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EIF4A3 shRNA慢病毒载体的构建及其稳定转染细胞系的建立

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吉林大学学报（医学版） 2024年第3期50卷 831-839页

作者：何嘉文李友廖科棋李胜男广东医科大学广东省衰老相关心脑疾病重点实验室广东湛江524002 广东医科大学附属医院神经病学研究所广东湛江524002

目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和... 详细信息

目的:构建真核细胞翻译起始因子4A3(EIF4A3)-短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,建立Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系。方法:通过美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库检索EIF4A3基因序列,设计并合成PCR鉴定引物,并将其连接至经EcoRⅠ和AgeⅠ酶切的慢病毒GV493载体,构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒质粒,PCR筛选阳性克隆并测序鉴定。将GV493空载质粒和GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,分别为GV493对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为空白组、GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组,空白组不作处理,GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组分别采用相应慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,使用10 mg·L-1嘌呤霉素筛选成功感染慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞的生长状态和绿色荧光表达情况;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中EIF4A3 mRNA及蛋白表达水平。结果:PCR测序结果显示GV493-EIF4A3-shRNA重组质粒基因序列与设计合成的EIF4A3-shRNA序列一致,成功构建GV493-EIF4A3慢病毒载体。荧光显微镜观察可见HEK293T细胞荧光表达强烈,生长状态良好,慢病毒包装成功。GV493-对照慢病毒和GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒的滴度均为2×10~8 TU·mL^(-1),GV493对照组和GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞生长状态良好且表达绿色荧光,表明慢病毒感染稳定细胞系构建成功。RT-qPCR法,与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3shRNA组Neuro-2a细胞EIF4A3mRNA表达水平明显降低(P<0.01)。Western blotting法,各组在相对分子质量49000处出现特异性条带,提示Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达成功;与空白组和GV493对照组比较,GV493-EIF4A3 shRNA组Neuro-2a细胞中EIF4A3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:成功构建GV493-EIF4A3-shRNA慢病毒载体,建立了Neuro-2a-EIF4A3-shRNA稳定转染细胞系,为EIF4A3在颅内动脉粥样硬化的作用机制研究提供了参考。

关键词：真核细胞翻译起始因子4A3 短发夹RNA 慢病毒稳定转染细胞系 Neuro-2a细胞

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用于肿瘤光热治疗的血小板膜仿生纳米粒的体外初步研究

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海军军医大学学报 2024年第8期45卷 999-1004页

作者：杨刚吴建明徐栋凯范清泽周佳涵万胜利西南医科大学附属医院药学部泸州646000 西南医科大学附属医院基建部泸州646000 西南医科大学基础医学院泸州646000 西南医科大学药学院泸州646000

目的制备用于肿瘤光热治疗的载吲哚菁绿(ICG)血小板膜仿生纳米粒(ICG-PLP),并对其体外特性进行初步评价。方法采用超声法制备ICG-PLP,并用激光粒度仪测定其粒径及zeta电位,用紫外分光光度法检测其包封率,在808 nm近红外光(2 W/cm^(2))... 详细信息

目的制备用于肿瘤光热治疗的载吲哚菁绿(ICG)血小板膜仿生纳米粒(ICG-PLP),并对其体外特性进行初步评价。方法采用超声法制备ICG-PLP,并用激光粒度仪测定其粒径及zeta电位,用紫外分光光度法检测其包封率,在808 nm近红外光(2 W/cm^(2))照射下考察其光热性质,用SDS-PAGE观察血小板膜蛋白保留情况,用激光共聚焦显微镜考察制剂被小鼠巨噬细胞RAW264.7及人非小细胞肺癌细胞A549、小鼠黑色素瘤细胞B16-F10、小鼠乳腺癌细胞4T1摄取的情况,用MTT法检测ICG-PLP光毒性,通过考察溶血率及细胞相容性初步评价其安全性。在健康SD大鼠体内尾静脉注射给药后考察ICG、载ICG脂质体和ICG-PLP的体内循环时间。结果成功制备了ICG-PLP,其平均包封率为(97.68±0.01)%,平均粒径为(109.77±0.76)nm,平均zeta电位为(-21.23±0.84)mV,多分散系数为0.22±0.01。ICG-PLP很好地保留了血小板膜上的蛋白质,并具有良好的光热性能。血小板膜能促进仿生纳米粒被A549、B16-F10、4T1等肿瘤细胞摄取,并减少巨噬细胞对仿生纳米粒的吞噬。ICG-PLP展示出良好的光热治疗效果,能杀伤肿瘤细胞,且有良好的安全性。静脉给药后,ICG-PLP能延长ICG在健康SD大鼠体内的滞留时间。结论成功构建了ICG-PLP,其在药物靶向递送和肿瘤光热治疗方面具有很大的潜力。

