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三种无形态损伤提取粉螨DNA方法的改进与评估

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应用昆虫学报 2024年

作者：范海页朱永航陈慧林刘璐瑶赵薇曹玉祥叶长江孙恩涛皖南医学院检验学院

【目的】改进和评估无形态损伤提取粉螨DNA并保留完整凭证标本的方法。【方法】用改良Chelex-100法，STE法和碱裂解法提取单只椭圆食粉螨Aleurolyphus ovatus基因组DNA，并进行凭证标本回收和形态观察。超微量分光光度计测定DNA的纯度... 详细信息

【目的】改进和评估无形态损伤提取粉螨DNA并保留完整凭证标本的方法。【方法】用改良Chelex-100法，STE法和碱裂解法提取单只椭圆食粉螨Aleurolyphus ovatus基因组DNA，并进行凭证标本回收和形态观察。超微量分光光度计测定DNA的纯度。通过对COⅠ基因的扩增，验证所提取的DNA是否满足PCR扩增。【结果】3种方法处理后的凭证标本整体保持完整，但碱裂解法处理后，躯体刚毛易脱落，凭证标本透明过度，影响标本的形态鉴定。改良Chelex-100法的A260/A280比值为1.95，其余两种方法 A260/A280均低于1.8。3种方法所提单只螨DNA均满足PCR扩增，但STE法的扩增效果较差。【结论】改良Chelex-100法保存凭证标本完整，不影响标本的形态鉴定；提取的DNA纯度高，可以满足PCR扩增和后续相关分子生物学研究，且简单高效，适于单只粉螨DNA的无形态损伤提取。

关键词：粉螨 DNA提取无形态损伤改良Chelex-100法碱裂解法

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藜麦麸皮黄酒和普通黄酒的品质比较

食品工业科技 2024年第6期45卷 254-264页

作者：姜学敏张虹高慧蔡雨情赵雷薛鹏潍坊医学院公共卫生学院山东潍坊261053 潍坊医学院公共卫生检测检验中心山东潍坊261053

为探究加入藜麦麸皮是否会对发酵黄酒的物质组成、风味及其生物活性产生影响。利用传统自制陈伏曲发酵黄酒,设置普通黄酒组和藜麦麸皮黄酒组,利用原子吸收分光光度计测定两组酒样当中的重金属含量,采用液相色谱-质谱联用技术(High-Perfo... 详细信息

为探究加入藜麦麸皮是否会对发酵黄酒的物质组成、风味及其生物活性产生影响。利用传统自制陈伏曲发酵黄酒,设置普通黄酒组和藜麦麸皮黄酒组,利用原子吸收分光光度计测定两组酒样当中的重金属含量,采用液相色谱-质谱联用技术(High-Performance Liquid Chromatography Mass Spectrometer,HPLC-MS)和气相色谱-质谱联用技术(Gas Chromatography-Mass Spectrometer,GC-MS)分析比较两组黄酒的基本理化指标、差异化合物和风味物质,并对黄酒的抗氧化活性进行分析。结果表明,藜麦麸皮黄酒中的总皂苷以及总酚酸含量明显优于普通黄酒,且铅含量低于普通黄酒,两组黄酒中均未检测到黄曲霉毒素B1。两种黄酒中共有48种差异化合物,其中数量最多的为醇类和酰胺类物质,均为10种,其次为酸类物质4种以及糖类物质2种。GC-MS测得挥发性物质共有19种,直接进样有12种,顶空进样有12种,利用外标法一共标定出四种物质,在普通黄酒中的物质为甲酸丁酯、乙酸和丁酸含量分别为5.10±1.10、4.40±1.70、10.80±2.20μg/mL。在藜麦麸皮黄酒中的物质为甲酸丁酯、正丁醇、乙酸和丁酸含量分别是9.00±1.80、7.40±2.10、4.50±1.00、9.50±2.10μg/mL。抗氧化活性方面,藜麦麸皮黄酒和普通黄酒的Fe2+螯合率分别为45.79%和6.51%,酪氨酸酶抑制率分别为94.84%和71.11%,藜麦麸皮黄酒要明显优于普通黄酒。自制藜麦麸皮黄酒和普通黄酒相比,酒体中非挥发性物质以及挥发性的风味物质含量上升,抗氧化性提高。

