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乳双歧杆菌对旋毛虫感染小鼠炎性细胞因子及肠道菌群的影响

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医学动物防制 2023年第3期39卷 282-287,293页

作者：迟茜文解文利姚梦玮李玉迁魏洪贵州医科大学基础医学院感染与免疫学实验室贵阳550025 贵州医科大学基础医学院微生物学教研室

目的探究不同剂量乳双歧杆菌对旋毛虫感染小鼠的虫荷量、炎症调节作用及肠道菌群组成的影响。方法取感染旋毛虫的小鼠(300条/只)随机分为模型组、乳双歧杆菌高剂量组、中剂量组、低剂量组,未感染旋毛虫小鼠作为空白对照组;高、中、低剂... 详细信息

目的探究不同剂量乳双歧杆菌对旋毛虫感染小鼠的虫荷量、炎症调节作用及肠道菌群组成的影响。方法取感染旋毛虫的小鼠(300条/只)随机分为模型组、乳双歧杆菌高剂量组、中剂量组、低剂量组,未感染旋毛虫小鼠作为空白对照组;高、中、低剂量组分别给予乳双歧杆菌灌胃,模型组和空白对照组每日给予等量磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline,PBS)连续灌胃30 d;胃蛋白酶消化法检测各组第7 d肠道成虫数量及第30 d肌肉幼虫数量。ELISA法检测各组模型小鼠血清中白细胞介素10(Interleukin-10,IL-10)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)水平,采集各组小鼠肠道感染期粪便样本,采用16S rDNA高通量测序进行微生物组生物信息学分析,评估样本多样性和分类学特征。结果虫荷量结果显示,高剂量乳双歧杆菌显著降低旋毛虫感染小鼠第7 d肠道成虫及第30 d肌肉幼虫数量(P微生物组成结果显示,乳双歧杆菌干预使感染小鼠厚壁菌门与拟杆菌门比值上升,降低普雷沃菌属丰度,高剂量组中异杆菌属、颤螺菌属丰度增加,中剂量组中布劳特菌属增加。结论乳双歧杆菌能改善旋毛虫感染小鼠炎症表现,促进旋毛虫清除,提高感染小鼠肠道内有益菌丰度。

关键词：乳双歧杆菌旋毛虫肠道菌群虫荷量炎性因子

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抗人B7-H4嵌合抗体的制备及鉴定

中国免疫学杂志 2022年第22期38卷 2763-2769页

作者：范振军张文婷张丽张俊爱赵祖国徐军发(指导) 广东医科大学医学技术学院检验医学研究所东莞523808 广东医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室东莞523808

目的:制备抗人B7-H4嵌合单克隆抗体(mAb),并对其生物学功能进行初步鉴定。方法:从杂交瘤细胞株扩增抗人B7-H4可变区基因序列;构建表达人鼠嵌合抗体的表达载体,并转染CHO-K1细胞构建稳定表达抗B7-H4嵌合抗体的CHO-K1细胞株;SDS-PAGE检测... 详细信息

目的:制备抗人B7-H4嵌合单克隆抗体(mAb),并对其生物学功能进行初步鉴定。方法:从杂交瘤细胞株扩增抗人B7-H4可变区基因序列;构建表达人鼠嵌合抗体的表达载体,并转染CHO-K1细胞构建稳定表达抗B7-H4嵌合抗体的CHO-K1细胞株;SDS-PAGE检测mAb纯度;ELISA测定mAb效价;SPR测定mAb的亲和力;BCA法检测mAb浓度;CCK-8法检测T细胞增殖情况;ELISA和Western blot确定mAb结合表位范围;使用Discovery Studio软件对单抗表位进行分析。结果:从杂交瘤细胞成功扩增出抗体可变区基因,筛选出稳定表达嵌合抗体的CHO-K1细胞株;细胞培养上清中mAB浓度为1.82 mg/ml,ELISA有效效价为1.97×10^(5)左右,亲和力为3.72×10^(-9)kD;CCK-8结果表明嵌合单抗可以阻断B7-H4-Fc分子对T细胞增殖的抑制作用;表位分析结果表明嵌合mAb主要以氢键和疏水作用与B7-H4 IgC域结合。结论:本研究成功制备了抗B7-H4的人鼠嵌合单抗,可在体外有效地阻断B7-H4-Fc对T细胞增殖抑制作用并为B7-H4抗体药物研发提供了前期基础。

