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黄芩汤通过调节色氨酸代谢激活AhR修复溃疡性结肠炎肠道屏障的作用机制研究

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中国中药杂志 2024年

作者：岑水梅邹颖曾家炀李柔德赵静梅廖晓霞程晋鹏迟宏罡广东医科大学附属东莞第一医院广东医科大学第二临床医学院广东医科大学寮步医院

该研究旨在通过研究色氨酸代谢与肠道屏障之间的关系来阐明黄芩汤（Huangqin Decotion，HQD）治疗溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）的机制。体内实验使用3% 葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium，DSS）诱导急性结肠炎小鼠模型... 详细信息

该研究旨在通过研究色氨酸代谢与肠道屏障之间的关系来阐明黄芩汤（Huangqin Decotion，HQD）治疗溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）的机制。体内实验使用3% 葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium，DSS）诱导急性结肠炎小鼠模型，以美沙拉嗪为阳性对照，根据体质量、疾病活动指数（disease activity index，DAI）、结肠长度和病理变化评估黄芩汤对溃疡性结肠炎小鼠的治疗效果。利用靶向代谢组学检测小鼠粪便中的色氨酸及其代谢产物的浓度。采用蛋白免疫印迹、RT-qPCR技术检测小鼠结肠芳香烃受体（aryl hydrocarbon receptor，AhR）、肌球蛋白轻链激酶（myosin light chain kinase，MLCK）、肌球蛋白轻链（myosin light chain，MLC）和p-MLC的表达水平。利用血清FITC-葡聚糖浓度、肠系膜淋巴结和脾脏的细菌培养以及荧光探针原位杂交技术评估肠上皮通透性。通过阿利新蓝和核固红染色、蛋白免疫印迹以及RT-qPCR等技术检测小鼠肠上皮杯状细胞分泌的黏蛋白的表达。利用透射电镜技术观察小鼠肠上皮细胞间连接。通过蛋白免疫荧光、免疫印迹以及RT-qPCR等技术检测肠上皮紧密连接蛋白的表达。体外实验利用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）诱导Caco2细胞肠上皮屏障损伤模型，采用AhR siRNA进一步明确黄芩汤激活AhR改善肠道屏障功能的机制。结果表明，黄芩汤可以有效缓解DSS诱导的结肠炎小鼠的症状和结肠病理变化。黄芩汤治疗可以调节结肠炎小鼠粪便色氨酸分解代谢，激活AhR改善肠上皮屏障。此外，体外实验结果证实了黄芩汤可以通过激活AhR调控MLCK/p-MLC信号通路恢复结肠炎细胞肠上皮紧密连接蛋白的表达。

关键词：黄芩汤色氨酸芳香烃受体溃疡性结肠炎肠道屏障

弓形虫MIC1、MIC6和ROP18混合蛋白对小鼠的免疫保护作用

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中国动物传染病学报 2024年第3期 34-41页

作者：李虎朱进进李婧旸韩成建余莉病原生物学安徽省重点实验室安徽省高校人畜共患病重点实验室安徽医科大学基础医学院微生物学与寄生虫学教研室安徽医科大学合肥第三临床学院合肥市第三人民医院检验科

为评估弓形虫微线体蛋白MIC1、MIC6和棒状体蛋白ROP18组成的重组疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用，我们将重组表达的MIC1、MIC6和ROP18三种蛋白进行不同的组合，并联合弗氏佐剂通过皮下注射的方式免疫小鼠。用ELISA技术检测免疫后小鼠... 详细信息

