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GGA2在囊泡转运和相关疾病中作用的研究进展

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中国病理生理杂志 2024年第3期40卷 543-550页

作者：陶逸豪拜尔娜·木太力甫祁正芳刘昶吾田园韩洋洋新疆医科大学基础医学院生物学教研室新疆乌鲁木齐830017 新疆地方病分子生物学重点实验室新疆乌鲁木齐830017 西安交通大学医学部基础医学院人体解剖与组织胚胎学系陕西西安710061

囊泡转运(vesicle transport)是大分子及颗粒性物质在细胞器间的跨膜转运方式,参与细胞多项重要的生命活动,如激素分泌、神经递质的释放及信息传递、天然免疫等,反式高尔基体网络(trans-Golgi network,TGN)-内体(endosome)运输作为其中... 详细信息

囊泡转运(vesicle transport)是大分子及颗粒性物质在细胞器间的跨膜转运方式,参与细胞多项重要的生命活动,如激素分泌、神经递质的释放及信息传递、天然免疫等,反式高尔基体网络(trans-Golgi network,TGN)-内体(endosome)运输作为其中一条途径,参与跨膜蛋白回收和重复利用[1]。TGN-内体运输缺陷引起的蛋白平衡紊乱和细胞功能紊乱,与恶性肿瘤、神经退行性疾病及糖尿病等多种疾病联系密切[2],如胶质瘤细胞中转接蛋白(adaptor pro-tein,AP)复合物1σ3的减少可抑制肿瘤增殖、侵袭和迁移[3];高尔基体相关、含γ-衔接蛋白耳(gamma-adaptin ear,GAE)的ADP核糖基化因子(ADP-ribo-sylation factor,ARF)结合蛋白3(Golgi-associated GAE-containing ARF-binding protein 3,GGA3)功能丧失引起β-分泌酶1(β-secretase 1)轴突积聚导致阿尔茨海默病早期病变[4]。

关键词： GGA2蛋白囊泡转运癌症阿尔茨海默病糖尿病

重组蛋白EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162的原核表达、纯化及鉴定

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中国病原生物学杂志 2024年第7期19卷 784-788页

作者：米热古丽·艾乃都王卫国陈娜菲周彦霞马西智单文豪李艳敏周晓涛新疆医科大学维吾尔医学院新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院免疫学教研室新疆医科大学第一附属医院临床2020-8班新疆地方病及分子生物学重点实验室

目的利用pET30a-EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162重组质粒,诱导表达、纯化获得EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162目的蛋白,并对其进行鉴定,为后续研究提供前提条件。方法利用双酶切的方法验证pET30a-EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162质粒,并将其转化至E.coli BL21(DE3)菌株,获得表达菌株。采用不同浓度的IPTG在不同诱导时间及温度下诱导表达重组蛋白,菌液超声破碎后,经SDS-PAGE检测上清及沉淀中蛋白的表达。通过镍柱亲和层析法纯化蛋白并进行Western blot鉴定。结果成功鉴定重组质粒pET30a-EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162;重组蛋白EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162在IPTG终浓度为0.5 mmol/L,28℃条件下诱导6 h,上清中的蛋白表达量最高;300 mmol/L咪唑时洗脱得到的目的蛋白较多,洗脱效果较好;Western blot检测重组蛋白EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162能被相应抗体识别,反应条带在35 ku处,与预期相符。结论成功构建pET30a-EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162重组质粒,表达出相应重组蛋白,为细粒棘球病重组疫苗的研究创造条件。

关键词：细粒棘球蚴重组蛋白EgG1Y162-GGGGSGGG-EgG1Y162 蛋白表达及鉴定

肝细胞癌组织核孔蛋白85(NUP85)高表达与免疫细胞浸润及预后相关性分析

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第6期 508-519页

作者：刘新宇丁泽邦吴焕马俊杰陆进蚌埠医科大学临床医学院蚌埠医科大学精神卫生学院蚌埠医科大学基础医学院人体解剖学教研室

目的探究核孔蛋白85(NUP85)在肝细胞癌(HCC)中的表达意义及免疫相关性分析。方法综合利用多种在线数据库分析NUP85在HCC中的mRNA表达、蛋白表达以及突变情况，并进行预后诊断价值分析；采用单细胞测序数据及肿瘤免疫评估资源(TIMER)... 详细信息

