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猪传染性胃肠炎病毒RT-CPA检测方法构建及初步应用

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中国动物传染病学报 2024年第05期32卷 65-71页

作者：赵子惠陈伯祥王佳成伟伟杨明李元新甘肃省畜牧兽医研究所

为开发一种猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）RT-CPA快速且准确的检测方法。本试验根据TGEV S基因的D序列，设计了3对引物，使用构建的重组质粒作为标准阳性对照，通过优化筛选条件并应用可视化核酸试纸条，成功建立了一种一步法TGEV RT-CPA... 详细信息

为开发一种猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）RT-CPA快速且准确的检测方法。本试验根据TGEV S基因的D序列，设计了3对引物，使用构建的重组质粒作为标准阳性对照，通过优化筛选条件并应用可视化核酸试纸条，成功建立了一种一步法TGEV RT-CPA检测方法。本实验筛选最优条件为：Mg2+浓度1.0 mmol/L，dNTP浓度0.8 mmol/L，Betaine浓度1.0 mol/L，BstDNA聚合酶浓度8.0U，反应温度63℃，反应时间60 min，AMV逆转录酶5U。本研究的扩增产物通过凝胶电泳显示出梯形条带，证明了其对TGEV的特异性检测和良好的重复性，灵敏度高达10拷贝/μL。初步应用显示，该方法与TGEV抗原快速检测试剂盒的符合率超过90%，显示了高灵敏度。TGEV RT-CPA方法免去了RNA提取和cDNA合成的步骤，能够完成一步检测。此外，该方法不需要特殊仪器，适用于现场快速检测TGEV，为快速诊断和防控猪传染性胃肠炎提供了新技术。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 RT-CPA S基因检测方法

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秃疮花异紫堇碱对LPS诱导的牛肺微血管内皮细胞炎症因子和TLR2/MYD88/NF-κB通路的影响

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饲料研究 2024年 96-101页

作者：蒙琦常亮丁姝元周瑶刘盛楠王胜明杨明甘肃省畜牧兽医研究所

试验旨在探究秃疮花异紫堇碱（ICD）对脂多糖（LPS）诱导的牛肺微血管内皮细胞（CPA 47）炎症因子和Toll样受体2/髓样分化因子88/核转录因子-κB (TLR2/MYD88/NF-κB)通路的影响。选取CPA 47分为5组接种于6孔板中，每组设置4孔，对照组... 详细信息

试验旨在探究秃疮花异紫堇碱（ICD）对脂多糖（LPS）诱导的牛肺微血管内皮细胞（CPA 47）炎症因子和Toll样受体2/髓样分化因子88/核转录因子-κB (TLR2/MYD88/NF-κB)通路的影响。选取CPA 47分为5组接种于6孔板中，每组设置4孔，对照组细胞加入1640培养基，LPS组加入脂多糖处理建立炎症模型，ICD高剂量组细胞加入20 mg/L ICD+50μg/L LPS,ICD中剂量组细胞加入15 mg/L ICD+50μg/L LPS,ICD低剂量组细胞加入10 mg/L ICD+50μg/L LPS。分别利用ELISA检测各组的炎性因子含量，实时荧光定量PCR检测TLR2/MYD88/NF-κB通路中关键基因的表达量，免疫印迹法（Western blot）检测上述通路中各蛋白含量。结果显示，与对照组相比，LPS处理组和ICD低剂量组牛肺微血管内皮细胞白细胞介素-1β (IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8 (IL-8)和肿瘤坏死因子（TNF-α）含量显著升高（P研究表明，15～20 mg/L ICD可以有效缓解LPS诱导的牛肺微血管内皮细胞的炎症反应，抑制LPS诱导的牛肺微血管内皮细胞TLR2/MYD88/NF-κB炎症通路的激活。

