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Hopx报告基因小鼠谱系示踪乳腺干细胞

中国组织工程研究 2024年

作者：石建云李文静彭映贾振华张书锦谭露露原一桐杜若琛山西医科大学细胞生理学教育部重点实验室内分泌代谢病山西省重点实验室山西医科大学生理学系山西医科大学细胞生理学教育部重点实验室山西医科大学动物中心

背景：乳腺干细胞对于乳腺组织的发育和稳态维持十分重要。乳腺癌的发生与乳腺干细胞有着紧密联系。最新研究表明，Hopx作为形态发生和细胞分化的重要转录调节因子已被证实在神经、肠道、毛囊等多种成体干细胞中表达，然而其在乳腺中的... 详细信息

背景：乳腺干细胞对于乳腺组织的发育和稳态维持十分重要。乳腺癌的发生与乳腺干细胞有着紧密联系。最新研究表明，Hopx作为形态发生和细胞分化的重要转录调节因子已被证实在神经、肠道、毛囊等多种成体干细胞中表达，然而其在乳腺中的作用至今尚未见报道。目的：探究Hopx是否可以作为乳腺干细胞的特异性标志物。方法：(1)选取8周龄雌性Hopx-LacZ转基因小鼠，利用β-半乳糖苷酶染色检测Hopx在乳腺组织中的本底表达情况。(2)选取4周龄、6周龄、8周龄及妊娠14.5 d的雌性野生型小鼠，分别进行乳腺全组织洋红染色及K14、K8免疫荧光染色。(3)选取8周龄与妊娠17.5 d的雌性HopxCreERT2;Rosa26LacZ转基因小鼠，进行乳腺β-半乳糖苷酶染色。(4)选取4周龄雌性Hopx-CreERT2;Rosa26LacZ转基因小鼠，通过腹腔注射他莫昔芬(隔天注射1次，注射3次)来激活Cre/loxp系统，注射后4周进行乳腺β-半乳糖苷酶染色；选取8周龄雌性Hopx-CreERT2;Rosa26LacZ转基因小鼠，通过腹腔注射他莫昔芬(隔天注射1次，注射3次)来激活Cre/loxp系统，末次注射后4,10周进行乳腺β-半乳糖苷酶染色。(5)选取8周龄雌性Hopx-CreERT2; Rosa26LacZ转基因小鼠，通过腹腔注射他莫昔芬(隔天注射1次，注射3次)来激活Cre/loxp系统，注射后2周使HopxCreERT2;Rosa26LacZ转基因小鼠怀孕，对第1次妊娠17.5 d、第3次妊娠17.5 d的小鼠乳腺组织进行β-半乳糖苷酶染色。结果与结论：(1)β-半乳糖苷酶染色结果显示，8周龄Hopx-LacZ转基因小鼠的乳腺导管内确实含有Hopx阳性细胞且位于基底上皮，数量较少。(2)乳腺全组织染色及免疫荧光染色结果显示，野生型小鼠的乳腺在青春期、成熟期及妊娠期等不同发育阶段具有各自相应时期依赖性的特征，并且经历了一系列复杂的上皮重塑过程。(3)β-半乳糖苷酶染色结果显示，与8周龄雌性Hopx-CreERT2; Rosa26LacZ转基因小鼠相比，妊娠17.5 d的Hopx-CreERT2; Rosa26LacZ转基因小鼠乳腺导管内Hopx标记阳性细胞增多。(4)β-半乳糖苷酶染色结果显示，4,8周龄雌性Hopx-CreERT2; Rosa26LacZ转基因小鼠他莫昔芬注射后的乳腺Hopx标记阳性细胞位于基底上皮，数量较少。(5)β-半乳糖苷酶染色结果显示，第1次妊娠17.5 d、第3次妊娠17.5 d的小鼠乳腺内的Hopx标记阳性细胞位于腺泡周围的基底上皮，数量较多，并且第3次妊娠17.5 d的Hopx标记阳性细胞数量更多。(6)结果表明，Hopx报告基因标记的细胞为休眠乳腺干细胞，负责妊娠期间乳腺的生长，对腺泡形成有贡献。

