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Toll样受体9介导的免疫激活研究进展

中国畜牧兽医 2010年第9期37卷 183-187页

作者：同戈孙瑶广东大华农动物保健品股份有限公司新兴527400 中牧实业股份有限公司北京100070

在细菌和DNA病毒的基因组中广泛存在着以非甲基化的胞嘧啶—鸟嘌呤核苷酸为核心的CpG基序。作为一种病原相关的分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP),含有CpG基序的寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucle-otides,CpG ODN... 详细信息

在细菌和DNA病毒的基因组中广泛存在着以非甲基化的胞嘧啶—鸟嘌呤核苷酸为核心的CpG基序。作为一种病原相关的分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP),含有CpG基序的寡聚脱氧核苷酸(CpG oligodeoxynucle-otides,CpG ODN)能激活包括B淋巴细胞和类浆细胞在内的多种免疫细胞,并诱导产生以Th1型细胞免疫反应为主的免疫应答。CpG ODN在哺乳动物细胞中的受体是Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)家族中的Toll样受体9(TLR9)。TLR9所介导的免疫激活作用在某些传染病的预防、新型疫苗佐剂的开发及过敏性疾病和癌症的治疗中有着巨大的应用前景。

关键词： CpG基序病原相关的分子模式 Toll样受体

两株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1基因序列分析

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中国畜牧兽医 2015年第8期42卷 1963-1972页

作者：尚辉琴李琳陈瑞爱刘红波梁梅兰贺东生广东大华农动物保健品股份有限公司云浮527400 华南农业大学兽医学院广州510642

为调查广东地区鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的流行及其遗传变异情况,本研究通过病料SPF鸡胚接种和鸡胚尿囊液的RT-PCR鉴定,于2013年从广东湛江地区不同发病鸡场分离到两株IBV,分别命名为CK/CH/GD/ZJ10/2013和CK/CH/GD/ZJ11/2013,并对... 详细信息

为调查广东地区鸡传染性支气管炎病毒（IBV）的流行及其遗传变异情况,本研究通过病料SPF鸡胚接种和鸡胚尿囊液的RT-PCR鉴定,于2013年从广东湛江地区不同发病鸡场分离到两株IBV,分别命名为CK/CH/GD/ZJ10/2013和CK/CH/GD/ZJ11/2013,并对这两株IBV的S1基因进行序列分析。结果显示,CK/CH/GD/ZJ10/2013株S1基因全长1 626bp,编码542个氨基酸,其裂解位点为NRFRR,属于基因型Ⅲ,并推测其为基因型Ⅲ毒株（CK/CH/GX/NN11-3）与基因型Ⅰ毒株（GX-NN-6）在S1基因处发生重组而产生的新毒株;CK/CH/GD/ZJ11/2013株S1基因全长1 620bp,编码540个氨基酸,其裂解位点为HRRRR,属于基因型Ⅰ（类QX型）;两株IBV的S1基因间核苷酸序列及其推导的氨基酸序列同源性较低,与位于同一基因型的参考毒株间同源性较高,而与中国使用的Mass型常规疫苗H120和H52之间的同源性最低,仅为75.7%~76.3%和77.1%~77.9%。本研究可为广东省IBV的流行病学调查和分子生物学研究提供参考。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒分离鉴定 S1基因序列分析

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广东地区犬瘟热病毒分子流行病学调查

动物医学进展 2013年第6期34卷 101-106页

作者：竺薇蒋再学张晓明罗满林华南农业大学兽医学院广东广州510642 广东大华农动物保健品股份有限公司广东新兴527439

为了解犬瘟热病毒(CDV)在广东地区的分子流行情况及遗传变异规律,本研究从广东省多地采集疑似感染犬瘟热病毒的患病犬的血液、体内组织样品100份,经RT-PCR法检测,共检出90份阳性病料。随机选取10份阳性病料进行CDV H基因扩增,序列分析... 详细信息