关键词：黄酒藜麦麸皮差异化合物挥发性风味物质抗氧化活性

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对睾丸的毒性作用及机制

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生物化学与生物物理进展 2024年第3期51卷 555-563页

作者：冯安妮孙任任肖玉波曾昭明莫中成谢远杰桂林医学院基础医学院组织学与胚胎学教研室桂林541199 湖南医药学院公共卫生与检验医学院怀化418000 桂林医学院-明舜制药慢性病防治研究联合实验室邵东422800

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)是目前使用最广泛的增塑剂之一,DEHP具有毒性,长期暴露会对机体的多个系统产生损害,特别是对雄性生殖系统的毒性作用更为明显。DEHP通过诱导氧化应激、调控细胞自噬,促进生精细胞和睾丸间质细胞凋亡、... 详细信息

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)是目前使用最广泛的增塑剂之一,DEHP具有毒性,长期暴露会对机体的多个系统产生损害,特别是对雄性生殖系统的毒性作用更为明显。DEHP通过诱导氧化应激、调控细胞自噬,促进生精细胞和睾丸间质细胞凋亡、抑制睾酮合成、破坏血-睾屏障、诱导睾丸支持细胞铁死亡以及影响子代雄性的表观遗传等,造成生殖器官的病理损伤。本文就DEHP对睾丸的毒性作用及机制进行综述,拟为男性生殖障碍的防治研究提供新思路。

关键词：邻苯二甲酸二(2-乙基己基) 酯睾丸生殖毒性氧化应激铁死亡

iPS细胞向内皮分化过程中Wnt信号对组蛋白去乙酰化酶5的调控

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第6期40卷 838-847页

作者：唐琦凯王雨晴张菲雨伍浩鹏张婉怡李涛湖南师范大学医学院检验系长沙410013 湖南师范大学医学院长沙410013

HDAC(histone deacetylase)是一类可对蛋白质进行去乙酰化修饰的表观修饰酶,通过改变细胞核内组蛋白乙酰化状态,调控启动子活化水平,从而影响下游基因的表达水平,但其在内皮分化过程中的表达变化尚不清楚。本研究利用3阶段法诱导hiPSCs... 详细信息

HDAC(histone deacetylase)是一类可对蛋白质进行去乙酰化修饰的表观修饰酶,通过改变细胞核内组蛋白乙酰化状态,调控启动子活化水平,从而影响下游基因的表达水平,但其在内皮分化过程中的表达变化尚不清楚。本研究利用3阶段法诱导hiPSCs向内皮细胞定向分化,利用qRT-PCR检测Ⅰ类HDAC(HDAC 1、2)、Ⅱ类HDAC(HDAC 4、5)基因的表达变化。研究发现,HDAC5分子在内皮分化中有着显著的表达变化,在中胚层分化阶段下调90%(P<0.01),在血管前体阶段上调至3.7倍(P<0.01),继而在内皮晚期分化阶段下调70%(P<0.01)。免疫印迹结果进一步证实,HDAC5蛋白在内皮分化过程中存在阶段性表达变化。机制研究中显示,HDAC5中胚层分化阶段的变化受Wnt信号调控。通过CHIR99021处理以及Wnt3a质粒过表达,激动Wnt信号通路,会引起HDAC5下调。通过IWP-2抑制Wnt信号通路,会促进HDAC5表达恢复。此外研究发现,HDAC5主要定位于细胞核,IWP-2恢复HDAC5表达,但大部分滞留在胞浆。进一步研究显示,中胚层分化阶段HDAC5下调与中胚层分化标志物BraT的表达启动相关。通过HDAC抑制剂BML210处理发现,其可以促进早期中胚层分化,干扰血管前体细胞的内皮分化,增强内皮晚期阶段分化。总体而言,内皮诱导分化过程中,HDAC5有着显著的阶段性表达改变。Wnt信号激活是调控HDAC5在中胚层分化阶段下调的主要机制。