关键词：血小板膜仿生纳米粒光热疗法肿瘤

单侧双通道脊柱内镜技术治疗颈椎病的研究进展

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中国脊柱脊髓杂志 2024年第4期34卷 425-431页

作者：张镇武李俊杨志超陈永龙陈炯灰王伟姜成黄春明李小川广东医科大学附属高州医院高州市525200

颈椎病是指颈椎椎间盘退行性改变及其继发的相邻结构病理改变累及周围组织结构(神经、脊髓、血管等),并出现与影像学改变相应的临床表现的疾病。根据不同组织结构受累而出现不同临床表现,颈椎病可分为神经根型、脊髓型、颈型和其他型(... 详细信息

颈椎病是指颈椎椎间盘退行性改变及其继发的相邻结构病理改变累及周围组织结构(神经、脊髓、血管等),并出现与影像学改变相应的临床表现的疾病。根据不同组织结构受累而出现不同临床表现,颈椎病可分为神经根型、脊髓型、颈型和其他型(包含交感神经型和椎动脉型)[1]。

关键词：神经根型交感神经型影像学改变颈型颈椎病脊髓型相邻结构椎动脉

关节镜下带袢钛板悬吊固定治疗后交叉韧带胫骨止点撕脱骨折

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中国修复重建外科杂志 2024年第3期38卷 267-271页

作者：万丰汪松王远文耿傲唐金龙李浩郑伟徐州医科大学附属医院骨科江苏徐州221000

目的探讨关节镜下带袢钛板悬吊固定治疗后交叉韧带(posterior cruciate ligament,PCL)胫骨止点撕脱骨折的疗效。方法回顾性分析2017年6月—2022年10月采用关节镜下带袢钛板悬吊固定治疗的52例(52膝)PCL胫骨止点撕脱骨折患者临床资料。... 详细信息

目的探讨关节镜下带袢钛板悬吊固定治疗后交叉韧带(posterior cruciate ligament,PCL)胫骨止点撕脱骨折的疗效。方法回顾性分析2017年6月—2022年10月采用关节镜下带袢钛板悬吊固定治疗的52例(52膝)PCL胫骨止点撕脱骨折患者临床资料。男29例,女23例;年龄19~66岁,平均40.6岁。致伤原因:交通事故伤24例,运动伤17例,摔伤11例。受伤至手术时间6~19 d,平均13.3 d。Meyers-McKeever分型:Ⅱ型30例,Ⅲ型22例。患者后抽屉试验均为阳性。术前膝关节功能Lysholm评分为(21.3±6.7)分,国际膝关节文献委员会(IKDC)评分为(20.7±5.8)分,疼痛视觉模拟评分(VAS)为(5.3±0.7)分;膝关节活动度(41.73±3.17)°。基于术前CT三维重建图像测量,骨块长径13~25 mm,平均18.1 mm。记录手术时间及并发症发生情况,影像学复查骨折愈合情况,采用膝关节活动度、Lysholm评分、IKDC评分、VAS评分评价膝关节功能及疼痛情况。结果手术时间46~81 min,平均56.2 min。患者均获随访,随访时间12~28个月,平均20.1个月。术中发生撕脱骨块医源性骨折4例;术后发生膝关节积液2例,膝前痛1例。切口均Ⅰ期愈合。术后3个月影像学复查示骨折均达骨性愈合,无内固定失效发生。术后12个月患者膝关节功能良好,均恢复正常活动。末次随访时,膝关节活动度达(133.44±4.17)°、Lysholm评分(93.6±3.1)分、IKDC评分(93.4±2.5)分、VAS评分(1.0±0.6)分,与术前比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论关节镜下带袢钛板悬吊固定治疗PCL胫骨止点撕脱骨折操作简便,患者膝关节功能恢复良好。

