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老鼠簕生物碱A对胰腺癌L3.6细胞增殖和凋亡的影响

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中国中药杂志 2024年第9期49卷 2355-2363页

作者：梁嘉敏杨思淇胡文浩李旭艳王锂韫粤西特色生物医药工程技术研究中心广东湛江524048 广东省粤西蓝碳资源保护与利用工程技术研究中心广东湛江524048 岭南师范学院红树林研究院广东湛江524048 岭南师范学院生命科学与技术学院广东湛江524048 广东省粤西海鲜资源可持续利用工程技术研究中心广东湛江524048

探讨老鼠簕生物碱A[4-hydroxy-2(3H)-benzoxazolone,HBOA]对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。0~1.0 mmol·L^(-1) HBOA处理体外培养的胰腺癌L3.6细胞,采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法测定细胞活力并计算半数抑制浓度IC50,筛选药物作用浓度和时间。利用倒置显微镜、吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察细胞形态,活细胞计数、细胞集落形成实验检测细胞增殖、自我更新能力,流式细胞术检测细胞周期进程和细胞凋亡比率,扫描电镜观察细胞凋亡形态,qPCR检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞周期蛋白A(cyclinA1、cyclinA2)、细胞周期蛋白依赖性激酶2(cyclin dependent kinase 2,CDK2)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A(cyclin dependent kinase inhibitor 1A,P21)mRNA表达,流式细胞术检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)、脂质过氧化物、线粒体膜电位水平,Western blot检测蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路活性。与对照组相比,HBOA处理组细胞活力显著下降,筛选出0.4、0.6 mmol·L^(-1) HBOA干预48 h为后续实验剂量与时间;与对照组相比,0.4、0.6 mmol·L^(-1) HBOA处理组细胞增殖和集落形成能力被抑制,PCNA、cyclinA1、cyclinA2、CDK2 mRNA表达水平显著降低,P21 mRNA表达水平显著升高,细胞周期阻滞于S期,细胞凋亡率显著增加、出现凋亡小体,ROS水平显著升高,脂质过氧化物水平显著升高,线粒体膜电位降低,其中0.6 mmol·L^(-1)处理组显著降低,p-Akt、p-mTOR蛋白水平显著降低。该研究表明HBOA抑制胰腺癌L3.6细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与ROS增加、Akt/mTOR通路活性抑制有关。

关键词：老鼠簕生物碱A 胰腺癌细胞细胞增殖细胞凋亡

响应面优化酶法提取虎斑乌贼肌肉多糖的工艺及抗氧化活性测定

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食品科学 2017年第22期38卷 246-255页

作者：孙玉林文菁赵娟田丽李锐陈道海岭南师范学院生命科学与技术学院广东湛江524048 岭南师范学院环北部湾海洋药用动物保护与利用研究所广东湛江524048

研究胰蛋白酶提取虎斑乌贼肌肉多糖的工艺及体外抗氧化活性,并与水提法和碱提法的多糖进行比较。在单因素试验基础上以响应面法优化酶法提取多糖的工艺,结果显示最佳工艺条件为:酶解温度55℃、料液比1∶40(g/mL)、酶解时间4 h、加酶量2.... 详细信息

研究胰蛋白酶提取虎斑乌贼肌肉多糖的工艺及体外抗氧化活性,并与水提法和碱提法的多糖进行比较。在单因素试验基础上以响应面法优化酶法提取多糖的工艺,结果显示最佳工艺条件为:酶解温度55℃、料液比1∶40(g/mL)、酶解时间4 h、加酶量2.5%,此时虎斑乌贼肌肉多糖得率为4.15%,优于水提法和碱提法的多糖得率。体外抗氧化活性研究表明酶法提取的多糖比碱提和水提的多糖具有更好的抗氧化活性,当多糖质量浓度为4 mg/mL时,水提、碱提和酶提虎斑乌贼肌肉多糖对·OH的清除率分别为50.15%、55.14%和89.47%,其IC50值分别为4.51、3.56 mg/mL和0.82 mg/mL;对DPPH自由基的清除率分别为28.89%、31.48%和40.80%,其IC50值分别为16.66、15.43 mg/mL和11.50 mg/mL;对O2-·的清除率分别为75.43%、81.63%和97.00%,其IC50值分别为1.15、0.69 mg/mL和0.29 mg/mL;还原力大小分别为0.134、0.156和0.193。综合分析表明,酶提法得到的多糖得率较高且具有较好的体外抗氧化活性。