关键词： Hopx 乳腺干细胞谱系追踪妊娠期腺泡形成

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Hopx报告基因小鼠谱系示踪乳腺干细胞

中国组织工程研究 2025年第13期 2720-2727页

关键词： Hopx 乳腺干细胞谱系追踪妊娠期腺泡形成

双瓶选择饮酒致酒精依赖小鼠海马中长链非编码RNA的表达谱分析

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中国生物制品学杂志 2024年第5期37卷 559-565页

作者：薛琳媛武南南封芮芮赵欣张宇殷丽天山西医科大学基础医学院生理学系、细胞生理学教育部重点实验室山西太原030001

目的对双瓶选择饮酒致酒精依赖小鼠海马中的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)表达谱进行分析。方法通过双瓶选择饮酒法建立酒精依赖小鼠模型,同时设对照组(饮水)。选取酒精组酒精偏好率>60%且酒精饮用量>10 g/(kg·24 h)的雄... 详细信息

目的对双瓶选择饮酒致酒精依赖小鼠海马中的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)表达谱进行分析。方法通过双瓶选择饮酒法建立酒精依赖小鼠模型,同时设对照组(饮水)。选取酒精组酒精偏好率>60%且酒精饮用量>10 g/(kg·24 h)的雄性小鼠3只,随机抽取对照组雄性小鼠3只,分离双侧海马脑组织,液氮保存。采用Agilent084388芯片对小鼠海马脑组织RNA样本lncRNA和mRNA进行测序分析,lncRNA表达谱芯片(ncRNA microarray)检测样本中lncRNA的差异表达情况。基因功能(Gene Ontology,GO)和信号通路数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析差异表达lncRNA可能涉及的生物学过程及参与的信号通路。Pearson相关分析预测与每个差异表达lncRNA共表达的编码基因,超几何分布检验法计算每个对应转录因子条目中差异基因富集的显著性,Cytoscape软件绘制可视化网络图。结果与对照组比较,酒精组小鼠海马组织差异表达的lncRNA共855个(FC≥2.0,P细胞表面正向调控、GTP酶活性、细胞囊泡运输差异最明显;其主要参与的信号通路有丙酸酯代谢通路、牛磺酸代谢通路、细胞外基质受体和AMPK信号通路。最富集的转录因子为FOXL1和LHX3,分别有25和21个对应共表达基因。结论通过高通量基因表达谱芯片分析,获得了lncRNA和mRNA可能的关键调控位点。本研究为海马脑区酒精依赖相关分子机制的研究提供了实验依据。

关键词：长链非编码RNA 酒精依赖海马双瓶选择饮酒基因芯片

阿戈美拉汀缓解APP/PS1转基因小鼠焦虑及抑郁样行为的机制

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中国组织工程研究 2024年

作者：李甜任俞桦高艳萍苏强山西医科大学基础医学院生理学系细胞生理学教育部重点实验室细胞生理学山西省重点实验室山西医科大学汾阳学院医学检验系

背景：阿戈美拉汀在临床上用于治疗焦虑、抑郁等相关精神行为异常。前期研究证实，阿戈美拉汀能够有效缓解阿尔茨海默病模型小鼠的认知行为、海马突触可塑性及脑病理特征，然而阿戈美拉汀能否改善阿尔茨海默病模型小鼠的焦虑和抑郁样行... 详细信息