目的探究核孔蛋白85(NUP85)在肝细胞癌(HCC)中的表达意义及免疫相关性分析。方法综合利用多种在线数据库分析NUP85在HCC中的mRNA表达、蛋白表达以及突变情况，并进行预后诊断价值分析；采用单细胞测序数据及肿瘤免疫评估资源(TIMER)和基因表达谱交互作用分析2021(GEPIA2021)数据库分析NUP85的免疫相关性；利用基因组癌症分析(GSCA)和临床生信之家分析NUP85的药物敏感性；通过肝细胞癌综合分子数据库(HCCDB)筛选NUP85在HCC中的共表达基因，并利用R语言“limma包”分析NUP85及其相关基因的相关性；再利用R语言“clusterProfiler包”分析NUP85及其相关基因的基因本体论(GO)功能注释、京都基因与基因组百科全书(KEGG)以及基因集富集分析(GSEA);利用临床生信之家对NUP85及其相关基因进行列线图和预后风险评分模型的构建。结果 NUP85的mRNA和蛋白质在HCC中表达上调，在不同分期和分级均高表达，不利于患者预后；而其在HCC样本中突变率是19%,显著影响患者的总生存期(OS)、疾病特异性生存(DSS)以及无进展生存(PFS),且其在巨噬细胞、 B细胞、 T细胞等多种免疫细胞中高表达并与多种免疫细胞浸润水平呈正相关；此外，NUP85的表达与米尔达美替尼(PD0325901)、维莫非尼的结构类似物(PLX4720)和瑞法替尼(PD0325901)等多用药物具有显著相关性。NUP85及其共表达基因的GO功能主要富集在细胞器裂变、核分裂和染色体分离等，KEGG通路主要富集在细胞周期和运动蛋白等，并显著不利于HCC患者OS,且对HCC患者1年、 3年和5年OS预后诊断的ROC曲线下面积AUC均大于0.7。结论 NUP85高表达HCC患者预后差，并与多种免疫细胞和药物相关，可作为HCC诊断、治疗和预后的生物标志物。

关键词：核孔蛋白85(NUP85) 肝细胞癌单细胞分析免疫浸润生物信息学

体外培养的人胸腺组织移植到裸鼠不同部位后的免疫重建效果分析

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免疫学杂志 2024年第2期40卷 113-121页

作者：关万青罗贵华撖菁萱糜建红冯泽清吴玉章南方医科大学基础医学院免疫学教研室广州510000 重庆国际免疫研究院 401338 陆军军医大学基础医学院免疫学教研室重庆400038 重庆理工大学药学与生物工程学院 400054

目的通过分析人胸腺组织切片移植到裸鼠肾包膜,皮下和股四头肌后的免疫重建效果,探究胸腺组织异位移植的最佳位置。方法收集先天性心脏病患者手术废弃的胸腺组织,制作成0.5~1 mm厚的组织切片,体外培养以清除免疫细胞。利用H&E染色、免... 详细信息