关键词：秃疮花异紫堇碱牛肺微血管内皮细胞脂多糖炎症因子 TLR2/NF-κB/MYD88通路

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基于全基因组重测序分析酃县白鹅保种效果

中国畜牧兽医 2024年第11期51卷 4890-4898页

作者：万伟粲张旭黄璇燕海峰蒋桂韬李闯湖南省畜牧兽医研究所长沙410131

【目的】酃县白鹅是湖南地区优秀的地方鹅种,为了解酃县白鹅的保种效果,对保种场各家系进行保种工作的评估。【方法】从酃县白鹅保种场的42个家系中各选取1只公鹅,翅静脉采血,提取DNA,进行全基因组重测序。基于保种场42只酃县白鹅公鹅... 详细信息

【目的】酃县白鹅是湖南地区优秀的地方鹅种,为了解酃县白鹅的保种效果,对保种场各家系进行保种工作的评估。【方法】从酃县白鹅保种场的42个家系中各选取1只公鹅,翅静脉采血,提取DNA,进行全基因组重测序。基于保种场42只酃县白鹅公鹅的重测序数据,对其群体遗传结构和遗传多样性进行分析与评价。【结果】检测到采样群体的SNPs位点14270647个,经数据质控和过滤筛选出13696453个SNPs位点。主成分分析(PCA)结果发现,42只公鹅个体可以明显聚为3个亚群;通过群体渗透分析发现,3个亚群之间未发生明显的杂化现象(K=3)。亚群1和亚群3的群体分化指数(Fst值)为0.0842。42只酃县白鹅共检测到832条连续性纯合片段(ROH),ROH片段长度都集中在0~2 Mb区间;基于ROH得到的近交系数F ROH值为0.0130。群体的期望杂合度为0.2918,观测杂合度为0.2968,群体近亲系数(Fis)为0.036,多态信息含量(PIC)为0.266,基因多样性指数(Nei)为0.336。【结论】酃县白鹅保种场的鹅遗传多样性比较丰富,群体近交程度比较低,观测杂合度略高于期望杂合度,并无显著性差异,说明群体处于平衡状态,但部分亚群出现了中度遗传分化,后续保种过程中要使这些亚群进行杂交,以减少酃县白鹅遗传分化的程度。

关键词：酃县白鹅全基因组重测序遗传多样性群体结构

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基于miRNA测序数据解析苏博美利奴羊毛囊发育分子机制

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中国农业科学 2024年第19期57卷 3917-3935页

作者：何军敏毛静艺魏晨任一帆张果平田可川刘桂芬山东省农业科学院畜牧兽医研究所

【背景】羊毛由毛囊（hair follicle,HF）产生并控制，HF结构功能和形态发生是一个复杂的生物过程。细毛羊胚胎期HF发育过程决定了羊毛的产量和品质。苏博美利奴羊是我国自主培育的羊毛细度达17—19μm的精纺用超细毛羊新品种。超细毛... 详细信息