为评估弓形虫微线体蛋白MIC1、MIC6和棒状体蛋白ROP18组成的重组疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用，我们将重组表达的MIC1、MIC6和ROP18三种蛋白进行不同的组合，并联合弗氏佐剂通过皮下注射的方式免疫小鼠。用ELISA技术检测免疫后小鼠血清特异性抗体，以及免疫蛋白刺激后脾细胞培养上清中各细胞因子的水平，通过脾淋巴细胞增殖实验检测脾淋巴细胞增殖情况。最后一次免疫后，用弓形虫WH3强毒株攻击，观察并记录小鼠的存活情况。结果表明，与对照PBS组相比，蛋白免疫组产生高滴度的IgG和IgG亚型(IgG1和IgG2a)抗体，滴度可高达1∶128 000。细胞因子IL-4、IL-10和IFN-γ表达水平不同程度地升高，并且重组蛋白能够诱导淋巴细胞特异性增殖。免疫组小鼠的生存时间较对照组有所延长，其中MIC6-ROP18组延长时间最长(P免疫和细胞免疫应答，其中MIC6-ROP18蛋白组合的免疫保护效果更为明显，但仍需进一步改进。本研究为弓形虫疫苗的研发提供了思路。

关键词：弓形虫疫苗重组蛋白 MIC1 MIC6 ROP18

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昆虫先天免疫调控机制的研究进展

寄生虫与医学昆虫学报 2024年

作者：包顺才卢雪侯晓晖遵义医科大学基础医学院细胞生物学教研室

在自然环境中，昆虫会和微生物病原体发生广泛的接触。其中，媒介昆虫所携带病毒等病原会导致严重的人类疾病或动物疫病。而昆虫主要通过先天免疫系统来应对病原体的感染。昆虫先天免疫按照其组织和作用方式的不同主要分为细胞和体液免... 详细信息

在自然环境中，昆虫会和微生物病原体发生广泛的接触。其中，媒介昆虫所携带病毒等病原会导致严重的人类疾病或动物疫病。而昆虫主要通过先天免疫系统来应对病原体的感染。昆虫先天免疫按照其组织和作用方式的不同主要分为细胞和体液免疫。细胞免疫指由血细胞介导的吞噬、集结和包囊反应。而体液免疫则主要依靠脂肪体细胞所分泌的免疫蛋白，通过抗菌肽或黑化反应来抵御病原体。抗菌肽的激活转录，离不开相应的免疫信号通路的参与，如：Toll、IMD、JAK/STAT等。昆虫先天免疫的研究会促进新方法的开发以保护人类和动物宿主免受媒介传播病原的威胁。

关键词：昆虫免疫先天免疫途径细胞免疫体液免疫黑化反应

运动及复杂环境抑制细菌脂多糖诱导的中脑黑质多巴胺能神经元损伤

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解剖学报 2024年第3期55卷 253-259页

作者：曹聪黄沁雯王红许泽婷张婵单亦文范肖肖廖敏温州医科大学基础医学院浙江温州325035 温州医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室浙江温州325035 温州医科大学检生学院生物学实验教学中心浙江温州325035 温州医科大学公共卫生与管理学院浙江温州325035

目的探讨运动和复杂环境对细菌脂多糖(LPS)诱导的中脑黑质多巴胺能神经元死亡的影响。方法将C57BL/6小鼠分为对照组、LPS组、LPS+游泳组和LPS+复杂环境组,每组各7只。LPS组小鼠通过脑立体定位注射建立帕金森病炎症模型,置于鼠笼中生活2... 详细信息

目的探讨运动和复杂环境对细菌脂多糖(LPS)诱导的中脑黑质多巴胺能神经元死亡的影响。方法将C57BL/6小鼠分为对照组、LPS组、LPS+游泳组和LPS+复杂环境组,每组各7只。LPS组小鼠通过脑立体定位注射建立帕金森病炎症模型,置于鼠笼中生活2周。LPS+游泳组小鼠模型制作后每日强迫进行游泳运动15 min,运动2周。LPS+复杂环境组小鼠模型制作后置于复杂环境生活2周。对照组小鼠不做处理。模型制作14 d后,对各组小鼠进行足迹、旷场和滚轴等行为学实验,检测小鼠的自主运动能力、运动平衡能力和抑郁水平;免疫组织化学染色和Western blotting检测中脑黑质中酪氨酸羟化酶(TH)的表达;Western blotting检测中脑黑质中脑源性神经生长因子(BDNF)、Caspase-3、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达;RT-PCR检测中脑黑质中IL-1β、IL-6和TNF-α转录水平。结果与对照组相比,LPS组、LPS+游泳组、LPS+复杂环境组小鼠的运动能力和平衡能力均有所下降,抑郁水平有所上升(P<0.001),TH阳性神经元存活数量和BDNF蛋白量均显著减少(P<0.001),Caspase-3及IL-1β、IL-6和TNF-α含量均显著增高(P<0.001)。与LPS组相比,LPS+游泳组和LPS+复杂环境组小鼠的运动能力和平衡能力均有所恢复,抑郁水平显著下降(P<0.01),TH阳性神经元存活数量及BDNF含量均显著增多(P<0.01),Caspase-3及IL-1β、IL-6和TNF-α均显著减少(P<0.01),且LPS+复杂环境组现象更为显著。结论运动和复杂环境能抑制LPS诱导的小鼠中枢神经系统炎症,从而减轻对中脑黑质神经元的损伤,且LPS+复杂环境组的抑制效果更为显著。

