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多房棘球绦虫感染的检测方法研究进展

中国兽医科学 2024年第7期54卷 946-954页

作者：游杰李立孙继文詹舒懿逯文颖周蜓蜓殷宏贾万忠闫鸿斌中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家动物包虫病专业实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730000 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

棘球蚴病是由棘球绦虫的幼虫(中绦期)——棘球蚴引起的一类人兽共患寄生虫病。感染棘球绦虫的终末宿主(犬、狐狸等)是传染源,及时准确检测终末宿主感染状况是防控棘球蚴病的关键环节。本文综述了多房棘球绦虫感染的病原学、分子生物学... 详细信息

棘球蚴病是由棘球绦虫的幼虫(中绦期)——棘球蚴引起的一类人兽共患寄生虫病。感染棘球绦虫的终末宿主(犬、狐狸等)是传染源,及时准确检测终末宿主感染状况是防控棘球蚴病的关键环节。本文综述了多房棘球绦虫感染的病原学、分子生物学和免疫学检测方法的研究进展,以期为终末宿主多房棘球绦虫感染的检测方法研究和试剂盒研发提供指导。

关键词：多房棘球绦虫犬科动物粪DNA 粪抗原分子生物学检测免疫学诊断

基于影像组学与临床实验室指标构建血吸虫病肝纤维化分级诊断模型

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中国血吸虫病防治杂志 2024年第3期36卷 251-258页

作者：郭照宇邵菊萍邹小青赵琴平钱沛君王文雅黄璐璐薛靖波许静杨坤周晓农李石柱传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心)、国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室、WHO热带病合作中心、科技部国家级热带病国际联合研究中心上海200025 江西省九江市都昌县第二人民医院武汉大学基础医学院国家卫生健康委员会寄生虫病预防与控制技术重点实验室、江苏省寄生虫与媒介控制技术重点实验室、江苏省血吸虫病防治研究所上海交通大学医学院-国家热带病研究中心全球健康学院上海200025

目的探索基于B型超声影像与临床实验室指标构建血吸虫病肝纤维化分级诊断模型的可行性。方法收集2018—2022年江西省都昌县第二人民医院血吸虫病患者超声影像及临床实验室数据。以血吸虫病肝纤维化Ⅰ级病例为第1组,Ⅱ级和Ⅲ级病例为第2... 详细信息

目的探索基于B型超声影像与临床实验室指标构建血吸虫病肝纤维化分级诊断模型的可行性。方法收集2018—2022年江西省都昌县第二人民医院血吸虫病患者超声影像及临床实验室数据。以血吸虫病肝纤维化Ⅰ级病例为第1组,Ⅱ级和Ⅲ级病例为第2组;选取2018—2021年病例数据为训练集、2022年病例数据为验证集,构建机器学习二分类模型。采用ITK-SNAP软件标记影像特征,采用Python 3.7编程语言和PyRadiomics工具包提取影像特征。采用t检验或Mann-Whitney U检验比较两组样本间影像特征差异,并采用套索算法(least absolute shrinkage and selection operator,LASSO)进行关键影像特征筛选。采用Scikit-learn机器学习库进行机器学习建模,包括支持向量机(support vector machine,SVM)、随机森林(random forest,RF)、线性回归(linear regression,LR)和极端梯度提升(extreme gradient boosting,XGBoost)等4种模型。采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)进行最优机器学习模型筛选,并使用沙普利加和解释(SHapley Additive exPlanations,SHAP)评估对机器学习模型中超声影像鉴别特征贡献度最高的特征。结果2019—2022年,累计将491例血吸虫病患者超声影像和临床实验室检查数据纳入研究。累计提取了851项影像组学特征和54项临床实验室指标,经统计学检验(t=-5.98~4.80,U=6550~20994,P均研究。临床实验室指标SVM机器学习模型训练集和验证集ROC曲线下面积(area under curve,AUC)分别为0.763和0.611,超声影像组学SVM机器学习模型训练集和验证集AUC分别为0.951和0.892,多模态SVM机器学习模型训练集和验证集AUC分别为0.960和0.913。机器学习模型中贡献度居前10位的特征或指标包括2项临床实验室指标和8项影像组学特征。结论超声影像组学和临床实验室指标相结合的多模态机器学习模型可用于血吸虫病肝纤维化智能识别,并可提升单类数据模型的分类效果。

