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免疫细胞在视神经损伤中作用的研究进展

中华眼科杂志 2024年第1期60卷 95-101页

作者：郁璐林沛杨宁邢怡桥武汉大学人民医院眼科中心武汉430000

视神经损伤可导致视网膜神经节细胞(RGC)及其轴突的丢失,是造成视力不可逆损伤的重要原因。免疫反应是损伤后的共同步骤,且在视神经病变中常表现出截然相反的作用。免疫细胞是其中重要一环,把握好各种免疫细胞在损伤后的分化,减轻其神... 详细信息

视神经损伤可导致视网膜神经节细胞(RGC)及其轴突的丢失,是造成视力不可逆损伤的重要原因。免疫反应是损伤后的共同步骤,且在视神经病变中常表现出截然相反的作用。免疫细胞是其中重要一环,把握好各种免疫细胞在损伤后的分化,减轻其神经毒性,促使免疫细胞朝着有利于保护RGC及轴突的方向发展对于视神经保护十分重要。本文主要对巨噬细胞、小胶质细胞、T细胞等免疫细胞在视神经损伤领域中的研究进展进行综述。此外还对如何深入识别细胞表型以及“固有免疫可能具有记忆”这一新观点等进行讨论。

关键词：视神经损伤视网膜神经节细胞免疫,先天适应性免疫巨噬细胞小神经胶质细胞 T淋巴细胞

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Wolfram-like综合征1例

中华眼科杂志 2024年第2期60卷 180-184页

作者：朱白雪张磊王海燕王茹贾炜西安市人民医院(西安市第四医院)陕西省眼科医院西安710004

与经典的常染色体隐性Wolfram综合征不同,Wolfram-like综合征是一种由WFS1基因单个杂合变异引起的常染色体显性疾病。本例7岁男性儿童因体检时发现视力无法矫正来眼科就诊。患儿自幼听力差,行人工耳蜗植入术。眼科检查发现双眼视神经萎... 详细信息

与经典的常染色体隐性Wolfram综合征不同,Wolfram-like综合征是一种由WFS1基因单个杂合变异引起的常染色体显性疾病。本例7岁男性儿童因体检时发现视力无法矫正来眼科就诊。患儿自幼听力差,行人工耳蜗植入术。眼科检查发现双眼视神经萎缩,其中相干光层析成像术(OCT)可见WFS1基因单一变异所特有的双眼外网状层增厚且结构异常分层。进一步行基因检测,患者WFS1基因单个杂合错义变异c.2051C>T(p.A684V),父母均未携带该变异,最终诊断为Wolfram-like综合征。

关键词：视神经萎缩膜蛋白质类突变误义遗传关联研究 Wolfram综合征

SR8278改善时差所致小鼠泪腺功能紊乱的转录组学分析

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眼科新进展 2024年第4期44卷 264-269页

作者：黄深振齐迪裴晓婷路顶立司宏丽黄杜鎏睿张文潇巴梦茹轩书婷李志杰郑州大学人民医院河南省人民医院河南大学人民医院河南省立眼科医院河南省眼科研究所河南省郑州市450003

目的探讨核受体亚家族1 D组成员1(NR1D1)合成拮抗剂SR8278在改善时差诱导的小鼠眶外泪腺结构和功能损伤方面的作用及其机制。方法 36只健康的8~10周龄野生型C57BL/6J小鼠在12 h光照/12 h黑暗循环的昼夜节律箱内适应2周后随机分为3组:... 详细信息

目的探讨核受体亚家族1 D组成员1(NR1D1)合成拮抗剂SR8278在改善时差诱导的小鼠眶外泪腺结构和功能损伤方面的作用及其机制。方法 36只健康的8~10周龄野生型C57BL/6J小鼠在12 h光照/12 h黑暗循环的昼夜节律箱内适应2周后随机分为3组:正常组(12 h光照/12 h黑暗循环的昼夜节律箱饲养)、时差组(8 h前移的12 h光照/12 h黑暗循环的昼夜节律箱饲养)及时差+SR8278组(8 h前移的12 h光照/12 h黑暗循环的昼夜节律箱饲养,并给予25 mg·kg^(-1)的SR8278干预),每组12只,共干预5 d。干预结束后,收集各组小鼠的活动度和核心体温,记录小鼠的泪液分泌量,并对泪腺组织进行称重和泪腺细胞大小测量。采用免疫组织化学方法对小鼠眶外泪腺进行组织学评估。提取泪腺RNA进行包含NR1D1的高通量RNA-Seq分析,并对获得的转录组数据进行KEGG和GO功能富集分析。结果与正常组相比,时差组小鼠白天活动度较高,夜间活动度较低,白天核心体温较高,夜间核心体温较低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与时差组相比,时差+SR8278组小鼠白天活动度较低,夜间活动度较高,白天核心体温较低,夜间核心体温较高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与正常组相比,时差组小鼠泪腺重量及泪液分泌量降低,泪腺细胞增大,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与时差组相比,时差+SR8278组小鼠泪腺重量及泪液分泌量增加,泪腺细胞减小,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与正常组相比,时差组小鼠夜晚泪腺中NR1D1表达量较高;与时差组相比,时差+SR8278组小鼠夜晚泪腺中NR1D1表达量较低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。生物信息学分析显示,时差组和时差+SR8278组共有947个显著性差异基因,其中显著性上调基因43个,显著性下调基因904个,信号通路差异最大的为Notch信号通路。结论 SR8278通过靶向抑制NR1D1,有效增强了时差小鼠的泪液分泌功能,其过程可能是通过Notch信号通路完成的。

