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花鲈虹彩病毒交叉引物恒温扩增检测方法的建立

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广东农业科学 2024年第3期51卷 148-156页

作者：马艳平覃宝田梁曦王刚郝乐周东来刘振兴广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东广州510640 汕尾市农业科学院广东汕尾516600 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所广东广州510640

【目的】花鲈虹彩病毒(Lateolabrax maculatus iridovirus,LMIV)严重威胁花鲈养殖业安全,无特效防控药物,早期诊断在LMIV防控中发挥极其重要的作用。建立一种简便、快捷、准确的现场快速诊断方法,可为LMIV的基层诊断提供技术支撑。【方... 详细信息

【目的】花鲈虹彩病毒(Lateolabrax maculatus iridovirus,LMIV)严重威胁花鲈养殖业安全,无特效防控药物,早期诊断在LMIV防控中发挥极其重要的作用。建立一种简便、快捷、准确的现场快速诊断方法,可为LMIV的基层诊断提供技术支撑。【方法】利用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA),针对LMIV ATPase基因高保守区设计1套单交叉引物。以构建的ATPase重组质粒作为阳性模板,对反应体系中的引物浓度比,Bst DNA聚合酶、Betaine、MgSO_(4)、dNTP浓度,以及反应温度和反应时间进行优化;结合一次性核酸试纸条,建立可视化检测LMIV-CPA的方法。【结果】最优引物浓度比组合为交叉引物CPF1.0μmol/L,引物F3和B3均为0.4μmol/L,探针引物B1(FAM)和B2(Biotin)均为0.8μmol/L;MgSO4浓度为6 mmol/L、Betaine浓度为0.4 mol/L、dNTP浓度为0.6 mmol/L、Bst DNA聚合酶浓度为0.256 U/μL;最佳反应温度为62℃,最佳反应时间为45 min。扩增产物经凝胶电泳检测呈梯形条带,带有探针的反应产物采用一次性核酸试纸条检测装置进行检测,在3~5 min内即可通过是否出现特征性条带而使反应结果可视化。该方法可特异性地检测出LMIV,不与其他水生常见病毒和常见细菌发生交叉反应。使用LMIV-CPA方法和常规PCR方法共同检测156份临床样品,LMIV-CPA的阳性检出率为93.30%,常规PCR方法的阳性检出率为85.83%;在比较二者的灵敏度差异时,LMIV-CPA的检测限为102 copies/μL,灵敏度为常规PCR的10倍,综合结果显示LMIV-CPA优于PCR。【结论】LMIV-CPA检测方法不依赖昂贵的仪器设备与专业技术人员,可应用于LMIV的现场快速检测,为花鲈LMIV的准确快速诊断和有效防控提供技术支撑。

关键词：花鲈虹彩病毒交叉引物恒温扩增特异性灵敏度核酸试纸条可视化

荷斯坦奶牛肝脏组织中与泌乳时期及繁殖力相关的基因共表达网络构建

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 528-539页

作者：张志飞唐雪颖闵力童雄陈卫东巨向红李大刚广东省农业科学院动物科学研究所广东省畜禽育种与营养研究重点实验室广州510000 广东海洋大学滨海农业学院湛江524000

旨在运用加权基因共表达网络分析技术(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)筛选出荷斯坦奶牛(Bos taurus)肝脏组织中与泌乳时期及繁殖力相关的基因。本研究采用GEO数据库中的GSE62159数据集,该数据集分别包含高繁殖力... 详细信息

