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锦鲤疱疹病毒RAA-LFD检测方法的建立

中国预防兽医学报 2024年第4期46卷 374-378,425页

作者：吕晓楠徐立蒲张文王小亮王静波王姝曹欢北京市水产技术推广站北京100176

为建立一种简便、快捷的现地检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的方法,本研究结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,根据RAA引物设计原则,以KHV Sph基因保守区为靶位点,设计5对引物并筛选出5号引物作为最优引物,在其下游引物、探针的5'... 详细信息

为建立一种简便、快捷的现地检测锦鲤疱疹病毒(KHV)的方法,本研究结合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,根据RAA引物设计原则,以KHV Sph基因保守区为靶位点,设计5对引物并筛选出5号引物作为最优引物,在其下游引物、探针的5'端分别标记Biotin、FAM荧光基因。采用方阵法对RAA反应时间和温度等条件优化,结果显示,该检测方法在34℃~40℃恒温反应10 min即可实现对KHV目的基因片段的有效扩增,并且扩增产物结果可直接观察,由此初步建立了KHV的RAA-LFD检测方法。特异性试验结果显示,建立的RAA-LFD检测方法与鲤浮肿病毒(CEV)、鲫造血器官坏死病毒(CHNV)、流行性造血器官坏死病毒(EHNV)、蛙虹彩病毒(BIV)等常见水生动物病原核酸均无交叉反应。敏感性试验结果显示,该方法对重组质粒标准品p EASY-KHV的检测限为50拷贝/μL,与行业标准常规PCR的敏感性相当。重复性试验结果显示,该方法对5份p EASY-KHV的检测结果均一致;对室温放置7 d的p EASY-KHV检测结果也均一致。采用该方法和常规PCR对60份临床样品检测,结果显示二者的阴性、阳性符合率以及总符合率均为100%。本研究首次建立了用于检测KHV的RAA-LFD方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好、操作方便,可用于KHV的临床样品检测,为KHV现地检测提供了一种简便、快捷的技术手段。

关键词：锦鲤疱疹病毒重组酶介导扩增侧向流试纸条快速检测

一株磺胺喹噁啉降解菌株Aspergillus sp. S-3的分离、鉴定及其降解代谢途径

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应用与环境生物学报 2024年

作者：陈雪婷张玉平刘菁华上海市水产研究所(上海市水产技术推广站)

磺胺喹噁啉(SQX)在集约化的养殖业中应用广泛，其残留威胁生态系统和人体健康，目前关于微生物纯培养物降解SQX的研究较少。本研究从养殖池塘底泥样品中分离到一株SQX降解菌株S-3，通过形态学特征和ITS序列系统发育分析将其鉴定为曲霉属... 详细信息

磺胺喹噁啉(SQX)在集约化的养殖业中应用广泛，其残留威胁生态系统和人体健康，目前关于微生物纯培养物降解SQX的研究较少。本研究从养殖池塘底泥样品中分离到一株SQX降解菌株S-3，通过形态学特征和ITS序列系统发育分析将其鉴定为曲霉属(Aspergillus sp.)。单因素实验表明，菌株S-3的最佳生长和降解温度及pH分别为30 ℃和7.0，降解最佳接种量为1%-5%。在此条件下，菌株S-3对初始浓度为0.8-24 mg/L的SQX具有较高的降解率(72 h降解率均在83.0%以上)。菌株S-3还可以降解磺胺邻二甲氧嘧啶和磺胺异恶唑，降解率分别为和78.5%和65.5%。通过超高效液相色谱串联高分辨率电喷雾电离质谱仪鉴定了菌株S-3降解SQX生成的6种代谢产物，并据此推测菌株S-3分别采用分子内SO2的脱除、脱氨羟基化以及喹噁啉基的羟基化策略开启SQX的降解。采用Toxicity Estimation Software Tool (T.E.S.T.)软件评估了降解产物的毒性，结果表明其急性毒性、发育毒性和致突变性的毒性分级区间整体上呈现减毒趋势。斑马鱼攻毒试验初步表明菌株S-3对水生生物的安全性较高。综上所述，本研究获得一株高效安全的SQX降解菌株Aspergillus sp. S-3，为环境污染的微生物修复提供菌株资源和理论依据。(图8 表4 参34)