关键词：运动复杂环境炎症多巴胺能神经元细菌脂多糖行为学实验免疫印迹法小鼠

人参皂苷Rg1通过抑制NLRP3炎症小体途径减轻氧糖剥夺/复供后小胶质细胞炎症反应

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中国临床解剖学杂志 2024年第1期42卷 33-41页

作者：王兴航丁佳媛李放包翠芬阎丽菁锦州医科大学组织胚胎学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学人体解剖学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学分析化学教研室辽宁锦州121001 锦州医科大学基础医学实验教学中心辽宁锦州121001

目的探讨人参皂苷Rg1通过NLRP3炎症小体途径对小胶质细胞氧糖剥夺/复供损伤后炎症反应的影响,并进一步研究其抗炎的作用机制。方法将生长状态良好的BV-2小胶质细胞随机分为6组:无处理组(Con),氧糖剥夺/复供组(OGD/R),人参皂苷Rg1低、中... 详细信息

目的探讨人参皂苷Rg1通过NLRP3炎症小体途径对小胶质细胞氧糖剥夺/复供损伤后炎症反应的影响,并进一步研究其抗炎的作用机制。方法将生长状态良好的BV-2小胶质细胞随机分为6组:无处理组(Con),氧糖剥夺/复供组(OGD/R),人参皂苷Rg1低、中、高剂量组(剂量分别为0.1、0.2、0.4 mmol/L,简称Rg1L、Rg1M、Rg1H),MCC950对照组(0.05 mmol/L,MCC950)。采用CCK8法检测细胞增殖;免疫荧光和免疫印迹法检测经不同浓度人参皂苷Rg1和MCC950作用48 h后,BV-2小胶质细胞内NLRP3炎症小体相关蛋白的表达。ELISA检测BV-2小胶质细胞培养液中炎症因子IL-1β、IL-18的表达水平。结果与Con组比较,经缺氧缺糖/复供处理的BV-2小胶质细胞胞质内可见明显的Iba-1绿色荧光表达;OGD/R处理BV-2小胶质细胞2 h后,加入不同浓度人参皂苷Rg1和MCC950培养48 h后,细胞增殖率呈现明显的下降趋势。OGD/R组呈现明显的NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18阳性表达。Rg1L、Rg1M、Rg1H 3组NLRP3蛋白表达水平显著下降,并且随着药物浓度的升高,表达越低。结果表明,与OGD/R组相比,人参皂苷Rg1和MCC950可抑制活化的BV-2小胶质细胞表达NLRP3(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1可能通过抑制NLRP3、ASC和Caspase-1蛋白的表达、干扰NLRP3炎症小体合成,进一步抑制相关炎症因子IL-1β和IL-18的表达水平,从而抑制炎症反应。

关键词：人参皂苷Rg1 氧糖剥夺/复供小胶质细胞炎症核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3

氯膦酸盐脂质体通过消耗巨噬细胞延缓周围神经损伤后功能性修复的实验研究

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中国临床解剖学杂志 2024年第3期42卷 265-269,277页