旨在运用加权基因共表达网络分析技术(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)筛选出荷斯坦奶牛(Bos taurus)肝脏组织中与泌乳时期及繁殖力相关的基因。本研究采用GEO数据库中的GSE62159数据集,该数据集分别包含高繁殖力(分泌到配种的平均时间间隔为85.6 d,n=24)和低繁殖力(分泌到配种的平均时间间隔为113.8 d,n=24)健康荷斯坦母牛在妊娠后期、泌乳初期和泌乳中期的肝脏组织转录组数据,使用R语言中的WGCNA包对该数据集进行共表达分析。将所得到的模块与不同泌乳时期以及不同繁殖力进行关联分析,得到目标模块,再依据连接度选择出排名前30的基因作为枢纽基因(Hub基因),对Hub基因进行功能富集分析,使用String网站构建出模块的蛋白互作网络(PPI),并使用Cytoscape软件筛选出Hub基因与蛋白互作分析(PPI)网络核心基因的交集,最终得到肝脏中与泌乳时期及繁殖力相关的目标基因。研究共得到14个模块,其中tan、greenyellow两个模块与泌乳时期相关,black模块与繁殖力相关。对hub基因进行富集分析后,发现肝脏中与泌乳早期相关基因功能主要包括:有物质的合成代谢途径、脂质脂蛋白的基因表达、蛋白质的合成到分泌等;与泌乳中期相关基因功能主要包括:疾病、机体的炎症反应、免疫反应以及急性期等;与繁殖力相关基因功能主要包括:胰岛素抵抗、子宫内膜癌以及癌症等。筛选到的12个肝脏中与泌乳早期相关的目标基因有RPN1、SEC 61A1、SEC 61B、SEC 61G、SSR1、SSR3、STT 3A、DAD1、DDOST、ERLEC1、HM 13和OSTC;6个与泌乳中期相关的目标基因有ITGAL、ITGB2、LAPTM5、PTPRC、C 3AR1和CTSS;4个与繁殖力相关的目标基因有:PDS 5A、ROCK1、AQR和LTN 1。本研究使用WGCNA、PPI、基因功能富集等生物信息学方法,鉴定得到荷斯坦奶牛肝脏中与泌乳时期、繁殖力相关的目标基因,并对目标基因进行了功能富集分析,为高繁殖力及高产奶牛培育方向的科研工作积累了理论资料。

关键词：荷斯坦奶牛肝脏泌乳繁殖性能加权基因共表达网络分析

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不同贮藏温度下稻花鸡肉优势腐败菌变化及Arrhenius货架期预测模型的建立

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现代食品科技 2024年第2期40卷 178-186页

作者：刘梦竹徐志宏魏琦麟涂杜康桦华岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心广东肇庆526238 广东省农业科学院动物卫生研究所农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东广州510640

为获得稻花鸡肉腐败菌的Arrhenius货架期预测模型,采用培养基初步筛选与16S rDNA全基因序列鉴定优势腐败菌,研究不同贮藏温度(25、4、0℃)下优势腐败菌和菌落总数的生长变化,通过化学反应动力学方程构建菌落总数、假单胞菌和沙雷氏菌货... 详细信息

为获得稻花鸡肉腐败菌的Arrhenius货架期预测模型,采用培养基初步筛选与16S rDNA全基因序列鉴定优势腐败菌,研究不同贮藏温度(25、4、0℃)下优势腐败菌和菌落总数的生长变化,通过化学反应动力学方程构建菌落总数、假单胞菌和沙雷氏菌货架期预测模型并进行验证。结果表明,稻花鸡肉在贮藏过程中逐渐占主导地位的优势腐败菌是假单胞菌属莓实假单胞菌和肠杆菌科沙雷氏菌属液化沙雷氏菌。稻花鸡肉25℃常温贮藏下货架期不超过0.5 d,腐败中后期沙雷氏菌占主导地位,4℃冷藏保鲜货架期不超过4 d,假单胞菌和沙雷氏菌均随贮藏时间的延长呈增长趋势,0℃冰温贮藏货架期不超过10 d,贮藏后期假单胞菌和沙雷氏菌差异性不显著。利用菌落总数、假单胞菌、沙雷氏菌3个指标建立货架期预测模型,3种货架期预测模型预测值与实测值对比,平均相对误差均在允许范围内,预测效果最佳的是假单胞菌货架期预测模型。菌落总数、假单胞菌和沙雷氏菌货架期预测模型均能对稻花鸡肉的货架期进行真实预测。

关键词：稻花鸡肉菌落总数假单胞菌沙雷氏菌货架期预测模型

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全基因关联分析筛选文昌鸡体尺性状相关分子标记

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中国农业科学 2024年第10期57卷 2046-2060页