关键词： B7-H4 嵌合抗体抗体表位 T细胞增殖

巨噬细胞迁移抑制因子调节登革病毒2型感染诱导人脐静脉内皮细胞自噬的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第3期42卷 185-193页

作者：苟小琴吴宁左丽贵州医科大学基础医学院免疫学教研室贵阳550000

目的:研究原代人脐静脉内皮细胞(primary human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)被登革病毒2型(dengue virus type 2,DENV2)感染后,巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)对腺苷酸激活蛋白激酶(adenosine 5′-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)/细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)自噬信号途径的影响。方法:TCID 50检测DENV2对C6/36细胞的毒力,RT-PCR检测DENV2感染后HUVEC内病毒NS1基因部分片段;透射电子显微镜观察自噬体结构,Western blot检测不同剂量病毒感染HUVEC后对微管关联蛋白Ⅱ(microtubule-associated proteinsⅡ,LC3-Ⅱ)表达的影响和不同时间MIF的蛋白质水平变化,分析MIF与自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的相关性;MIF抑制剂和通路抑制剂分别预处理DENV2感染的HUVEC,Western blot检测MIF、AMPK、ERK、mTOR和LC3-Ⅱ蛋白变化,分析MIF与AMPK自噬通路的关联。结果:实验用毒株对C6/36细胞的TCID 50为10-9.09/ml,被感染的HUVEC内可检测病毒NS1基因部分片段序列。不同剂量病毒感染后,在HUVEC内可形成自噬小体或自噬溶酶体,自噬水平有差异。DENV2感染HUVEC引起MIF和LC3-ⅡmRNA水平的变化呈正相关,MIF抑制剂的处理影响通路蛋白AMPK、ERK和LC3-Ⅱ的表达,但几乎不影响MIF的蛋白质水平。结论:DENV2感染HUVEC引起的MIF变化可影响自噬水平,MIF通过调控AMPK/ERK/mTOR途径影响自噬。

关键词：登革病毒2型巨噬细胞迁移抑制因子自噬腺苷酸激活蛋白激酶原代人脐静脉内皮细胞

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以实验素养为导向的医学微生物学实验探索

基础医学教育 2023年第2期25卷 127-129页

作者：宋姗姗杨艾华王小敏王微微遵义医科大学基础医学院医学微生物学与免疫学实验室遵义563000 遵义医科大学基础医学院微生物学教研室

医学微生物学实验是一门实践性、应用型很强的课程,培养学生的实验素质是实验教学的重要组成部分,可直接影响学生实验技能的掌握度和科研思维的活跃力。为进一步加强和完善学生实验素质的培养,课题组在实验物品的归置、仪器设备的使用... 详细信息

医学微生物学实验是一门实践性、应用型很强的课程,培养学生的实验素质是实验教学的重要组成部分,可直接影响学生实验技能的掌握度和科研思维的活跃力。为进一步加强和完善学生实验素质的培养,课题组在实验物品的归置、仪器设备的使用、实验废弃物的处理、示教品标识的制作等方面进行探索和改革,注重培养学生的实验操作细节、团队合作以及自我防护的习惯,以期营造整洁、有序的实验环境,使学生养成良好的实验习惯,提高其综合实验素质,提升实验教学效率和教学质量。

关键词：医学微生物学实验教学素质培养

复合益生菌制剂缓解cuprizone诱导的小鼠神经脱髓鞘

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微生物学报 2022年第3期62卷 774-784页

作者：杨昊李琳刘青青康行杨晓丹刘海霞樊卫平山西医科大学基础医学院微生物与免疫学教研室山西晋中030619

【目的】探索复合益生菌制剂对双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导的小鼠脑内神经脱髓鞘的作用。【方法】将27只小鼠随机分为正常组(NC)、模型组(CPZ)和益生菌处理组(probiotics)。NC组小鼠正常饲喂,CPZ组和probiotics组小鼠饲喂含0.2... 详细信息