目的通过分析人胸腺组织切片移植到裸鼠肾包膜,皮下和股四头肌后的免疫重建效果,探究胸腺组织异位移植的最佳位置。方法收集先天性心脏病患者手术废弃的胸腺组织,制作成0.5~1 mm厚的组织切片,体外培养以清除免疫细胞。利用H&E染色、免疫组织化学染色和定量PCR等方法评估组织切片中残余的组织结构、细胞类型和功能。最后将胸腺组织切片分别移植入裸鼠的肾包膜、皮下和股四头肌3个部位,并通过流式细胞术和组织学检测等手段比较3个部位移植后的免疫重建效果。结果体外培养14 d的胸腺组织切片中T淋巴细胞的清除率达90%以上,上皮细胞网状结构保存完整,残存大量的巨噬细胞、树突状细胞、内皮细胞。定量PCR结果显示,体外培养能有效维持胸腺组织切片中上皮细胞标志物及其分泌细胞因子的基因表达量。流式细胞术显示移植后16周,不同移植组小鼠外周血中T细胞的比例均显著增加,其中股四头肌移植组小鼠的T细胞比例最高。原位组织学检测显示,移植物在3个部位均能检出胸腺组织再生。但是肾包膜组移植物检出率为40%,皮下组移植物检出率为60%,股四头肌组移植物检出率为100%。结论体外培养14 d的胸腺组织切片保留了完整的胸腺基质微环境,移植人的胸腺组织切片后可有效重建裸鼠的T细胞比例,且股四头肌部位移植的效果优于肾包膜和皮下部位。

关键词：人胸腺组织切片胸腺移植免疫重建

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衰老脂肪组织的微环境

中国生物化学与分子生物学报 2024年第6期40卷 749-758页

作者：张玉洁杨萌刘新光广东省医学分子诊断重点实验室广东医科大学衰老研究所广东医科大学生物化学与分子生物学研究所广东医科大学医学技术学院

脂肪组织是人体重要的能量储存库，也是最大的内分泌器官，在衰老过程中发生显著变化。脂肪组织中衰老的细胞通过分泌细胞因子、释放代谢物质等与邻近细胞相互作用，可造成脂肪组织功能异常，并引发全身性的慢性炎症或代谢紊乱。目前，... 详细信息

脂肪组织是人体重要的能量储存库，也是最大的内分泌器官，在衰老过程中发生显著变化。脂肪组织中衰老的细胞通过分泌细胞因子、释放代谢物质等与邻近细胞相互作用，可造成脂肪组织功能异常，并引发全身性的慢性炎症或代谢紊乱。目前，对衰老过程中脂肪组织微环境的变化及其机制并不完全清楚。本文概述了衰老脂肪组织微环境的改变，包括脂肪组织中多种细胞类型的变化、细胞外基质堆积造成的纤维化、细胞因子等分泌表型和代谢物的改变；归纳总结了衰老脂肪组织微环境如何影响脂肪组织功能以及全身慢性低度炎症、胰岛素抵抗和早衰等；最后介绍了几种有望延缓脂肪组织衰老的策略，包括改善脂肪细胞产热、衰老细胞消融药物、饮食和锻炼。本综述对衰老脂肪组织微环境的深入探讨，有望为衰老相关疾病的治疗提供理论支撑。

关键词：脂肪组织衰老微环境免疫代谢

敲低线粒体转录因子A(TFAM)抑制人宫颈癌细胞及骨肉瘤细胞自噬及增殖、侵袭和迁移

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第4期40卷 311-318页

作者：许颖高榴杨靖瑞汪晶蒋旭禹莉蚌埠医科大学检验医学院肿瘤基础研究与临床检验诊断重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医科大学临床医学院安徽蚌埠233030 蚌埠医科大学临床检验诊断学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医科大学输血学教研室安徽蚌埠233030

目的研究线粒体转录因子A(TFAM)对宫颈癌HeLa细胞及骨肉瘤U2OS细胞的线粒体功能、自噬、增殖、侵袭、迁移的影响。方法HeLa、U2OS细胞转染TFAM小干扰片段(si-TFAM)下调TFAM表达,Mito-Tracker Red CMXRos染色结合激光共聚焦显微镜检测线... 详细信息