作者：骆娜安炳星魏立民文杰赵桂苹海南省农业科学院三亚研究院(海南省实验动物研究中心) 海南省农业科学院畜牧兽医研究所中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/动物营养学国家重点实验室

【目的】体尺是评价禽类生长特性的主要指标，通过筛选与文昌鸡体尺性状相关的分子标记及候选基因，为解析体尺性状的遗传机制及分子育种提供理论支撑。【方法】利用海南省文昌鸡品系3个世代（n=2 024）群体作为研究对象，测定每只鸡在... 详细信息

【目的】体尺是评价禽类生长特性的主要指标，通过筛选与文昌鸡体尺性状相关的分子标记及候选基因，为解析体尺性状的遗传机制及分子育种提供理论支撑。【方法】利用海南省文昌鸡品系3个世代（n=2 024）群体作为研究对象，测定每只鸡在上市日龄的胫长、胫围、体斜长、龙骨长及胸宽等5个体尺性状。采集血液进行鸡“京芯一号”55 K芯片测序及基因分型，使用GEMMA软件与PLINK软件进行全基因组关联分析，鉴定与体尺性状相关的SNP位点和候选基因，通过LD分析鉴定与体尺性状显著相关的单倍型。【结果】表型结果显示，113日龄文昌鸡公鸡平均胫长8.64 cm，胫围0.46 cm，体斜长19.73 cm，龙骨长12.32 cm，胸宽6.81 cm；母鸡平均胫长6.98 cm，胫围0.40 cm，体斜长17.79 cm，龙骨长10.45 cm，胸宽6.24 cm。经过质控后，共保留42 206个SNPs和2 024个个体用于后续研究。使用Plink软件进行PCA主成分分析，结果发现3个世代群体存在一定的分散情况，因此在GWAS关联分析中加入了前3个主成分作为协变量，以校正群体结构对关联分析的影响。GWAS结果研究共鉴定出19个SNPs位点与胫长性状显著或建议性显著相关（P值分别为2.17789E-06和4.35578E-05）,23个SNPs位点与胫围性状显著或建议性显著相关，7个SNPs位点与体斜长性状显著或建议性显著相关，2个SNPs位点与龙骨长性状显著或建议性显著相关，未鉴定出与胸宽性状或建议性显著相关的SNPs位点。通过对显著性位点进行注释，结果共鉴定到16个体尺性状相关的候选基因，包括羧基末端LIM结构域结合蛋白2(LIM domain binding 2,LDB2)、染色体缩合蛋白G(non-SMC condensin I complex subunit G,NCAPG)、序列相似家族184成员B基因（family with sequence similarity 184 member B,FAM184B）、A型钾离子通道调节蛋白4(potassium voltage-gated channel interacting protein 4,KCNIP4)等。通过LD单倍型分析结果显示，GGA4存在3个显著关联的单倍型，对于胫长性状，rs316943436和rs313978573两个位点位于单倍型区块中；对于胫围性状，rs313196946AA、rs316242963、rs315796839、rs313978573、rs734365522共5个位点位于单倍型区块中；对于体斜长性状，只有1个位点（rs313978573）位于单倍型区块中，其中候选基因LDB2和NCAPG在显著的block区块中被注释到。【结论】经GWAS方法筛选出SEPSECS、LGI2、DHX15、KCNIP4、NCAPG、FAM184B、LDB2、CC2D2A作为胫长性状潜在的候选基因；FH、TBC1D1、DTHD1、SEPSECS、LGI2、SOD3、PPARGC1A、KCNIP4、NCAPG、FAM184B、CLRN2、LDB2、TAPT1、CC2D2A作为胫围性状潜在的候选基因，KCNIP4、LDB2、TAPT1、NRXN3作为体斜长性状潜在的候选基因，FAM184B作为龙骨长性状潜在的候选基因。总之，本文确定了LDB2、NCAPG和FAM184B等作为胫长、胫围、体斜长和龙骨长等体尺性状的潜在功能基因。为文昌鸡体尺性能的分子标记辅助选择育种提供理论支撑。