作者：李云伦许逸舟蔡家乐许淑怡张家琪傅兰雅马心蕊何叶王祥海郭家松南方医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室广州510515 南方医科大学珠江医院脊柱外科广州510510 广东省组织构建与检测重点实验室广州510515

目的探究巨噬细胞消耗对周围神经损伤修复的影响。方法实验组小鼠腹腔注射氯膦酸盐脂质体消耗巨噬细胞后制备坐骨神经夹伤模型,另外部分小鼠注射空载脂质体后神经损伤作为对照组。术后7 d利用免疫荧光检测F4/80阳性巨噬细胞和GAP43阳性... 详细信息

目的探究巨噬细胞消耗对周围神经损伤修复的影响。方法实验组小鼠腹腔注射氯膦酸盐脂质体消耗巨噬细胞后制备坐骨神经夹伤模型,另外部分小鼠注射空载脂质体后神经损伤作为对照组。术后7 d利用免疫荧光检测F4/80阳性巨噬细胞和GAP43阳性再生轴突。术后28 d再次进行免疫荧光检测F4/80阳性巨噬细胞,并通过行为学、神经电生理检测运动功能和神经传导功能,腓肠肌称重和HE染色评估靶区肌萎缩。结果术后7 d和28 d,实验组神经夹伤远端巨噬细胞消耗效率均达到70%以上,术后7 d神经远端的GAP43阳性再生轴突比对照组更少、更短。术后28 d,实验组小鼠的运动能力和神经传导强度显著下降,神经传导潜伏期延长,腓肠肌湿重比和肌纤维面积显著变小。结论氯膦酸盐脂质体通过巨噬细胞消耗可导致神经损伤后的再生修复能力下降。

关键词：巨噬细胞氯膦酸盐周围神经损伤功能性修复

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神经肌肉电刺激通过调控白细胞介素6/信号转导子及转录激活子3信号通路促进脊髓损伤后小鼠运动功能恢复

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解剖学报 2024年第3期55卷 260-267页

作者：覃建锋宋海旺孙宝飞吉杨丹龙思方杨丹黔南民族医学高等专科学校基础医学部贵州都匀558003 贵州医科大学基础医学院人体解剖学教研室贵州贵安新区561113

目的观察神经肌肉电刺激(NMES)对脊髓损伤后小鼠白细胞介素6(IL-6)/STAT3信号通路的影响,探讨其对运动功能恢复的机制。方法选取SPF级小鼠72只随机分成假手术(sham)组、脊髓损伤组(SCI)和NMES组。利用BMS评分、斜坡实验与电生理(EMG)评... 详细信息

目的观察神经肌肉电刺激(NMES)对脊髓损伤后小鼠白细胞介素6(IL-6)/STAT3信号通路的影响,探讨其对运动功能恢复的机制。方法选取SPF级小鼠72只随机分成假手术(sham)组、脊髓损伤组(SCI)和NMES组。利用BMS评分、斜坡实验与电生理(EMG)评估小鼠脊髓损伤后肢体运动恢复情况。Western blotting和Real-time PCR检测各组小鼠脊髓组织中相关炎症因子、IL-6/STAT3信号通路与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。HE染色观察各组小鼠脊髓形态结构。结果NMES组BMS评分和小鼠斜坡实验均高于SCI组(P<0.05);NMES组小鼠运动诱发电位(MEP)最大振幅高于SCI组(P<0.05);NMES组脊髓组织TNF-α、IL-12A与GFAP表达量均低于SCI组(P<0.05),TGF-β、IL-10与BDNF表达量均高于SCI组(P<0.05);与SCI组相比,NMES组小鼠脊髓空洞较少,脊髓形态修复较好;与SCI组相比,NMES组IL-6/STAT3信号通路蛋白表达均低于SCI组(P<0.05)。结论神经肌肉电刺激通过抑制IL-6/STAT3信号通路发挥抗炎作用,从而促进脊髓损伤后小鼠后肢运动功能的恢复。