关键词：虎斑乌贼多糖酶法提取响应面抗氧化活性

拟目乌贼生殖腺碱提多糖的抗氧化及吸湿保湿特性

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食品科学 2016年第2期37卷 31-38页

作者：戴宏杰孙玉林杨梅语辛欣欣冯梓欣文菁陈道海岭南师范学院环北部湾海洋药用动物保护与利用研究所广东湛江524048 岭南师范学院生命科学与技术学院广东湛江524048

以拟目乌贼生殖腺为材料,采用碱法提取多糖,并对其抗氧化活性和吸湿保湿性进行研究。结果表明:拟目乌贼生殖腺碱提多糖最佳工艺为NaOH溶液浓度0.3 mol/L、料液比1∶40(g/m L)、提取时间3 h、提取温度80℃,此条件下多糖得率为7.697%。拟... 详细信息

以拟目乌贼生殖腺为材料,采用碱法提取多糖,并对其抗氧化活性和吸湿保湿性进行研究。结果表明:拟目乌贼生殖腺碱提多糖最佳工艺为NaOH溶液浓度0.3 mol/L、料液比1∶40(g/m L)、提取时间3 h、提取温度80℃,此条件下多糖得率为7.697%。拟目乌贼生殖腺碱提多糖具有良好的抗氧化活性,对羟自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基具有较好的清除效果,清除率与多糖质量浓度呈正相关。拟目乌贼生殖腺碱提多糖的吸湿性能高于壳聚糖、聚乙二醇6000等常规保湿剂,保湿性能和壳聚糖、聚乙二醇6000、丙三醇接近;吸湿保湿能力均高于翡翠贻贝多糖、近江牡蛎多糖等海洋动物多糖。综上表明,拟目乌贼生殖腺碱提多糖作为天然的抗氧化剂和保湿剂具有一定的应用前景。

关键词：拟目乌贼生殖腺多糖抗氧化吸湿性保湿性

拟目乌贼肌肉多糖酶法脱蛋白工艺优化及体外清除自由基能力

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食品科学 2017年第18期38卷 251-258页

作者：孙玉林戴宏杰文菁张卫赵娟田丽陈道海岭南师范学院环北部湾海洋药用动物保护与利用研究所广东湛江524048 岭南师范学院生命科学与技术学院广东湛江524048

以加酶量、酶解温度、pH值、酶解时间为影响因素,以蛋白脱除率和多糖损失率为评价指标,通过正交试验优化拟目乌贼肌肉多糖酶法脱蛋白工艺,并与三氯乙酸法、等电点法脱蛋白效果进行比较。同时对脱蛋白多糖的体外清除自由基能力进行研究... 详细信息

以加酶量、酶解温度、pH值、酶解时间为影响因素,以蛋白脱除率和多糖损失率为评价指标,通过正交试验优化拟目乌贼肌肉多糖酶法脱蛋白工艺,并与三氯乙酸法、等电点法脱蛋白效果进行比较。同时对脱蛋白多糖的体外清除自由基能力进行研究。结果表明,拟目乌贼肌肉多糖脱蛋白最佳工艺条件为:加酶量3.0 g/100 m L、酶解温度53℃、p H 8.2、酶解时间1.5 h。此条件下蛋白脱除率为89.43%,多糖损失率为1.78%,优于三氯乙酸法和等电点法。清除自由基结果显示,多糖质量浓度为10 mg/m L时,酶法、三氯乙酸法和等电点法得到的脱蛋白多糖对羟自由基清除率分别为45.72%、38.72%和25.18%,相应的IC_(50)值分别为12.44、16.37、34.64 mg/m L;对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的清除率分别为68.00%、30.08%和23.10%,相应的IC50值分别为7.62、16.71、28.96 mg/m L。3种脱蛋白方法所得拟目乌贼肌肉多糖清除自由基效果依次为:酶法>三氯乙酸法>等电点法。