关键词：磺胺喹噁啉微生物降解曲霉菌属降解特性代谢产物

长江刀鲚GHRH基因遗传多态性及其与生长性状的关联分析

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西北农业学报 2024年第6期33卷 997-1007页

作者：于爱清施永海徐嘉波刘永士邓平平上海市水产研究所上海市水产技术推广站上海200433

生长激素释放激素(GHRH)是鱼类生长激素合成和分泌的重要调控因子,对细胞的生长、增殖和分化极为重要。基于长江刀鲚转录组测序数据,利用基因克隆和PCR扩增技术,获得其GHRH基因的cDNA全长和基因组DNA序列,并开展基因遗传多态性与生长性... 详细信息

生长激素释放激素(GHRH)是鱼类生长激素合成和分泌的重要调控因子,对细胞的生长、增殖和分化极为重要。基于长江刀鲚转录组测序数据,利用基因克隆和PCR扩增技术,获得其GHRH基因的cDNA全长和基因组DNA序列,并开展基因遗传多态性与生长性状的关联性研究,为其分子标记辅助育种提供技术支持。结果显示:长江刀鲚GHRH基因cDNA全长1329 bp,由5′-UTR(300 bp)、ORF(465 bp)和3′-UTR(564 bp)组成,推导的蛋白序列由154个氨基酸组成,具有一个信号肽和GLUCA结构域;该基因的DNA序列长2983 bp,由4个内含子和5个外显子组成,经筛选,在第1、2内含子和第3外显子上分别筛选到9、2和1个SNP位点;12个突变位点共36种基因型,分别与100尾长江刀鲚的体质量、体长和体高性状进行关联分析,获得2个与其生长性状显著相关的位点(g.1636C>T和g.1882A>C)(PT和g.1882A>C可以作为优选长江刀鲚繁育亲本的重要候选分子标记。

关键词：长江刀鲚 GHRH 单核苷酸多态性生长性状关联分析

鲤Rhbdd3重组乳酸菌微生物制剂的开发及效果评价

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海洋与湖沼 2024年第4期55卷 1019-1026页

作者：刘亚楠张小明邵玲上海市水产研究所、上海市水产技术推广站上海200433

鱼类Rhbdd3(Rhomboid domain-containing protein 3)蛋白具有抗水生病毒感染功能,然而生产实践中缺乏其大量制备及应用方案。为研制鲤Rhbdd3蛋白重组微生物制剂,利用乳酸菌NICE表达系统,构建了Rhbdd3蛋白重组表达质粒pNZ8148-rhbdd3,并... 详细信息

鱼类Rhbdd3(Rhomboid domain-containing protein 3)蛋白具有抗水生病毒感染功能,然而生产实践中缺乏其大量制备及应用方案。为研制鲤Rhbdd3蛋白重组微生物制剂,利用乳酸菌NICE表达系统,构建了Rhbdd3蛋白重组表达质粒pNZ8148-rhbdd3,并转化获得了重组乳酸乳球菌pNZ8148-rhbdd3 NZ9000。利用乳酸链球菌素nisin进行Rhbdd3蛋白的诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western blotting进行验证。进一步,将重组乳酸乳球菌进行饲料拌喂并开展鲤春病毒血症病毒(SVCV)人工感染实验,检测鱼体免疫因子表达水平及攻毒后鱼体组织病毒载量。结果显示:经nisin诱导后,pNZ8148-rhbdd3 NZ9000能够表达约为39 kDa的特异性蛋白,与Rhbdd3蛋白大小一致。重组乳酸乳球菌的最佳nisin诱导浓度为100 ng/mL,最佳诱导时间为5 h。重组乳酸乳球菌饲喂后14 d,与对照组相比,实验组鲤鱼组织中免疫相关基因IFN1、IRF7、Viperin、Mx1和ISG15的表达水平均显著上调。此外,SVCV攻毒后,重组乳酸乳球菌饲喂组鱼体组织中病毒滴度较对照组显著降低,表明其可以抑制病毒的增殖。研究结果为Rhbdd3蛋白的大量制备和应用提供了一种可行方案,并为鱼类病毒性疾病的防控提供了一种有效措施。