为了解犬瘟热病毒(CDV)在广东地区的分子流行情况及遗传变异规律,本研究从广东省多地采集疑似感染犬瘟热病毒的患病犬的血液、体内组织样品100份,经RT-PCR法检测,共检出90份阳性病料。随机选取10份阳性病料进行CDV H基因扩增,序列分析表明该地区内H基因的同源性为96.6%～99.8%,与参考毒株的H基因同源性为89.9%～97.9%。遗传进化分析发现所检测样品大部分属于亚洲I型毒株,使用软件预测H蛋白的糖基化位点数,发现所有被检测野毒株的糖基化位点数为9个,而疫苗株的为4个或7个。本研究明确广东地区犬瘟热病毒H蛋白基因的变异趋势,为疫苗的选择或开发奠定了基础,为广东地区犬瘟热的防控提供了参考。

关键词：犬瘟热病毒 H基因逆转录-聚合酶链反应序列分析

抗体免疫压力下猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF3和ORF5基因变异研究

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中国畜牧兽医 2012年第11期39卷 13-17页

作者：胡静蒋爱翔牛晓芸苏丹萍陈瑞爱贺东生华南农业大学兽医学院广东广州510642 广东大华农动物保健品股份有限公司广东新兴527400

本试验旨在对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在抗体免疫选择压力下分子变异情况进行研究。将HPPRRSV-JXA1株在添加适量抗体或不添加抗体的Marc-145细胞上连续传代各30代,获得毒株JXA1-Abf30和JXA1-f30。对传代前后毒株的ORF3和ORF5基因... 详细信息

本试验旨在对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在抗体免疫选择压力下分子变异情况进行研究。将HPPRRSV-JXA1株在添加适量抗体或不添加抗体的Marc-145细胞上连续传代各30代,获得毒株JXA1-Abf30和JXA1-f30。对传代前后毒株的ORF3和ORF5基因进行扩增、克隆和序列分析,研究结果显示,JXA1-Abf30和JXA1-f30在ORF3和ORF5基因上核苷酸发生突变位点数累计分别为18和9个,氨基酸发生突变位点数累计分别为15和3个。JXA1-Abf30和JXA1-f30的核苷酸突变速率比为186%,氨基酸突变速率比为500%,非同义突变(NS)与同义突变(S)比值(NS/S)分别为5.0和0.5。此外,抗体压力下传代的毒株ORF5基因有4个碱基位点发生稳定的非同义突变,其中2个(AA31和AA190)与已知抗原表位有关。由研究结果可知,抗体压力下传代的PRRSV的突变速率和非同义突变数目明显高于无抗体压力下的传代毒株;抗体免疫选择压能显著影响PRRSV的ORF5基因变异,并呈现明显的压力选择性突变,对ORF3基因变异的影响小于ORF5基因。

关键词： PRRSV ORF3 ORF5 免疫选择压基因变异

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抗猪流行性腹泻病毒卵黄抗体的制备及应用

中国畜牧兽医 2014年第10期41卷 68-72页

作者：李冰张显浩裴仉福陈瑞爱贺东生广东大华农动物保健品股份有限公司广东云浮527499 华南农业大学兽医学院广东广州510642

本试验利用猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)SC株免疫产蛋鸡,收集高免卵黄,采用水稀释法和水稀释-盐析法获得鸡源抗PEDV卵黄抗体,采用已建立的ELISA方法对卵黄抗体效价进行测定。以3日龄无母源抗体的易感仔猪为... 详细信息

本试验利用猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)SC株免疫产蛋鸡,收集高免卵黄,采用水稀释法和水稀释-盐析法获得鸡源抗PEDV卵黄抗体,采用已建立的ELISA方法对卵黄抗体效价进行测定。以3日龄无母源抗体的易感仔猪为试验动物,对抗PEDV卵黄抗体的治疗效果及安全性进行测定,并进一步利用自然发病猪场的治疗效果进行验证。结果表明,经PEDV SC株细胞毒免疫的鸡可在2次加强免疫后15d产生高水平的特异性抗体。在实验室治疗试验中,攻毒治疗组仔猪的存活率达60%,攻毒对照组存活率为20%;用于自然发病猪场时,饲喂抗PEDV卵黄抗体饲料的仔猪存活率亦为60%,而自然发病对照组的存活率为10%。以上结果表明抗PEDV卵黄抗体对感染PEDV的仔猪有一定治疗作用。

