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细胞氧化损伤时8-羟基鸟嘌呤的测定

生物化学与生物物理进展 1999年第3期26卷 280-283页

作者：张海涛祝其锋莫丽儿庄海旗蔡春广东医学院医用生化研究所广东医学院化学教研室广东医学院中心实验室

利用Ｈ２Ｏ２易通过细胞膜而到达核这一特点，初步探讨了不同浓度Ｈ２Ｏ２对ＨＬ６０细胞ＤＮＡ的氧化损伤程度．发现Ｈ２Ｏ２浓度在０４ｍｍｏｌ／Ｌ以上时，作用８～２４ｈ可以用气相色谱／火焰离子检测器（ＧＣ／ＦＩＤ）检测到... 详细信息

利用Ｈ２Ｏ２易通过细胞膜而到达核这一特点，初步探讨了不同浓度Ｈ２Ｏ２对ＨＬ６０细胞ＤＮＡ的氧化损伤程度．发现Ｈ２Ｏ２浓度在０４ｍｍｏｌ／Ｌ以上时，作用８～２４ｈ可以用气相色谱／火焰离子检测器（ＧＣ／ＦＩＤ）检测到氧化损伤标志产物———８羟基鸟嘌呤（８ｏｈＧ），并观测到在０４～０８ｍｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２作用一定时间时。

关键词： 8-羟基鸟嘌呤 H2O2 GC/FID 细胞氧化损伤

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EB病毒vIL-10基因的表达与功能研究

中国病原生物学杂志 2025年第2期 131-135+140页

作者：刘瑞坪陈彦妤王俊颖孙德月辛宪云张栋薛庆节王晖济宁医学院临床医学院济宁医学院生物科学学院济宁学院附属高级中学临沂市荣军医院济宁医学院基础医学院

目的构建EB病毒vIL-10基因的原核表达载体并纯化vIL-10,进行小鼠实验探究其对MC38肿瘤细胞的作用，为进一步探究vIL-10的在机体内的作用及其机制奠定基础。方法根据vIL-10的DNA序列，设计引物并通过PCR扩增获得vIL-10基因；构建重组质... 详细信息

目的构建EB病毒vIL-10基因的原核表达载体并纯化vIL-10,进行小鼠实验探究其对MC38肿瘤细胞的作用，为进一步探究vIL-10的在机体内的作用及其机制奠定基础。方法根据vIL-10的DNA序列，设计引物并通过PCR扩增获得vIL-10基因；构建重组质粒vIL-10-pGEX-4T-1,将重组质粒转化***5α;抗性平板筛选阳性菌落，提取质粒后做PCR、双酶切及测序鉴定；将鉴定正确的重组质粒vIL-10-pGEX-4T-1转化***3并用氨苄西林筛选、IPTG诱导表达，超声波破碎菌体提取蛋白并做SDS-PAGE、Western blot鉴定；大量培养阳性菌株，破碎菌体后提取蛋白，利用GST标签纯化vIL-10,取少量纯化产物再次做SDS-PAGE、Western blot鉴定；凝血酶切掉GST标签，透析袋除盐、浓缩蛋白后测定蛋白含量，备用；收集MC38细胞，皮下注射6周龄体重相近的野生型、IL-10基因敲除型C57BL/6J小鼠，3周后取成功构建的肿瘤模型小鼠，按400μg/kg肿瘤周围浸润注射vIL-10,每7天注射1次，共注射2次。末次注射7 d后处死小鼠，剥离肿瘤称重并记录、分析。结果 PCR获得的vIL-10基因大小约为513 bp,重组质粒vIL-10-pGEX-4T-1的PCR、双酶切结果均符合预期，基因测序结果与vIL-10模板序列相符；转化vIL-10-pGEX-4T-1的***3经IPTG诱导表达，SDS-PAGE电泳显示与对照组对比可见45 ku条带，Western blot显示该蛋白表达成功；阳性菌株经大量培养，提取蛋白后用GST标签进行纯化，Western blot结果显示该蛋白能被特异性纯化，经切割透析浓缩后测定蛋白含量为0.56 mg/mL;动物实验结果显示，野生型(C57BL/6J)小鼠注射vIL-10蛋白组比未注射组肿瘤重量明显增加(P肿瘤重量明显增加(P肿瘤生长。为探究vIL-10对肿瘤的作用研究及其机制奠定了基础。

