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增强自噬的可注射水凝胶微球改善软骨微环境抗软骨细胞衰老

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中国组织工程研究 2025年第22期29卷 4710-4719页

作者：李文铭李永航严才平王星宽向超张袁蒋科陈路川北医学院附属医院四川省南充市637000

背景:细胞衰老是骨关节炎的重大危险因素之一,目前尚无广泛认可的针对衰老细胞的抗骨关节炎治疗策略。目的:制定可行的针对骨关节炎中衰老细胞的治疗策略。方法:采用薄膜分散法制备包封雷帕霉素的阳离子脂质体RAPA@Lipo,合成甲基丙烯酰... 详细信息

背景:细胞衰老是骨关节炎的重大危险因素之一,目前尚无广泛认可的针对衰老细胞的抗骨关节炎治疗策略。目的:制定可行的针对骨关节炎中衰老细胞的治疗策略。方法:采用薄膜分散法制备包封雷帕霉素的阳离子脂质体RAPA@Lipo,合成甲基丙烯酰化透明质酸水凝胶,将RAPA@Lipo加入甲基丙烯酰化透明质酸水凝胶水相液中,利用微流控设备制成水凝胶微球,再于紫光光照下交联成固体水凝胶微球(RAPA@Lipo@MS)。将人原代软骨细胞分别与RAPA@Lipo、 RAPA@Lipo@MS共培养,采用CCK-8法、活/死染色评价材料的生物相容性。将大鼠原代软骨细胞分4组培养:正常对照组常规培养48 h,造模组加入H2O2刺激24 h建立衰老细胞模型,RAPA@Lipo组、RAPA@Lipo@MS组建立衰老细胞模型后分别加入RAPA@Lipo、RAPA@Lipo@MS培养24 h,培养结束后,采用免疫荧光观察p62及Ⅱ型胶原蛋白的表达,RT-PCR检测白细胞介素6、基质金属蛋白酶13、Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖及ADAMTS-5的m RNA表达。结果与结论:(1)CCK-8检测、活/死染色结果显示,RAPA@Lipo与RAPA@Lipo@MS均具有良好的生物相容性;(2)与正常对照组相比,造模组细胞p62蛋白表达升高(P <0.05),Ⅱ型胶原蛋白表达降低(P <0.05),白细胞介素6、基质金属蛋白酶13及ADAMTS-5的m RNA表达升高(P <0.05),Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖m RNA表达降低(P <0.05);与造模组比较,RAPA@Lipo@MS组p62蛋白表达降低(P <0.05),Ⅱ型胶原蛋白表达升高(P <0.05),白细胞介素6、基质金属蛋白酶13及ADAMTS-5的m RNA表达降低(P <0.05),Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖m RNA表达升高(P <0.05);(3)结果表明,RAPA@Lipo@MS通过增强自噬控制体内细胞质量、减少体内的衰老细胞,局部清除骨关节炎中的衰老细胞和衰老相关分泌表型因子,以此减缓骨关节炎的进展,创造一个促再生的软骨微环境。

关键词：骨关节炎水凝胶微球自噬衰老细胞衰老相关分泌表型雷帕霉素

SR9009联合吲哚丙酸通过核因子κB信号通路减轻C2C12成肌细胞的炎症反应

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中国组织工程研究 2025年第6期29卷 1220-1229页

作者：姬慧慧蒋旭张志敏邢运虹王亮亮李娜宋雨庭罗旭光崔慧林曹锡梅山西医科大学组织学与胚胎学教研室山西省晋中市030604 山西医科大学法医学院山西省晋中市030604 山西医科大学微生物免疫学教研室山西省晋中市030604 山西医科大学山西省临床级细胞治疗转化中试基地山西省晋中市030604

背景:钟基因Rev-erbα参与调节炎症,但激活Rev-erbα会增加心脑血管疾病风险。为降低相关风险,探索Rev-erbα激动剂SR9009联合其他药物来减轻骨骼肌成肌细胞炎症,奠定治疗炎症相关性骨骼肌萎缩的理论基础。目的:探讨脂多糖刺激C2C12成... 详细信息

