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流速对黑鲷幼鱼游泳行为及运动生理的影响

水生生物学报 2023年第12期47卷 1993-2002页

作者：汤保贵陈秀灿胡长圣戴佳玥王学锋张静广东海洋大学水产学院湛江524088 南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江) 湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室湛江524088

研究黑鲷(Acanthopagrus schlegelii)游泳行为和运动生理,为其近海网箱养殖和增殖放流野外驯化提供技术支持。研究采用泳道呼吸仪测定19℃、不同流速下黑鲷幼鱼[体长(12.38±0.69)cm,体重(45.99±9.05)g]的游泳行为、呼吸代谢和生理生... 详细信息

研究黑鲷(Acanthopagrus schlegelii)游泳行为和运动生理,为其近海网箱养殖和增殖放流野外驯化提供技术支持。研究采用泳道呼吸仪测定19℃、不同流速下黑鲷幼鱼[体长(12.38±0.69)cm,体重(45.99±9.05)g]的游泳行为、呼吸代谢和生理生化指标。结果表明:黑鲷幼鱼的相对感应流速约为1.42 BL/s(体长/s),临界游泳速度Ucrit约为76 cm/s,暴发游泳速度约为114 cm/s;摆尾频率与流速呈显著的线性正相关关系;静止耗氧率约为332.25 mg/(kg·h),运动耗氧率与流速呈二次多项式关系,最低耗氧率出现在3.6 BL/s流速下,约为185.65 mg/(kg·h);单位距离耗能与流速呈幂函数关系,在4 BL/s流速即约66%Ucrit流速处单位距离耗能最小且随流速增加基本保持不变。静水时黑鲷幼鱼的中位生存时间最短,约3h,低(1 BL/s)、中(3 BL/s)流速下中位生存时间最长,在10h以上;静水时窒息点约为0.34 mg/L,低、中流速下约为1.70 mg/L,高流速时约为3.18 mg/L。低、中流速下(20%Ucrit和50%Ucrit)肌糖原、肝糖原和磷酸肌酸的含量均较高,而静水和高流速下血乳酸含量较高,与耗氧率、窒息点的变化趋势一致。综上,推荐黑鲷网箱养殖的流速不宜超过0.8 m/s,放流鱼苗的适宜训练流速为1.5—3.5 BL/s,驯化时间在2周以上为宜。

关键词：流速游泳行为呼吸代谢生理生化黑鲷幼鱼

溶藻弧菌VcrV基因缺失株的构建及生物学特性

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生物工程学报 2022年第8期38卷 3062-3075页

作者：彭新亮简纪常丁燏广东海洋大学水产学院广东湛江524088 信阳农林学院水产学院河南信阳464000 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088

为研究溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统VcrV基因的功能和生物学特性,采用同源重组技术成功构建了溶藻弧菌缺失株ΔVcrV,并用PCR检测其遗传稳定性。结果显示,缺失株遗传稳定;与野生株相比,生长和自凝集能力无显著变化;但生物膜形成能力降低,半致死... 详细信息

为研究溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统VcrV基因的功能和生物学特性,采用同源重组技术成功构建了溶藻弧菌缺失株ΔVcrV,并用PCR检测其遗传稳定性。结果显示,缺失株遗传稳定;与野生株相比,生长和自凝集能力无显著变化;但生物膜形成能力降低,半致死剂量升高16.5倍;游动性和涌动性极显著升高,细胞粘附能力极显著降低(P生物学特性表明,VcrV基因参与溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统性的致病性和多种生物学功能。

关键词：溶藻弧菌 Ⅲ型分泌系统 VcrV基因缺失株生物学特性

抗溶藻弧菌的芽孢杆菌的筛选、鉴定及其生物学特性分析

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饲料研究 2022年第10期45卷 61-65页

作者：王琳晶丁燏广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524000

试验筛选对溶藻弧菌HY9901具有拮抗作用的芽孢杆菌。于广东湛江海域的红树林根部土壤中分离出117株芽孢杆菌,通过初筛和复筛,获得1株对溶藻弧菌HY9901具有较强抑制作用的ZJ2009菌株,对其鉴定以及生物学特性分析。结果显示:ZJ2009菌株为... 详细信息

试验筛选对溶藻弧菌HY9901具有拮抗作用的芽孢杆菌。于广东湛江海域的红树林根部土壤中分离出117株芽孢杆菌,通过初筛和复筛,获得1株对溶藻弧菌HY9901具有较强抑制作用的ZJ2009菌株,对其鉴定以及生物学特性分析。结果显示:ZJ2009菌株为解淀粉芽孢杆菌;在瓶装载量10%~20%,初始pH值6.0~8.0、添加1.5%NaCl的BHI培养基中培养12 h以上生长最佳;该菌株具有广谱抑菌性,无溶血现象,对斑马鱼无毒副作用且具有一定的保护率。研究表明,解淀粉芽孢杆菌用于抑制溶藻弧菌,为弧菌病的防治提供新思路,在水产养殖领域具有开发潜能。