关键词：血吸虫病肝纤维化超声影像影像组学诊断模型

鸡滑液囊支原体ZP-1株的分离鉴定及其致病性和免疫保护效果的评估

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中国预防兽医学报 2024年第5期46卷 455-460页

作者：李真亚孔嫄嫄杨红玉李允刘洁贾荣玲李生涛南阳农业职业学院河南南阳473000 河南省动物疫病防控工程技术研究中心河南南阳473000

为分离鉴定鸡滑液囊支原体(MS),并评估其致病性和免疫保护效果,本实验无菌采集南阳市多家鸡场35份疑似MS发病鸡的关节腔粘液和关节组织,通过病原分离培养后观察菌落、PCR鉴定并测序。结果显示,在改良Friis固体培养基上可见圆形、边缘整... 详细信息

为分离鉴定鸡滑液囊支原体(MS),并评估其致病性和免疫保护效果,本实验无菌采集南阳市多家鸡场35份疑似MS发病鸡的关节腔粘液和关节组织,通过病原分离培养后观察菌落、PCR鉴定并测序。结果显示,在改良Friis固体培养基上可见圆形、边缘整齐、隆起的“煎蛋样”菌落形态;PCR可以扩增到16S r RNA基因目的条带,扩增产物测序后与NCBI中登录的ATCC 25204标准菌株16S r RNA基因序列比对,结果显示二者的同源性达99%以上,本实验共分离到5株MS。选择ZP-1株进行生物学特性研究,通过颜色变化单位(CCU)试验测定其生长滴度、采用试剂盒测定其代谢产生的H_(2)O_(2)水平。结果显示,在培养24 h~36 h后,ZP-1株的生长滴度最高可达10^(12)CCU/mL,具有生长速度快、滴度高的特点。在甘油存在的情况下,ZP-1株产生H_(2)O_(2)的相对水平极显著高于弱毒疫苗株(P研究获得了具有较高生长滴度(10^(12)CCU/mL)的MS分离株ZP-1,发现利用该MS分离株制备的灭活疫苗具有较好的免疫保护效果,为MS疫苗的研发奠定了基础。

关键词：鸡滑液囊支原体分离鉴定致病性免疫原性

鸭短喙矮小综合征灭活疫苗的研制及免疫效力评价

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中国兽医学报 2024年第2期44卷 264-267页

作者：陈仕龙程晓霞肖世峰江丹丹林锋强王劭朱小丽俞伏松邹敏陈少莺福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建福州350000 福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建福州350013 青岛易邦生物工程有限公司山东青岛266000

鸭短喙矮小综合征(short beak and dwarfism syndrome,SBDS)是近年来在我国鸭群中流行的一种新传染病,为研制SBDS灭活疫苗,本研究将SBDSV M15株在番鸭胚增殖,收获病毒尿囊液经灭活后制备了3批灭活疫苗,并对疫苗的安全性、免疫原性及免... 详细信息

鸭短喙矮小综合征(short beak and dwarfism syndrome,SBDS)是近年来在我国鸭群中流行的一种新传染病,为研制SBDS灭活疫苗,本研究将SBDSV M15株在番鸭胚增殖,收获病毒尿囊液经灭活后制备了3批灭活疫苗,并对疫苗的安全性、免疫原性及免疫效力进行检验。结果显示,3日龄樱桃谷鸭超剂量接种1.0 mL/羽,未见不良反应,表明疫苗的安全性好;3批灭活疫苗免疫20日龄雏半番鸭,免疫后28 d血清的胶乳凝集抑制试验(LPAI)抗体效价均值为4.3 log_(2);130日龄樱桃谷鸭种鸭免疫1次灭活疫苗后60 d血清LPAI抗体平均效价为6.9 log_(2);种鸭免疫后60 d所产种蛋卵黄抗体的LPAI效价均值为6.5 log_(2);对种鸭免疫后的3日龄子代雏鸭进行攻毒获得100%免疫保护。结果表明,本研究研制的SBDS灭活疫苗具有良好的免疫原性,种鸭1次免疫后可提供子代雏鸭保护性母源抗体,保护雏鸭度过最易感的危险窗口期,为SBDS的防控提供了有效手段。