关键词：人诱导多能干细胞内皮细胞组蛋白去乙酰化酶表达调控 Wnt信号

老年医院分离铜绿假单胞菌的耐药性及耐消毒剂基因分析

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中国抗生素杂志 2024年

作者：李玉林唐秋萍董叶娜胡洋龙治任苏承丹张旬郭紫琪程曦成都医学院临床医学院成都医学院检验医学院成都市第八人民医院检验科

目的分析老年患者分离铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的耐药性和耐消毒剂基因的分布情况。方法收集2019—2022年老年患者分离的111株PA，采用VITEK 2 Compact进行细菌鉴定和耐药性分析，PCR法检测耐消毒剂基因，采用SPSS 21.... 详细信息

目的分析老年患者分离铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的耐药性和耐消毒剂基因的分布情况。方法收集2019—2022年老年患者分离的111株PA，采用VITEK 2 Compact进行细菌鉴定和耐药性分析，PCR法检测耐消毒剂基因，采用SPSS 21.0对结果进行统计分析。结果 15种药物中PA耐药率最高的是左氧氟沙星(30.63%)，最低的是多黏菌素B (1.80%)，对碳青霉烯耐药的铜绿假单胞菌(carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa,CRPA)占比为23.42%(26/111)，多重耐药的铜绿假单胞菌(multidrug-resistant PA,MDR-PA)占比为20.72%(23/111)。共检出3种耐消毒剂基因：qacE⊿1-sulΙ、emrE及merA基因，阳性率分别为16.22%(18/111)、91.89%(102/111)和46.85%(52/111)，只有3株PA所有消毒剂基因均未检出。消毒剂基因携带模式最多见为模式c(41.44%,46/111)；其次为模式f(36.94%,41/111)。CRPA组和非CRPA组之间、MDR组和非MDR组之间qacE⊿1-sulΙ检测阳性率具有显著差异。此外，MDR组qacE⊿1-sulΙ、emrE及merA基因同时检出的比率显著高于非MDR组。结论老年患者分离PA中携带耐消毒剂基因的比率高，携带qacE⊿1-sulΙ基因与耐药性之间可能存在一定的相关性。临床需科学合理使用消毒剂和抗菌药物，尽量减少细菌产生对两者的抗性。

关键词：铜绿假单胞菌消毒剂耐药性老年患者

植物源养发精华液对小鼠毛发生长的促进功能及机制研究

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中成药 2024年第2期46卷 601-605页

作者：王苏华邢光伟李芳周结张宇张冉董丽华肖钊朱薛羽王强陆荣柱江苏大学医学院预防医学与卫生检验系江苏镇江212013

目的评价植物源养发精华液对脱毛小鼠毛发生长的促进功能,并探讨其作用机制。方法采用脱毛膏法建立脱毛小鼠模型,将养发精华液涂抹于小鼠的脱毛处,连续21 d,观察小鼠脱毛处皮肤颜色、毛发长度和质量的变化;丙酸睾酮诱导建立雄激素性脱... 详细信息