关键词：时差 SR8278 泪腺功能紊乱小鼠

基于Python语言开发的荧光检测系统定量分析吲哚菁绿在黄斑前膜剥除术后眼内分布特点的临床观察

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中华眼科杂志 2024年第3期60卷 242-249页

作者：张韵张可人高昇张美霞四川大学华西医院眼科成都610041 重庆两江新区人民医院眼科重庆401121

目的探讨基于Python语言开发的吲哚菁绿(ICG)荧光面积检测系统观察并定量分析ICG在黄斑前膜剥除术后眼内分布特点及代谢规律的作用和优势。方法前瞻性病例系列研究。纳入2019年3月至2021年3月在四川大学华西医院眼科行玻璃体切除术的特... 详细信息

目的探讨基于Python语言开发的吲哚菁绿(ICG)荧光面积检测系统观察并定量分析ICG在黄斑前膜剥除术后眼内分布特点及代谢规律的作用和优势。方法前瞻性病例系列研究。纳入2019年3月至2021年3月在四川大学华西医院眼科行玻璃体切除术的特发性黄斑前膜患者,术中使用ICG染色后剥除黄斑前膜和内界膜。患者术前及术后1周、1个月、3个月、6个月及12个月随访时均行最佳矫正视力、眼压、眼底照相、近红外眼底成像术(NIR-FF)和相干光层析成像术(OCT)检查。开发基于Python语言编程ICG眼内代谢过程检测系统测量NIR-FF的眼内ICG荧光残留面积,预测ICG代谢规律方程式,与术后视力和视盘旁视网膜神经纤维层厚度进行相关性分析。结果共纳入患者64例(64只眼),年龄为(64.6±8.4)岁,其中男性25例(39.1%),女性39例(60.9%)。NIR-FF图像显示患者术前无ICG强荧光影像,术后1周出现后极部呈弥漫ICG强荧光,内界膜剥除区域呈现环形弱荧光,随时间延长可见ICG强荧光沿血管弓及神经纤维走行并逐渐向视盘方向消退,直至1年时在视盘处仍可见ICG残留荧光。基于Python语言开发的ICG荧光面积检测系统可测量眼内ICG残留面积,并通过线性回归分析构建方程式预测术后12个月ICG残留面积=0.22×术后6个月ICG残留面积(R2=16%,P=0.002)。除术后1个月ICG残留面积与术后视力呈负相关(P=0.017,r=-0.195)外,其余随访时间眼内ICG荧光残留面积与术后视力预后和视盘旁神经纤维层厚度均无相关性(均P>0.05)。结论特发性黄斑前膜患者采用ICG染色剥除内界膜后ICG在眼内的特征性代谢过程,表现为ICG强荧光沿血管弓及神经纤维走行,随时间延长逐渐向视盘汇集。基于Python语言开发的ICG荧光面积检测系统能够清晰显示ICG在黄斑前膜剥除术后的眼内分布特点,可用作预测ICG眼内代谢规律的工具。

关键词：吲哚花青绿视网膜外膜计算生物学编程语言谱学,近红外线体层摄影术,光学相干

lncRNA MIAT调节miR-495-3p/STAT3信号通路对高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响

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中国老年学杂志 2024年第11期44卷 2784-2790页