关键词：拮抗作用溶藻弧菌解淀粉芽孢杆菌生物学特性

溶藻弧菌磷酸甲基嘧啶合酶(ThiC)的原核表达及其乙酰化修饰鉴定

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大连海洋大学学报 2022年第3期37卷 435-440页

作者：王旭东范晨龙丁燏广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室水产经济动物病害控制广东省普通高校重点实验室广东湛江524088

为研究溶藻弧菌Vibrio alginolyticus磷酸甲基嘧啶合酶(phosphomethylpyrimidine synthase,ThiC)是否存在乙酰化修饰,以溶藻弧菌HY9901基因组为模板,PCR扩增ThiC基因,构建pET-28a-ThiC原核表达载体,在大肠杆菌BL21中诱导表达,并优化其表达条件,然后用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达及乙酰化情况。结果表明:克隆获得的溶藻弧菌ThiC基因长度为1941 bp;重组蛋白成功在大肠杆菌BL21中表达,相对分子质量为72500,其最佳诱导条件为IPTG 0.1 mmol/L、温度37℃、诱导时间3 h;经Western blot检测显示,ThiC蛋白具有乙酰化修饰,但在体外不能通过乙酰化酶途径去乙酰化。研究表明,溶藻弧菌ThiC原核表达载体构建成功,该蛋白存在乙酰化修饰,但体外不能去乙酰化,本研究结果为溶藻弧菌的维生素合成过程中酶的翻译后调控机制研究提供了科学参考。

关键词：溶藻弧菌磷酸甲基嘧啶合酶原核表达乙酰化

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斜带石斑鱼BAG-1基因克隆及表达分析

南方农业学报 2022年第5期53卷 1399-1406页

作者：李星吴子杰温依铭刘结红蔡佳简纪常广东海洋大学水产学院广东湛江524088 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088 广东省水产经济动物病害控制重点实验室广东湛江524088

【目的】明确斜带石斑鱼(Epinephelu coioides)BAG-1基因(EcBAG-1)的结构特征、组织表达分布及在脂多糖(LPS)和聚肌胞苷酸(PolyI:C)刺激后的表达变化,进一步揭示鱼类BAG-1在病原感染中的作用机制,也为了解鱼类的抗病免疫提供参考依据。... 详细信息

【目的】明确斜带石斑鱼(Epinephelu coioides)BAG-1基因(EcBAG-1)的结构特征、组织表达分布及在脂多糖(LPS)和聚肌胞苷酸(PolyI:C)刺激后的表达变化,进一步揭示鱼类BAG-1在病原感染中的作用机制,也为了解鱼类的抗病免疫提供参考依据。【方法】依据EcBAG-1基因EST序列设计特异性引物克隆EcBAG-1基因,通过SMART、TMHMM Server v.2.0、SOPMA、SWISS-MODEL、ExPASy、ClustalX及MEGA 5.0等在线软件进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR检测EcBAG-1基因的组织表达特征及其在LPS和PolyI:C刺激后的表达模式。【结果】克隆获得的EcBAG-1基因开放阅读框(ORF)长624 bp,共编码207个氨基酸残基;EcBAG-1蛋白分子量为49.84 kD,理论等电点(pI)为5.18,为疏水性蛋白。EcBAG-1蛋白具有BAG-1家族保守的BAG结构域和UBQ泛素相关结构域,无跨膜结构域,主要分布在细胞质和细胞核,其二级结构中α-螺旋占65.22%、延伸链占10.63%、无规则卷曲占20.29%、β-转角仅占3.86%。EcBAG-1氨基酸序列与大黄鱼的BAG-1氨基酸序列相似性最高(96.62%),亲缘关系最近;与原鸡和热带爪蛙的亲缘关系相对较远,对应的BAG-1氨基酸序列相似性分别为58.45%和57.50%。EcBAG-1基因在斜带石斑鱼的肝脏、胸腺、脾脏、头肾、鳃、皮肤、肌肉、大脑、外周血淋巴细胞及心脏等组织中均有表达,且以在大脑中的相对表达量最高,显著高于在其他组织中的相对表达量(P>0.05,下同);经LPS和PolyI:C刺激24 h后,斜带石斑鱼脾脏中的EcBAG-1基因相对表达量显著上调。【结论】EcBAG-1蛋白含有BAG-1蛋白家族典型的BAG结构域和UBQ结构域,具有与哺乳动物BAG-1相似的生物学功能,即EcBAG-1基因在斜带石斑鱼抵御细菌/病毒感染的过程中发挥重要作用,为深入了解鱼类的抗感染机理拓宽了思路。