【背景】羊毛由毛囊（hair follicle,HF）产生并控制，HF结构功能和形态发生是一个复杂的生物过程。细毛羊胚胎期HF发育过程决定了羊毛的产量和品质。苏博美利奴羊是我国自主培育的羊毛细度达17—19μm的精纺用超细毛羊新品种。超细毛羊HF形态发生过程中miRNA及其调控机制有待更为深入的研究。【目的】解析超细毛羊早期HF发育中miRNA的分子调控机制对于更好地理解HF形态发生过程以及对细毛羊的育种工作具有重要的指导意义，为解析超细毛羊HF发育分子调控机制和选育优质超细毛羊提供可参考的分子标记。【方法】对相同饲养条件下的苏博美利奴羊进行同期发情和人工授精，授精日被指定为胚胎第0天（E0）。在胚胎期第65天（E65）、85天（E85）、105天（E105）和135天（E135）将妊娠母羊安乐死后进行剖宫产收集胚胎的皮肤组织；在羔羊出生后第7天（D7）和30天（D30）采集左侧肩胛部皮肤组织，每个时期采3个样本。运用miRNA-Seq鉴定毛囊发育不同时期的保守miRNA和Novel miRNA，并构建苏博美利奴羊HF发育不同时期的皮肤组织miRNA文库。对差异表达miRNA(DE-miRNA)进行靶基因预测及生物信息学分析，筛选参与超细毛羊HF发育的关键miRNA和候选基因，并构建miRNA-靶基因调控网络。运用RT-qPCR和双荧光素酶报告基因检测方法验证miR-433-3p与NOTCH1的靶向关系。【结果】构建了苏博美利奴羊HF发育不同时期18个皮肤组织miRNA文库，并筛选出87个DE-miRNA和446个Novel DE-miRNA。对DE-miRNA聚类分析可知毛囊诱导分化阶段（E65、E85、E105）有21个DE-miRNA，其中有5个（oar-miR-23b、oar-miR-133等）是关键候选miRNA；毛囊成熟阶段（E135、D7、D30）有28个DE-miRNA。SOM分析结果表明DE-miRNA可聚为10个Cluster，每个Cluster中miRNA有相似功能。对DE-miRNA和Novel DE-miRNA进行混合预测靶基因并进行功能富集发现靶基因主要富集通路有AMPK、Notch、hedgehog。将DE-mRNA与靶基因结合生物信息学分析构建了与HF发育相关的miRNA-靶基因调控网络。在293T细胞中将NOTCH1野生型和突变型载体与miR-433-3p mimics和mimics-NC共转染，结果表明NOTCH1为miR-433-3p的靶基因。【结论】构建了苏博美利奴羊毛囊发育不同时期miRNA表达谱，分析了miRNA及其靶基因的表达调控关系，并构建了miRNA-靶基因调控网络，进一步了解了miRNA在毛囊发育不同时期的作用及分子机制；为解析超细毛羊毛囊发育分子调控机制和选育优质超细毛羊提供可参考的分子标记。

关键词：毛囊发育苏博美利奴羊 miRNA 靶基因调控网络

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鄂东大别山区野生豆科牧草资源调查与评价

草业学报 2024年第6期33卷 116-125页

作者：熊军波张鹤山田宏陆姣云吴新江刘洋湖北省农业科学院畜牧兽医研究所湖北武汉430064

为开发利用野生豆科牧草资源,2017-2021年对分布于鄂东大别山区的野生豆科牧草资源现状、属种、植物区系、生活型及饲用价值进行了调查统计与分析。结果表明:鄂东大别山区豆科牧草资源分属于34属77种,以少种属和单种属为主体,占资源总数... 详细信息

为开发利用野生豆科牧草资源,2017-2021年对分布于鄂东大别山区的野生豆科牧草资源现状、属种、植物区系、生活型及饲用价值进行了调查统计与分析。结果表明:鄂东大别山区豆科牧草资源分属于34属77种,以少种属和单种属为主体,占资源总数的91%。资源中包括6个中国特有种,2个中国珍稀濒危种,23个栽培牧草野生种及野生近缘种。区系地理成分以温带和热带为主要分布型,分别占总属种的47%和38%。生活型以多年生草本和灌木为主,占资源总数的70%。资源中饲用品质优良的占79%,其余均在中等以上。

关键词：鄂东大别山区豆科牧草植物区系资源

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三穗鸭高低体重组胸肌代谢组差异分析

中国家禽 2024年

作者：伍革民韩雪吴松成冯宇隆贵州省农业科学院畜牧兽医研究所

为研究三穗鸭代谢组差异与其生长性能的关系，试验采用液相色谱质谱联用（LC-MS）技术对160日龄三穗鸭高低体重组鸭胸肌中的代谢物含量进行了鉴定。结果显示：三穗鸭胸肌中共鉴定到代谢物724种，其中多肽类含量最高，其次是激素递质类... 详细信息

