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EIF4A3 shRNA慢病毒载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

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吉林大学学报（医学版） 2024年第3期50卷 831-839页

作者：何嘉文李友廖科棋李胜男广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室广东湛江524002 广东医科大学附属医院神经病学研究所广东湛江524002

目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和... 详细信息

目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和AgeⅠ酶切的慢病毒GV493载体,构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒质粒,PCR筛选阳性克隆并测序鉴定。将GV493空载质粒和GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为GV493对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为空白组、GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组,空白组不作处理,GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组分别采用相应慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,使用10 mg·L-1嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞的生长状态和绿色荧光表达情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中EIF4A3 mRNA及蛋白表达水平。结果:PCR测序结果显示GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒基因序列与设计合成的EIF4A3-shRNA序列一致,成功构建GV493-EIF4A3慢病毒载体。荧光显微镜观察可见HEK293T细胞荧光表达强烈,生长状态良好,慢病毒包装成功。GV493-对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒的滴度均为2×10~8 TU·mL^(-1),GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞生长状态良好且表达绿色荧光,表明慢病毒感染稳定细胞系构建成功。RT-qPCR法,与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3shRNA组Neuro-2a细胞EIF4A3mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。Western blotting法,各组在相对分子质量49000处出现特异性条带,提示Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达成功;与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:成功构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒载体,建立了Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系,为EIF4A3在颅内动脉粥样硬化的作用机制研究提供了参考。

关键词：真核细胞翻译起始因子4A3 短发夹RNA 慢病毒稳定转染细胞系 Neuro-2a细胞

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异基因造血干细胞移植后CMV和EBV共激活患者的临床研究

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中国实验血液学杂志 2024年第2期32卷 561-567页

作者：王之玮刘琼孙海英徐州医科大学附属医院血液科江苏徐州221000

目的:探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后巨细胞病毒(CMV)和EB病毒(EBV)共激活患者的临床特点、危险因素及其对预后的影响。方法:收集2015年1月至2020年12月接受allo-HSCT的222例患者临床资料,根据是否发生CMV、EBV感染进行分组,采... 详细信息

目的:探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后巨细胞病毒(CMV)和EB病毒(EBV)共激活患者的临床特点、危险因素及其对预后的影响。方法:收集2015年1月至2020年12月接受allo-HSCT的222例患者临床资料,根据是否发生CMV、EBV感染进行分组,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox比例风险回归模型分析CMV、EBV共激活的危险因素。结果:allo-HSCT后发生CMV和EBV共激活患者(CMV^(+)+EBV^(+)组,即CMV及EBV合并感染)30例,CMV血症患者(CMV^(+)组)101例,EBV血症患者(EBV^(+)组)149例,CMV、EBV未激活患者(CMV-+EBV-组)28例。与其他组相比,CMV^(+)+EBV^(+)组中急性移植物抗宿主病、出血性膀胱炎发生率更高(53.3%vs 42.6%、36.9%、17.9%,P<0.001;36.7%vs 32.7%、22.8%、10.7%,P=0.042)。CMV^(+)+EBV^(+)组与CMV^(+)组、EBV^(+)组移植后淋巴细胞增殖性疾病患者的发生率类似(3.3%vs 3.0%、3.4%,P=0.811)。单因素及多因素分析结果显示,移植后CMV^(+)持续时间、EBV^(+)持续时间是CMV和EBV共激活患者的独立危险因素。与其他组相比,CMV^(+)+EBV^(+)组患者2年总生存率、2年无病生存率较低(46.7%vs 74.9%、83.4%、71.4%,P<0.001;46.7%vs 70.9%、79.5%、69.9%,P=0.002),2年非复发死亡率较高(48.2%vs 22%、13.6%、18.7%,P<0.001)。结论:移植后CMV^(+)持续时间、EBV^(+)持续时间是CMV和EBV共激活患者的独立危险因素。CMV和EBV共激活患者的总生存率、无病生存率更低,非复发死亡率更高,临床预后更差。

关键词：异基因造血干细胞移植巨细胞病毒 EB病毒共同激活预后

联合免疫检查点抑制剂治疗驱动基因阴性非小细胞肺癌脑转移的研究进展

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中国肿瘤临床 2024年第3期51卷 153-158页

作者：郭丽娜(综述) 王宏伟(审校) 内蒙古医科大学呼和浩特市010059 内蒙古医科大学附属医院放疗科

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌中最常见的组织学类型,约66%的患者在确诊时就被发现伴有远处转移。脑转移是最常见的转移部位之一,约13%的患者在初诊时即发现颅内受累,严重影响生活质量,预后不佳。驱动基因阳性... 详细信息