关键词： EB病毒 vIL-10 原核表达 GST标签纯化 MC38

蓝布正总酚酸的体内外成分分析及其促急性伤口愈合与抑制瘢痕形成的作用

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中国实验方剂学杂志 2025年第3期 156-167页

作者：孔熙贤田广环吴桐胡少伟赵洁潘福竺刘憬曈邓勇欧阳意吴宏伟中国中医科学院中药研究所遵义医科大学药学院中国中医科学院医学实验中心

目的：鉴别蓝布正总酚酸体内、外化学成分，结合药效学和网络药理学分析明确蓝布正总酚酸促进急性伤口愈合与抑制瘢痕形成的作用及机制。方法：采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Orbitrap-MS）鉴定蓝布正总... 详细信息

目的：鉴别蓝布正总酚酸体内、外化学成分，结合药效学和网络药理学分析明确蓝布正总酚酸促进急性伤口愈合与抑制瘢痕形成的作用及机制。方法：采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-Q-Orbitrap-MS）鉴定蓝布正总酚酸的化学成分及外用给药后体内吸收成分；120只ICR小鼠随机分为模型组、重组人表皮生长因子（rhEGF）组(4 mg·kg-1)、蓝布正总酚酸低、中、高剂量组(3.5、7、14 mg·kg-1)，每组24只。构建全皮层切除模型，各给药组分别于伤口处涂抹给药，模型组涂抹等体积生理盐水，连续30 d，期间于给药6、12、30 d后每组随机处死8只小鼠，观察小鼠创面愈合情况，苏木素-伊红（HE）、马松（Masson）、天狼星红染色动态观察皮肤组织病理变化，酶联免疫吸附测定法（ELISA）动态测定皮肤组织中的白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、基质金属蛋白酶（MMP）-3和MMP-9含量。利用网络药理学预测蓝布正总酚酸促进急性伤口愈合与抑制瘢痕形成相关靶点，并进行关键成分和靶点的分子对接，对相关靶点进行基因本体（GO）生物过程分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）信号通路富集分析，构建“药材-化合物-靶点-通路-药理作用-疾病”网络图，进一步探讨其潜在机制。结果：鉴定出蓝布正总酚酸共含有146个化合物，包括苯丙素类28个、鞣质类31个、三萜类23个、黄酮类49个、其他类15个，从小鼠血清中发现入血原型成分16个。药效学结果显示，与模型组比较，蓝布正总酚酸各剂量组相对伤口愈合率、相对瘢痕抑制率增加（P肿瘤蛋白53（TP53）、非受体酪氨酸激酶（SRC）、蛋白激酶B1（Akt1）、信号传导与转录活化因子3（STAT3）、表皮生长因子受体（EGFR）等10个核心靶点，涉及糖基化终末产物（AGE）/AGE受体（RAGE）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等75条通路；经分子对接验证，关键成分老鹳草素、染料木素、木麻黄鞣质与TP53、SRC、Akt1、STAT3、EGFR结合能力较好。结论：该研究较全面地反映了蓝布正总酚酸的化学成分及外用给药后的入血成分，并验证了其可促进急性伤口愈合，抑制瘢痕形成。其中的关键成分可能与TP53、Akt1和EGFR等靶点结合通过免疫炎症、血管再生等相关通路发挥治疗作用。

关键词：超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Orbitrap-MS) 蓝布正总酚酸成分鉴定入血成分伤口愈合瘢痕修复网络药理学