背景:钟基因Rev-erbα参与调节炎症,但激活Rev-erbα会增加心脑血管疾病风险。为降低相关风险,探索Rev-erbα激动剂SR9009联合其他药物来减轻骨骼肌成肌细胞炎症,奠定治疗炎症相关性骨骼肌萎缩的理论基础。目的:探讨脂多糖刺激C2C12成肌细胞时吲哚丙酸、SR9009与核因子κB信号通路的关系。方法:①1μg/mL脂多糖刺激C2C12成肌细胞,RNA转录组测序结合KEGG通路富集分析信号通路。②CCK-8法检测C2C12成肌细胞活性,筛选吲哚丙酸的最佳给药浓度;然后将细胞分为空白对照组、脂多糖(1μg/mL)组、SR9009(10μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸(80μmol/L)+脂多糖组、吲哚丙酸+SR9009+脂多糖组,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素6水平,RT-qPCR检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达,Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表达。③siRNA敲减Rev-erbα,RT-qPCR评估敲减效率,检测白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达。结果与结论:①与空白对照组比较,脂多糖时间依赖性抑制成肌细胞融合形成肌管,白细胞介素6、肿瘤坏死因子αmRNA表达水平升高,细胞上清液中白细胞介素6水平显著升高;KEGG通路分析支持脂多糖刺激激活核因子κB信号通路。②吲哚丙酸浓度>80μmol/L时抑制C2C12成肌细胞活性;吲哚丙酸和SR9009通过抑制核因子κB信号通路发挥抗炎作用,降低白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体4、CD14 mRNA表达水平,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值低于脂多糖组。SR9009联合吲哚丙酸显著降低脂多糖诱导的炎症,Toll样受体4、CD14、白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA表达水平进一步下调,p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达比值显著低于吲哚丙酸+脂多糖组和SR9009+脂多糖组。③Rev-erbα随脂多糖刺激时间依赖性升高;siRNA敲减Rev-erbα效率达58%以上,成功敲减Rev-erbα后添加脂多糖,白细胞介素6和肿瘤坏死因子αmRNA表达较脂多糖组显著上调。④结果说明,Rev-erbα可以作为调节炎症反应的靶点,SR9009靶向激活Rev-erbα联合吲哚丙酸能抑制核因子κB信号通路显著减轻C2C12成肌细胞的炎症反应,联合抗炎效果优于单独干预。

关键词： Rev-erbα SR9009 吲哚丙酸脂多糖核因子κB信号通路 C2C12成肌细胞

β-羟基丁酸改善β淀粉样蛋白1-42诱导小鼠海马神经元HT22细胞的能量障碍

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中国组织工程研究 2025年第13期29卷 2713-2719页

作者：叶育采付朝晶李燕李欣儒柴世凡蔡红艳王昭君山西医科大学基础医学院生理学系细胞生理学教育部重点实验室山西省太原市030000 山西医科大学医学科学院山西省太原市030000 山西医科大学基础医学院微生物与免疫学教研室山西省太原市030000

背景:阿尔茨海默病患者存在严重的脑能量障碍,近年来基于酮体干预的脑能量拯救策略在阿尔茨海默病的治疗中越来越受到重视。目的:探讨β-羟基丁酸能否改善β淀粉样蛋白1-42(β-amyloid protein 1-42,Aβ_(1-42))诱导的小鼠海马神经元HT2... 详细信息

背景:阿尔茨海默病患者存在严重的脑能量障碍,近年来基于酮体干预的脑能量拯救策略在阿尔茨海默病的治疗中越来越受到重视。目的:探讨β-羟基丁酸能否改善β淀粉样蛋白1-42(β-amyloid protein 1-42,Aβ_(1-42))诱导的小鼠海马神经元HT22细胞能量障碍。方法:将HT22细胞分为4组,分别为对照组、β-羟基丁酸组、Aβ_(1-42)组、Aβ_(1-42)+β-羟基丁酸组。使用相应试剂盒检测HT22细胞的存活率、ATP水平、α-酮戊二酸脱氢酶活性、Na^(+)K^(+)-ATP酶活性、线粒体膜电位及活性氧水平。结果与结论:与对照组相比,Aβ_(1-42)组HT22细胞的存活率、ATP水平、α-酮戊二酸脱氢酶活性、Na^(+)K^(+)-ATP酶活性、线粒体膜电位均显著降低(P生物能量功能和细胞存活率,最终改善了Aβ_(1-42)诱导的HT22细胞能量障碍。

关键词：阿尔茨海默病 HT22细胞 β-羟基丁酸线粒体生物能量功能能量障碍三磷酸腺苷

含查尔酮结构香豆素衍生物的合成及抗肿瘤增殖活性

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中国药科大学学报 2014年第5期45卷 522-528页