目的研究线粒体转录因子A(TFAM)对宫颈癌HeLa细胞及骨肉瘤U2OS细胞的线粒体功能、自噬、增殖、侵袭、迁移的影响。方法HeLa、U2OS细胞转染TFAM小干扰片段(si-TFAM)下调TFAM表达,Mito-Tracker Red CMXRos染色结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位(MMP)、MitoSOX^(TM)Red标记法检测线粒体活性氧(mtROS)水平、实时定量PCR检测线粒体DNA(mtDNA)的表达,免疫荧光细胞化学染色检测自噬体数量的变化。Western blot法检测TFAM、微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)、自噬相关基因2A(ATG2A)、ATG2B、ATG9A、锌指转录因子Snail、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9的表达。CCK-8法、平板集落形成实验检测细胞增殖,Transwell^(TM)实验、划痕愈合实验检测细胞侵袭、迁移的变化。结果下调TFAM表达导致HeLa及U2OS细胞MMP减少,mtDNA拷贝数减少,mtROS产生量增加。LC3A/B蛋白含量较对照组明显下降,胞质内自噬体数量明显减少,自噬早期阶段蛋白ATG2B、ATG9A表达量明显减少。HeLa及U2OS细胞Snail、MMP2和MMP9蛋白表达均减少。干扰TFAM表达,抑制HeLa及U2OS细胞的增殖、侵袭、迁移能力。结论下调TFAM表达抑制线粒体功能,延缓自噬进程,降低宫颈癌细胞及骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力。

关键词：宫颈癌细胞骨肉瘤细胞线粒体转录因子A(TFAM) 自噬侵袭迁移

病原感染与免疫教学AI视频动画的制作与思考

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基础医学教育 2024年第3期26卷 249-254页

作者：夏丹丹郭萍刘伯玉张俊玲张林杰王林定王明丽安徽医科大学临床医学院基础医学部病原生物学与免疫学教研室合肥230031 安徽医科大学临床医学院临床医学系安徽医科大学基础医学院微生物学教研室

病原感染与免疫主要教授病原微生物等感染引发疾病后的诊断与防治的发生机制与方法,传统教学法学生接受程度较低。文章中本科生为教学AI视频动画的创作主体,以此探索不同课程独立知识点间的链接,能够更好地理解和掌握各课程的内在联系... 详细信息

病原感染与免疫主要教授病原微生物等感染引发疾病后的诊断与防治的发生机制与方法,传统教学法学生接受程度较低。文章中本科生为教学AI视频动画的创作主体,以此探索不同课程独立知识点间的链接,能够更好地理解和掌握各课程的内在联系。实施方案根据病原感染与免疫三门临床医学生必修课程为主线梳理出40个重难点,制作出30个具有综合内容的教学脚本,依据脚本完成AI化视频动画的制作与表现。在安徽医科大学临床医学院小范围使用后盲评教学效果,99%的学生都认为该教学动画能够加深对相应知识点的理解和记忆。71.71%学生认为画面非常有趣。全体参加该教学动画制作的学生的专业技能与理论联系实际能力显著提升。教师在教学过程使用该视频动画可以提高教学效率。

关键词：基础医学病原感染与免疫教学AI视频动画线上教育教学方法

继发性肠道弥漫大B细胞淋巴瘤的临床特征及预后分析

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中国实验血液学杂志 2024年第4期 1097-1105页

作者：陈晓君林素霞甘东辉沈建箴傅煜旻殷悦曾敏娟刘彦权莆田学院附属医院血液风湿科福建医科大学附属协和医院血液科广东医科大学基础医学院解剖学教研室广东医科大学附属东莞第一医院血液内科

目的:探讨和分析继发性肠道弥漫大B细胞淋巴瘤(SI-DLBCL)的临床特征及预后因素，以期为血液病学领域中罕见部位继发性淋巴瘤的基础研究与临床诊疗提供借鉴与参考。方法:收集并整理福建医科大学附属协和医院2011年6月-2022年6月收治的138... 详细信息