关键词：拟目乌贼多糖酶法脱蛋白自由基

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13种双壳类贝壳的扫描电镜观察

动物学杂志 2015年第1期50卷 122-130页

作者：陈道海霍颖娴岭南师范学院环北部湾海洋药用动物保护与利用研究所湛江524048 岭南师范学院生命科学与技术学院湛江524048

采用扫描电子显微镜(SEM)对湛江地区的丽文蛤(Meretrix lusoria)、琴文蛤(M.lyrata)、文蛤(M.meretrix)、波纹巴非蛤(Paphia undulata)、菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)、杂色蛤仔(R.variegata)、伊萨伯雪蛤(Clausinella isobellina)、格粗饰蚶(Anadara clathrata)、泥蚶(Tegillarca granosa)、栉孔扇贝(Chlamys farreri)、尖紫蛤(Sanguinolaria aauta)、锈色朽叶蛤(Coecella turgida)和栉江珧(Atrina pectinata)这6科13种双壳类的贝壳形态微观结构特征进行观察。结果表明,不同种的贝壳表面和横切面微观结构有一定差异。这些差异主要表现在晶体的组成和排列方式两个方面。贝壳角质层根据表面形态特征分为5种类型:光滑平整、颗粒状、不规则多边形、蜂窝状和沟壑状。贝壳棱柱层的晶体形状有棱柱状、短柱状、片状和不规则形状。不同贝壳的晶体有两种排列方向,垂直于横切面和平行于横切面。13种贝壳珍珠层的晶体有颗粒状、砖块状、圆形、块状和不规则的多边形。不同种的贝壳角质层、棱柱层和珍珠层的厚度也不同。研究贝壳微观结构之间的差异,可以为分类提供基本资料。

关键词：双壳类贝壳微观结构扫描电镜

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雌性虎斑乌贼缠卵腺营养成分分析与评价

食品科学 2016年第14期37卷 97-103页

作者：戴宏杰孙玉林冯梓欣文菁陈道海岭南师范学院环北部湾海洋药用动物保护与利用研究所广东湛江524048 岭南师范学院生命科学与技术学院广东湛江524048 华南理工大学食品科学与工程学院广东广州510640

为评估雌性虎斑乌贼缠卵腺的营养水平,确定其开发利用价值,对其一般营养成分、氨基酸组成、脂肪酸组成、胆固醇含量和无机元素进行分析。结果表明,雌性虎斑乌贼缠卵腺(鲜质量)中水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分含量分别为73.27%、18.40%、0.... 详细信息

为评估雌性虎斑乌贼缠卵腺的营养水平,确定其开发利用价值,对其一般营养成分、氨基酸组成、脂肪酸组成、胆固醇含量和无机元素进行分析。结果表明,雌性虎斑乌贼缠卵腺(鲜质量)中水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分含量分别为73.27%、18.40%、0.16%和1.70%。缠卵腺中共检出18种氨基酸,必需氨基酸含量为5.54 g/100 g,占氨基酸总量的41.47%,必需氨基酸构成比例符合联合国粮食与农业组织/世界卫生组织模式。以氨基酸评分评价,其第1限制性氨基酸是缬氨酸;以化学评分评价,其第1限制性氨基酸是色氨酸。不饱和脂肪酸含量丰富,占脂肪酸总量的63.21%,其中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的含量分别为12.55%和33.19%。胆固醇含量为2.24 mg/g,远低于鸡蛋黄。常量元素K、Ca、Na、Mg和微量元素Se、Cu、Mn等含量丰富,但重金属元素As含量达到35.90 mg/kg,远超出限定的0.5 mg/kg。以上结果表明雌性虎斑乌贼缠卵腺营养价值丰富,但需控制食用量及加工方法,保证食品安全。

关键词：虎斑乌贼缠卵腺营养成分氨基酸脂肪酸胆固醇

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头足类腕上吸盘和内壳扫描电镜观察

动物学杂志 2014年第5期49卷 736-743页

作者：陈道海邱海梅湛江师范学院环北部湾海洋药用动物保护与利用研究所湛江524048 湛江师范学院生命科学与技术学院湛江524048

本文采用扫描电子显微镜对7种头足类腕上的吸盘及乌贼的内壳进行观察。结果表明,蛸科(Octopodidae)的短蛸(Octopus ocellatus)、真蛸(O.vulgaris)和长蛸(O.variabilis)腕的吸盘均无齿;乌贼科(Sepiidae)的日本无针乌贼(Sepia japonica)... 详细信息

