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人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型的建立及鉴定

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复旦学报（医学版） 2009年第6期36卷 768-775页

作者：陈威中吴满平复旦大学药学院生物化学与分子生物学教研室上海201203

目的建立人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型,以体外模拟人动脉壁,为动脉粥样硬化及炎症等疾病的发病机制和治疗研究打下基础。方法采用胶原酶灌注消化法从人脐动脉中原代培养获得人脐动脉内皮细胞(human umbilical artery endothel... 详细信息

目的建立人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型,以体外模拟人动脉壁,为动脉粥样硬化及炎症等疾病的发病机制和治疗研究打下基础。方法采用胶原酶灌注消化法从人脐动脉中原代培养获得人脐动脉内皮细胞(human umbilical artery endothelial cell,HUAEC),采用组织块贴块法从人脐动脉中原代培养获得人脐动脉平滑肌细胞(human umbilical artery smooth muscle cell,HUASMC)。用含有抗坏血酸(≥50μg/mL)的培养基孵育平滑肌细胞,使之合成并分泌胶原蛋白,形成内皮细胞的生长基质;然后将内皮细胞以饱和密度接种到平滑肌细胞上,使内皮细胞和平滑肌细胞直接接触并整合形成内皮细胞-平滑肌细胞共培养(EC-SMC co-culture)模型。分别用免疫荧光染色和Dil-Ac-LDL吞噬实验对共培养模型进行形态学和功能学的鉴定。结果形态学鉴定结果显示,两种细胞已成功整合,模拟出体内动脉壁的形态。Dil-Ac-LDL吞噬实验的结果显示共培养模型的内皮细胞中有荧光信号,并且共培养模型中内皮细胞Dil-Ac-LDL的内吞量显著高于单纯内皮细胞(EC monoculture or ECmonolayer),证明共培养模型中内皮细胞与平滑肌细胞已建立联系。结论本实验成功建立人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型,可在体外更好地模拟人动脉壁形态和基本功能。

关键词：人脐动脉内皮细胞人脐动脉平滑肌细胞动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型免疫荧光染色 Dil-Ac-LDL吞噬

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余甘子果汁的营养成分分析

食品工业科技 2007年第8期28卷 222-223页

作者：崔炳权林元藻广东药学院生物化学与分子生物学教研室广东广州510006

对余甘子(Phyllanthus emblica L.)新鲜果汁中的营养成分进行了分析,结果表明:余甘子果汁中含有蛋白质、脂肪、糖、Vc、多种微量元素;含有17种氨基酸,8种人体营养必需氨基酸和SOD;余甘子果汁营养丰富,是一种集营养、保健、药用功能于一... 详细信息

对余甘子(Phyllanthus emblica L.)新鲜果汁中的营养成分进行了分析,结果表明:余甘子果汁中含有蛋白质、脂肪、糖、Vc、多种微量元素;含有17种氨基酸,8种人体营养必需氨基酸和SOD;余甘子果汁营养丰富,是一种集营养、保健、药用功能于一体的优质天然生物资源。

关键词：余甘子果汁营养成分氨基酸分析

漆酶基因lac1338在大肠杆菌中的表达条件优化及其染料降解作用

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应用与环境生物学报 2014年第6期20卷 1076-1081页

作者：冯娟覃炎锋李荷广东药学院基础学院生物化学与分子生物学系广州510006

在摇瓶水平上,采用单因素试验方法,对已构建好的表达漆酶蛋白HIS-Lac1338的工程菌BL21(DE3)/p ET32a(+)-lac1338的诱导表达条件进行优化,以期提高蛋白产量,降低生产成本.研究了培养温度、诱导时间、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、铜离... 详细信息

在摇瓶水平上,采用单因素试验方法,对已构建好的表达漆酶蛋白HIS-Lac1338的工程菌BL21(DE3)/p ET32a(+)-lac1338的诱导表达条件进行优化,以期提高蛋白产量,降低生产成本.研究了培养温度、诱导时间、异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、铜离子(Cu2+)浓度等不同条件对HIS-Lac1338表达量和活性的影响.通过聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDSPAGE)分析确定最佳表达条件,用酶标仪测其酶活性.结果显示,温度为30℃,初始菌体浓度D600 nm为1.6,加终浓度为0.2 mmol/L的IPTG及终浓度0.5 mmol/L的Cu2+,培养16 h,融合蛋白表达量提高了约2.5倍,为450 mg/L,是已报道的最高表达量;以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为底物测纯酶的比酶活为22.8 U/mg.染料降解作用显示其对刚果红和靛红有95%以上的降解能力.研究表明,工程菌BL21(DE3)/p ET32a(+)-lac1338产漆酶量高且大部分为可溶性蛋白,可以快速生产,具有较好的应用价值.