【目的】探索复合益生菌制剂对双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导的小鼠脑内神经脱髓鞘的作用。【方法】将27只小鼠随机分为正常组(NC)、模型组(CPZ)和益生菌处理组(probiotics)。NC组小鼠正常饲喂,CPZ组和probiotics组小鼠饲喂含0.2%CPZ的饲料且每天分别灌饲0.2 mL生理盐水及同体积(75亿菌落形成单位活菌)的复合益生菌制剂,6周后处死小鼠。通过快蓝染色(LFB)观察小鼠脑内神经髓鞘的完整性;苏木素-伊红染色(HE)、阿利新蓝染色及免疫荧光染色分别评估回肠及结肠组织病理学改变、黏蛋白的表达及紧密连接蛋白ZO-1、occludin的表达;ELISA检测脑组织匀浆脂多糖LPS水平;Western blotting检测脑组织TLR4/NF-κB信号通路的蛋白表达。【结果】与CPZ组相比,复合益生菌制剂干预后,发生在CPZ组小鼠大脑胼胝体内的神经脱髓鞘明显减少;回肠绒毛排列整齐致密,结肠腺体增多,炎细胞浸润减少,黏蛋白及紧密连接蛋白表达均增加;脑组织LPS水平显著降低,TLR4、NF-κB及P-IκB/IκB蛋白表达量下降。【结论】复合益生菌制剂可能通过降低肠壁通透性缓解CPZ诱导的小鼠中枢神经系统脱髓鞘。

关键词：双环己酮草酰二腙多发性硬化症(MS) 脱髓鞘益生菌肠屏障

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乳酸调控巨噬细胞功能促进登革病毒2型感染

中华微生物学和免疫学杂志 2024年第5期44卷 396-405页

作者：胡欢覃燕春黄贞植周璐吴家红商正玲贵州医科大学基础医学院免疫学教研室安顺550025 贵州医科大学基础医学院寄生虫教研室安顺550025

目的探究外源性乳酸对Raw264.7细胞、小鼠骨髓来源巨噬细胞(mouse bone marrow-derived macrophages,BMDMs)及THP-1细胞中登革病毒2型(dengue virus type 2,DENV-2)复制的影响及乳酸与细胞活化之间的关系。方法培养和诱导BALB/c小鼠骨... 详细信息

目的探究外源性乳酸对Raw264.7细胞、小鼠骨髓来源巨噬细胞(mouse bone marrow-derived macrophages,BMDMs)及THP-1细胞中登革病毒2型(dengue virus type 2,DENV-2)复制的影响及乳酸与细胞活化之间的关系。方法培养和诱导BALB/c小鼠骨髓中的BMDMs,流式细胞术检测F4/80+CD11b+细胞纯度。qRT-PCR检测不同时间点DENV-2感染BMDMs中葡萄糖转运体1(glucose transporter type 1,GLUT1)、己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、乳酸转运体4(monocarboxylate transporters 4,MCT4)的mRNA表达水平,比色法检测细胞上清液中乳酸含量。使用CCK-8法评估不同浓度乳酸对Raw264.7细胞、BMDMs及THP-1细胞活力的影响,qRT-PCR检测不同浓度乳酸对不同MOI DENV-2感染细胞中病毒E基因、CD163、TGF-β、CD86、视黄酸诱导基因Ⅰ(retinoic acid-inducible geneⅠ,RIG-Ⅰ)、IFN-β、干扰素刺激基因15(interferon-stimulated gene 15,ISG15)及ISG56的mRNA表达水平,流式细胞术检测CD86和CD206蛋白的表达。结果BMDMs纯度为(87.53±1.66)%。DENV-2(MOI=3)感染BMDMs后,GLUT1 mRNA转录水平在12 h一过性增高,在24 h降低(P0.05)。结论本研究发现外源性乳酸能促进DENV-2在人源及鼠源巨噬细胞中的感染,该现象与细胞M2型极化有关。

关键词：乳酸巨噬细胞登革病毒病毒复制 M2型极化干扰素信号通路

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一种新型抗体替代品——亲和体的研究进展

国际生物制品学杂志 2022年第5期45卷 272-276页

作者：杨佳周璐琪(综述) 张丽芳朱珊丽(审校) 温州医科大学基础医学院微生物学与免疫学教研室温州325000

作为抗体的一种新型替代品,亲和体不仅以高亲和力与靶蛋白特异性结合,同时又具备相对分子质量小(~6500)、穿透性强、免疫原性弱和制备过程简单等诸多特性。因此,亲和体在肿瘤靶向治疗、体内成像诊断和生物技术应用等方面具有更突出的优... 详细信息

作为抗体的一种新型替代品,亲和体不仅以高亲和力与靶蛋白特异性结合,同时又具备相对分子质量小(~6500)、穿透性强、免疫原性弱和制备过程简单等诸多特性。因此,亲和体在肿瘤靶向治疗、体内成像诊断和生物技术应用等方面具有更突出的优势和可行性。此文对其特性和应用研究进展做一综述。

关键词：亲和体靶向治疗成像诊断生物技术

人正常宫颈上皮细胞感染沙眼衣原体的基因表达谱分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第2期43卷 93-101页

