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盐酸青藤碱诱导黏连性膝关节强直家兔成纤维细胞凋亡的机制研究

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生物化学与生物物理进展 2024年第4期51卷 959-968页

作者：侯新聚雷洪峰陈勇黎芙希孙敬宁刘佳铭马红梅南昌市洪都中医院南昌330008 广州中医药大学第四临床医学院广州510006 广州中医药大学第二临床医学院广州510006

目的观察盐酸青藤碱对膝关节黏连强直的家兔成纤维细胞增殖和相关基因表达的影响,并进一步尝试探讨其对抗膝关节黏连强直的作用机制。方法以体外培养法培养成纤维细胞,并设对照组、盐酸青藤碱低中高浓度实验组。CCK-8法检测成纤维细胞... 详细信息

目的观察盐酸青藤碱对膝关节黏连强直的家兔成纤维细胞增殖和相关基因表达的影响,并进一步尝试探讨其对抗膝关节黏连强直的作用机制。方法以体外培养法培养成纤维细胞,并设对照组、盐酸青藤碱低中高浓度实验组。CCK-8法检测成纤维细胞增殖的情况;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测经过盐酸青藤碱处理后,成纤维细胞相关基因mRNA表达的改变,用ELISA法检测药物的作用对血清中炎症因子等水平的影响,蛋白质印迹法(Western blot)检测相关蛋白质的表达。结果盐酸青藤碱能降低成纤维细胞存活率,且随浓度升高存活率逐渐降低。盐酸青藤碱中各个组的效果均十分明显(P<0.05)。在相关基因的mRNA表达层面,与对照组比较,盐酸青藤碱各组炎症因子均显著下调(P<0.05),凋亡蛋白的表达量显著上升、Bcl-2的mRNA表达量下降(P<0.05),而PI3K/mTOR/AKT3信号通路分子的mRNA表达量均下降(P<0.05)。在蛋白质表达层面,与对照组相比较,中、高剂量盐酸青藤碱组血清中炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β、TGF-β的水平均明显下调(P<0.05),凋亡蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3/7及Bax的表达量均上调,并且与给药剂量成正相关,而抗凋亡蛋白Bcl-2、PI3K/AKT3/mTOR信号通路的表达量则与给药剂量成负相关。盐酸青藤碱对家兔膝关节成纤维细胞的存活表现为显著的抑制作用,作用机制或与下调炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β的表达,并促进凋亡蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3/7及Bax的表达,抑制Bcl-2的表达,抑制其下游PI3K/AKT3/mTOR信号通路的基因表达有关。结论盐酸青藤碱可抑制黏连性膝关节强直家兔膝关节成纤维细胞的炎症反应和加速成纤维细胞的凋亡,或可通过该机制为改善和治疗黏连性膝关节强直提供新的方法。

关键词：盐酸青藤碱黏连性膝关节强直家兔成纤维细胞

多组学分析揭示溃疡性结肠炎缓解期脾虚湿困证与活动期湿热阻滞证间的潜在分子机制及靶向中药预测

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中草药 2024年第9期55卷 3041-3056页

作者：黎祖鸣封杰妮陈雪如陈剑坤卢月李际强冯艳广州中医药大学第二临床医学院广东广州510405 广州中医药大学第二附属医院(广东省中医院) 广东广州510006

目的综合分析溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)相关scRNA-seq和RNA-seq数据集,探讨UC缓解期脾虚湿困证与活动期湿热阻滞证间的潜在分子机制,并挖掘潜在干预中药。方法运用差异基因表达分析和韦恩图鉴定出UC缓解期脾虚湿困证和活动... 详细信息