关键词：漆酶大肠杆菌表达条件优化染料降解

微波辐射对人胰腺癌JF305细胞增殖的抑制作用及其机制

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卫生研究 2013年第6期42卷 1008-1011页

作者：朱文赫张巍李妍徐俊杰罗军姜艳霞芦晓晶吕士杰吉林医药学院生物化学与分子生物学教研室吉林132013

目的探讨不同强度,频率为2450 MHz微波辐射对人胰腺癌JF305细胞增殖的抑制作用及其机制。方法分别以强度为2.5、5.0、10.0、15.0和20.0 mW/cm2的微波处理JF305细胞20 min,24 h后采用MTT法检测微波辐射后对细胞增殖的抑制情况,Annexin V-... 详细信息

目的探讨不同强度,频率为2450 MHz微波辐射对人胰腺癌JF305细胞增殖的抑制作用及其机制。方法分别以强度为2.5、5.0、10.0、15.0和20.0 mW/cm2的微波处理JF305细胞20 min,24 h后采用MTT法检测微波辐射后对细胞增殖的抑制情况,Annexin V-FITC和PI双染检测细胞凋亡,Caspase-3活性检测试剂盒检测辐射后细胞Caspase-3活性;Western blotting法检测细胞内Caspase-3和HSP 70蛋白表达量。结果微波辐射作用JF305细胞后,细胞增殖活性明显受到抑制,细胞发生凋亡,随着辐射强度的提高,细胞凋亡率明显增加。随着辐射强度的增加,细胞内Caspase-3活性同对照组细胞相比呈上升趋势,差异具有统计学意义;细胞内Caspase-3和HSP 70蛋白表达水平也随着辐射强度的增加呈上升趋势。结论微波辐射对人胰腺癌JF305细胞增殖具有抑制作用,其可能机制是通过改变细胞内的应激水平而引起细胞凋亡。

关键词：微波辐射细胞增殖细胞凋亡热应激蛋白70 Caspase-3

肽质量指纹谱鉴定蛋白质时生物信息学分析条件的优化

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分析化学 2008年第4期36卷 467-472页

作者：彭咏波马永平夏永鹏邱宗荫重庆医科大学药学院药物分析教研室重庆医科大学药学院生物化学与分子生物学教研室

为了优化肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF)鉴定蛋白质的生物信息学分析条件。将牛碳酸酐酶2(carbonic anhydrase-2,CAH2)和人热休克蛋白70s(Hsp70s)进行2-DE分离、酶解,肽段经过MALDI-TOFMS分析得到PMF数据。选择Swissprot、MSDB、NCBInr、Random等数据库和MASCOT与MS-Fit搜索引擎,以牛CAH2为模型优化搜索参数,结果表明:Swissprot是适合做蛋白PMF分析的数据库;主要参数最佳设置为:漏切位点数为1个,肽质量容错数为±1Da,同时肽质量类型选择平均分子质量比单同位素质量更便于候选蛋白的筛选。最后用人Hsp70s蛋白的PMF数据检验优化条件,结果表明,所选择的数据库及参数是可靠的。

关键词：激光辅助解析/飞行时间质谱肽质量指纹谱搜索蛋白质

原花青素对β-淀粉样肽25-35诱导PC12细胞par-4和bcl-2基因表达的影响

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中草药 2006年第3期37卷 405-408页

作者：梅寒芳谢朝阳杨红祝其锋广东药学院生物化学教研室广东广州510006 广东医学院生物化学与分子生物学研究所广东湛江524023

目的探讨原花青素(PC)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导凋亡PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA和蛋白表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA的表达,W... 详细信息

目的探讨原花青素(PC)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导凋亡PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA和蛋白表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA的表达,Westernblotting检测PC12细胞Par-4和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量(5、10、20、30mg/L)PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡,提高PC12细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂,降低par-4基因mRNA表达及蛋白表达,增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因par-4和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。

关键词：原花青素(PC) (Aβ(25-35)) PC12细胞细胞凋亡 par-4 bcl-2

原花青素对β-淀粉样肽(25-35)诱导PC12细胞bax和bcl-2基因表达的影响

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中国老年学杂志 2008年第14期28卷 1355-1358页