作者：魏雪梅谈丽丽韩崇岭陈平青海省第五人民医院眼科

目的探讨长链非编码RNA心肌梗死相关转录物(lncRNA MIAT)对高糖(HG)诱导的人视网膜色素上皮细胞(RPE)凋亡的影响及分子机制。方法用HG处理人RPE细胞系ARPE-19以在体外模拟糖尿病视网膜病变(DR)。将用于lncRNA MIAT沉默的小干扰RNA(siR... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA心肌梗死相关转录物(lncRNA MIAT)对高糖(HG)诱导的人视网膜色素上皮细胞(RPE)凋亡的影响及分子机制。方法用HG处理人RPE细胞系ARPE-19以在体外模拟糖尿病视网膜病变(DR)。将用于lncRNA MIAT沉默的小干扰RNA(siRNA,si-MIAT)和阴性对照(si-NC)、miR-495-3p抑制剂(miR-495-3p inhibitor)及抑制剂对照(inhibitor-NC)转染ARPE-19细胞，分为HG+si-NC组、HG+si-MIAT组、HG+si-MIAT+anti-NC组、HG+si-MIAT+anti-miR-495-3p组，另设正常糖(NG)组和HG组。使用逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞lncRNA MIAT、miR-495-3p、信号转导和转录激活因子(STAT)3 mRNA水平，MTT法测定细胞活性，流式细胞术测定细胞凋亡，蛋白质印迹分析STAT3与凋亡相关蛋白表达。双荧光素酶实验检测miR-495-3p与lncRNA MIAT或STAT3的靶标关系。建立DR小鼠模型，分为对照(Control)组、DR组、DR+si-NC组、DR+si-MIAT组，苏木素-伊红(HE)染色和原位末端标记染色(TUNEL)染色观察lncRNA MIAT敲低对DR小鼠视网膜组织损伤的影响，RT-qPCR和Western印迹检测视网膜组织lncRNA MIAT、miR-495-3p、STAT3表达。结果与NG组相比，HG组lncRNA MIAT、STAT3 mRNA和蛋白水平、细胞凋亡率、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平和(Cleaved-Caspase)-3/Caspase-3比值升高，miR-495-3p水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白水平降低(均P<0.05)。敲低lncRNA MIAT可明显上调miR-495-3p,明显抑制STAT3表达，明显升高细胞存活率和Bcl-2蛋白水平，明显降低细胞凋亡率、Bax蛋白水平和Cleaved-Caspase-3/Caspase-3比值(均P<0.05)。下调miR-495-3p可升高STAT3水平，部分消除lncRNA MIAT敲低对HG诱导的ARPE-19细胞凋亡的抑制作用(均P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示，过表达miR-495-3p可降低MIAT-野生型(WT)和STAT3-WT的荧光素酶活性(P<0.05)。体内实验结果显示，lncRNA MIAT敲低可通过上调miR-495-3p抑制STAT3表达，减轻DR小鼠视网膜损伤，抑制视网膜细胞凋亡。结论敲低lncRNA MIAT可能通过增强miR-495-3p对STAT3的抑制作用，减少HG诱导的人RPE细胞凋亡，减缓DR进展。

关键词：糖尿病视网膜病变长链非编码RNA心肌梗死相关转录物 miR-495-3p 信号转导和转录激活因子3 人视网膜色素上皮细胞凋亡

伴肝损伤的甲状腺相关眼病患者临床特征及危险因素分析

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眼科新进展 2024年第3期44卷 203-207页

作者：靳玮柴昌河南省人民医院郑州大学人民医院河南省立眼科医院河南省眼科研究所河南省郑州市450003

目的探讨伴肝功能损伤的甲状腺相关眼病(TAO)患者临床特征及肝损伤相关危险因素。方法回顾性队列研究。收集2017年7月至2023年5月就诊于河南省人民医院的1030例TAO患者临床资料,根据患者肝功能是否正常分为TAO肝损伤患者(A组)(132例)及... 详细信息

目的探讨伴肝功能损伤的甲状腺相关眼病(TAO)患者临床特征及肝损伤相关危险因素。方法回顾性队列研究。收集2017年7月至2023年5月就诊于河南省人民医院的1030例TAO患者临床资料,根据患者肝功能是否正常分为TAO肝损伤患者(A组)(132例)及TAO肝功能正常患者(B组)(898例);收集并比较2组患者年龄、性别、吸烟史、肝功能各项指标[丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰转肽酶(γ-GT)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、碱性磷酸酶(ALP)],甲状腺功能相关指标[游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)、促甲状腺素受体抗体(TRAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体]及眼部体征指标[眼突度、眼压、是否上睑退缩、NOSPECS分级、临床活动性评分(CAS)、双眼眼肌受累条数]的差异。采用多因素Logistic回归分析TAO患者发生肝损伤的危险因素。结果初诊未治疗的TAO患者出现肝损伤比例为12.82%。两组患者性别比及吸烟人数比例比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。A组患者年龄[(44.63±13.64)岁]大于B组[(40.25±14.04)岁],差异有统计学意义(t=3.718,P<0.05)。A组患者ALT、AST、γ-GT、ALP、TBil及DBil水平均大于B组,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。A组患者FT3、FT4、TPOAb及TRAb水平均高于B组,TSH水平低于B组,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。A组患者双眼眼肌受累条数及CAS评分≥3分的患者比例均高于B组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。回归分析结果显示,FT4、TRAb水平越高,年龄越大,TSH水平越低,TAO患者发生肝损伤的风险越高。结论高水平的FT4与TRAb,以及低水平的TSH和高龄是TAO患者发生肝损伤的独立危险因素。免疫因素和高水平甲状腺素对肝脏的直接毒性作用共同参与了TAO患者肝损伤的机制。