目的综合分析溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)相关scRNA-seq和RNA-seq数据集,探讨UC缓解期脾虚湿困证与活动期湿热阻滞证间的潜在分子机制,并挖掘潜在干预中药。方法运用差异基因表达分析和韦恩图鉴定出UC缓解期脾虚湿困证和活动期湿热阻滞证相关基因及两者间的对话基因。通过京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)、基因集变异分析(gene set variation analysis,GSVA)及Spearman相关性分析深入探讨对话基因参与的生物过程及潜在功能。通过单细胞转录组分析探讨UC缓解期与活动期的差异情况及对话基因在其中的作用。基于循环算法构建UC缓解期脾虚湿困证向活动期湿热阻滞证发生发展的风险预测模型。运用外部数据集、动物实验与实时定量聚合酶链反应(realtime quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)进一步验证对话基因的表达情况。借助SoFDA数据库构建“基因-中医症状/现代医学症状”网络;借助TCMIP和COREMINE数据库预测对话基因的潜在靶向中药。结果鉴定出31个UC缓解期脾虚湿困证相关基因,其主要富集在代谢相关途径;鉴定出160个UC活动期湿热阻滞证相关基因,其主要富集在炎症免疫相关途径。鉴定出22个UC缓解期脾虚湿困证与活动期湿热阻滞证之间的对话基因,上调对话基因与炎症免疫相关途径呈显著相关性,下调对话基因与代谢途径呈显著相关性。单细胞转录组分析显示,相比于正常对照及UC缓解期,UC活动期中B细胞占比上调;B细胞在UC活动期湿热阻滞证中作用贡献较大,而在UC缓解期脾虚湿困证中的作用贡献较小;UC活动期B细胞的受体信号通路活性明显高于UC缓解期;上调的对话基因CD55在B细胞中表达水平较高,CD55+B细胞与CD55−B细胞之间存在差异的细胞通讯及细胞代谢水平。6个风险预测基因(CD55、PCSK1、SERPING1、ACAT1、SLC26A2、HMGCS2)可以较为准确预测UC缓解期脾虚湿困证向UC活动期湿热阻滞证发展,动物实验及RT-PCR验证了其表达水平。通过数据库检索得到人参、黄芪、枸杞子等45味潜在靶向中药。结论鉴定出22个关键对话基因,它们可能通过影响炎症免疫和代谢相关途径诱导UC缓解期脾虚湿困证向UC活动期湿热阻滞证发展。B细胞在UC缓解期脾虚湿困证向活动期湿热阻滞证发生发展过程中发挥重要作用。CD55可能通过影响炎症免疫和代谢相关途径,促进B细胞活性,从而促进UC缓解期脾虚湿困证向活动期湿热阻滞证发展。22个关键对话基因与UC相关中医症状和现代医学症状关联密切。

关键词：溃疡性结肠炎单细胞转录组转录组缓解期脾虚湿困证活动期湿热阻滞证人参黄芪枸杞子

靳三针调神针法治疗卒中后焦虑的疗效观察及对下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响

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针刺研究 2024年第1期49卷 57-63页

作者：李美晨王毓婷李柯谊许小燕庄礼兴广州中医药大学第二临床医学院广州510405 广州中医药大学针灸康复临床医学院广州510405 广州中医药大学第一临床医学院广州510405 广州中医药大学第一附属医院康复中心广州510405

目的:观察靳三针调神针法治疗卒中后焦虑的临床疗效,从下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的角度探讨其作用机制。方法:将54例卒中后焦虑患者按照随机数字表法分为假针组(26例)和靳三针调神针组(28例)。两组患者均接受基础药物治疗及康复治疗,... 详细信息