关键词：后交叉韧带撕脱骨折悬吊固定关节镜带袢钛板

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髋臼内陷技术对成人DDH全髋关节置换术髋臼杯生物力学影响的有限元分析

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医用生物力学 2024年第3期39卷 421-427页

作者：张欣林文杰贺彬冯柏淋陈海聪钟环欧阳汉斌广东医科大学附属医院骨科中心关节外科广东湛江524001 江门市中心医院四肢关节骨科广东江门529000

目的探讨髋臼内陷技术对成人发育性髋关节发育不良(developmental dysplasia of the hip, DDH)髋关节置换术后髋臼假体的生物力学效应。方法获取1名成人单侧DDH患者双侧髋关节CT图像数据,进一步构建患侧半骨盆有限元模型。在此基础上... 详细信息

目的探讨髋臼内陷技术对成人发育性髋关节发育不良(developmental dysplasia of the hip, DDH)髋关节置换术后髋臼假体的生物力学效应。方法获取1名成人单侧DDH患者双侧髋关节CT图像数据,进一步构建患侧半骨盆有限元模型。在此基础上,建立臼杯不同内陷水平的有限元模型,对比分析原位组和不同水平内移组之间的生物力学差异。结果在模拟拔出试验中,原位组最大抗拔出载荷强度为1 166 N;相比原位组,4 mm和8 mm内移组抗拔出载荷强度分别增加了45.8%和57.1%;原位组髋臼假体在步态周期站立位相载荷工况下臼杯-骨界面最大微动为166.4μm,内移4 mm及8 mm组相对原位组分别减少了46.2%和62.1%。对于臼杯植入后髋臼周围即刻应力分布,不同组别之间的差异并不显著;而在步态周期站立位相载荷工况下,原位组髋臼周围平均应力及峰值应力均最小,平均应力随内移程度的增加而增大,内移4 mm组峰值应力最高。结论相较原位植入假体,髋臼内陷技术可以提高假体初始稳定性,稳定性和内移程度成正比。但内移程度不足导致骨覆盖面积不足时,臼杯-骨界面边缘应力显著增加,可能会导致假体相关并发症风险的升高。

关键词：发育性髋关节发育不良髋关节置换髋臼内陷有限元分析

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脂代谢紊乱在肾脏衰老和肾纤维化中的作用

生物化学与生物物理进展 2024年第5期51卷 1067-1078页

作者：吴胜泉杨萌刘新光广东医科大学衰老研究所广东省医学分子诊断重点实验室东莞523808 广东医科大学生物化学与分子生物学研究所东莞523808

肾间质纤维化是终末期肾脏病的病理基础,肾脏衰老是肾间质纤维化的危险因素。越来越多的研究证明,脂代谢紊乱会导致肾脏衰老和肾间质纤维化。脂代谢紊乱引起的脂质堆积,会造成脂毒性和细胞应激性损伤,从而诱发衰老与细胞外基质(extracel... 详细信息

肾间质纤维化是终末期肾脏病的病理基础,肾脏衰老是肾间质纤维化的危险因素。越来越多的研究证明,脂代谢紊乱会导致肾脏衰老和肾间质纤维化。脂代谢紊乱引起的脂质堆积,会造成脂毒性和细胞应激性损伤,从而诱发衰老与细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的分泌。维持脂代谢稳态有助于减轻肾脏衰老与肾间质纤维化的发生发展。脂代谢途径的关键酶和调控蛋白有望成为改善肾脏衰老和肾间质纤维化的潜在靶点。本综述概括了脂代谢紊乱在肾脏衰老和间质纤维化中的作用,并对脂代谢中肾脏衰老和间质纤维化的预防靶点和策略进行了总结,为治疗肾纤维化发现新靶点提供了参考。

关键词：肾脏衰老肾间质纤维化脂代谢肾小管上皮细胞

LncRNA SOX2OT靶向SIRT1/自噬通路增强胆管癌细胞5-FU耐药

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南方医科大学学报 2024年第1期44卷 187-193页