关键词：甲状腺相关眼病肝损伤甲状腺功能危险因素

HTRA3基因对脉络膜新生血管和M2型巨噬细胞极化的影响

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眼科新进展 2024年第4期44卷 275-281页

作者：肇莉莉王萍孙连义马为梅张乐喻磊西安市人民医院(西安市第四医院) 陕西省眼科医院西北大学附属人民医院眼科陕西省西安市710004 西北妇女儿童医院眼科陕西省西安市710003

目的探讨HtrA丝氨酸肽酶3(HTRA3)基因对脉络膜新生血管(CNV)和M2型巨噬细胞极化的影响。方法收集30例湿性年龄相关性黄斑变性(wAMD)患者(wAMD组)和30例同期健康体检者(健康组)的空腹静脉血,通过qRT-PCR检测血清HTRA3 mRNA水平。将RF/6... 详细信息

目的探讨HtrA丝氨酸肽酶3(HTRA3)基因对脉络膜新生血管(CNV)和M2型巨噬细胞极化的影响。方法收集30例湿性年龄相关性黄斑变性(wAMD)患者(wAMD组)和30例同期健康体检者(健康组)的空腹静脉血,通过qRT-PCR检测血清HTRA3 mRNA水平。将RF/6A细胞随机分为对照组、NC-sh组和HTRA3-sh组,使用Lipofectamine2000将NC-shRNA和HTRA3-shRNA慢病毒载体分别转染到NC-sh组和HTRA3-sh组RF/6A细胞中,通过qRT-PCR和Western blot检测HTRA3的转染情况。将RF/6A细胞随机分为N组、H组、H+NC-sh组和H+HTRA3-sh组,细胞转染后,N组RF/6A细胞在完全RPMI 1640培养基中进行常氧培养,其他组细胞在添加200 mmol·L^(-1)氯化钴(CoCl_(2))的RPMI 1640培养基中进行低氧培养,使用Matrigel测定小管形成。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、CNV组、CNV+NC-sh组和CNV+HTRA3-sh组,每组12只。对照组为未建模的小鼠,其他组为激光诱导的CNV模型小鼠。向CNV+NC-sh组和CNV+HTRA3-sh组小鼠玻璃体内分别注射1μL滴度为1×10^(11)TU·mL^(-1)的NC-shRNA和HTRA3-shRNA慢病毒载体。对照组和CNV组小鼠注射PBS。注射后7 d,对小鼠进行荧光素眼底血管造影(FFA)检测和眼球苏木精伊红(HE)染色。通过qRT-PCR检测RF/6A细胞或各组小鼠脉络膜组织中HTRA3、类几丁质酶3样蛋白3(Ym-1)、精氨酸酶1(Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平。通过Western blot检测RF/6A细胞或脉络膜组织中HTRA3、VEGF和细胞核核因子κB(NF-κB) p65的蛋白表达水平。结果与健康组比较,wAMD组患者的血清HTRA3 mRNA水平升高(t=11.804,P<0.001)。与对照组和NC-sh组比较,HTRA3-sh组RF/6A细胞的HTRA3 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。与N组比较,H组RF/6A细胞的闭合管腔数量、HTRA3和VEGF的mRNA和蛋白表达水平均增加(均为P<0.05)。与H+NC-sh组比较,H+HTRA3-sh组RF/6A细胞的闭合管腔数量、HTRA3和VEGF的mRNA和蛋白表达水平均减少(均为P<0.05)。与对照组比较,CNV组小鼠的HTRA3的mRNA和蛋白表达水平增加,CNV相对荧光强度升高,Ym-1和Arg-1 mRNA水平升高,iNOS和COX-2 mRNA水平降低,细胞核NF-κB p65蛋白表达水平升高(均为P<0.05)。与CNV+NC-sh组比较,CNV+HTRA3-sh组小鼠的HTRA3的mRNA和蛋白表达水平减少,CNV相对荧光强度降低,Ym-1和Arg-1 mRNA水平降低,iNOS和COX-2 mRNA水平升高,细胞核NF-κB p65蛋白表达水平降低(均为P<0.05)。结论下调HTRA3可抑制CNV形成和M2型巨噬细胞极化,HTRA3可能是防治wAMD的重要潜在靶点。