关键词：鸭短喙矮小综合征灭活疫苗抗体效价母源抗体免疫效力

基于Ypt1靶标的非洲菊隐地疫霉TaqMan探针实时荧光定量PCR检测

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微生物学通报 2024年第9期51卷 3658-3672页

作者：王丽花孙爱青张艺萍许凤杨秀梅云南省农业科学院花卉研究所、云南省花卉育种重点实验室、国家观赏园艺工程技术研究中心云南昆明650205 云南大学农学院云南昆明650091

【背景】隐地疫霉(Phytophthora cryptogea P.)是一种可危害多种植物且危害症状较为严重的检疫性病原卵菌,在世界范围内危害严重。【目的】建立一种特异性强、灵敏度高且能定量分析***携带情况的高效检测方法。【方法】根据隐地疫霉Ypt... 详细信息

【背景】隐地疫霉(Phytophthora cryptogea P.)是一种可危害多种植物且危害症状较为严重的检疫性病原卵菌,在世界范围内危害严重。【目的】建立一种特异性强、灵敏度高且能定量分析***携带情况的高效检测方法。【方法】根据隐地疫霉Ypt1基因的保守序列设计并筛选实时荧光定量PCR的特异性引物和探针,在优化引物浓度、探针浓度和退火温度的基础上获得最优反应体系和条件,利用最优反应条件构建标准曲线及检测体系,并验证检测体系的特异性、灵敏性和重复性。【结果】综合考虑Cq值、最终荧光信号值(relative fluorescence units,RFU)和经济角度,优化后的隐地疫霉荧光定量PCR最佳退火温度为60℃,上、下游引物浓度均为20μmol/L,探针浓度为10μmol/L;所建立的标准曲线为y=−3.323x+40.767,相关系数(R^(2))为0.998,扩增效率(E)为99.9%,相关性好、扩增效率高;对其他8种常见卵菌及真菌均无扩增曲线,表明所设计的引物探针组合特异性强;灵敏度检测结果显示最低检出限为1 copy,最低稳定检出限为10 copies,较常规PCR技术的灵敏度提高了10−100倍;同浓度批组内和批组间重复性试验Cq值标准差为0.04−0.13,变异系数(coefficient of variation,CV)为0.20%−0.58%,重复性及稳定性好、可靠性高。【结论】基于Ypt1靶标建立了非洲菊隐地疫霉TaqMan实时荧光定量PCR检测技术体系,可高效特异地鉴别出疫霉属中广泛侵染非洲菊的隐地疫霉病菌,对于口岸通关和田间隐地疫霉的快速高效检测,尤其是原原种、原种等核心材料的痕量病原菌的检测鉴定和病害早期精准诊断,以及有效防控意义重大,应用前景广阔。

关键词：非洲菊隐地疫霉 Ypt1基因实时荧光定量PCR TaqMan探针

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四类重大林业有害生物的防控有效性分析

中国森林病虫 2024年第1期43卷 9-16页

作者：才琪朱宁波潘佳亮董瀛谦刘枫郭瑞中国林业科学研究院生态保护与修复研究所北京100091 国家林业和草原局生物灾害防控中心林草有害生物监测预警国家林业和草原局重点实验室辽宁沈阳110034