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是肺癌中最常见的组织学类型,约66%的患者在确诊时就被发现伴有远处转移。脑转移是最常见的转移部位之一,约13%的患者在初诊时即发现颅内受累,严重影响生活质量,预后不佳。驱动基因阳性的NSCLC脑转移患者靶向治疗可以达到较好的颅内控制率,但驱动基因阴性的患者治疗手段较为局限。近年来,随着免疫治疗的兴起,免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors,ICIs)被广泛运用于临床,ICIs联合放疗的治疗模式为驱动基因阴性NSCLC脑转移患者的治疗带来了新希望。本文就放疗联合免疫治疗在敏感驱动基因阴性NSCLC脑转移患者中的临床研究进展进行综述,以期为临床治疗方案的选择提供参考。

关键词：非小细胞肺癌脑转移驱动基因阴性放射治疗免疫检查点抑制剂

DCLK1激活FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路促进A549细胞的恶性行为

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肿瘤防治研究 2024年第6期51卷 419-425页

作者：闫锐肖泽儒黄旭颖安广宇葛洋首都医科大学附属北京朝阳医院肿瘤科北京100020

目的探讨双肾上腺素皮质样激酶1(DCLK1)对A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为的影响,并探究可能涉及的相关分子机制。方法慢病毒感染法建立稳定表达DCLK1分子的A549细胞系,反转录-聚合酶链技术和蛋白质印记法进行鉴定。CCK-8与... 详细信息

目的探讨双肾上腺素皮质样激酶1(DCLK1)对A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为的影响,并探究可能涉及的相关分子机制。方法慢病毒感染法建立稳定表达DCLK1分子的A549细胞系,反转录-聚合酶链技术和蛋白质印记法进行鉴定。CCK-8与平板克隆实验检测过表达DCLK1后细胞增殖能力变化。Transwell实验观察过表达DCLK1对细胞迁移与侵袭能力的影响。癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析DCLK1对肺腺癌细胞的调控富集通路,蛋白质印记法进行验证。结果DCLK1在A549细胞中过表达可增加细胞的增殖、迁移与侵袭等能力,而抑制FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路可削弱DCLK1对A549细胞的恶性调控。结论DCLK1通过激活FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路,促进A549细胞的恶性生物学行为。

关键词：双肾上腺素皮质样激酶1 A549细胞系 FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路增殖迁移与侵袭

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基于小鼠脾脏转录组测序探索脓毒症预后关键基因

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中国免疫学杂志 2024年第4期40卷 698-704,713页

作者：罗福龙张雨婷余亚义胡迎春陈睦虎钟武西南医科大学附属医院急诊科泸州646000

目的:运用脾脏高通量测序结合生物信息学筛选脓毒症死亡小鼠的关键差异表达基因(DEGs)。方法:①腹腔注射脂多糖(LPS)建立小鼠脓毒症模型,绘制7 d生存曲线确定生存组、死亡组造模剂量。②ELISA验证对照组、生存组、死亡组小鼠外周血浆TNF... 详细信息

目的:运用脾脏高通量测序结合生物信息学筛选脓毒症死亡小鼠的关键差异表达基因(DEGs)。方法:①腹腔注射脂多糖(LPS)建立小鼠脓毒症模型,绘制7 d生存曲线确定生存组、死亡组造模剂量。②ELISA验证对照组、生存组、死亡组小鼠外周血浆TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10表达。③使用脓毒症生存组和死亡组脾脏测序,结合生物信息学分析DEGs,筛选关键基因。④RT-PCR及Western blot验证关键基因及蛋白表达差异。结果:①脓毒症生存组造模剂量为15 mg/kg LPS(死亡率为30%),死亡组造模剂量为30 mg/kg LPS(死亡率为80%)。②脓毒症小鼠外周血IL-6、TNF-α、IL-1β表达量较对照组明显升高,IL-10表达水平降低(P<0.05);脓毒症模型组间进行比较,死亡组促炎因子水平较生存组升高,IL-10较生存组降低(P<0.05)。③共筛选出生存组和死亡组中2999个DEGs,其中1185个基因上调,1814个基因下调,筛选出“造血细胞谱系”“原发性免疫缺陷”“非洲锥虫病”“利什曼病”“B细胞受体信号通路”为排名前5的DEGs富集通路,Ifit1、Ifit3、Mx1为筛选出的3个关键基因。④与生存组相比,Ifit1、Ifit3、Mx1在死亡组脾脏组织中的基因及蛋白水平表达均下调(P<0.05)。结论:通过高通量测序与生物信息学筛选出与脓毒症死亡预后相关的关键基因为Ifit1、Ifit3和Mx1,其可能通过病毒感染相关免疫机制影响脓毒症预后。