目的:观察靳三针调神针法治疗卒中后焦虑的临床疗效,从下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的角度探讨其作用机制。方法:将54例卒中后焦虑患者按照随机数字表法分为假针组(26例)和靳三针调神针组(28例)。两组患者均接受基础药物治疗及康复治疗,两组均取四神针、神庭、印堂及双侧神门、三阴交、合谷、太冲,靳三针调神针组予真实针刺,假针组予假针刺,每次30 min,每日1次,每周连续针刺5次,共治疗3周。比较两组治疗前、开始治疗后第10天及治疗后第21天汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评分、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分的变化,ELISA法检测血清促肾上腺皮质激素(ACTH)及血清皮质醇(CORT)含量,并记录不良反应。结果:与本组治疗前比较,靳三针调神针组治疗第10、21天HAMA评分及NIHSS评分降低(P<0.05);假针组治疗第21天HAMA评分及NIHSS评分降低(P<0.05)。治疗第21天,靳三针调神针组HAMA评分及NIHSS评分较假针组下降更明显(P<0.05)。治疗第21天靳三针调神针组血清ACTH含量及血清CORT含量较本组治疗前及假针组治疗后降低(P<0.05)。靳三针调神针组及假针组均未发生明显不良事件。结论:采用假针刺作为对照,初步证实了靳三针调神针法治疗卒中后焦虑的有效性,进一步结合血清学指标的下降趋势,推测其作用机制可能与调节HPA轴有关。

关键词：卒中后焦虑靳三针调神针法假针刺下丘脑-垂体-肾上腺轴

1株伤口分离贪铜菌的分类鉴定及生物学特征分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第6期44卷 510-518页

作者：康世越邓晨晖陈晓慰林美莲屈平华周强广州中医药大学第二临床医学院广州510006 广州中医药大学第二临床医学院/广东省中医院麻醉科广州510006 重庆医科大学检验医学院重庆400016 广州中医药大学第二临床医学院/广东省中医院检验医学部广州510006

目的对从临床伤口标本中分离出的贪铜菌SZY C1进行形态学及分子生物学鉴定和分析,了解其微生物学特性及明确分类学地位。方法将菌株SZY C1复苏培养后,依次进行形态学、生理生化鉴定、16S rRNA基因测序、全基因组测序,并应用生物信息学... 详细信息

目的对从临床伤口标本中分离出的贪铜菌SZY C1进行形态学及分子生物学鉴定和分析,了解其微生物学特性及明确分类学地位。方法将菌株SZY C1复苏培养后,依次进行形态学、生理生化鉴定、16S rRNA基因测序、全基因组测序,并应用生物信息学软件对其基因组和毒力基因进行分析。结果菌株SZY C1为不发酵糖革兰阴性菌,菌体无鞭毛、不形成芽孢,可在哥伦比亚血琼脂平板上培养24 h呈现灰白色、圆形、突起、不透明、边缘整齐的菌落。基于16S rRNA基因序列分析结果显示,菌株SZY C1与耐金属贪铜菌(Cupriavidus metallidurans)的相似度为98.52%。菌株SZY C1测得基因组大小为5515517 bp,G+C含量为67.87%,全基因系统发育分析显示,菌株SZY C1与根际贪铜菌亲缘化关系最近,两者之间平均核苷酸一致性值84.76%,数字DNA-DNA杂交值为29.1%,低于原核生物物种的鉴定阈值。基因预测显示菌株SZY C1携带多种毒力基因、耐药基因和抗重金属基因。结论根据表型和基因组分析,菌株SZY C1为贪铜菌属中潜在的新种。

关键词：贪铜菌属菌种鉴定全基因组测序

电针“四白”和“颧髎”激活小鼠躯体感觉运动皮层的兴奋性神经元

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针刺研究 2024年第5期49卷 480-486页

作者：张芷晴申晨薇陈明权杜梓霏陈秋怡姬昌张文捷许能贵刘健华广州中医药大学广州510006 广州中医药大学第二临床医学院广州510120 广州中医药大学针灸康复临床医学院华南针灸研究中心广州510006 广州中医药大学基础医学院广州510006 暨南大学第一附属医院广州510630

目的:探讨电针“四白”和“颧髎”对小鼠躯体感觉皮层和初级运动皮层神经元的激活状态及其分型的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组和电针组,每组6只。电针组电针“四白”和“颧髎”,干预30 min。采用免疫荧光染色法观察躯体... 详细信息