目的评价植物源养发精华液对脱毛小鼠毛发生长的促进功能,并探讨其作用机制。方法采用脱毛膏法建立脱毛小鼠模型,将养发精华液涂抹于小鼠的脱毛处,连续21 d,观察小鼠脱毛处皮肤颜色、毛发长度和质量的变化;丙酸睾酮诱导建立雄激素性脱毛小鼠模型,养发精华液连续处理28 d,观察小鼠脱毛处皮肤颜色、毛发长度和质量的变化,检测小鼠血清、皮肤组织睾酮(T)、5-二氢睾酮(DHT)、雌二醇(E_(2))、肝细胞生长因子(HGF)水平,并采用Western blot法检测β-catenin和GSK-3β蛋白表达。结果植物源养发精华液可促进脱毛膏脱毛小鼠和雄激素性脱毛小鼠新生毛发的生长,增加毛发长度和质量(P<0.05);同时,养发精华液可降低雄激素性脱毛模型小鼠血清和皮肤组织T、DHT水平(P<0.05),增加皮肤组织β-catenin蛋白表达(P<0.05),降低GSK-3β蛋白表达(P<0.05)。结论植物源养发精华液对脱毛膏法脱毛小鼠和雄激素性脱发小鼠的毛发生长均具有促进作用,其机制可能与降低体内雄激素水平,激活Wnt/β-catenin信号通路,从而激活小鼠皮肤毛囊,促进血液循环,加快黑色素生成有关。

关键词：养发精华液脱毛模型丙酸睾酮毛发生长 Wnt/β-catenin信号通路

结核分枝杆菌潜伏相关蛋白Rv2204c的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2024年第1期19卷 32-35,41页

作者：王文涛姜吉亮王晓强隽中乾付玉荣伊正君潍坊医学院医学检验学院山东潍坊261053 潍坊医学院基础医学院

目的应用生物信息学方法分析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)潜伏相关蛋白Rv2204c的结构及功能。方法从NCBI数据库中搜索Rv2204c蛋白的氨基酸序列,运用ProtParam, Signal 6.0 Server, ProtScale, TMHMM Server v.2.0,ProtCompB,NetNGlyc-1.0及NetPhos-3.1预测蛋白的理化性质、疏水性、信号肽、跨膜螺旋区、亚细胞定位及糖基化和磷酸化位点;运用SOPMA、SWISS-MODEL预测蛋白的二、三级结构;运用IEDB预测蛋白的B细胞抗原表位;采用SYFPEITHI,RANKPEP,NetMHC和NetCTL预测其细胞毒性T淋巴细胞(CTL)抗原表位;采用SYFPEITHI、RANKPEP预测其辅助性T(Th)淋巴细胞表位;利用MEGA构建Rv2204c蛋白进化树;运用STRING蛋白相互作用数据库预测Rv2204c相互作用蛋白。结果 Rv2204c蛋白氨基酸总数为118,为亲水性稳定蛋白;该蛋白无信号肽,无跨膜螺旋区;亚细胞定位主要为细胞质;无糖基化位点,含5个磷酸化位点;二级结构中α-螺旋(Hh)占23.73%,β-转角(Tt)占10.17%,无规则卷曲(Cc)占39.83%;含多个优势T、B细胞表位;其互作蛋白为Rv0398c, Rv0883c, pyrD(Rv2139),Rv1465,Rv1463,Rv2205c, ppiA(Rv0009),mmsA(Rv0753c),kgd(Rv1248c)和lipA(Rv2218),参与固氮、脂酸盐合成等多个生物过程。结论 Rv2204c为亲水性稳定蛋白,具有多个T、B细胞抗原表位,可能在潜伏结核感染过程中发挥重要作用,可作为结核病诊断的候选蛋白和治疗新靶点。

关键词：结核分枝杆菌结核潜伏感染 Rv2204c 生物信息学

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重组酶聚合酶扩增技术的研究进展

微生物学通报 2024年第5期51卷 1495-1511页

作者：沈方园葛萧张晓宇张郁勃周慧姿李恒潍坊医学院医学检验学院山东潍坊261053

重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术是一种利用重组酶(T4 UvsX)、单链DNA结合蛋白(T4 Gp32)和链置换DNA聚合酶(Bsu)等蛋白在恒温条件下扩增核酸的技术。由于其可以恒温、高效地扩增靶核酸片段,近几年在细... 详细信息