关键词：脓毒症脾脏转录组学预后关键基因

单侧双通道脊柱内镜技术治疗颈椎病的研究进展

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中国脊柱脊髓杂志 2024年第4期34卷 425-431页

作者：张镇武李俊杨志超陈永龙陈炯灰王伟姜成黄春明李小川广东医科大学附属高州医院高州市525200

颈椎病是指颈椎椎间盘退行性改变及其继发的相邻结构病理改变累及周围组织结构(神经、脊髓、血管等),并出现与影像学改变相应的临床表现的疾病。根据不同组织结构受累而出现不同临床表现,颈椎病可分为神经根型、脊髓型、颈型和其他型(... 详细信息

颈椎病是指颈椎椎间盘退行性改变及其继发的相邻结构病理改变累及周围组织结构(神经、脊髓、血管等),并出现与影像学改变相应的临床表现的疾病。根据不同组织结构受累而出现不同临床表现,颈椎病可分为神经根型、脊髓型、颈型和其他型(包含交感神经型和椎动脉型)[1]。

关键词：神经根型交感神经型影像学改变颈型颈椎病脊髓型相邻结构椎动脉

髋臼内陷技术对成人DDH全髋关节置换术髋臼杯生物力学影响的有限元分析

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医用生物力学 2024年第3期39卷 421-427页

作者：张欣林文杰贺彬冯柏淋陈海聪钟环欧阳汉斌广东医科大学附属医院骨科中心关节外科广东湛江524001 江门市中心医院四肢关节骨科广东江门529000

目的探讨髋臼内陷技术对成人发育性髋关节发育不良(developmental dysplasia of the hip, DDH)髋关节置换术后髋臼假体的生物力学效应。方法获取1名成人单侧DDH患者双侧髋关节CT图像数据,进一步构建患侧半骨盆有限元模型。在此基础上... 详细信息

目的探讨髋臼内陷技术对成人发育性髋关节发育不良(developmental dysplasia of the hip, DDH)髋关节置换术后髋臼假体的生物力学效应。方法获取1名成人单侧DDH患者双侧髋关节CT图像数据,进一步构建患侧半骨盆有限元模型。在此基础上,建立臼杯不同内陷水平的有限元模型,对比分析原位组和不同水平内移组之间的生物力学差异。结果在模拟拔出试验中,原位组最大抗拔出载荷强度为1 166 N;相比原位组,4 mm和8 mm内移组抗拔出载荷强度分别增加了45.8%和57.1%;原位组髋臼假体在步态周期站立位相载荷工况下臼杯-骨界面最大微动为166.4μm,内移4 mm及8 mm组相对原位组分别减少了46.2%和62.1%。对于臼杯植入后髋臼周围即刻应力分布,不同组别之间的差异并不显著;而在步态周期站立位相载荷工况下,原位组髋臼周围平均应力及峰值应力均最小,平均应力随内移程度的增加而增大,内移4 mm组峰值应力最高。结论相较原位植入假体,髋臼内陷技术可以提高假体初始稳定性,稳定性和内移程度成正比。但内移程度不足导致骨覆盖面积不足时,臼杯-骨界面边缘应力显著增加,可能会导致假体相关并发症风险的升高。

关键词：发育性髋关节发育不良髋关节置换髋臼内陷有限元分析

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初诊超高龄多发性骨髓瘤患者硼替佐米基础方案治疗的生存预后分析

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中国全科医学 2024年第8期27卷 971-977页

作者：赵凤仪李新詹晓凯张佳佳申曼汤然范斯斌黄仲夏首都医科大学附属北京朝阳医院血液与肿瘤科北京市100020

背景多发性骨髓瘤(MM)是一种高度异质性疾病,超高龄老年MM患者是一类特殊群体,其治疗决策和一般评价缺乏一定的循证医学依据,在衰弱评估方面也有一定争议。目的分析以硼替佐米为基础方案治疗初诊超高龄MM患者的一般临床特征和生存预后... 详细信息