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去乙酰化酶Sirtuin与衰老的研究进展

生物化学与生物物理进展 2010年第12期37卷 1271-1277页

作者：彭琪陈维春刘新光广东医学院衰老研究所东莞523808 广东医学院检验医学研究所东莞523808 广东医学院生物化学与分子生物学研究所湛江524023

Sirtuin蛋白是一组具有NAD+依赖性的组蛋白去乙酰基转移酶,该家族成员具有高度保守的催化结构域,可以通过对多种底物进行去乙酰化作用,从而在机体内参与一系列的生物学活动,包括维持细胞抗胁迫能力和基因组稳定性以及参与能量代谢等.Sir... 详细信息

Sirtuin蛋白是一组具有NAD+依赖性的组蛋白去乙酰基转移酶,该家族成员具有高度保守的催化结构域,可以通过对多种底物进行去乙酰化作用,从而在机体内参与一系列的生物学活动,包括维持细胞抗胁迫能力和基因组稳定性以及参与能量代谢等.Sir2参与了酵母的交配型基因、端粒和rDNA重复序列的沉默以及细胞寿命等生理功能.在哺乳动物中,SIRT1是该家族中目前研究最为广泛且较为透彻的成员,而SIRT6的功能研究成为近年来继SIRT1后的又一新热点.综述了sirtuin蛋白的结构及其与衰老关系的研究进展.

关键词： sirtuin 衰老 NAD 去乙酰化酶

半边旗抗肿瘤有效成分对HL-60细胞DNA拓扑异构酶活性及其细胞周期的影响(英文)

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中国药理学报 1999年第6期20卷 541-545页

作者：李金华何承伟梁念慈莫丽儿张晓广东医学院医用生化研究所广东医学院化学教研室

研究半边旗（Ｐｔｅｒｉｓｓｅｍｉｐｉｎｎａｔａ　Ｌ，ＰｓＬ）有效成分５Ｆ，６Ｆ，Ａ对ＨＬ－６０细胞ＤＮＡ拓扑异构酶活性和细胞周期的影响．方法：应用ｐＢＲ３２２质粒ＤＮＡ作为底物测定酶的活性；细胞周期用流式细胞仪测... 详细信息

研究半边旗（Ｐｔｅｒｉｓｓｅｍｉｐｉｎｎａｔａ　Ｌ，ＰｓＬ）有效成分５Ｆ，６Ｆ，Ａ对ＨＬ－６０细胞ＤＮＡ拓扑异构酶活性和细胞周期的影响．方法：应用ｐＢＲ３２２质粒ＤＮＡ作为底物测定酶的活性；细胞周期用流式细胞仪测定；应用噻唑蓝（ＭＩＴ）法测定药物对细胞生长的抑制率．结果：５Ｆ，６Ｆ，Ａ均能够抑制ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅰ，Ⅱ的活性，化合物６Ｆ作用细胞２４ｈ后，可升高Ｓ期和Ｇ２／Ｍ期细胞，同时降低Ｇ０／Ｇ１期细胞，低浓度６Ｆ（５７．８和１１５．６ｎｍｏｌ·Ｌ－１）与金雀异黄素（Ｇｅｎ）合用可增强它对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用，ｑ＞１．１５．结论：５Ｆ，６Ｆ和Ａ明显抑制ＨＬ－６０细胞ＤＮＡ拓扑异构酶的活性；６Ｆ阻断细胞于Ｇ２／Ｍ期，增强Ｇｅｎ对ＨＬ－６０细胞的杀伤作用。

关键词：半边旗二萜 DNA拓扑异构酶细胞周期抗肿瘤药

海洋来源的口蛄虾生物碱的分离纯化和抗鼻咽癌作用研究

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时珍国医国药 2008年第12期19卷 2965-2966页