关键词：脊髓损伤炎症反应白细胞介素6/信号转导子及转录激活子3信号通路神经肌肉电刺激免疫印迹法小鼠

基于多模态多示例学习的免疫介导性肾小球疾病自动分类方法

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南方医科大学学报 2024年第3期44卷 585-593页

作者：龙楷兴翁丹仪耿舰路艳蒙周志涛曹蕾南方医科大学生物医学工程学院//广东省医学图像处理重点实验室//广东省医学成像与诊断技术工程实验室广东广州510515 南方医科大学基础医学院广东广州510515 南方医科大学中心实验室广东广州510515 广州华银医学检验中心广东广州510515

目的探讨如何利用多模态深度学习方法,联合光学显微镜(OM)、免疫荧光显微镜(IM)及透射电子显微镜(TEM)对应的3种图像进行免疫介导性肾小球疾病分类。方法基于273例患者的病理图像进行回顾性研究,构建多模态多示例模型对3种免疫介导性的... 详细信息

目的探讨如何利用多模态深度学习方法,联合光学显微镜(OM)、免疫荧光显微镜(IM)及透射电子显微镜(TEM)对应的3种图像进行免疫介导性肾小球疾病分类。方法基于273例患者的病理图像进行回顾性研究,构建多模态多示例模型对3种免疫介导性的肾小球疾病——免疫球蛋白A肾病(IgAN)、膜性肾病(MN)、狼疮性肾炎(LN)进行分类。该模型采用示例水平的多示例学习(I-MIL)方法挑选患者的TEM图像并与同一患者的OM图像和IM图像进行多模态特征融合。通过该模型与单模态、双模态模型的比较,探究3种模态之间的不同组合形式以及模态特征融合方式的特性。结果联合OM、IM以及TEM图像建立的多模态多示例模型准确率为(88.34±2.12)%,优于准确率为(87.08±4.25)%的最优的单模态模型,以及准确率为(87.92±3.06)%的最优的双模态模型。结论本研究成功建立基于OM、IM及TEM三种模态图像的多模态多示例模型,并验证了采用多示例学习结合多模态学习方法对免疫介导性肾小球疾病分类的有效性。

关键词：肾活检病理肾小球疾病深度学习多模态融合多示例学习

分枝杆菌噬菌体D29 LysinB/Holin真核表达载体的构建及杀菌试验

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第1期44卷 74-80页

作者：席志阳宋通王文涛吴文潇付玉荣伊正君山东第二医科大学医学检验学院潍坊261053 山东第二医科大学基础医学院潍坊261053

目的构建分枝杆菌噬菌体D29 LysinB/Holin融合蛋白真核表达载体,通过细胞感染模型研究其在胞内对结核分枝杆菌的杀伤效果。方法构建原核重组质粒pET32a-LysinB并诱导表达,纯化蛋白后制备多克隆抗体;构建真核重组质粒pcDNA3.1(+)-LysinB/... 详细信息

目的构建分枝杆菌噬菌体D29 LysinB/Holin融合蛋白真核表达载体,通过细胞感染模型研究其在胞内对结核分枝杆菌的杀伤效果。方法构建原核重组质粒pET32a-LysinB并诱导表达,纯化蛋白后制备多克隆抗体;构建真核重组质粒pcDNA3.1(+)-LysinB/Holin并转染进单核巨噬细胞RAW264.7,经制备的LysinB多克隆抗体进行表达鉴定后,建立细胞感染模型并通过抗酸染色和菌落计数检测LysinB/Holin融合蛋白的杀菌效果。结果成功制备LysinB的多克隆抗体。重组质粒pcDNA3.1(+)-LysinB/Holin在真核细胞中有效表达LysinB/Holin融合蛋白且对细胞无明显毒性。LysinB/Holin融合蛋白可有效杀伤胞内的结核分枝杆菌。结论重组质粒pcDNA3.1(+)-LysinB/Holin对胞内结核分枝杆菌有较好的杀伤效果,且对细胞无明显毒性,具有治疗结核病的潜能。

关键词：结核分枝杆菌噬菌体D29 Lysin B Holin