作者：刘文虎常晋霞张建武川北医学院药学院南充637007 川北医学院微生物学与免疫学教研室南充637007

基于活性亚单元拼接原理,将查尔酮分子片段拼接到香豆素结构中,设计并合成了一系列新型含查尔酮结构的香豆素衍生物;以苯乙酮和对甲基苯甲醛为原料,经克莱森-施密特缩合、溴代、环合、消除等反应制备得到24个目标化合物;化合物结构经1H ... 详细信息

基于活性亚单元拼接原理,将查尔酮分子片段拼接到香豆素结构中,设计并合成了一系列新型含查尔酮结构的香豆素衍生物;以苯乙酮和对甲基苯甲醛为原料,经克莱森-施密特缩合、溴代、环合、消除等反应制备得到24个目标化合物;化合物结构经1H NMR、ESI-MS确证。采用MTT法评价了化合物对HepG2、DU145及A549肿瘤细胞的抗增殖作用。结果表明,部分化合物对肿瘤细胞具有较好抗增殖作用,其中Ⅰc,Ⅱb,Ⅱc和Ⅱd对HepG2和A549的抗增殖作用较强,IC50分别为2.05-9.16 mol/L和3.48-10.81 mol/L,在此基础上初步探讨了此类化合物的构效关系。

关键词：香豆素查尔酮分子杂合合成抗肿瘤

S1P/S1PR1通路调节补体B因子的表达对食管鳞状细胞癌细胞增殖和迁移的影响

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中国免疫学杂志 2021年第19期37卷 2364-2369页

作者：徐凤敏陈昱伶任玲蒙春梅李倩倩胡为民川北医学院微生物学与免疫学教研室南充637100

目的:探讨1-磷酸鞘氨醇(S1P)/1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1PR1)通路调节补体B因子(CFB)的表达对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖和迁移的影响。方法:采用RT-qPCR检测食管鳞癌Eca109、TE-1、KYSE150细胞中S1PR1、CFB的表达量,以及在Eca109细胞... 详细信息

目的:探讨1-磷酸鞘氨醇(S1P)/1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1PR1)通路调节补体B因子(CFB)的表达对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞增殖和迁移的影响。方法:采用RT-qPCR检测食管鳞癌Eca109、TE-1、KYSE150细胞中S1PR1、CFB的表达量,以及在Eca109细胞中过表达S1PR1对CFB表达的影响;采用过表达和小干扰RNA(siRNA),用Lipofectamine^(TM)2000将S1PR1-EGFP过表达载体和CFB siRNA共转染Eca109细胞,CCK8法和划痕实验检测细胞的增殖和迁移;CFB siRNA转染TE-1细胞,检测细胞的增殖和迁移。结果:在低表达S1PR1和CFB的Eca109细胞中过表达S1PR1,结果显示诱导CFB表达上调,促进细胞的增殖和迁移,并且干扰CFB表达可抑制上述作用;在高表达S1PR1和CFB的TE-1细胞中敲低CFB的表达,TE-1细胞增殖和迁移受到明显抑制。结论:S1P/S1PR1通路能诱导CFB表达,促进食管鳞癌细胞的增殖和迁移,CFB可能在ESCC的发生发展中发挥重要作用。

关键词： 1型1-磷酸鞘氨醇受体补体B因子食管鳞状细胞癌增殖迁移

雷公藤多甙与白介素-10对人外周血树突细胞的影响(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第8期22卷 53-56页

作者：王胜军姚堃谢芳艺季晓辉中国 212001 南京 210029 南京医科大学微生物学和免疫学教研室南京医科大学微生物学和免疫学教研室镇江镇江医学院微生物学和免疫学教研室

目的:体外研究雷公藤多甙与白介素-10(IL-10)对人外周血树突细胞表面HLA-DR、CD80抗原表达及IL-12 p40蛋白表达和mRNA转录的影响。方法:采用GM-CSF、IL-4和TNFα体外培养体系获得人外周血树突细胞(DC),HLA-DR和CD80抗原的表达经免疫荧... 详细信息

目的:体外研究雷公藤多甙与白介素-10(IL-10)对人外周血树突细胞表面HLA-DR、CD80抗原表达及IL-12 p40蛋白表达和mRNA转录的影响。方法:采用GM-CSF、IL-4和TNFα体外培养体系获得人外周血树突细胞(DC),HLA-DR和CD80抗原的表达经免疫荧光染色后采用流式细胞仪进行分析,用酶联免疫吸附测定和逆转录聚合酶链反应分别检测IL-12p40蛋白水平和mRNA的转录。结果:雷公藤多甙5-20mg/L显著下调HLA-DR和CD80抗原的表达,IL-10 50-200μg/L能抑制HLA-DR和CD80抗原的表达,并都具有剂量依赖关系;雷公藤多甙5-20mg/L和IL-10 50-200μg/L均能抑制DC分泌IL-12p40蛋白,同时经雷公藤多甙20mg/L和IL-10 200μg/L处理的DC中IL-12 p40 mRNA的表达受到显著抑制。结论:雷公藤多甙和IL-10能通过抑制DC表面分子的表达和IL-12的合成而发挥免疫抑制作用。