为研究三穗鸭代谢组差异与其生长性能的关系，试验采用液相色谱质谱联用（LC-MS）技术对160日龄三穗鸭高低体重组鸭胸肌中的代谢物含量进行了鉴定。结果显示：三穗鸭胸肌中共鉴定到代谢物724种，其中多肽类含量最高，其次是激素递质类和脂肪。通过偏最小二乘判别分析（PLS-DA）和正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）分别筛选出显著差异代谢物126和137个，富集到46条代谢通路，其中显著差异代谢通路9条，分别属于氨基酸代谢、甘油磷酸酯代谢、氨基糖和核苷酸糖代谢以及烟酸和烟酰胺代谢。分析认为，氨基酸代谢和甘油磷酸酯代谢分别通过影响胸肌中蛋白质和脂肪的合成或沉积而成为影响三穗鸭生长性能的关键通路。以低体重组为对照，精氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、卵磷脂、甘磷酸胆碱等代谢物含量在高体重组中显著上调，而缬氨酸、瓜氨酸、乙酰鸟氨酸等代谢物含量在高体重组中显著下调，上述代谢物可能是影响三穗鸭生长性能的关键代谢物。试验鉴定和筛选到影响三穗鸭成年体重的氨基酸代谢、甘油磷酸酯代谢、氨基糖和核苷酸糖代谢以及烟酸和烟酰胺代谢等关键代谢通路，以及精氨酸、组氨酸、卵磷脂、甘磷酸胆碱、缬氨酸、瓜氨酸等关键代谢物，为三穗鸭生长性状遗传机理的进一步研究提供了基础理论素材。

关键词：三穗鸭生长性能代谢组学液相色谱质谱联用

妊娠相关糖蛋白的生物学功能及其在畜牧生产中的研究进展

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畜牧兽医学报 2024年第3期55卷 874-881页

作者：钟朱夏胡修忠向敏余婕刘辰晖赵胜兰万平民王定发周源程蕾武汉市农业科学院畜牧兽医研究所武汉430208

妊娠相关糖蛋白(pregnancy associated glycoproteins, PAGs)属于天冬氨酸蛋白酶基因编码的多基因家族成员,由偶蹄类动物胎盘滋养层巨细胞合成分泌的特异性糖蛋白,可在胎盘附着后的母体循环中检测到。PAGs在胚胎附着、胎盘发育、妊娠维... 详细信息

妊娠相关糖蛋白(pregnancy associated glycoproteins, PAGs)属于天冬氨酸蛋白酶基因编码的多基因家族成员,由偶蹄类动物胎盘滋养层巨细胞合成分泌的特异性糖蛋白,可在胎盘附着后的母体循环中检测到。PAGs在胚胎附着、胎盘发育、妊娠维持、胚胎存活、蛋白水解活性和免疫调节等方面具有潜在作用,常作为早期妊娠诊断和胚胎丢失的生物标志物,同时还可作为检测胎儿生存能力和监测胎盘健康的指标。在本文主要综述了PAGs家族的起源及特征、生物学功能及其在畜牧生产上应用的研究进展,以期为深入探究PAGs的生物学功能以及推动其在畜牧业快速发展提供参考依据。

关键词：妊娠相关糖蛋白胎盘起源及特征生物学功能畜牧生产

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温州红鸡生长曲线拟合与最佳上市周龄分析

浙江农业学报 2024年第8期36卷 1741-1752页

作者：李紫薇张雅文宋斌侯凤香金俊杰赵燕卢立志温州市农业科学研究院畜牧兽医研究所浙江温州325000 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310021

探究温州红鸡生长发育规律和不同周龄温州红鸡屠宰性能、肌肉品质的差异,为确定最佳上市周龄和高效养殖提供理论依据。利用Logistic模型、Gompertz模型和Von Bertalanffy模型对温州红鸡0~24周龄的生长曲线进行拟合分析;分别选取26、30... 详细信息