关键词：全基因组关联分析鸡体尺性状胫长胫围

白花鬼针草复方提取物对生长猪生长性能和血液生化指标的影响

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家畜生态学报 2024年第2期45卷 33-38页

作者：袁明贵徐志宏彭新宇唐兴刚八晓敏田雅向蓉杨希广东省农业科学院动物卫生研究所广东省畜禽疫病防治研究重点实验室农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站广东广州510640 岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心广东茂名525000 广东省农业科学院动物科学研究所广东广州510640

为了促进入侵植物白花鬼针草(Bidens alba(L.)DC,BD)的资源化利用,将4.00 kg白花鬼针草、1.20 kg车前草、0.10 kg生姜、0.25 kg大蒜组成复方,用水提取,然后用乙醇沉淀,经工艺处理后获得白花鬼针草复方提取物(BD formulation extracts,BD... 详细信息

为了促进入侵植物白花鬼针草(Bidens alba(L.)DC,BD)的资源化利用,将4.00 kg白花鬼针草、1.20 kg车前草、0.10 kg生姜、0.25 kg大蒜组成复方,用水提取,然后用乙醇沉淀,经工艺处理后获得白花鬼针草复方提取物(BD formulation extracts,BDFE)成品0.15 kg。将提取物成品按照0 mg/kg(对照组),125 mg/kg(低剂量组),250 mg/kg(中剂量组),500 mg/kg(高剂量组)比例添加到配合饲料中,饲喂杜长大生长猪。结果表明,饲喂20 d后,与对照组相比,高、中剂量组的料重比(F/G)分别降低4.52%和2.08%。饲喂10 d后,高剂量组胆固醇(CHOL)浓度和碱性磷酸酶(ALKP)活性极显著高于中剂量组(P<0.01);低剂量组谷氨酰转移酶(GGT)活性显著高于中剂量组(P<0.05);高剂量组血清磷(PHOS)浓度显著高于低剂量组(P<0.05)。饲喂20 d后,高、中、低剂量组ALKP活性极显著高于对照组(P<0.01);高、中、低剂量组球蛋白(GLOB)含量显著高于对照组(P<0.05);高、中剂量组肌酐(CREA)浓度显著高于对照组(P<0.05);高剂量组胆固醇(CHOL)浓度和GGT活性显著高于对照组(P<0.05);高剂量组白蛋白(ALB)含量和丙氨酸转氨酶(ALT)活性显著低于对照组(P<0.05)。综上,白花鬼针草复方提取物对生长猪无肝脏毒性,无肾脏毒性,无胰腺毒性,可以促进生长猪对脂肪、能量、蛋白质的新陈代谢,可以促进对钙磷矿物质的吸收,从而提高生长猪的生长性能。

关键词：白花鬼针草杜长大生长猪生长性能血液生化

饲粮中添加不同水平钙磷对断奶仔猪肠道微生物和肠道上皮屏障功能的影响

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动物营养学报 2024年

作者：苗振彦李英孙焱杰吴绮雯邓东艳唐佳希杨雪芬王丽蒋宗勇易宏波广东省农业科学院动物科学研究所猪禽种业全国重点实验室农业农村部华南动物营养与饲料重点实验室广东省畜禽育种与营养研究重点实验室岭南现代农业科学与技术广东省实验室茂名分中心华南农业大学兽医学院

本试验旨在探讨饲粮中添加不同水平钙磷对断奶仔猪肠道微生物和肠道上皮屏障功能的影响。144头断奶仔猪(杜×长×大,21日龄)随机分配到6个组,每组6个栏,每栏4头(公母各占1/2)。饲粮标准全消化道可消化钙(STTD Ca)和标准全消化道可消化磷... 详细信息