背景：阿戈美拉汀在临床上用于治疗焦虑、抑郁等相关精神行为异常。前期研究证实，阿戈美拉汀能够有效缓解阿尔茨海默病模型小鼠的认知行为、海马突触可塑性及脑病理特征，然而阿戈美拉汀能否改善阿尔茨海默病模型小鼠的焦虑和抑郁样行为仍不清楚。目的：探究阿戈美拉汀对APP/PS1(阿尔茨海默病)转基因小鼠焦虑和抑郁样行为的改善效应及分子机制。方法：(1)将18只APP/PS1转基因小鼠随机分为模型对照组(n=9)、模型干预组(n=9)，将18只野生型小鼠随机分为对照组(n=9)、干预组(n=9)，模型干预组与干预组小鼠腹腔注射阿戈美拉汀10 mg/(kg·d)，连续注射31 d后进行高架十字迷宫、强迫游泳行为学实验与海马组织mRNA测序。(2)取小鼠海马神经元细胞株(HT22)、脑微血管内皮细胞株(bEnd.3)，分别分4组培养：空白组不加入任何药物，药物组加入20μmol/L阿戈美拉汀，模型组加入10μmol/L β-淀粉样蛋白1-42，实验组加入10μmol/L β-淀粉样蛋白1-42+20μmol/L阿戈美拉汀，培养24 h后，免疫印迹检测HT22细胞S416p-tau和S9p-GSK3β的蛋白表达，免疫印迹检测bEnd.3细胞低密度脂蛋白受体相关蛋白1、糖基化终产物受体的蛋白表达。结果与结论：(1)在高架十字迷宫实验中，模型对照组小鼠的探索开放臂时间与开放臂进入次数均少于对照组(P 细胞S416p-tau蛋白表达高于空白组(P 实验组HT22细胞S416p-tau蛋白表达低于模型组(P 细胞S9p-GSK3β蛋白表达高于空白组(P 实验组HT22细胞S9p-GSK3β蛋白表达高于模型组(P 实验组bEnd.3细胞低密度脂蛋白受体相关蛋白1蛋白表达高于模型组(P <0.05)。(3)结果表明，阿戈美拉汀可通过促进脑内β-淀粉样蛋白和tau的清除来缓解阿尔茨海默病小鼠的焦虑和抑郁样行为。

关键词：阿尔茨海默病阿戈美拉汀 APP/PS1转基因小鼠焦虑抑郁

苯乙酰胺衍生物的合成及其对棕榈酸诱导的胰岛细胞损伤的保护作用

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中国药理学通报 2024年第6期40卷 1130-1136页

作者：李爱云关丽苏琬真鲁洋洋张胜杰李伟泽焦向英山西医科大学生理学系细胞生理学教育部重点实验室山西太原030001 西安医学院药学院陕西西安710021

目的以不同取代的苯乙酸为原料设计合成一系列苯乙酰胺衍生物,并考察化合物对棕榈酸(palmitate acid,PA)诱导的胰岛细胞损伤的保护作用。方法培养Min6细胞,分为B空白对照组、PA处理组、PA+化合物组,采用CCK-8法检测细胞活性;通过Western... 详细信息

目的以不同取代的苯乙酸为原料设计合成一系列苯乙酰胺衍生物,并考察化合物对棕榈酸(palmitate acid,PA)诱导的胰岛细胞损伤的保护作用。方法培养Min6细胞,分为B空白对照组、PA处理组、PA+化合物组,采用CCK-8法检测细胞活性;通过Western blot观察细胞TXNIP、NLRP3的蛋白表达;MDA、SOD试剂盒检测MDA含量以及SOD活性;胰岛素试剂盒检测Min6细胞胰岛素的分泌量。结果共设计合成10个苯乙酰胺衍生物,结构经1H NMR、ESI-MS确证;药理活性研究表明,大多数化合物对胰岛细胞有保护作用,化合物LY-6和LY-8相较PA模型组(细胞活力为61.4%)保护作用较强,其中LY-6细胞活力最高,达到104.9%;与PA组相比,LY-6和LY-8组TXNIP和NLRP3蛋白表达降低,MDA含量减少,SOD活性增加,胰岛素分泌量增加。结论LY-6和LY-8可通过抑制TXNIP的表达,减少对NLRP3炎性小体的激活,减少MDA的产生、增加SOD的活性,最终减少胰岛β细胞的凋亡,增加胰岛素的分泌量。故化合物LY-6可以作为潜在的抗糖尿病新化学实体。