关键词：湿性年龄相关性黄斑变性脉络膜新生血管 HtrA丝氨酸肽酶3 M2型巨噬细胞极化

巨大视网膜色素上皮撕裂合并渗出性视网膜脱离

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中华眼底病杂志 2024年第4期40卷 317-318页

作者：郭浩轶聂晓东郭希让河南省立眼科医院、河南省人民医院眼科、河南省眼科研究所郑州450003

患者男,72岁。因颜面部及四肢水肿5个月,双眼视物模糊3 d到河南省立眼科医院就诊。既往糖尿病史12年,胰岛素治疗,随机血糖12.8 mmol/L;糖尿病肾病半年;高血压史5年,血压控制差,波动在170~180/100~110 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)之间;低... 详细信息

患者男,72岁。因颜面部及四肢水肿5个月,双眼视物模糊3 d到河南省立眼科医院就诊。既往糖尿病史12年,胰岛素治疗,随机血糖12.8 mmol/L;糖尿病肾病半年;高血压史5年,血压控制差,波动在170~180/100~110 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)之间;低蛋白血症半年。肝功能检测,总蛋白38.9 mmol/L,白蛋白19.0 mmol/L。尿常规检测,尿蛋白(+++),尿糖(++)。24 h尿蛋白定量检测,尿蛋白4.54 g/L,24 h尿蛋白7.72 g/24 h。眼部检查:右眼视力眼前数指,左眼视力0.1。右眼、左眼眼压分别为18.0、16.2 mm Hg。

关键词：巨大视网膜色素上皮撕裂渗出性视网膜脱离图片精粹

circRNA CPT1A调控PTEN在糖尿病视网膜病变患者神经组织病变中的作用

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眼科新进展 2024年第3期44卷 212-216页

作者：尹丹韩莎莎刘颖李跃峰李勇衡水市人民医院眼科河北省衡水市053000

目的研究circRNA肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)在糖尿病视网膜病变(DR)患者中的表达情况,并探讨其对神经组织病变的作用。方法选取我院2019年1月至2022年1月收治的2型糖尿病患者80例(102眼),其中无DR(NDR)患者22例(28眼)为NDR组,非增生型... 详细信息

目的研究circRNA肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)在糖尿病视网膜病变(DR)患者中的表达情况,并探讨其对神经组织病变的作用。方法选取我院2019年1月至2022年1月收治的2型糖尿病患者80例(102眼),其中无DR(NDR)患者22例(28眼)为NDR组,非增生型DR(NPDR)患者38例(48眼)为NPDR组,增生型DR(PDR)患者20例26眼为PDR组。采用OCTA检查患者视盘周围视网膜神经纤维层(pRNFL)厚度、黄斑神经节细胞复合体(GCC)厚度,采用Western blot检测患者外周血磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN),采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测患者外周血circRNA CPT1A。比较3组患者外周血circRNA CPT1A、PTEN以及pRNFL、GCC厚度,并采用Pearson相关分析患者circRNA CPT1A与PTEN、pRNFL厚度、GCC厚度的相关性。结果 PDR组患者外周血circRNA CPT1A均高于NDR组、NPDR组,而PDR组患者外周血PTEN均低于NDR组、NPDR组(均为P0.05)。Pearson相关性分析结果显示,患者外周血circRNA CPT1A与PTEN呈负相关性(P<0.05)。随着疾病严重程度的增加,pRNFL以及GCC厚度均呈降低趋势,NDR组患者的整体、上半部分、下半部分pRNFL厚度以及GCC厚度均高于NPDR组(均为P<0.05),NPDR组患者以上指标均高于PDR组(均为P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,患者外周血circRNA CPT1A分别与受检眼的整体、上半部分、下半部分pRNFL厚度以及GCC厚度均呈负相关性(均为P<0.05)。结论随着DR严重程度的增加,DR患者外周血circRNA CPT1A呈增加趋势,且与外周血PTEN、pRNFL厚度以及GCC厚度呈负相关性,其作用机制可能为circRNA CPT1A负性调控PTEN的表达,从而参与DR的发生、发展。

关键词： circRNA肉碱棕榈酰转移酶1A 磷酸酶-张力蛋白基因糖尿病视网膜病变神经组织病变