关键词：斜带石斑鱼 BAG-1基因病原感染免疫反应表达分析

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卵形鲳鲹应对流速胁迫的代谢组学分析

海洋学报 2023年第5期45卷 53-63页

作者：张静戴佳玥来新昊刘旭祥张浩王学锋汤保贵广东海洋大学水产学院广东湛江524088 南方海洋科学与工程广东省实验室(湛江) 广东湛江524025 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东湛江524088

流速是深远海养殖的关键环境因子之一。为了深入解析卵形鲳鲹在流速胁迫下的分子调控机制,分别以静水环境、中等流速(54 cm/s)和高流速(90 cm/s)水流对卵形鲳鲹进行胁迫,利用LC/MS的代谢组学技术探究肝脏内源性代谢物的变化,寻找差异代... 详细信息

流速是深远海养殖的关键环境因子之一。为了深入解析卵形鲳鲹在流速胁迫下的分子调控机制,分别以静水环境、中等流速(54 cm/s)和高流速(90 cm/s)水流对卵形鲳鲹进行胁迫,利用LC/MS的代谢组学技术探究肝脏内源性代谢物的变化,寻找差异代谢物以及相关的代谢通路。结果表明,与静水组相比,中流速组有51种代谢产物的含量发生显著变化,富集在40条通路中,主要包括半乳糖代谢(galactose metabolism)、糖异生(gluconeogenesis)、不饱和脂肪酸的合成(biosynthesis of unsaturated fatty acids)、花生四烯酸代谢(arachidonic acid metabolism)等;高流速组有40种代谢产物的含量发生显著变化,富集在22条通路中,主要包括饱和脂肪酸的合成(biosynthesis of unsaturated fatty acids)、泛酸和辅酶A的生物合成(pantothenate and CoA biosynthesis)、赖氨酸降解(lysine degradation)、花生四烯酸代谢(arachidonic acid metabolism)、亚油酸代谢(linoleic acid metabolism)等。与中流速组相比,高流速组有31种代谢产物含量发生显著变化,富集在12条通路中,主要包括花生四烯酸代谢(arachidonic acid metabolism)、脂肪细胞因子信号通路(adipocytokine signaling pathway)、半胱氨酸和蛋氨酸代谢(cysteine and methionine metabolism)等。通路分析表明中、高流速胁迫均促进了不饱和脂肪酸代谢、花生四烯酸代谢和泛酸的合成,鱼体通过加强代谢来提高游泳能力,中流速组主要显著影响了半乳糖代谢、半胱氨酸和蛋氨酸的代谢,卵形鲳鲹此时产生了更多能量用于运动;高流速组则显著影响了L-赖氨酸、维甲酸的代谢,揭示了在面对高流速胁迫时,鱼体的游泳能力在下降,部分免疫机能触发。

关键词：卵形鲳鲹流速胁迫代谢组分析

长毛明对虾酚氧化酶原基因cDNA克隆及组织表达分析

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基因组学与应用生物学 2019年第11期38卷 4910-4918页

作者：韦光本伍元植张依琳吴凡黄郁葱蔡双虎汤菊芬广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室

酚氧化酶(phenoloxidase,PO)属于对虾免疫系统的核心酶,在机体抵抗微生物感染过程中起到重要的作用。本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆长毛明对虾(Fenneropenaeus penicillatus)酚氧化酶原(prophenoloxidase,proPO)基因(F-proPO)。cDNA全长3003 bp,包含63 bp的5′-UTR、879 bp的3′-UTR和编码686个氨基酸的2061 bp的开放阅读框(ORF),预测分子量为78.05 kD,理论等电点(pI)为5.79;含有3个串联式血蓝蛋白结构功能域、2个保守的Cu2+结合位点和6个组氨酸残基;多重比对结果表明,F-proPO与中国明对虾proPO相似度最高(98%),与其他甲壳类动物proPO相似度为51%~93%。实时荧光定量PCR检测结果表明,该基因的表达具有组织特异性,在血淋巴中表达量最高。人工感染溶藻弧菌后,该基因在鳃、血淋巴、肠和性腺中表达水平显著上调;人工感染白斑综合征病毒后,该基因在脑、鳃、心、血淋巴和肠中表达水平显著上调。可见,长毛明对虾PO是参与机体免疫防御反应的一种重要分子。