关键词：糖尿病硫氧还蛋白相互作用蛋白苯乙酰胺衍生物氧化应激 NLRP3炎症小体胰岛细胞保护

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基于网络药理学和体外实验探讨冠心宁注射液改善心肌肥厚的作用

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山西大学学报(自然科学版) 2024年

作者：申晶苗俊秋王德平石建云左琳封启龙曹济民山西医科大学基础医学院细胞生理学教育部重点实验室山西医科大学药学院

本文采用网络药理学方法，对冠心宁（Guanxinning, GXN）注射液改善心肌肥厚的关键靶点及作用机制进行探讨，并在细胞水平上进行验证。首先，利用中药系统药理学数据库分析平台TCMSP对GXN注射液活性成分进行筛选，并结合BATMAN-TCM、Swi... 详细信息

本文采用网络药理学方法，对冠心宁（Guanxinning, GXN）注射液改善心肌肥厚的关键靶点及作用机制进行探讨，并在细胞水平上进行验证。首先，利用中药系统药理学数据库分析平台TCMSP对GXN注射液活性成分进行筛选，并结合BATMAN-TCM、Swiss Target Prediction、OMIM、GeneCards和DisGeNet数据库分析其改善心肌肥厚的潜在靶点。通过String数据库和Cytoscape 3.9.1软件构建潜在靶点间相互作用网络图并筛选核心靶点。将核心靶点输入Metascape数据库进行GO和KEGG富集分析，探索GXN抗心肌肥厚的潜在机制。其次，采用Autodock平台进行分子对接，预测活性成分与关键靶点的结合度。最后，在细胞水平上对GXN注射液改善心肌肥厚的作用机制进行验证。网络药理学筛选得到GXN注射液活性成分68个，GXN注射液改善心肌肥厚的关键靶点100个，主要MAPK信号通路、JAK-STAT信号通路、钙信号通路等。分子对接结果显示GXN注射液活性成分新隐丹参酮、米尔顿酮和脱氧隐丹参酮与MAPK1、SRC和MAPK3对接较为稳定。细胞实验结果显示，GXN可通过MAPK信号通路抑制心肌细胞肥大。本研究表明GXN注射液改善心肌肥厚具有多成分、多靶点和多途径的特点。

关键词：网络药理学分子对接冠心宁注射液心肌肥厚 MAPK信号通路

海马ICAM5对小鼠饮酒行为的影响及机制研究

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中国比较医学杂志 2024年第6期34卷 1-10页

作者：胡佳佳杨转芳孙喜喆袁娟娟程燕张宇殷丽天山西医科大学基础医学院生理学系细胞生理学教育部重点实验室太原030001

目的分析小鼠海马组织中ICAM5对小鼠饮酒偏好、运动能力等行为的影响,并分析其可能的作用机制。方法选取8周龄C57BL/6J雄性小鼠,随机将小鼠分为饮水组和饮酒组,建立双瓶饮酒模型。检测ICAM5在小鼠内侧前额叶皮层、海马及杏仁核脑区的... 详细信息

目的分析小鼠海马组织中ICAM5对小鼠饮酒偏好、运动能力等行为的影响,并分析其可能的作用机制。方法选取8周龄C57BL/6J雄性小鼠,随机将小鼠分为饮水组和饮酒组,建立双瓶饮酒模型。检测ICAM5在小鼠内侧前额叶皮层、海马及杏仁核脑区的表达改变。构建ICAM5过表达腺相关病毒,通过脑立体定位方法注射至海马脑区。通过免疫荧光技术和Western blot检测海马组织ICAM5的蛋白表达水平。通过旷场实验、条件位置偏爱实验和翻正反射实验,观察小鼠对酒精的偏好性以及ICAM5对小鼠行为的影响。通过Western blot检测分析树突棘F-actin/G-actin比值,高尔基染色方法检测树突棘形态。结果在双瓶饮酒模型中,与饮水组相比,饮酒组小鼠海马脑区ICAM5的表达显著下降(P实验中,AAV-ICAM5组小鼠较对照组小鼠在旷场中心位置停留时间(P实验中,测试期AAV-ICAM5小鼠在伴药箱的停留时间较对照组小鼠明显降低(P实验中,过表达ICAM5可以明显降低小鼠镇静潜伏期(P细胞骨架蛋白的表达,形成树突棘结构可塑性改变,最终引起小鼠饮酒和运动行为的改变。