探究温州红鸡生长发育规律和不同周龄温州红鸡屠宰性能、肌肉品质的差异,为确定最佳上市周龄和高效养殖提供理论依据。利用Logistic模型、Gompertz模型和Von Bertalanffy模型对温州红鸡0~24周龄的生长曲线进行拟合分析;分别选取26、30和34周龄的温州红鸡各20只(公母各半),测定屠宰性能、肌肉品质。结果表明:3种非线性模型均可以较好地拟合温州红鸡的生长,拟合度(R2)均达到0.99以上,其中Von Bertalanffy模型更适合公鸡(R^(2)=0.998 2),Gompertz模型更适合母鸡(R^(2)=0.997 3)。屠宰率达到90%以上,全净膛率达到68%以上。公鸡、母鸡在各周龄时的半净膛率、全净膛率、胸肌率、腿肌率、剪切力、水分含量、粗灰分含量和粗蛋白含量无显著差异,剪切力随着周龄的增长逐渐增大;30周龄公鸡的粗脂肪含量最高,26周龄公鸡的总钙含量最高,26周龄、30周龄公鸡的总磷含量显著(P所述,温州红鸡母鸡在30~34周龄上市为宜,公鸡在30周龄上市为宜。

关键词：温州红鸡生长曲线屠宰性能肌肉品质上市周龄

基于全基因组重测序研究文昌鸡产蛋性能的影响因素

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 502-514页

作者：任钰为陈星林燕宁黄潇仙洪玲玲王峰孙瑞萍张艳刘海隆郑心力晁哲海南省农业科学院畜牧兽医研究所海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口571100 武汉市农业科学院畜牧兽医研究所武汉430000

旨在通过研究文昌鸡进化过程的特征,深入理解影响产蛋性能的因素,为文昌鸡优良品种选育提供基础。本研究采集35只健康文昌鸡(35周龄,15公,20母)和30只健康江汉鸡(35周龄,10公,20母)的血液组织各3 mL提取DNA,采用全基因组重测序方法建库... 详细信息

旨在通过研究文昌鸡进化过程的特征,深入理解影响产蛋性能的因素,为文昌鸡优良品种选育提供基础。本研究采集35只健康文昌鸡(35周龄,15公,20母)和30只健康江汉鸡(35周龄,10公,20母)的血液组织各3 mL提取DNA,采用全基因组重测序方法建库测序。首先,对于原始测序数据用trimmomatic软件过滤,获得高质量序列比对到鸡的参考基因组,GATK软件提取变异位点SNPs,设置参数质控去除低质量、假阳性变异位点,进一步采用snpEff对过滤的SNPs进行基因结构和功能注释。然后,比较文昌鸡和江汉鸡的群体结构差异,分别设置评估群体差异参数Fst、ROD、Tajima′s D的阈值,筛选受到选择的区域,并对这些区域的基因进行功能富集。结果表明:1)文昌鸡测序获得1.05 Tb clean data,平均每个样本大约29.97 Gb,测序深度大约28×;江汉鸡测序获得1.10 Tb clean data,每个样本大约36.72 Gb,测序深度大约35×;平均比对率>98%。2)两个群体基因结构注释总数均是内含子>基因间区>上下游调控区>编码区;系统进化树和主成分分析显示文昌鸡和江汉鸡亲缘关系较远;文昌鸡的连锁不平衡程度低于江汉鸡。3)与产蛋性能相关基因的功能富集结果主要包括3种必须氨基酸(缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸)代谢途径、钙离子沉积、金属肽酶抗氧化、肾上腺素和催乳素受体活性等功能,而且这些通路的基因都位于受到强烈选择的区域。综上所述,影响文昌鸡产蛋性能的因素主要包括必须氨基酸代谢、矿物质沉积和抗氧化、性腺激素分泌,这3个因素在进化过程中都受到强烈选择,对产蛋性能发挥重要调控作用。从进化分子遗传学角度研究鸡的产蛋机理,不但能够促进理解文昌鸡产蛋性能的进化特征,而且有助于加速高产蛋鸡品种或品系的培育。

关键词：文昌鸡全基因组重测序遗传选择产蛋性能影响因素