目的:探讨电针“四白”和“颧髎”对小鼠躯体感觉皮层和初级运动皮层神经元的激活状态及其分型的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组和电针组,每组6只。电针组电针“四白”和“颧髎”,干预30 min。采用免疫荧光染色法观察躯体感觉皮层和初级运动皮层即刻早期基因c-Fos的阳性细胞密度,以及c-Fos阳性细胞和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)/γ-氨基丁酸(GABA)共表达细胞的百分比,分析电针后躯体感觉皮层和初级运动皮层c-Fos神经元的类型。另取10只小鼠,采用光纤钙成像技术分别观察电针前后躯体感觉皮层和初级运动皮层兴奋性神经元钙活动的变化。结果:在躯体感觉皮层和初级运动皮层中,电针组的c-Fos阳性细胞密度显著高于空白组(P<0.05)。在躯体感觉皮层和初级运动皮层中,电针组c-Fos和CaMKⅡ共表达细胞百分比显著高于空白组(P<0.01)。光纤记录钙成像结果显示,与电针前相比,电针期间躯体感觉皮层和初级运动皮层兴奋性神经元的自发钙活动显著上升(P<0.01);电针后,其自发钙活动较电针期间显著降低(P<0.05)。结论:在生理状态下,针刺“四白”和“颧髎”能够有效激活躯体感觉皮层和初级运动皮层的兴奋性神经元。

关键词：电针躯体感觉皮层初级运动皮层四白颧髎

MiR-3609通过靶向调控CCND1抑制成骨细胞分化介导骨质疏松症发生

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中国骨质疏松杂志 2024年

作者：余照宇陈文创李勇鲁尧广州中医药大学第二临床医学院广东省中医院珠海医院

目的通过生物信息学分析和体外实验结合的方式验证miR-3609在骨质疏松症发病中的可能作用机制，为骨质疏松症的治疗提供新靶点。方法通过miRDB、miRWalk、TargetScan三大miRNA靶点分析数据库进行miR-3609下游靶点分析。双荧光素酶实... 详细信息

目的通过生物信息学分析和体外实验结合的方式验证miR-3609在骨质疏松症发病中的可能作用机制，为骨质疏松症的治疗提供新靶点。方法通过miRDB、miRWalk、TargetScan三大miRNA靶点分析数据库进行miR-3609下游靶点分析。双荧光素酶实验验证miR-3609和下游靶基因之间的靶向关系，RT-qPCR实验和WB实验验证miR-3609对下游靶基因表达的影响及WB实验检测miR-3609对抗凋亡基因Bcl2和成骨相关蛋白Runx2、OPG表达的影响。碱性磷酸酶实验及茜素红实验检测分析miR-3609对成骨细胞成骨分化、矿化的影响。结果首先，数据库靶点预测结果显示，CCND1可能是miR-3609导致骨质疏松发病的潜在靶点。其次，双荧光素酶实验验证了二者之间的靶向关系：miR3609的激活会下调成骨细胞中的CCND1表达。同时，碱性磷酸酶和茜素红实验结果表明miR3609的激活抑制成骨细胞向成骨分化及矿化。此外，miR3609的激活下调了成骨细胞成骨相关蛋白Runx2、OPG的表达，下调了抗凋亡蛋白Bcl2的表达。结论miR-3609可以通过靶向抑制CCND1表达抑制成骨细胞成骨分化、矿化，这可能是其导致骨质疏松发病的机制，靶向抑制miR-3609有望成为治疗骨质疏松症的新方向。

关键词：骨质疏松症 miR-3609 CCND1 成骨分化治疗靶点

电针“足三里”联合capeOX方案对结直肠癌裸鼠肿瘤细胞凋亡和铁死亡的影响

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针刺研究 2024年第7期49卷 678-685页

作者：李泽丽曾文静李国海张洁桐李祉澄王思颖邱芳华李述文广州中医药大学针灸康复临床医学院华南针灸研究中心广州中医药大学第二临床医学院广州中医药大学第一临床医学院广州医科大学附属中医院

目的：观察电针“足三里”联合capeOX方案对结直肠癌（CRC）裸鼠肿瘤体积、肿瘤质量、脾脏系数、肿瘤细胞凋亡、铁死亡及肝肾功能的影响，探讨电针辅助capeOX抑制CRC、减轻capeOX毒性反应的作用机制。方法：将雌性Balb/c裸鼠随机分为模... 详细信息