作者：叶才果潘海燕黄培春何志巍广东医学院中美肿瘤研究所广东东莞523808

目的从海洋来源的口蛄虾中提取并纯化该生物碱,研究其抗鼻咽癌作用。方法系统溶剂法初步分离口蛄虾乙醇粗提物,大孔树脂HP20层析分离正丁醇洗脱的组分;对富含生物碱的组分合并后萃取总生物碱;自动层析仪纯化总生物碱,254 nm波长检测,手... 详细信息

目的从海洋来源的口蛄虾中提取并纯化该生物碱,研究其抗鼻咽癌作用。方法系统溶剂法初步分离口蛄虾乙醇粗提物,大孔树脂HP20层析分离正丁醇洗脱的组分;对富含生物碱的组分合并后萃取总生物碱;自动层析仪纯化总生物碱,254 nm波长检测,手动收集洗脱液;质谱仪分析生物碱分子量;MTT方法检测药物对细胞的生长抑制率,绘制细胞生长曲线。结果大孔树脂HP20能非常有效地富集分离的生物碱,质谱分析纯化的生物碱D3分子量为234.33。分离纯化的生物碱对鼻咽癌细胞增殖具有明显的抑制作用。结论口蛄虾来源的生物碱分子量为234.33,对鼻咽癌细胞的增殖具有明显的抑制作用,并呈时间-剂量关系。

关键词：口蛄虾生物碱鼻咽癌纯化

奥硝唑药物对牙髓再生根管内血管化的潜在影响

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中国组织工程研究 2025年第14期29卷 2892-2898页

作者：黎梓楷张程程熊嘉颖杨曦瑞阳晶石海山暨南大学口腔医学院广东省广州市510632

背景:在牙髓治疗中,组织的再生修复和根尖的进一步发育依赖于血运重建及细菌感染的有效控制。有研究报道,将奥硝唑载于盖髓材料或血管化支架材料中可控制牙髓感染,但其血管化影响有待研究。目的:探究奥硝唑在根管内的残留浓度规律,评价... 详细信息

背景:在牙髓治疗中,组织的再生修复和根尖的进一步发育依赖于血运重建及细菌感染的有效控制。有研究报道,将奥硝唑载于盖髓材料或血管化支架材料中可控制牙髓感染,但其血管化影响有待研究。目的:探究奥硝唑在根管内的残留浓度规律,评价奥硝唑对内皮细胞增殖、迁移、分化的影响以及对血管的刺激性。方法:①将奥硝唑包封于离体牙髓腔后浸泡于Hanks缓冲液中,7 d后去除髓腔内的奥硝唑并重新包封无菌水,再次浸泡于Hanks缓冲液中,采用比色法定期检测髓腔液中奥硝唑质量浓度。②将人脐静脉内皮细胞接种于孔板内,观察细胞贴壁后加入脂多糖刺激24 h,然后分别加入0,1,2,5,8,10μg/mL奥硝唑共培养,检测细胞活性与迁移能力。将人脐静脉内皮细胞接种于孔板内,分别加入不同质量浓度(0,1,2,5,8,10μg/mL)奥硝唑共培养,或者经脂多糖刺激24 h后分别加入不同质量浓度(0,1,2,5,8,10μg/mL)奥硝唑共培养,检测血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的基因表达与血管内皮生长因子的蛋白表达。③采用鸡胚绒毛膜实验评估2,10μg/mL奥硝唑对血管的刺激性。结果与结论:①离体牙中残留的奥硝唑在最初6 d内迅速释放,随后释放速度减慢,8 d以后根尖奥硝唑质量浓度约为2μg/mL。②在脂多糖诱导的炎症条件下,CCK-8与细胞活死荧光染色显示奥硝唑(1-10μg/mL)对人脐静脉内皮细胞的活性无明显影响,细胞划痕实验显示奥硝唑(1-10μg/mL)对人脐静脉内皮细胞的迁移能力无明显影响。RT-qPCR检测显示,与单独的奥硝唑共培养后,人脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达整体呈下降趋势;在脂多糖诱导的炎症条件下与奥硝唑共培养后,人脐静脉内皮细胞中两种因子的mRNA表达呈上升趋势。Western blot检测显示,在脂多糖诱导的炎症条件下与奥硝唑共培养后,人脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子蛋白表达呈升高趋势。③鸡胚绒毛膜实验显示2,10μg/mL奥硝唑无血管刺激性。④结果表明1-10μg/mL奥硝唑无细胞毒性及血管刺激性,可促进炎性内皮细胞中血管生成相关基因及蛋白的表达,作为一种潜在的治疗药物用于髓腔感染控制。