关键词： Rhbdd3蛋白乳酸菌鲤鱼鲤春病毒血症病毒微生物制剂

一株红霉素降解菌Penicillium ***-1的筛选、降解特性及其应用研究

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生态环境学报 2024年第4期33卷 607-616页

作者：刘菁华张玉平陈雪婷上海市水产研究所(上海市水产技术推广站) 上海200433

在渔业养殖过程中,使用绿色环保、高效低廉的微生物菌剂解决渔业废水中的抗生素残留,对保障水产品质量安全和生态环境有重要意义。为获得可应用于渔业养殖废水的红霉素降解菌剂,采用梯度富集驯化的方法从养殖污染底泥样品中分离筛选红... 详细信息

在渔业养殖过程中,使用绿色环保、高效低廉的微生物菌剂解决渔业废水中的抗生素残留,对保障水产品质量安全和生态环境有重要意义。为获得可应用于渔业养殖废水的红霉素降解菌剂,采用梯度富集驯化的方法从养殖污染底泥样品中分离筛选红霉素降解菌株,通过形态学特征和ITS(InternalTranscribedSpaces)序列分析进行微生物分类鉴定;采用单因素试验确定最适降解温度和pH;利用超高效液相色谱串联高分辨率电喷雾电离质谱仪鉴定降解产物,并据此推测降解途径,通过斑马鱼攻毒试验初步评估菌株的生物安全性;优化菌株固态发酵参数,制备红霉素降解菌剂,并初探降解菌剂对红霉素污染的养殖废水的修复效果。结果显示,获得一株红霉素降解菌株ERY-1并鉴定其为青霉菌属(Penicilliumsp.);菌株ERY-1在温度20-35℃、pH 5-7的环境中具有较好的降解率,在该条件下,菌株对质量浓度为1.0 mg·L^(-1)的红霉素的降解率在97%以上;鉴定了5种降解中间产物,并据此推测菌株ERY-1通过脱水、脱红霉支糖和开环逐渐使红霉素失去抗菌活性;斑马鱼攻毒试验初步表明菌株ERY-1对水生生物具有较高的安全性;以稻壳:麦麸:玉米粉质量比(m꞉m꞉m)为1꞉1꞉1作为固态培养基配方,初始料水比为1g:1L,接种量为0.75%,在温度为25℃,发酵13d后获得产孢量约9.14×10^(9)cfu·g^(-1)的降解菌剂。将制备的降解菌剂投撒到有红霉素残留的养殖废水中,3d后水中的红霉素未达到方法的检出质量浓度(0.2ng·L^(-1))。结果表明,菌株ERY-1可有效的解决渔业养殖废水中的红霉素残留,由其制备的降解菌剂具有良好的应用和推广价值。

关键词：红霉素微生物降解降解特性代谢产物固态发酵菌剂应用

2种饲料投喂下美洲鲥幼鱼肌肉营养成分分析及评价

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中国农业科技导报 2024年第5期26卷 223-233页

作者：蒋飞施永海徐嘉波严银龙刘永士袁新程上海市水产研究所上海市水产技术推广站上海200433

为科学评价常规饲料和绿色饲料养殖美洲鲥幼鱼肌肉的营养品质,采用生化分析方法对2种饲料投喂下美洲鲥幼鱼肌肉营养成分进行测定和比较分析。结果显示,常规饲料组肌肉中的粗脂肪含量(7.84%)极显著高于绿色饲料组(5.05%),水分含量(68.87%... 详细信息