作者：辛辰王笑影李响陈宇王雪宁佳曦杨适王忠琼西南医科大学附属医院消化内科四川泸州646000 西南医科大学附属医院麻醉科四川泸州646000

目的探讨LncRNASOX2OT靶向SIRT1/自噬通路调节胆管癌细胞5-FU耐药的机制。方法将未用5-FU处理HCCC-9810细胞和不同浓度(50、100、150、200μg/mL)5-FU处理的HCCC-9810细胞分为对照组和模型组,qRT-PCR检测LncRNA SOX2OT、SIRT1 mRNA表达水平,Western blot检测SIRT1、Beclin1、LC3和p62蛋白表达。pcDNA3.1-SOX2OT和pcDNA3.1-NC转染HCCC-9810/5-FU耐药细胞,CCK-8检测细胞耐药性,划痕实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR检测LncRNASOX2OT、SIRT1 mRNA表达水平,Western blot检测SIRT1、Beclin1、LC3和p62表达。在以上基础上做了Rescue实验,将OV-SOX2OT(2μg/孔)和si-NC(75pmol/孔)、OV-SOX2OT(2μg/孔)和si-SIRT1(75pmol/孔)分别共转染HCCC-9810/5-FU耐药细胞,分组为OV-SOX2OT+si-NC组和OV-SOX2OT+si-SIRT1组,以证明LncRNASOX2OT通过SIRT1影响自噬,并由此影响胆管癌细胞对5-FU的耐药性。RNAPulldown验证SOX2OT与SIRT1的靶向结合关系。结果不同浓度的5-FU均能抑制HCCC-9810细胞增殖(P<0.05)。与对照组相比,模型组SIRT1、Beclin1(P<0.001)和p62(P<0.01)蛋白表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值(P<0.001)、SIRT1和LncRNA SOX2OT mRNA水平(P<0.05)均明显增加。与OV-NC组相比,OV-SOX2OT组细胞迁移能力、SIRT1、Beclin1(P<0.001)和p62(P<0.05)蛋白表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值(P<0.001)、SIRT1和LncRNASOX2OTmRNA(P<0.05)水平均明显增加。沉默SIRT1表达导致LncRNASOX2OT过表达的HCCC-9810细胞对5-FU的耐药性显著降低。与OV-SOX2OT+si-NC组相比,OV-SOX2OT+si-SIRT1组SIRT1(P<0.001)、p62和Beclin1(P<0.01)蛋白表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值(P<0.01)、SIRT1 mRNA(P<0.05)水平均明显降低。RNA Pulldown检测结果显示SOX2OT能够直接与SIRT1结合。结论LncRNA SOX2OT通过上调SIRT1表达促进自噬来增强胆管癌HCCC-9810细胞5-FU耐药性。

关键词： LncRNASOX2OT SIRT1 自噬胆管癌细胞 5-FU耐药

右美托咪定对脓毒症急性肾损伤患者的肾功能影响的队列研究

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实用医学杂志 2024年第10期40卷 1423-1428页

作者：郑因碧邵义明黎焯基黎诗婷陈鸣娣曾文驰董宏裕广东医科大学附属第二医院广东湛江524000 广东医科大学附属东莞第一医院广东东莞523710

目的探讨右美托咪定对脓毒症急性肾损伤(AKI)患者的肾功能影响。方法采取前瞻性队列研究,选取2021年10月至2023年4月广东医科大学附属第二医院180例入住ICU治疗的脓毒症患者为研究对象。按照随机对照原则进行分组,将60例非AKI患者分为S-... 详细信息