本文采用扫描电子显微镜对7种头足类腕上的吸盘及乌贼的内壳进行观察。结果表明,蛸科(Octopodidae)的短蛸(Octopus ocellatus)、真蛸(O.vulgaris)和长蛸(O.variabilis)腕的吸盘均无齿;乌贼科(Sepiidae)的日本无针乌贼(Sepia japonica)和金乌贼(S.esculenta)的腕和触腕吸盘上的角质环均有齿,且齿的形状不同,虎斑乌贼(S.pharoanis)触腕的吸盘角质环光滑无齿;枪乌贼科(Loliginidae)的中国枪乌贼(Uroteuthis chinensis)腕上吸盘的角质环无齿。对3种乌贼内壳横切面进行扫描电镜观察,乌贼内壳的背表面和腹表面均由文石和铺在上面的球型颗粒构成,但文石的形状和小球的排列存在种间差异,这些差异可以作为头足类分类的辅助特征。

关键词：头足类吸盘内壳扫描电镜

不同盐度下拟目乌贼(Sepia lycidas)胚胎发育过程研究

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海洋与湖沼 2013年第5期44卷 1282-1287页

作者：陈道海郭永平文菁梁汉清湛江师范学院环北部湾海洋药用动物资源保护与利用研究所湛江524048 湛江师范学院生命科学与技术学院湛江524048

分别配置盐度为13、18、23、28、33、38和43的海水,(23±0.5)℃温度条件下孵化拟目乌贼(Sepia lycidas)卵,并对拟目乌贼胚胎发育情况进行观察与分析。结果表明,拟目乌贼胚胎在盐度为28时发育最佳,孵化历期为28—30天,胚胎发育经过受精... 详细信息

分别配置盐度为13、18、23、28、33、38和43的海水,(23±0.5)℃温度条件下孵化拟目乌贼(Sepia lycidas)卵,并对拟目乌贼胚胎发育情况进行观察与分析。结果表明,拟目乌贼胚胎在盐度为28时发育最佳,孵化历期为28—30天,胚胎发育经过受精卵、卵裂期、囊胚期、原肠胚期、胚芽原基形成期、胚体形成期、漏斗形成期、眼点形成期、红眼期、心跳出现期、内壳发生期、色素形成期、墨囊形成期、黑眼期、内壳形成期和幼体出膜期等16个典型时期。盐度为13、18、38和43时,发育停滞,说明海水盐度是拟目乌贼胚胎发育过程中一个很重要的影响因素。

关键词：拟目乌贼盐度胚胎发育

虎斑乌贼(Sepia pharaonis)繁殖行为谱分析

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海洋与湖沼 2013年第4期44卷 931-936页

作者：陈道海郑亚龙湛江师范学院环北部湾海洋药用动物资源保护与利用研究所湛江524048 湛江师范学院生命科学与技术学院湛江524048

利用现场观察和数码摄像机记录的方法对虎斑乌贼(Sepia pharaonis)繁殖行为学进行研究。结果表明,虎斑乌贼的繁殖行为谱包括游泳、休息、捕食、求偶、争斗、交配、产卵等行为,虎斑乌贼早晚常离底游动觅食,白天下沉水底,捕食甲壳类和幼... 详细信息

利用现场观察和数码摄像机记录的方法对虎斑乌贼(Sepia pharaonis)繁殖行为学进行研究。结果表明,虎斑乌贼的繁殖行为谱包括游泳、休息、捕食、求偶、争斗、交配、产卵等行为,虎斑乌贼早晚常离底游动觅食,白天下沉水底,捕食甲壳类和幼鱼等。在隐蔽阴暗处休息,在交配行为上不是"一夫一妻"制,存在一雌多雄交配现象,交配前有较复杂求偶行为,包括雄性争斗与对峙、雌性配偶的选择等,交配为头对头的方式,雌性受精不久便在产卵区轮流产卵,卵呈白色,半透明,卵群葡萄状,卵径约14—16mm,长径约27—34mm。

关键词：虎斑乌贼繁殖行为谱