关键词：猪流行性腹泻病毒产蛋鸡卵黄抗体

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两种不同检测法对猪瘟抗体阴性猪筛检的比较

广东畜牧兽医科技 2013年第4期38卷 37-38页

作者：李小静唐满华邓月嫦叶健聪广东大华农动物保健品股份有限公司广东云浮527400

猪瘟抗体阴性猪是猪瘟活疫苗安检的重要实验动物,目前对于猪瘟抗体阴性猪筛选是采用兔体中和反应法,实验复杂,工作量大并且易受实验兔个体差异等因素影响。随着生物学及其技术的发展,ELISA被广泛用于生物制品的各个领域。本试验应用ELIS... 详细信息

猪瘟抗体阴性猪是猪瘟活疫苗安检的重要实验动物,目前对于猪瘟抗体阴性猪筛选是采用兔体中和反应法,实验复杂,工作量大并且易受实验兔个体差异等因素影响。随着生物学及其技术的发展,ELISA被广泛用于生物制品的各个领域。本试验应用ELISA法和兔体中和反应法对猪瘟抗体阴性猪进行筛选,共检测160份血清,检测结果显示两种方法结果有很高的一致性,但ELISA法更为敏感,快捷,更适用于猪瘟抗体阴性猪的筛选。

关键词： ELISA法兔体中和反应法猪瘟抗体阴性猪

利用ZFN敲除转基因猪细胞中多拷贝EGFP基因

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中国生物化学与分子生物学报 2014年第8期30卷 837-842页

作者：任广彩张英丛佩清陈瑶生何祖勇中山大学生命科学学院、有害生物控制与资源利用国家重点实验室广州510006 广东大华农动物保健品股份有限公司广州510642

锌指核酸酶（zinc finger nuclease,ZFN）是由特异性识别DNA的锌指结构域和Fok I切割结构域组成,能够在基因组特定位点上切割DNA,引起DNA双链断裂（double-strand break,DSB）.通过DSB修复机制,可以使基因修饰的效率比传统方法提高102~... 详细信息

锌指核酸酶（zinc finger nuclease,ZFN）是由特异性识别DNA的锌指结构域和Fok I切割结构域组成,能够在基因组特定位点上切割DNA,引起DNA双链断裂（double-strand break,DSB）.通过DSB修复机制,可以使基因修饰的效率比传统方法提高102~104倍.目前,利用ZFN对动物内源基因进行敲除的研究较多,但对转基因动物中外源多拷贝基因进行敲除的报道较少.本研究首先利用荧光定量PCR法对本实验室培育的两头转基因猪中增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因的拷贝数进行鉴定,发现其拷贝数分别为11.95和17.36拷贝;然后将靶向EGFP的一对ZFN转染进拷贝数为17.36的EGFP转基因猪的成纤维细胞中,并通过流式和CEL-1酶切方法检测敲除效率.结果表明,转染400 ng、800 ng和1 200 ng ZFN的切割效率分别为0.97%、1.39%和1.76%,可见随着转染ZFN剂量的增加,ZFN的切割效率逐渐提高.但是,不发绿色荧光的细胞比例却没有明显提高,因此认为,ZFN敲除转基因动物中多拷贝基因的效率还是比较低.

关键词：锌指核酸酶外源基因增强型绿色荧光蛋白转基因猪敲除效率

β-丙内酯在H9N2禽流感灭活疫苗中的应用研究

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β-丙内酯在H9N2禽流感灭活疫苗中的应用研究

猪细小病毒PPVM2株在ST细胞上最佳培养条件的研究

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十六次学术研讨会

作者：黄文科陈春丽韩静芳梁桂益林绮萍严洁珍陈瑞爱广东大华农动物保健品股份有限公司

前言β-丙内酯(BPI)是一种杂环化合物,对病毒具有很强的灭活作用,并且具有极易水解成无毒无害物质的特性,目前在国外广泛应用于各种疫苗的灭活。本研究通过应用β-丙内酯作为H9N2禽流感病毒灭活剂,对病毒灭活效果、灭活剂残留量、疫苗...