关键词：酒精依赖 ICAM5 海马树突棘结构 CPP模型

精氨酸甲基转移酶在肝细胞癌中作用的研究进展

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生理科学进展 2024年第3期55卷 232-239页

作者：赵文慧王德平郭跃虎李建国燕子山西医科大学基础医学院生理学系山西医科大学细胞生理学教育部重点实验室武警山西省总队医院太原030001

肝细胞癌是一种异质性疾病,其发生的复杂性与表观遗传修饰有关。哺乳动物蛋白质精氨酸甲基转移酶(protein arginine methyltransferases,PRMTs)可介导细胞的表观遗传修饰,并在肝细胞癌的发生、发展、治疗及预后中发挥重要作用。PRMTs催... 详细信息

肝细胞癌是一种异质性疾病,其发生的复杂性与表观遗传修饰有关。哺乳动物蛋白质精氨酸甲基转移酶(protein arginine methyltransferases,PRMTs)可介导细胞的表观遗传修饰,并在肝细胞癌的发生、发展、治疗及预后中发挥重要作用。PRMTs催化组蛋白和非组蛋白靶蛋白的精氨酸残基发生单甲基化和(对称的及不对称的)二甲基化。PRMT1、2、3、4、5、6、7、9等家族成员在肝细胞癌中的作用不同,涉及癌细胞生长、转移、治疗和预后等。选择性和特异性PRMTs抑制剂的研究开发有望为临床肝细胞癌的治疗和预后提供新思路和新靶点。本文重点概述PRMTs在肝细胞癌中作用的机制研究进展。

关键词：肝细胞癌蛋白质精氨酸甲基转移酶蛋白质精氨酸甲基转移酶抑制剂表观遗传修饰

一种改良原代海马神经元糖氧剥夺/复氧模型的建立

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中国生物制品学杂志 2024年第4期37卷 471-474,480页

作者：史晋朝马娜张倩陈静钟锦周阳李建国山西医科大学细胞生理学教育部重点实验室山西太原030001

目的建立一种改良的原代海马神经元糖氧剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)模型。方法从SD乳鼠脑组织中分离海马组织,制备海马神经元悬液,通过抑制胶质细胞数量,将海马神经元悬液分为无抑制、部分抑制和完全... 详细信息

目的建立一种改良的原代海马神经元糖氧剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)模型。方法从SD乳鼠脑组织中分离海马组织,制备海马神经元悬液,通过抑制胶质细胞数量,将海马神经元悬液分为无抑制、部分抑制和完全抑制组,经镜下观察细胞形态,确定原代海马神经元的最佳培养条件。在此基础上,将海马神经元进行糖氧剥夺0.5、1和1.5 h,再分别复氧0、24、36和48 h,ELISA法检测培养液中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)含量,CCK-8法测定神经元存活率,以LDH含量较高,对神经元存活率影响较小的条件为原代海马神经元OGD/R模型的最佳建模条件。结果部分抑制胶质细胞时,神经元纯度较高,生长状态均一良好,胶质细胞与海马神经元数量比约1∶1,可保留胶质细胞与神经元间的结构和功能联系。与OGD 1 h组比较,OGD 1 h/R 36 h时,LDH含量显著升高(t=4.31,P 0.05)。结论获得了胶质细胞与神经元数量约为1∶1的原代海马神经元,且生长状态良好。OGD 1 h/R 36 h条件下建立的OGD/R模型,神经元树突缩短,活力受损,存活率较高。本研究为后续相关疾病的发病机制深入研究奠定了基础。

关键词：海马神经元原代糖氧剥夺/复氧模型乳酸脱氢酶细胞存活率