关键词：奥硝唑内皮细胞血管再生药物残留牙髓感染根管内血管化

Bcl-2在RNAi-hTERT诱导HeLa细胞凋亡过程中的作用

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山东医药 2011年第27期51卷 73-74页

作者：王建何志巍广东医学院中美肿瘤研究所广东东莞523808

目的探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)在靶向端粒酶逆转录酶(hTERT)的RNA干扰诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中的作用。方法将常规培养的HeLa细胞分为6个组,A组不处理,B组转染试剂,C组转染空载体,D组转染阴性siRNA,E组转染siRNA-hTERT,F... 详细信息

目的探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)在靶向端粒酶逆转录酶(hTERT)的RNA干扰诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡过程中的作用。方法将常规培养的HeLa细胞分为6个组,A组不处理,B组转染试剂,C组转染空载体,D组转染阴性siRNA,E组转染siRNA-hTERT,F组同时转染pcDNA3.1-Bcl-2和siRNA-hTERT。转染后48h,流式细胞术分析各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组hTERT、Bcl-2表达水平。结果与E组相比较,F组的Bcl-2的蛋白水平显著增高,细胞凋亡率显著降低(P<0.01)。结论靶向hTERT的RNA干扰诱导HeLa细胞凋亡依赖于Bcl-2蛋白水平的下调。

关键词：白血病-2 靶向端粒酶逆转录酶细胞凋亡

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组织工程技术修复颞下颌关节:问题与挑战

中国组织工程研究 2025年第22期29卷 4804-4812页

作者：赖鹏宇梁冉沈山暨南大学口腔医学院广东省广州市510632

背景:颞下颌关节疾病的传统疗法受限于疾病严重程度和个体差异。相比之下,组织工程作为一种新兴治疗方法,可以根据患者具体情况定制个性化治疗方案,减少手术过程中的不确定性,提高治疗效果。目的:综述组织工程修复颞下颌关节的最新研究... 详细信息

背景:颞下颌关节疾病的传统疗法受限于疾病严重程度和个体差异。相比之下,组织工程作为一种新兴治疗方法,可以根据患者具体情况定制个性化治疗方案,减少手术过程中的不确定性,提高治疗效果。目的:综述组织工程修复颞下颌关节的最新研究成果和进展。方法:以“颞下颌关节,组织工程,种子细胞,支架,生长因子,动物模型”为中文检索词,以“temporomandibular joint,tissue engineering,seed cell,scaffold,growth factor,animal model”为英文检索词,分别在PubMed数据库和中国知网进行文献检索,检索时限为各数据库建库时间至2024年3月。通过分析和阅读文献进行筛选,按照排除筛选标准纳入文献,最终纳入57篇文献进行综述。结果与结论:(1)随着生物学、材料学与工程学等技术的发展,颞下颌关节组织工程己取得较大进展,例如种子细胞的筛选、新型支架的开发、生长因子作用机制的探索、多种动物模型的构建等,目前大多数研究尚处于体外实验阶段,动物实验等体内研究尚未大规模开展,组织工程修复颞下颌关节的临床应用还需更多证据支持。(2)尽管颞下颌关节组织工程研究仍存在许多问题和挑战等待解决,依然展现出广阔的临床应用前景,有望在将来成为颞下颌关节疾病出色高效的治疗方式。

关键词：组织工程颞下颌关节软骨缺损种子细胞支架水凝胶脱细胞外基质生长因子外泌体动物模型