作者：贾如斯辰力李明洋杨佳吴芯蕾朱珊丽温州医科大学第一临床医学院(信息与工程学院) 温州325035 武汉大学医学部基础医学院武汉430062 温州医科大学基础医学院微生物学和免疫学教研室温州325035 温州医科大学第二临床医学院温州325035

目的分析人正常宫颈上皮细胞(HcerEpic)感染沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)前后基因表达谱差异。方法HcerEpic细胞经DEAE-D预处理后加入E型Ct标准株,培养44 h后收集HcerEpic细胞(感染组),并以未感染Ct的HcerEpic细胞作为对照组,... 详细信息

目的分析人正常宫颈上皮细胞(HcerEpic)感染沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)前后基因表达谱差异。方法HcerEpic细胞经DEAE-D预处理后加入E型Ct标准株,培养44 h后收集HcerEpic细胞(感染组),并以未感染Ct的HcerEpic细胞作为对照组,提取两组总RNA后反转录并构建cDNA文库。通过高通量测序分析两组基因表达谱差异,并选择代表性基因通过实时荧光定量PCR(qPCR)验证。结果共检测23997个基因,差异基因125个,其中上调基因119个,下调基因6个;GO分析显示差异基因富集于对病毒防御反应、Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路、对Ⅰ型IFN的细胞反应等条目;KEGG富集通路为甲型流感、单纯疱疹病毒感染、EB病毒感染、HPV感染、NOD样受体通路等相关通路。结论人正常宫颈上皮细胞感染Ct前后转录组存在差异,差异基因主要富集于IFN通路,与细胞抗病毒过程密切相关。qPCR验证了ISG15、IFIT2、OASL、UBE2L6等差异显著且与IFN通路密切相关的基因。

关键词：沙眼衣原体宫颈上皮细胞转录组差异表达基因

中介素对脂多糖诱导巨噬细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体活化及细胞焦亡的影响

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中华风湿病学杂志 2022年第12期26卷 813-819,I0002页

作者：景刚张军锋朱爱萍杨佳常思佳黄太平王艳红山西医科大学第二医院检验科太原030001 山西中医药大学基础医学院晋中030619 山西医科大学微生物学与免疫学教研室太原030001

目的利用脂多糖刺激的小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,研究中介素对腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)诱导的核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化和细胞焦亡的影响及其机制。方法细胞分组为:对照组,脂多糖组,中介素处理组,磷脂酰肌醇-3... 详细信息

目的利用脂多糖刺激的小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,研究中介素对腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)诱导的核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化和细胞焦亡的影响及其机制。方法细胞分组为:对照组,脂多糖组,中介素处理组,磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)阻滞剂LY294002组。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞NLRP3炎症小体的激活情况及炎症因子IL-1β和IL-18表达,碘化丙锭(PI)染色法检测细胞焦亡的改变。计量资料以±s表示,组间差异比较采用方差分析,以P学意义。结果与对照组[(0.83±0.09),(0.49±0.04)]比较,脂多糖组磷酸化(p)-PI3K/PI3K(0.44±0.05),p-Akt/Akt(0.27±0.06)比值均显著降低,与脂多糖组相比,脂多糖+中介素组细胞中p-PI3K/PI3K(1.22±0.18),pAkt/Akt(0.83±0.09)比值均显著升高(F=31.40,P免疫印迹结果显示,IL-1β蛋白相对表达量:对照组为(100%),脂多糖组为[(188±14)%],脂多糖+中介素组为[(112±11)%],脂多糖+中介素+LY组为[(171±27)%](F=21.25,P<0.001);IL-18蛋白相对表达量:对照组为(100%),脂多糖组为[(183±16)%],脂多糖+中介素组为[(115±19)%],脂多糖+中介素+LY组为[(179±23)%](F=19.62,P<0.001);NLRP3蛋白相对表达量:对照组为(100%),脂多糖组为[(149±15)%],脂多糖+中介素组为[(106±10)%],脂多糖+中介素+LY组为[(144±15)%](F=14.35,P<0.001);ASC蛋白相对表达量:对照组为(100%),脂多糖组为[(188±12)%)],脂多糖+中介素组为[(110±18)%],脂多糖+中介素+LY组为(192±8)%(F=15.79,P<0.001)。结论中介素通过调节PI3K/Akt活性,抑制NLRP3炎症小体的活化与细胞焦亡。

关键词：巨噬细胞脂多糖类细胞焦亡 NLRP3炎症小体中介素 PI3K/Akt信号通路