为科学评价常规饲料和绿色饲料养殖美洲鲥幼鱼肌肉的营养品质,采用生化分析方法对2种饲料投喂下美洲鲥幼鱼肌肉营养成分进行测定和比较分析。结果显示,常规饲料组肌肉中的粗脂肪含量(7.84%)极显著高于绿色饲料组(5.05%),水分含量(68.87%)极显著低于绿色饲料组(71.98%),粗蛋白含量(16.93%)显著低于绿色饲料组(17.54%)。常规饲料组和绿色饲料组肌肉中必需氨基酸总量/氨基酸总量和必需氨基酸总量/非必需氨基酸总量无显著差异,均属于优质蛋白;绿色饲料组肌肉中鲜味氨基酸、苦味氨基酸和酸味氨基酸含量均显著高于常规饲料组,且甜味氨基酸含量极显著高于常规饲料组;绿色饲料组肌肉中支链氨基酸含量和支/芳值均显著高于常规饲料组;根据氨基酸评分和化学评分,常规饲料组和绿色饲料组的第一限制性氨基酸均为色氨酸,常规饲料组必需氨基酸指数(73.58)高于绿色饲料组(71.00)。常规饲料组肌肉中二十碳五烯酸(eicosa pentenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docose hexaenoie acid,DHA)含量均极显著高于绿色饲料组,常规饲料组肌肉中不饱和脂肪酸、n-3多不饱和脂肪酸(Σn-3)、n-6多不饱和脂肪酸(Σn-6)、多不饱和脂肪酸/饱和脂肪酸和Σn-3/Σn-6多不饱和脂肪酸均极显著高于绿色饲料组,而绿色饲料组肌肉中饱和脂肪酸/不饱和脂肪酸极显著高于常规饲料组。以上结果表明,2种饲料组均属于优质蛋白,在绿色饲料中提高色氨酸、EPA和DHA含量有助于改善美洲鲥肌肉的营养品质。

关键词：美洲鲥饲料肌肉营养成分氨基酸脂肪酸

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凡纳滨对虾养殖尾水悬浮物粒径分布研究

水产科学 2024年第1期43卷 41-50页

作者：刘金金张玲玲张玉平上海市水产研究所上海市水产技术推广站上海200433

为探明凡纳滨对虾养殖尾水中悬浮物的物质组成和粒径分布特性,2021年11月对上海市3口典型对虾养殖池塘(SP1、SP2、SP3)尾水排放过程进行动态监测,采集不同排水深度的尾水样品,分析尾水中悬浮物物质组成和变化规律,研究尾水中悬浮颗粒粒... 详细信息

为探明凡纳滨对虾养殖尾水中悬浮物的物质组成和粒径分布特性,2021年11月对上海市3口典型对虾养殖池塘(SP1、SP2、SP3)尾水排放过程进行动态监测,采集不同排水深度的尾水样品,分析尾水中悬浮物物质组成和变化规律,研究尾水中悬浮颗粒粒径数量和体积分布特征。试验结果显示,尾水中悬浮物、颗粒态氮、颗粒态磷含量随排水深度的增加呈递增趋势,在排水深度达2/3以后增幅明显升高,悬浮物中氮、磷含量平均占比则随之下降,分别由排水前的6.11%和1.20%降至排水末期的0.38%和0.11%;悬浮颗粒粒径分布受排水过程驱动,排水末期SP1、SP2和SP3尾水悬浮颗粒体积组成的中值粒径分别为11.69、20.89μm和38.23μm,主要以<100μm的胶体和细颗粒为主,平均体积占比达92.68%;虾塘尾水悬浮颗粒粒径数量分布符合可变β模型(r^(2)=0.849±0.128),粒径体积分布符合对数正态分布模型(r^(2)=0.879±0.141)。