作者：梅寒芳谢朝阳祝其锋广东药学院生物化学与分子生物学教研室广东广州510006 广东医学院生物化学与分子生物学研究所

目的探讨原花青素(Procyanidins,PC)对β-淀粉样肽(25-35)(Aβ25～35)诱导凋亡PC12细胞bax和bcl-2基因表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变,RT-PCR检测bax和bcl-2基因mRNA... 详细信息

目的探讨原花青素(Procyanidins,PC)对β-淀粉样肽(25-35)(Aβ25～35)诱导凋亡PC12细胞bax和bcl-2基因表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变,RT-PCR检测bax和bcl-2基因mRNA表达,Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量PC预处理PC12细胞1h,可剂量依赖性对抗Aβ25～35引起的细胞凋亡,增加细胞存活率,减少Aβ25～35引起的细胞核固缩、核碎裂,降低bax mRNA及Bax蛋白表达,增加bcl-2mRNA及Bcl-2蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25～35诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与下调凋亡基因bax和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。

关键词：原花青素 Aβ25-35 PC12细胞 bax bcl-2

苦荞蛋白源肽AFYRW对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

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食品科学 2023年第3期44卷 155-161页

作者：肖怡左婕邓艳张礼林王筑婷莫晓川许庆忠李红梅贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550025

目的:探讨苦荞蛋白源肽AFYRW在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的血管内皮细胞损伤中的作用。方法:采用LPS诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立血管内皮细胞炎症损伤模型;采用CCK8试剂盒检测A... 详细信息

目的:探讨苦荞蛋白源肽AFYRW在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的血管内皮细胞损伤中的作用。方法:采用LPS诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立血管内皮细胞炎症损伤模型;采用CCK8试剂盒检测AFYRW对细胞增殖活力的影响;Western blot检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhension molecule-1,VCAM-1)、细胞内黏附分子-1(intercellular adhension molecule-1,ICAM-1)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitricoxide synthase,iNOS)水平及核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65的磷酸化水平;酶法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量变化;单核细胞黏附实验检测HUVECs的黏附性。结果:AFYRW明显提高了细胞的生存活力,降低VCAM-1、ICAM-1、IL-6、TNF-α、iNOS蛋白的相对表达量,减少了NO含量和单核细胞对内皮细胞的黏附,抑制NF-κB的活性。结论:AFYRW对LPS诱导的HUVECs炎症具有改善作用,其机制可能与抑制NF-κB的活性有关。

关键词：炎症生物活性肽苦荞脂多糖人脐静脉内皮细胞

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太空养心丸干预模拟失重大鼠的血清代谢组学分析

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中国实验方剂学杂志 2025年第2期 147-153页

作者：刘晓弟范雪梅王义明闫梦佳李勇枝王佳平刘军莲罗国安广东药科大学中药学院清华大学药学院清华大学化学系中国航天员科研训练中心

目的：基于代谢组学研究太空养心丸对模拟失重大鼠代谢水平的影响，探讨其代谢作用机制。方法：在地面模拟太空舱环境内，采用尾部悬吊法建立模拟失重大鼠模型。将大鼠随机分为舱外正常组、舱内正常组、模型组和高(3.0 g·kg-1)、低剂量... 详细信息

目的：基于代谢组学研究太空养心丸对模拟失重大鼠代谢水平的影响，探讨其代谢作用机制。方法：在地面模拟太空舱环境内，采用尾部悬吊法建立模拟失重大鼠模型。将大鼠随机分为舱外正常组、舱内正常组、模型组和高(3.0 g·kg-1)、低剂量(1.5 g·kg-1)太空养心丸给药组，灌胃给药28 d。采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱法（UPLC-Q-TOF/MS）检测大鼠血清内源性代谢物水平，通过主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）处理数据以筛选差异代谢物、潜在生物标志物，然后利用MetaboAnalyst 5.0进行通路富集分析，阐释药物的代谢调控机制。结果：相比舱外正常组，舱内正常组大鼠体内14-羟基十六烷酸、亚油酸、α-亚麻酸等13个代谢物含量显著升高（P生物合成，酪氨酸代谢、组氨酸代谢及柠檬酸循环等代谢途径。结论：模拟太空舱环境和尾部悬吊模拟失重均会对大鼠体内代谢水平造成影响，太空养心丸能够通过调节多种氨基酸及能量代谢相关通路改善失重模型大鼠的代谢异常。

关键词：太空养心丸模拟失重模型代谢组学超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF/MS) 作用机制

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