利用普通最小二乘法的稳健标准误模型及似不相关回归模型,定量分析松材线虫Bursaphelenchus xylophilus、美国白蛾Hyphantria cunea、薇甘菊Mikania micrantha及林业害鼠(兔)4类重大林业有害生物的防控有效性。结果显示:预防措施可以显... 详细信息

利用普通最小二乘法的稳健标准误模型及似不相关回归模型,定量分析松材线虫Bursaphelenchus xylophilus、美国白蛾Hyphantria cunea、薇甘菊Mikania micrantha及林业害鼠(兔)4类重大林业有害生物的防控有效性。结果显示:预防措施可以显著使松材线虫、美国白蛾及薇甘菊的发生面积呈递减趋势,防治资金的使用效率为抑制薇甘菊扩散起到显著作用。对于松材线虫病的防控,应加强生物化学农药在媒介昆虫防治中的应用,提升防控资金的使用效果;轻度发生的美国白蛾可采用综合防治措施,中度及重度发生首选生物化学农药防治;薇甘菊主要采用化学及营林防治措施,轻度发生时可结合采用人工物理防治;轻度发生的林业害鼠(兔)可采用综合防治措施,中度及重度发生采用生物、化学及人工物理防治,当重度发生时,营林措施控制灾害扩散的效果最好。

关键词：松材线虫美国白蛾薇甘菊林业害鼠(兔) 防控有效性

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水稻秸秆生物炭对南方稻田土壤的固碳减排效应

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土壤通报 2024年第3期55卷 686-694页

作者：陈立天刘玉学何莉莉吕豪豪汪玉瑛杨生茂浙江农林大学环境与资源学院、碳中和学院浙江杭州311300 浙江省农业科学院环境资源与土壤肥料研究所浙江杭州310021 浙江省生物炭工程技术研究中心浙江杭州310021 省部共建农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室浙江杭州310021

【目的】研究不同生物炭添加量对稻田土壤固碳和温室气体减排的影响,以期为稻田生态系统固碳减排提供理论依据和技术支撑。【方法】以南方稻田土壤为研究对象,在常规施肥条件下设置4个水稻秸秆生物炭添加量,分别为0、7.5、15.0和22.5 t ... 详细信息

【目的】研究不同生物炭添加量对稻田土壤固碳和温室气体减排的影响,以期为稻田生态系统固碳减排提供理论依据和技术支撑。【方法】以南方稻田土壤为研究对象,在常规施肥条件下设置4个水稻秸秆生物炭添加量,分别为0、7.5、15.0和22.5 t hm^(-2),以不施肥且不添加生物炭为空白对照,对土壤理化性质、土壤固碳量、温室气体排放以及水稻产量进行测定,评估其净增温潜势和温室气体排放强度。【结果】与常规施肥但不添加生物炭处理相比,添加22.5 t hm^(-2)水稻秸秆生物炭显著降低稻田土壤容重达5.1%,显著提高土壤pH、全氮、有效磷和速效钾分别达8.1%、38.8%、55.2%和64.2%。水稻收获后土壤固碳量随生物炭添加量的提高呈增加趋势,单位质量(kg)生物炭的土壤固碳量并非随生物炭添加量提高而持续增加,添加量为15.0 t hm^(-2)时达到最高值0.361 kg。与不添加生物炭处理相比,添加22.5 t hm^(-2)水稻秸秆生物炭显著增加水稻产量,增幅达14.5%;显著降低N2O和CH4累积排放量分别达19.9%和51.6%,显著降低稻田综合增温潜势、净增温潜势和温室气体排放强度分别达49.9%、291.7%和55.3%。【结论】综合作物增产、土壤固碳和温室气体减排效应,添加22.5 t hm^(-2)水稻秸秆生物炭可以作为稻田固碳减排的最优策略。

关键词：生物炭温室气体固碳稻田土壤环境效应

基于黏膜sIgA抗体的非洲猪瘟病毒感染早期血清学检测方法的建立

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畜牧兽医学报 2024年第1期55卷 300-310页

作者：白昀谢青云欧阳伟甘源袁厅赵东明步志高邵国青冯志新江苏省农业科学院兽医研究所农业农村部兽用生物制品工程重点实验室南京210014 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069 兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心泰州225300