前言β-丙内酯(BPI)是一种杂环化合物,对病毒具有很强的灭活作用,并且具有极易水解成无毒无害物质的特性,目前在国外广泛应用于各种疫苗的灭活。本研究通过应用β-丙内酯作为H9N2禽流感病毒灭活剂,对病毒灭活效果、灭活剂残留量、疫苗安全性和疫苗免疫效力等多个方面进行了研究,为β-丙内酯能否代替甲醛进行禽流感病毒的灭活提供参考依据。材料与方法(1)灭活条件的优化:β-丙内酯以不同浓度、不同灭活时间、不同pH值条件下对H9N2鸡胚毒进行4℃灭活,然后37℃水解2h,最后检测灭活效果及灭活前后胚液HA效价。(2)β-丙内酯残留量检测:对灭活后鸡胚液和免疫疫苗后肌肉进行残留量检测。(2)动物免疫试验:按照优化后的灭活条件灭活H9N2的SPF鸡胚毒液和海兰鸡鸡胚毒液,用常规浓度为0.1%甲醛量灭活作对照,然后分别制备成油乳剂灭活苗免疫SPF鸡和广西土鸡,另设生理盐水、大华农商品苗免疫组作对照组,定期检测免疫鸡血清AIV-H9 HI抗体变化情况。结果与分析(1)β-丙内酯灭活条件的优化:试验结果显示β-丙内酯对禽流感H9N2病毒胚液最佳的灭活条件为β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:3000灭活24h或β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:1000灭活18h;本实验设定的三个pH值(6.5、7.0、7.5)对病毒灭活效果的影响不明显;β-丙内酯灭活后的胚液HA效价下降在1个滴度以内,甲醛对照组灭活后的胚液HA效价下降为1个滴度。(2)残留量检测结果:H9N2鸡胚毒液经β-丙内酯灭活和水解后,鸡胚液和SPF鸡、广西土鸡免疫疫苗肌肉中未检测到β-丙内酯残留,且免疫鸡无异常发生,说明β-丙内酯在灭活后的37℃水浴中完全水解,在疫苗中无残留,对动物机体安全性高。(3)动物免疫试验结果:SPF鸡胚毒液制备的油苗和大华农油苗免疫SPF鸡和广西土鸡后均产生了较高HI抗体,并且持续到90天时,都能维持在较高的抗体水平(SPF鸡HI抗体为91og2以上,广西土鸡HI抗体为8log2以上),其中β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:1000油苗组与0.1%甲醛油苗组、大华农油苗组的抗体水平差异较小,介于0.5log2之间,优于β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:3000油苗组。海兰胚毒液制备的油苗免疫SPF鸡和广西土鸡后均产生了较高的HI抗体,并且持续到90天时,都能维持在较高的抗体水平(SPF鸡HI抗体为91og2以上,广西土鸡HI抗体为7log2以上),其中β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:3000油苗组与0.1%甲醛油苗组、大华农油苗组的抗体水平差异较小,介于0 log2之间,略优于β-丙内酯:胚液(v/v)比例为1:1000油苗组。结论本研究结果显示β-丙内酯具有对H9N2灭活能力强HA效价影响小、极易水解成对机体无害产物而无残留等优点,以β-丙内酯作为灭活剂制备的H9N2灭活疫苗与甲醛作为灭活剂制备的H9N2灭活疫苗免疫SPF鸡和广西土鸡免疫效果相当,这一结果为β-丙内酯能否代替甲醛进行禽流感病毒的灭活提供了参考依据。

关键词：

来源： cnki会议评论

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猪细小病毒PPVM2株在ST细胞上最佳培养条件的研究