关键词：凡纳滨对虾养殖尾水悬浮物粒径分布

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鳗鲡源气单胞菌毒力基因及其耐药性分析

大连海洋大学学报 2024年第3期39卷 383-391页

作者：王巧煌福建省水产技术推广总站福建福州350002

为了解鳗鲡(Angulla spp.)源气单胞菌(Aeromonas spp.)潜在致病性及其耐药状况,选取近年来从患病鳗鲡肝、肾、脾及病灶等处分离的41株气单胞菌,通过扩增其16S rRNA及保守基因gyr B、rpo D序列进行病原菌鉴定,利用微量肉汤稀释法检测病... 详细信息

为了解鳗鲡(Angulla spp.)源气单胞菌(Aeromonas spp.)潜在致病性及其耐药状况,选取近年来从患病鳗鲡肝、肾、脾及病灶等处分离的41株气单胞菌,通过扩增其16S rRNA及保守基因gyr B、rpo D序列进行病原菌鉴定,利用微量肉汤稀释法检测病原菌对9种抗菌药物的敏感特性,并通过PCR和SYBR Green qPCR方法分别检测其7种毒力基因及15种耐药基因的携带情况。结果表明:41株气单胞菌中有维氏气单胞菌(***)27株、嗜水气单胞菌(***)6株、达卡气单胞菌(***)5株、双壳气单胞菌(***)2株和豚鼠气单胞菌(***)1株;毒力基因分析显示,alt的阳性检出率最高(75.6%),其余毒力基因显示不同的携带率,且56.1%的气单胞菌至少携带3种及以上的毒力基因;耐药性分析显示,气单胞菌对甲砜霉素、氟苯尼考完全耐药(100%),3重及以上耐药的菌株占100%,最多同时耐受8种抗菌药物;耐药基因分析显示,酰胺醇类floR、cmlA、磺胺类sul 1和氨基糖苷类aac(6′)-Ib为主要耐药基因,检出率均为100%,100%的菌株携带6重及以上耐药基因,最高的携带12重耐药基因(9.8%)。研究表明,鳗鲡源气单胞菌对酰胺醇类药物完全耐药,多重耐药情况较为严重,且大部分菌株同时携带多种毒力基因和耐药基因,耐药基因与耐药表型的检测结果不完全一致。

关键词：鳗鲡气单胞菌毒力基因耐药性耐药基因

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人工养殖对尼罗罗非鱼肠道菌群的影响

饲料研究 2024年第4期47卷 56-62页

作者：周玥祺黄杰王志强邓小红林举星吴芸露易弋广西科技大学生物与化学工程学院广西柳州545006 柳州市水产技术推广站广西柳州545006 全州县水产技术推广站广西桂林541500

试验旨在研究人工养殖对尼罗罗非鱼肠道菌群的影响。研究采用16S rDNA测序方法对野生(YS)和人工养殖(YZ)尼罗罗非鱼的肠道内容物进行测序,分析比较两者肠道菌群生物丰富度及多样性差异。结果表明,在野生环境下,尼罗罗非鱼肠道中Actinoba... 详细信息

试验旨在研究人工养殖对尼罗罗非鱼肠道菌群的影响。研究采用16S rDNA测序方法对野生(YS)和人工养殖(YZ)尼罗罗非鱼的肠道内容物进行测序,分析比较两者肠道菌群生物丰富度及多样性差异。结果表明,在野生环境下,尼罗罗非鱼肠道中Actinobacteriota、Proteobacteria和Firmicutes为主要优势菌群;在人工养殖环境下,Actinobacteriota、Proteobacteria和Cyanobacteria为主要优势菌群。肠道菌群多样性的分析表明,YZ组群落多样性指数低于YS组(PNH_(4)-N>NO_(2)-N>O>PO_(4)-P。在属分类水平上,环境因子对不同分组样本中物种数据分布的影响程度排序为NO_(2)-N>NH_(4)-N>pH值>O>PO_(4)-P。研究表明,人工养殖会改变尼罗罗非鱼的肠道菌群,有助于解释肠道菌群对养殖和野生环境下尼罗罗非鱼健康和生长的影响。

关键词：尼罗罗非鱼肠道菌群不同养殖环境 16S rDNA序列

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