目的探讨右美托咪定对脓毒症急性肾损伤(AKI)患者的肾功能影响。方法采取前瞻性队列研究,选取2021年10月至2023年4月广东医科大学附属第二医院180例入住ICU治疗的脓毒症患者为研究对象。按照随机对照原则进行分组,将60例非AKI患者分为S-D组(n=30,右美托咪定+常规治疗)和S组(n=30,常规治疗),比较两组治疗后AKI的发生和病情评分。将120例AKI患者分为SA-D-RT组(n=30,右美托咪定+血液净化+常规治疗)、SA-D组(n=30,右美托咪定+常规治疗)、SA-RT组(n=30,血液净化+常规治疗)和SA组(n=30,常规治疗),比较四组患者治疗后的肾功能、炎症因子水平和病情变化。结果经治疗,S-D组患者的AKI发生率低于S组,S-D组患者治疗后第7天的APACHEⅡ评分、SOFA评分均低于S组(P<0.05)。治疗第7天后,四组患者的Scr、BUN和Cys C水平较第1、3天均明显降低,且SA-D-RT组低于SA-D组、SA-RT组和SA组(P<0.05)。治疗第7天后,四组患者的CRP、PCT、TNF-α、IL-6和IL-1β水平较第1、3天均明显降低,且SA-D-RT组低于SA-D组、SA-RT组和SA组(P<0.05)。治疗第7天后,四组患者的APACHEⅡ评分、SOFA评分较第1、3天均明显降低,且SA-D-RT组低于SA-D组、SA-RT组和SA组(P<0.05)。结论右美托咪定应用于脓毒症的治疗中,可有效降低AKI的发生率,影响SAKI患者肾功能、炎症因子各项指标在血清中的表达水平,改善患者的病情。

关键词：右美托咪定脓毒症急性肾损伤肾功能炎症因子队列研究

直肠癌保肛术后患者发生低位前切除综合征及对肠道功能和生活质量影响的研究

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中华肿瘤防治杂志 2024年第1期31卷 33-38页

作者：木尼瓦尔·买买提蔡晓慧刘娟刘瑶王丽君葛磊新疆医科大学护理学院新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学附属肿瘤医院护理部新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学附属肿瘤医院胃肠外科新疆乌鲁木齐830011 广东医科大学附属医院胃肠外科广东湛江524001

目的探讨直肠癌保肛术后长期生存患者低位前切除综合征(LARS)发生情况,并调查对患者肠道功能和生活质量的影响。方法收集2010-01-01-2018-04-10在新疆医科大学附属肿瘤医院接受直肠癌保肛根治术并生存≥5年的135例患者临床资料,其中61... 详细信息

目的探讨直肠癌保肛术后长期生存患者低位前切除综合征(LARS)发生情况,并调查对患者肠道功能和生活质量的影响。方法收集2010-01-01-2018-04-10在新疆医科大学附属肿瘤医院接受直肠癌保肛根治术并生存≥5年的135例患者临床资料,其中61例发生LARS(LARS组),74例未发生LARS(无LARS组)。无LARS组年龄为49.5(19.0~68.0)岁,LARS组为53.0(29.0~68.0)岁。采用单中心回顾性横断面研究方法,对入组的患者采用电话访谈的方式用量表进行调查,并分析这些患者LARS的发生情况、肠道功能及生活质量。对可能与LARS评分升高的相关因素根据变量类型进行单因素分析,分类变量采用χ^(2)检验,不符合正态分布的变量用Mann-Whitney U检验;二元logistic回归分析LARS的危险因素。结果单因素分析发现,肿瘤距肛缘距离和术后时间是影响肠道功能的危险因素(t=3.510,P=0.033;t=4.350,P=0.015)。对肿瘤距肛缘距离和术后时间行多元线性回归分析显示,肿瘤距肛缘>10和10年患者肠道功能的差异有统计学意义,P<0.05。二元logistic回归分析显示,术前放疗和肿瘤距肛缘距离是影响LARS发生的高危因素(P=0.036;P=0.017),而术后时间在术后LARS发生风险的多因素分析中差异无统计学意义,P=0.109。生活质量得分中,躯体形象、便频、臀痛、肛门排气和排便尴尬的差异有统计学意义,均P<0.05。结论术前放疗和肿瘤距肛缘距离是影响LARS发生的高危因素,肿瘤距肛缘距离和术后时间是影响肠道功能的危险因素。直肠癌保肛术后长期生存患者仍有较高的LARS患病率,其中无LARS患者的生活质量较LARS者好。

关键词：直肠癌保肛术低位前切除综合征长期生存肠道功能生活质量