关键词：长毛明对虾酚氧化酶原酚氧化酶基因克隆组织表达

马氏珠母贝V-ATPase-d基因序列特征及其与耐低温性状的关系

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水产学报 2022年

作者：赖卓欣宋欣霖潘若哲谭又瑄王庆恒广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省海水养殖生物育种工程实验室广东省珍珠科技创新中心广东海洋大学水产学院

V-ATPase在生物应对各种环境压力时发挥重要功能，为了探究V-ATPase在马氏珠母贝低温适应过程中的作用，本研究克隆了马氏珠母贝的V-ATPase-d基因，采用qRT-PCR技术研究了低温胁迫下Pm-V-ATPase-d表达量的变化，并筛选和比较分析了该基... 详细信息

V-ATPase在生物应对各种环境压力时发挥重要功能，为了探究V-ATPase在马氏珠母贝低温适应过程中的作用，本研究克隆了马氏珠母贝的V-ATPase-d基因，采用qRT-PCR技术研究了低温胁迫下Pm-V-ATPase-d表达量的变化，并筛选和比较分析了该基因在耐低温选育系(low temperature resistant line， R) F和北部湾野生群体(Beibu Gulf wild population， W)外显子区的SNP位点。结果显示，Pm-V-ATPase-d总长为1 473 bp，开放阅读框(ORF)为1 140 bp，编码379个氨基酸，具有ATP典型的结构域Pfam vATP-synt＿AC39。Motif分析及三级结构预测结果表明，Pm-V-ATPase-d具有较高的保守性，其在系统进化树中与太平洋牡蛎聚为一支。组织荧光定量结果显示，Pm-V-ATPase-d在所检测的组织中均有表达，在肝胰腺、性腺和鳃组织表达量较高；在低温胁迫条件下，Pm-V-ATPase-d基因的表达量随着时间的延长呈现先上升后下降的趋势，且低温组的表达量在5 d内均显著高于对照组，这表明Pm-V-ATPase-d可能参与了马氏珠母贝对温度胁迫的响应；对Pm-V-ATPase-d外显子区的SNP分析共得到35个SNP，其中34个为同义突变，只有一个位点为非同义突变，26个SNP在W和R群体的不同基因型和等位基因之间具有显著差异，单倍型连锁不平衡分析结果显示，Pm-V-ATPase-d基因SNPs可形成6个单倍体块，14种单倍型，其中单倍型GAAT、CGC、TC、TG、AG与马氏珠母贝耐低温性状显著相关。研究表明，Pm-V-ATPase-d可能是参与调节马氏珠母贝低温适应过程中的候选基因，本研究可为马氏珠母贝对低温的适应机制提供研究基础，筛选出的与抗低温性状相关的 SNPs 及单倍型可应用于分子辅助育种。

关键词：马氏珠母贝 Pm-V-ATPase-d SNP 低温

溶藻弧菌ThiC蛋白的原核表达及其乙酰化修饰鉴定

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大连海洋大学学报 2021年

作者：王旭东范晨龙丁燏广东海洋大学水产学院广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室广东省水产经济动物病害控制重点实验室

为构建溶藻弧菌HY9901 ThiC蛋白的原核表达载体、优化其表达条件，并鉴定该蛋白是否存在乙酰化修饰。以溶藻弧菌HY9901基因组为模板，PCR扩增ThiC基因，构建pET-28a-ThiC原核表达载体，在大肠杆菌BL21中诱导表达，并优化其表达条件，然... 详细信息

为构建溶藻弧菌HY9901 ThiC蛋白的原核表达载体、优化其表达条件，并鉴定该蛋白是否存在乙酰化修饰。以溶藻弧菌HY9901基因组为模板，PCR扩增ThiC基因，构建pET-28a-ThiC原核表达载体，在大肠杆菌BL21中诱导表达，并优化其表达条件，然后用SDS-PAGE和Western blot分析蛋白的表达及乙酰化情况。结果表明：溶藻弧菌ThiC基因长度为1941 bp；重组蛋白成功在大肠杆菌BL21中表达（相对分子质量为72 500），其最佳诱导条件为0.1 mmol/L IPTG 37 ℃诱导3 h；Western blot结果显示，ThiC蛋白具有乙酰化修饰，但在体外不能通过乙酰化酶途径去乙酰化。研究表明，溶藻弧菌ThiC原核表达载体构建成功，该蛋白存在乙酰化修饰，但体外不能去乙酰化，本研究结果果为溶藻弧菌维生素营养的翻译后调控机制研究奠定了基础。

关键词：溶藻弧菌 ThiC 原核表达乙酰化