目前的非洲猪瘟病毒(ASFV)血清学检测方法存在因采血引起交叉感染风险、抗体转阳滞后影响检测敏感性等问题,因此建立一种无创采样且可实现早期诊断的血清学方法对于在临床上ASFV感染的诊断与监测有重要意义。本研究以人工合成的方式构建... 详细信息

目前的非洲猪瘟病毒(ASFV)血清学检测方法存在因采血引起交叉感染风险、抗体转阳滞后影响检测敏感性等问题,因此建立一种无创采样且可实现早期诊断的血清学方法对于在临床上ASFV感染的诊断与监测有重要意义。本研究以人工合成的方式构建了pFastbac1-P30-His重组表达载体,利用杆状病毒-昆虫细胞真核表达系统表达ASFV重组P30蛋白(SUMO-P30),用Ni柱亲和纯化后作为包被抗原,经过一系列条件优化,建立一种以猪口腔液中黏膜sIgA抗体为靶标的ASFV抗体间接ELISA方法。结果显示,真核重组表达的P30蛋白(SUMO-P30)约为47 ku,Western blot鉴定显示其具有良好的反应原性;经优化确定了ELISA最佳反应条件:包被量为1.0μg·mL^(-1),5%脱脂乳为最佳样品稀释液,与待检口腔液的最佳混合比例为2∶8,样品反应时间为120 min,鼠抗猪IgA-HRP最佳稀释度为1∶5000,反应时间为60 min,最佳显色时间为15 min。该方法检测ASFV感染口腔液抗体效价可达1∶32,与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒黏膜抗体阳性口腔液均无交叉反应,具有良好的敏感性和特异性。利用该方法和ASFV商品化ELISA血清抗体检测试剂盒,分别检测感染ASFV强毒株或人工致弱株后同一头猪不同时间点的口腔液和血清样品,口腔液中黏膜sIgA抗体在感染后3~5 d S/P值就显著提升,而血清抗体在监测期内未检测到转阳。检测人工感染或同圈感染自然变异株后不同时间点的口腔液和血清样品,本研究建立的方法与商品化非洲猪瘟病毒血清抗体检测试剂盒检测的阳性符合率为100%,阴性符合率为37.5%,总符合率为61.5%。综上,本研究建立了一种无需采血,以口腔液为样品的ASFV黏膜sIgA抗体ELSIA检测方法,可实现ASFV感染的无创、早期、敏感诊断,为ASFV的监测和防控提供新的技术支持和补充。

关键词：非洲猪瘟 sIgA抗体 ELISA 早期诊断

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Tollip敲除猪肾细胞系的构建

畜牧兽医学报 2024年第4期55卷 1810-1818页

作者：王家丽杨帆邵文华黄梦瑶曹伟军蒲秀瑛张伟郑海学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730000 兰州理工大学生命科学与工程学院兰州730050 甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046

旨在探究Toll作用蛋白(toll-interacting protein, Tollip)对口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)增殖的影响,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Tollip基因缺失的猪肾细胞系(porcine kidney cell line, PK-15),并通过PCR测序和Western blot确认敲除效果,然后利用CCK-8试剂盒测定Tollip缺失后细胞活力变化,确认敲除细胞与野生细胞无显著差异,用FMDV感染敲除细胞后,采用Western blot、间接免疫荧光、实时荧光定量和病毒滴度测定等方法测定病毒在敲除细胞系中复制情况。结果显示:感染FMDV后,敲除细胞与野生细胞相比,显著促进了病毒的复制。综上,在PK-15细胞上,成功构建Tollip缺失细胞系,且试验表明Tollip的缺失有助于FMDV的复制。研究结果为后续Tollip功能研究及抗病毒机制研究提供理论依据。

关键词： CRISPR/Cas9 Tollip基因细胞系口蹄疫病毒