背景多发性骨髓瘤(MM)是一种高度异质性疾病,超高龄老年MM患者是一类特殊群体,其治疗决策和一般评价缺乏一定的循证医学依据,在衰弱评估方面也有一定争议。目的分析以硼替佐米为基础方案治疗初诊超高龄MM患者的一般临床特征和生存预后的影响因素,同时评价超高龄MM患者一般状况的最佳评估模式。方法回顾性分析2013年11月—2023年1月于首都医科大学附属北京朝阳医院石景山院区收治的29例初诊超高龄MM患者病例资料,通过首都医科大学附属北京朝阳医院病案系统进行生存随访,随访截至2023-04-01,本研究结局终点为总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)。根据治疗方案将患者分为两药治疗组(n=18)和三药治疗组(n=11),比较两组患者临床和遗传学特征。采用老年评分系统(GA)评分、英国骨髓瘤研究联盟风险状况(MRP)评分和梅奥(Mayo)评分评估患者的衰弱状态,并进行疗效评价。采用Kaplan-Meier法绘制MM患者OS和PFS的生存曲线,不同影响因素的生存曲线比较采用Log-rank检验,采用多因素Cox比例风险回归分析探讨MM患者OS和PFS的影响因素。结果随访中位PFS为8.70(1.90~43.87)个月,中位OS为17.23(2.00~72.83)个月。至末次随访,共21例(72.41%)患者出现疾病进展(PD)或复发,12例(41.38%)患者死亡;一线治疗客观缓解率(ORR)为82.76%(24/29),部分缓解(PR)率为51.72%(15/29),非常好的部分缓解(VGPR)率为24.14%(7/29),完全缓解(CR)率为6.90%(2/29)。两组初诊超高龄MM患者CR率、VGPR率、PR率、ORR比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。多因素Cox比例风险回归分析结果显示,MRP衰弱(HR=0.213,95%CI=0.049~0.924,P=0.039)、血清校正钙升高(HR=0.153,95%CI=0.041~0.570,P=0.005)和维持治疗(HR=4.301,95%CI=1.219~15.169,P=0.023)是初诊超高龄MM患者PFS的独立影响因素;维持治疗(HR=4.372,95%CI=1.049~18.221,P=0.043)是初诊超高龄MM患者OS的独立影响因素。结论含硼替佐米两药或三药治疗方案对初诊超高龄MM疗效和预后影响无明显差异,血清校正钙升高和维持治疗是影响生存的独立预后因素;MRP评分可用于评估初诊超高龄MM患者预后。

关键词：多发性骨髓瘤硼替佐米预后衰弱老年人,80以上总生存期无进展生存期

Dato-DXd在乳腺癌治疗中的应用效果、安全性及耐药机制研究进展

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山东医药 2024年第12期64卷 103-106页

作者：巫高宏李丽霞广东医科大学附属医院乳腺肿瘤科广东湛江524000

乳腺癌(BC)是全球发病率最高的恶性肿瘤,对患者的生活和健康造成了巨大的威胁。Dato-DXd是新一代的抗体偶联药物药物,在乳腺癌治疗中取得了显著的进展,从最初的单一药物治疗扩展到了联合免疫治疗的多方面研究。在多项临床试验中,Dato-DX... 详细信息

乳腺癌(BC)是全球发病率最高的恶性肿瘤,对患者的生活和健康造成了巨大的威胁。Dato-DXd是新一代的抗体偶联药物药物,在乳腺癌治疗中取得了显著的进展,从最初的单一药物治疗扩展到了联合免疫治疗的多方面研究。在多项临床试验中,Dato-DXd不仅对局部晚期或转移性三阴性乳腺癌患者(TNBC)有效,还对经过多线治疗后仍然进展的TNBC患者表现出了显著的疗效,此外对那些在接受内分泌治疗后仍然进展或对内分泌治疗产生耐药的激素受体+/人类表皮生长因子受体2-的BC患者也显示出了令人满意的疗效收益。更为重要的是,Dato-DXd在临床应用中表现出了良好的安全性,这对于长期接受治疗的BC患者来说非常重要,不仅降低了患者的不良反应,而且提高了患者的生活质量。然而,目前Dato-DXd仍处于临床前实验阶段,关于其耐药机制的研究还相对有限。尚未有明确的研究证据揭示其潜在的耐药机制,但我们可以推测可能包括靶抗原的下调、抗体的结合、内化、运输或再循环缺陷等,这也是未来研究的一个重要方向。

关键词： Dato-DXd 抗体偶联药物乳腺癌 DNA拓扑异构酶I抑制剂