重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术是一种利用重组酶(T4 UvsX)、单链DNA结合蛋白(T4 Gp32)和链置换DNA聚合酶(Bsu)等蛋白在恒温条件下扩增核酸的技术。由于其可以恒温、高效地扩增靶核酸片段,近几年在细菌、病毒、寄生虫、支原体、衣原体检测方面发挥着独特的作用,逐渐成为床旁检测(point-of-care testing,POCT)的重要技术。本文以RPA技术的原理为起点,对其临床应用、不足之处及改进方法进行阐述,以期为临床疾病的快速检测和诊断方面提供新思路。

关键词：重组酶聚合酶扩增技术等温扩增技术核酸检测

基于免疫信息学的猴痘病毒多表位疫苗设计及免疫效果评价

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中国病原生物学杂志 2024年第8期19卷 869-874,879页

作者：宋浩然辛继莹王亚孙艳丽潍坊医学院医学检验学院山东潍坊261053

目的构建一种以猴痘病毒(monkeypox virus,MPXV)优势保护性抗原为基础的多表位疫苗。方法从NCBI网站获取9种MPXV蛋白的GenBank登录ID及其氨基酸序列;通过ABCpred、NetCTL 1.2和IEDB的MHC-I Immunogenicity模块分别预测9种MPXV蛋白的B、... 详细信息

目的构建一种以猴痘病毒(monkeypox virus,MPXV)优势保护性抗原为基础的多表位疫苗。方法从NCBI网站获取9种MPXV蛋白的GenBank登录ID及其氨基酸序列;通过ABCpred、NetCTL 1.2和IEDB的MHC-I Immunogenicity模块分别预测9种MPXV蛋白的B、CTL及Th细胞(HTL)表位;采用IEDB的MHC I Binding模块预测各CTL表位与特定MHC-I类分子的亲和力;使用VaxiJen v2.0、ToxinPred、AllerTOP v.2.0分别预测所得表位的抗原性、毒性及致敏性,从中筛选出具有最高抗原性但无细胞毒性和致敏性的表位,其中,CTL表位选择IC_(50)值<30 nmol/L者,HTL表位选择IFN-γ预测值最好者;将上述各表位与RS09、PADRE、Pam2Cys三种佐剂随机连接并添加6×H(组蛋白)尾巴以构建多表位疫苗,从各连接组合中筛选出具有最高抗原性但无细胞毒性和致敏性的组合;通过ExPASy的Protparam与ProtScale模块分析其理化性质;通过PSIPRED预测其二级结构;使用I-TASSER进行多表位疫苗的三级结构模拟,然后使用ModeRefiner和GalaxyRefiner将模拟出的三级结构进行优化;使用ZDOCK serves将优化后的多表位疫苗与TLR2、TLR4受体进行分子对接处理,以观察其相互作用情况与对接位点;采用C-ImmSim行免疫模拟对疫苗的免疫效果进行评估。结果该MPXV疫苗包括9个B细胞表位、23个CTL细胞表位和9个HTL表位,组合方式为RS09-PADRE-B-Pam2Cys-HTL-CTL-6×H,其抗原性得分为0.6828,共包含675个氨基酸残基,相对分子质量(M_r)为74431.30,理论pI值9.36,分子式为C_(3473)H_(5267)N_(867)O_(920)S_(17),热稳定性好,亲水性强;二级结构中α螺旋占46.82%,β折叠占18.37%,无规则卷曲占34.81%;可与TLR2、TLR4分子稳定结合,还可诱导较强的体液与细胞免疫应答。结论运用免疫信息学方法成功构建一种含多个优势抗原表位的MPXV疫苗,可能对猴痘病毒感染有预防作用。

关键词：猴痘病毒(MPXV) 免疫信息学多表位疫苗保护性抗原免疫效果