目的：观察电针“足三里”联合capeOX方案对结直肠癌（CRC）裸鼠肿瘤体积、肿瘤质量、脾脏系数、肿瘤细胞凋亡、铁死亡及肝肾功能的影响，探讨电针辅助capeOX抑制CRC、减轻capeOX毒性反应的作用机制。方法：将雌性Balb/c裸鼠随机分为模型组、capeOX组、电针（EA）+capeOX组，每组8只。采用右侧腹股沟皮下注射结肠癌细胞复制CRC模型。CapeOX组于造模成功后第1天给予腹腔注射奥沙利铂，第2～7天按100 mg/kg给予卡培他滨灌胃；EA+capeOX组在capeOX组的基础上每天给予电针双侧“足三里”，1 mA,2 Hz/100 Hz,20 min/次，1次/d，共干预7 d。干预期间每天测量肿瘤体积、裸鼠体质量，干预结束后称量肿瘤及脾脏质量，计算肿瘤体积差和脾脏系数，流式细胞仪检测肿瘤组织的凋亡细胞比例，ELISA法检测血清丙二醛（MDA）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、尿素氮（BUN）及肌酐（Cr）的含量，Western blot法检测肿瘤组织谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)蛋白表达水平。结果：与模型组比较，capeOX组、EA+capeOX组裸鼠肿瘤体积、体质量、肿瘤体积差、肿瘤质量及脾脏系数均降低（P<0.05），肿瘤组织中的凋亡细胞比例上升（P<0.05）;capeOX组ALT、BUN及Cr含量均上升（P<0.05）;EA+capeOX组血清MDA含量降低（P<0.05）,GPX4蛋白表达水平升高（P<0.05）。与capeOX组比较，EA+capeOX组的肿瘤体积、肿瘤体积差、肿瘤质量及MDA、ALT、AST、BUN、Cr含量均降低（P<0.05），体质量、脾脏系数、凋亡细胞比例、GPX4蛋白表达水平均升高（P<0.05）。结论：电针“足三里”可增强capeOX抑制CRC的疗效，其作用机制可能与促进肿瘤细胞凋亡、抑制铁死亡、调节免疫耐受有关；另外，电针“足三里”联合capeOX还可减轻capeOX对造血功能、免疫功能、肝肾功能的损害。

关键词：电针 capeOX方案足三里结直肠癌凋亡铁死亡

皮肤黑色素瘤差异表达基因的生物信息学分析及调控中药预测

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中草药 2024年第2期55卷 551-562页

作者：王梓霞黄羽欣谢锦楠王沐瑶王文辉广州中医药大学第二临床医学院广东广州510006 广州中医药大学第一临床医学院广东广州510499 广州中医药大学东莞医院广东东莞523000

目的通过生物信息学技术分析皮肤黑色素瘤患者皮肤组织与非癌皮肤组织的基因表达微阵列数据,筛选出皮肤黑色素瘤的差异表达基因,预测可用于诊断和治疗皮肤黑色素瘤的生物标志物及潜在中药。方法从基因表达数据库(Gene Expression Omni... 详细信息