本试验旨在探讨饲粮中添加不同水平钙磷对断奶仔猪肠道微生物和肠道上皮屏障功能的影响。144头断奶仔猪(杜×长×大,21日龄)随机分配到6个组,每组6个栏,每栏4头(公母各占1/2)。饲粮标准全消化道可消化钙(STTD Ca)和标准全消化道可消化磷(STTD P)比值固定为1.2,6个组(CAP1～6组)STTD Ca含量分别为0.216%、0.312%、0.408%、0.504%、0.600%、0.696%,对应的STTD P含量分别为0.18%、0.26%、0.34%、0.42%、0.50%、0.58%。试验期为42 d。结果表明:1)与CAP1组和CAP6组相比,CAP2组和CAP4组仔猪结肠微生物Chao1指数显著降低(P<0.05),Goods＿coverage指数显著提高(P<0.05)。与CAP1组相比,CAP5组仔猪结肠中变形菌门(Proteobacteria)、狭义梭菌属1(Clostridium＿sensu＿stricto＿1)相对丰度显著增加(P<0.05),拟杆菌门(Bacteroidota)、粪杆菌属(Faecalibacterium)的相对丰度显著降低(P<0.05);而CAP6组链球菌属(Streptococcus)、粪杆菌属的相对丰度显著降低(P<0.05),克里斯滕森菌科R-7群(Christensenellaceae＿R-7＿group)的相对丰度显著增加(P<0.05)。2)CAP6组仔猪结肠内容物中乙酸含量最低,且显著低于CAP1组(P<0.05);同时,CAP1组仔猪结肠内容物中异丁酸和异戊酸含量显著低于其他5组(P<0.05),且相关性分析揭示异丁酸和异戊酸的含量变化与狭义梭菌属1、考拉杆菌属(Phascolarctobacterium)等微生物相对丰度密切相关。3)与CAP1组相比,CAP6组仔猪空肠闭锁蛋白-1(Claudin-1)基因相对表达量和蛋白表达水平降低,且回肠闭合蛋白(Occludin)和Claudin-1的蛋白表达水平显著降低(P<0.05);同时,CAP4组仔猪回肠Occludin基因相对表达量和空肠Claudin-1的蛋白表达水平显著低于CAP1组(P<0.05);此外,与CAP4组相比,CAP6组回肠Occludin和空肠Claudin-1的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。综上可知,饲粮中添加不同水平钙磷对仔猪肠道微生物及其肠道屏障功能具有重要调控作用,且0.504%STTD Ca和0.42%STTD P有利于维护肠道微生物稳态和肠道上皮屏障功能,而低钙磷(0.216%STTD Ca和0.18%STTD P)会抑制肠道微生物代谢物的产生,高钙磷(0.696%STTD Ca和0.58%STTD P)可能会损害仔猪肠道上皮屏障功能。

关键词：断奶仔猪钙磷肠道微生物肠道屏障

饲粮中葛藤不同添加量对肉兔养分表观消化率、胃肠道发育及消化酶活性的影响

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草业学报 2024年第4期33卷 199-209页

作者：高承芳桑雷孙世坤陈冬金王锦祥谢喜平福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽遗传育种重点实验室福建福州350013

为探讨葛藤在肉兔饲粮中的应用效果,开展葛藤的常规营养成分分析,选取35±2日龄体重(0.88±0.13 kg)相近的断奶伊拉兔肉兔200只,随机分成4组,每组5个重复,每个重复10只,分别饲喂添加0(对照组)、15%、25%、35%葛藤的试验饲粮。预试期7 d... 详细信息

为探讨葛藤在肉兔饲粮中的应用效果,开展葛藤的常规营养成分分析,选取35±2日龄体重(0.88±0.13 kg)相近的断奶伊拉兔肉兔200只,随机分成4组,每组5个重复,每个重复10只,分别饲喂添加0(对照组)、15%、25%、35%葛藤的试验饲粮。预试期7 d,正试期42 d。于正试期第36天开始进行为期7 d的消化代谢试验,分析肉兔养分表观消化率,试验结束后测定分析肉兔盲肠消化酶活性及胃肠道的变化。结果显示,饲粮中添加不同量的葛藤:1)提高了各处理组肉兔对饲粮中干物质、粗蛋白、粗纤维、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、酸性木质素、粗脂肪和半乳糖醛酸的表观消化率,35%葛藤组表观消化率最高,显著高于15%葛藤组与对照组(P0.05),但显著提高了盲肠相对长度和重量、胃相对重量与小肠相对重量,25%与35%葛藤组显著高于对照组(P<0.05)。4)提高了肉兔空肠、回肠与十二指肠的绒毛长度、绒毛长度/隐窝深度比值(V/C)和黏膜层厚度,降低了隐窝深度值,35%葛藤组肉兔回肠、十二指肠的绒毛长度显著高于对照组(P<0.05),空肠、回肠的隐窝深度低于对照组,空肠、回肠的V/C显著高于对照组(P<0.05)。因此,生长肉兔饲粮中最适宜的葛藤添加量为35%。