目的:探讨和分析继发性肠道弥漫大B细胞淋巴瘤(SI-DLBCL)的临床特征及预后因素，以期为血液病学领域中罕见部位继发性淋巴瘤的基础研究与临床诊疗提供借鉴与参考。方法:收集并整理福建医科大学附属协和医院2011年6月-2022年6月收治的138例SI-DLBCL患者的临床资料，分析其临床和病理特征、诊治经过及预后情况，并采用Cox回归风险模型对其预后风险因素进行单因素和多因素分析。结果:本研究纳入的138例SI-DLBCL患者中，男性85例(61.59%),女性53例(38.41%),中位发病年龄59.5(16-84)岁，临床表现缺乏特异性，一线治疗方案以化疗(67.39%)为主，单纯接受化疗94例(68.12%),化疗联合外科治疗40例(28.98%),单纯外科治疗4例(2.90%)。中位随访时间72(1-148)个月，其中存活79例(57.25%),死亡34例(24.64%),失访25例(18.12%),1、3、5年PFS率分别为57.97%、49.28%和32.61%,1、3、5年OS率分别为60.14%、54.35%和34.06%。单因素Cox回归分析结果显示，年龄、Lugano分期、IPI评分是SI-DLBCL患者OS、PFS的影响因素。多因素Cox回归分析结果显示，Lugano分期是影响SI-DLBCL患者OS及PFS的独立预后因素。结论:SI-DLBCL患者以中老年男性多见，早期临床表现缺乏特异性，一线治疗方案以R-CHOP方案化疗为主，Lugano分期是影响SI-DLBCL患者OS及PFS的独立预后因素。

关键词：继发弥漫大B细胞淋巴瘤肠道消化系统预后

硫代乙酰胺诱导的小鼠肝内胆管癌模型特点研究

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中国药理学通报 2024年第5期40卷 992-998页

作者：张玉梅琼沈玉先安徽医科大学基础医学院药理学教研室生物药物研究所安徽合肥230032

目的建立硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)诱导的小鼠肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)模型并探讨该模型的特点及形成机制,为ICC的病理机制和治疗药物的研究提供实验基础。方法C57BL/6J小鼠分为正常对照组和TAA组,正常对... 详细信息

目的建立硫代乙酰胺(thioacetamide,TAA)诱导的小鼠肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)模型并探讨该模型的特点及形成机制,为ICC的病理机制和治疗药物的研究提供实验基础。方法C57BL/6J小鼠分为正常对照组和TAA组,正常对照组小鼠饮用灭菌水,模型组小鼠饮用600 mg·L^(-1)的TAA溶液,连续饮用32周。眼球取血,检测血清中ALT、AST、DBIL和TBIL的水平;观察两组小鼠肝脏形态;HE、天狼猩红、Masson和普鲁士蓝染色观察肝脏组织病理改变;免疫组化检测CK7、CK19、Ki67、CD68、TNF-α和α-SMA的表达水平;RT-qPCR和Western blot检测ICC相关标志物mRNA和蛋白的水平;免疫荧光双标记检测肝脏组织中HNF4α+CK19+双阳性细胞。结果与正常对照组比较,TAA组小鼠肝脏表面呈细颗粒状、质硬,肝内呈肿块性病变;病理检查结果显示,肝组织有炎症细胞浸润,肿瘤细胞排列成管状,肝组织有明显的纤维化;血清中ALT、AST、DBIL和TBIL水平升高;肝脏组织中ICC标志物CK7、CK19及细胞增殖标志物Ki67表达上调;免疫细胞标志分子CD68和TNF-α表达增多,肝星状细胞活化标志物α-SMA的阳性染色增多;肝组织中出现HNF4α+CK19+双表型细胞。结论TAA可用于诱导小鼠ICC模型,该模型具有炎症免疫细胞浸润、纤维化及ICC分子标志物增高等特点,这与人类的ICC非常相似,可用于评价内源性分子和外源性药物对ICC作用的研究。

关键词：硫代乙酰胺肝内胆管癌小鼠模型肝纤维化炎症

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