关键词：雷公藤树突细胞细胞培养 HLA-DR抗原 CD80抗原白介素-10 白介素-12 流式细胞术逆转录聚合酶链反应酶联免疫吸附测定

探讨新型冠状病毒肺炎疫情在医学免疫学教学中的应用

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中国免疫学杂志 2020年第18期36卷 2205-2207页

作者：李倩倩杨艳红常晋霞胡为民川北医学院微生物学与免疫学教研室南充637007

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)爆发后,如何利用热点效应服务于免疫学的教学是值得探索的方向。本文通过举例设计理论知识点与COVID-19的结合教学,从不同切入点充分利用新冠疫情,为学生的学习注入持续动力,在改善理论教学效果的同时激发学... 详细信息

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)爆发后,如何利用热点效应服务于免疫学的教学是值得探索的方向。本文通过举例设计理论知识点与COVID-19的结合教学,从不同切入点充分利用新冠疫情,为学生的学习注入持续动力,在改善理论教学效果的同时激发学生的科研热情。

关键词：新型冠状病毒肺炎医学免疫学教学方法

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应用重组DNA探针检测不同毒力钩端螺旋体

华西医科大学学报 1995年第1期26卷 1-5页

作者：江南敬保迁戴保民张燕华川北医学院微生物学教研室

应用质粒载体ｐＵＣ１８构建赖型钩端螺旋体０１７株的基因库。筛选出重组质粒ｐＤＪ６和ｐＤＪ８，插入片段分别是１．９ｋｂ和２．２ｋｂ。地高辛随机引物标记１．９ｋｂ片段制备探针，对５个血清型６株钩体ＤＮＡ进行杂交。结果显示... 详细信息

应用质粒载体ｐＵＣ１８构建赖型钩端螺旋体０１７株的基因库。筛选出重组质粒ｐＤＪ６和ｐＤＪ８，插入片段分别是１．９ｋｂ和２．２ｋｂ。地高辛随机引物标记１．９ｋｂ片段制备探针，对５个血清型６株钩体ＤＮＡ进行杂交。结果显示，重组探针与致病钩体ＤＮＡ出现明显杂交信号，与非致病钩体，人白细胞ＤＮＡ及大肠杆菌ＪＭ１０３株ＤＮＡ杂交信号不明显。此特异性重组探针可作为鉴定、识别致病性钩体和进行钩体属、种分类的一种手段。

关键词：钩端螺旋体分子杂交 DNA探针毒力检测

天敌应激下小鼠血浆皮质酮、巨噬细胞产生NO、IL-1β水平与脑不对称性

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生物化学与生物物理进展 2004年第9期31卷 824-828页

作者：赵丽纯苏芸李康生汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室汕头515031

为探讨天敌应激下脑不对称性对小鼠HPA轴活性及巨噬细胞功能的影响,通过伸爪取食法将Balb/c小鼠分为左利、右利、双利组,分别暴露在鼠类天敌———猫急性应激(4 5min,1次)、慢性应激(4 5min/次,每天 1次,连续 14天)刺激后,分别用EIA法... 详细信息

为探讨天敌应激下脑不对称性对小鼠HPA轴活性及巨噬细胞功能的影响,通过伸爪取食法将Balb/c小鼠分为左利、右利、双利组,分别暴露在鼠类天敌———猫急性应激(4 5min,1次)、慢性应激(4 5min/次,每天 1次,连续 14天)刺激后,分别用EIA法、硝酸还原酶法、ELISA法测定了血浆皮质酮、腹腔巨噬细胞培养上清中一氧化氮(nitricoxide,NO)、IL 1β水平.a 血浆皮质酮水平:急性应激下,右利、双利组小鼠血浆皮质酮升高,右利组更为显著,左利组呈下降趋势,右利、双利组显著高于左利组及相应正常对照组(P 学意义(P >0 0 5),右利组则显著高于相应正常对照组(P <0 0 5 ).上述研究结果提示,小鼠在暴露于天敌———猫应激下。

关键词：天敌应激,脑不对称皮质酮一氧化氮 IL-1β