关键词：伊拉兔葛藤养分表观消化率胃肠道发育消化酶活性

棉籽蛋白的营养价值及其在动物饲料中的应用研究进展

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中国畜牧兽医 2024年第9期51卷 3867-3877页

作者：李敏吕旦陈冰曹俊明赵红霞广东省农业科学院动物科学研究所广东省农业科学院水产协同创新中心广东省畜禽育种与营养研究重点实验室农业农村部华南动物营养与饲料重点实验室广州510640 广东海洋大学水产学院湛江524088 广东省农业科学院广州510640

由于畜禽水产养殖业的快速发展,优质饲料蛋白面临需求量快速增加、原料价格上涨和品质参差不齐等问题,寻找优质的替代蛋白成为解决问题的关键。棉籽蛋白作为一种优质蛋白在动物饲料中广泛使用,蛋白质含量可以达到40%以上,资源丰富且价... 详细信息

由于畜禽水产养殖业的快速发展,优质饲料蛋白面临需求量快速增加、原料价格上涨和品质参差不齐等问题,寻找优质的替代蛋白成为解决问题的关键。棉籽蛋白作为一种优质蛋白在动物饲料中广泛使用,蛋白质含量可以达到40%以上,资源丰富且价格低廉,但其存在的抗营养因子限制了其在生产中的应用。随着棉籽蛋白生产工艺的不断发展,通过合理有效的科学技术手段去除棉籽蛋白的抗营养因子并进一步优化其营养组成,其营养价值和适口性不断提高。合理利用棉籽蛋白能在保证动物生长性能的同时可以大幅降低动物饲料成本,但关于棉籽蛋白在不同养殖动物和生长阶段的适宜添加量和添加形式,对动物吸收、代谢、生理功能的影响及作用机制研究尚未明确。作者阐述了棉籽蛋白的营养价值、生产工艺、替代饲料蛋白源的研究现状以及影响棉籽蛋白利用价值的因素,为棉籽蛋白的合理使用和进一步提高棉籽蛋白利用价值提供参考。

关键词：棉籽蛋白营养价值游离棉酚蛋白替代

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干扰素刺激基因20的研究进展

畜牧与兽医 2024年第8期56卷 121-124页

作者：沈海燕王梦璐王松祺聂晶晶瞿云芝刘志成张春红廖明张建峰广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室广东广州510640 华南农业大学兽医学院广东广州510642

干扰素刺激基因20(interferon-stimulated gene 20,ISG20)属于DEDDh外切核酸酶家族,具有3′-5′端外切核酸酶活性,能降解RNA和DNA。ISG20在宿主抗病毒天然免疫应答中起着重要作用。此外,ISG20在特定疾病中的作用以及将其作为疾病的生物... 详细信息

干扰素刺激基因20(interferon-stimulated gene 20,ISG20)属于DEDDh外切核酸酶家族,具有3′-5′端外切核酸酶活性,能降解RNA和DNA。ISG20在宿主抗病毒天然免疫应答中起着重要作用。此外,ISG20在特定疾病中的作用以及将其作为疾病的生物标志物等方面的研究同样具有重要生物学意义。本文综述了ISG20的概况,阐述了近些年来ISG20的抗病毒研究进展及其在疾病标记中的潜在用途,以期为ISG20抗病毒免疫研究和治疗疾病药物的开发提供参考。

关键词：干扰素刺激基因20 核酸外切酶抗病毒机制生物标志物