目的通过生物信息学技术分析皮肤黑色素瘤患者皮肤组织与非癌皮肤组织的基因表达微阵列数据,筛选出皮肤黑色素瘤的差异表达基因,预测可用于诊断和治疗皮肤黑色素瘤的生物标志物及潜在中药。方法从基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)提取GSE3189、GSE114445、GSE46517基因芯片,使用GEO2R工具筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。利用DAVID数据库对DEGs进行基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析;使用String数据库构蛋白-蛋白互作网络,应用Cytoscape软件及其插件筛选PPI网络中关键基因,应用GSCA数据库进行关键基因的突变分析。通过Gepia 2.0数据库结合癌症基因组图谱数据集(Cancer Genome Atlas,TCGA)对关键基因进行生存分析。根据度(degree)值和生存分析结果综合筛选出核心基因(集),应用GSCA数据库对核心基因(集)进行泛癌分析和免疫浸润分析,并使用TIMER 2.0数据库对核心基因分别进行免疫浸润分析。使用Coremine Medical数据库预测作用于关键基因的潜在中药。结果共筛选出DEGs 114个,其中上调基因36个,下调基因78个。上调DEGs主要富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用、Toll样受体信号等通路,下调DEGs主要富集在细胞黏附、细胞增殖的正调控等方面。15个关键基因为EGFR、KPNA2、GATA3、AURKA、TYMS、PKP1、SPP1、MMP1、KLF4、EPCAM、KIF23、DTL、CLDN1、LCP2、FGFR2,其中共3个基因KPNA2、AURKA、DTL被视为核心基因(集)。潜在治疗中药有丹参、人参、构皮、高良姜、甘草、蓖麻子、油桐叶等。结论皮肤黑色素瘤中关键基因的突变以FGFR2的错义突变为主,突变方式多为胞嘧啶(C)向胸腺嘧啶(T)的转换。EGFR、KPNA2、GATA3、AURKA、PKP1、DTL、LCP2对皮肤黑色素瘤的生存预后存在显著影响。核心基因集在多种癌症中显著上调,并与自然调节性T细胞(natural regulatory T-cells,nTreg)细胞、树突状细胞、单核细胞等免疫细胞的浸润有关。潜在调控中药包括补虚药、清热解毒药、拔毒生肌药、消肿拔毒药、温里药、健脾利湿药、利水渗湿药、活血化瘀药、安神药9类,在相关古籍中存在对应的中医内外治经验记载,其中药活性成分亦被证明对皮肤黑色素瘤存在一定的调控和抑制作用。

关键词：皮肤黑色素瘤差异表达基因核心基因中药预测生物信息学丹参人参构皮高良姜甘草蓖麻子油桐叶

萆苓止带片治疗脾虚湿盛证外阴阴道假丝酵母菌病的临床疗效及对生殖道微生态的作用机制

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中华中医药杂志 2024年第6期39卷 3235-3240页

作者：陈志霞冯淑仪陈惠超广州中医药大学第二临床医学院广州510006 广东省中医院广州510006

目的:观察萆苓止带片治疗脾虚湿盛证外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)患者的疗效,并从生殖道微生态和炎症因子探讨其作用机制。方法:将2021年11月—2022年9月就诊于广东省中医院的单纯性VVC患者分为治疗组(47例)和对照组(44例)。对照组与治疗... 详细信息

目的:观察萆苓止带片治疗脾虚湿盛证外阴阴道假丝酵母菌病(VVC)患者的疗效,并从生殖道微生态和炎症因子探讨其作用机制。方法:将2021年11月—2022年9月就诊于广东省中医院的单纯性VVC患者分为治疗组(47例)和对照组(44例)。对照组与治疗组均予克霉唑栓剂外用,治疗组联用萆苓止带片口服,疗程7 d,分别观察治疗前、治疗7 d和停药7 d时患者真菌转阴率、阴道清洁度、中医证候积分、舒适度评分,并检测生殖道微生态和血清人单核细胞趋化蛋白1、人细胞间黏附分子1和人肿瘤坏死因子α表达情况。结果:治疗组在治疗7 d和停药7 d时真菌转阴率显著高于对照组(P中医证候及舒适度评分较对照组改善更显著(P<0.05)。VVC患者生殖道微生态α多样性等与健康组存在差异,以Pseudomonas(属)和Lactobacillus iners(种)变化最显著,治疗组治疗后可恢复部分生殖道微生态。结论:萆苓止带片治疗脾虚湿盛证VVC疗效显著,可显著提高真菌转阴率、改善症状和舒适度,对生殖道微生态的调节作用可能是其作用机制之一。

关键词：萆苓止带片外阴阴道假丝酵母菌病脾虚湿盛证生殖道微生态菌群多样性