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棉粕发酵菌株M-15的筛选及全基因组测序分析

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微生物学通报 2024年

作者：李佳徐明洋高同国王伟姜军坡赵朔封晓娜谢艺菲朱宝成河北农业大学生命科学学院

【背景】棉粕中的游离棉酚致使其释放营养价值及蛋白饲料应用受到限制，微生物发酵是棉粕脱酚的有效策略。【目的】筛选具有棉酚降解活性的发酵菌株，初步探索菌株降解棉酚机制。【方法】以棉酚降解率为检测指标筛选棉酚高效降解菌株，... 详细信息

【背景】棉粕中的游离棉酚致使其释放营养价值及蛋白饲料应用受到限制，微生物发酵是棉粕脱酚的有效策略。【目的】筛选具有棉酚降解活性的发酵菌株，初步探索菌株降解棉酚机制。【方法】以棉酚降解率为检测指标筛选棉酚高效降解菌株，采用形态学观察、生理生化鉴定及基于16S rRNA基因序列的系统发育分析进行菌株鉴定。同时，分析筛选到的菌株代谢棉酚可能的中间产物及对多环芳烃类物质代谢关键中间产物的利用能力，并通过菌株全基因组测序发掘菌株中相关代谢酶对应基因的存在。【结果】从保定近郊某土壤样品中筛选出一株具有较高棉酚降解活性的菌株，命名为M-15。该菌株发酵棉粕，可将其中的游离棉酚含量由882.07 mg/kg降至32.38 mg/kg，降解率高达96.33%；菌株M-15被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。此外，菌株M-15降解棉酚的培养液中检测到关键中间产物有水杨酸、邻苯二酚及龙胆酸，结合该菌株对多环芳烃类物质代谢关键中间产物利用能力，推测菌株M-15发酵棉粕降解棉酚可能的代谢途径由棉酚的联萘结构分解形成萘类化合物，再经水杨酸途径形成邻苯二酚或龙胆酸，通过邻苯二酚和龙胆酸分别进行间位开环，最后由三羧酸循环途径代谢。【结论】筛选得到高效降解棉酚的菌株M-15，初步推定其应该通过水杨酸途径降解棉酚，为微生物发酵棉粕脱毒技术的开发与应用奠定了一定的理论基础。

关键词：棉粕枯草芽孢杆菌固态发酵棉酚脱毒

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酶法提取头孢菌素C菌渣中蛋白质工艺优化

河南农业大学学报 2024年

作者：赵会如刘柯妤张立美田甜甜张继冉徐淑霞张世敏吴坤河南农业大学生命科学学院

【目的】探究酶法高效提取头孢菌素C菌渣中蛋白质的工艺条件，拓展抗生素菌渣资源化利用途径。【方法】以蛋白质提取率为指标，在溶菌酶、蜗牛酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶6种酶最适条件下，对头孢菌素C菌渣蛋... 详细信息

【目的】探究酶法高效提取头孢菌素C菌渣中蛋白质的工艺条件，拓展抗生素菌渣资源化利用途径。【方法】以蛋白质提取率为指标，在溶菌酶、蜗牛酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶6种酶最适条件下，对头孢菌素C菌渣蛋白质进行提取，确定最适提取酶；考察酶添加质量分数、温度、时间、pH值和V/mL∶m（头孢菌素C菌渣/g）(以下简称液固比)对头孢菌素C菌渣中蛋白质提取的影响，通过响应面试验优化确定最佳提取工艺条件。【结果】溶菌酶酶解法提取头孢菌素C菌渣中蛋白质的效果最好，且主要受时间、pH值、液固比影响，影响顺序依次为液固比＞时间＞pH值。利用溶菌酶提取头孢菌素C菌渣蛋白质的最佳工艺条件为液固比7.0∶1，时间99 min，pH值7.2，酶添加质量分数1.0%，温度35 ℃，在此条件下头孢菌素C菌渣中蛋白质提取率最高达到69.06%。【结论】溶菌酶适用于酶解和综合利用头孢菌素C菌渣，能够快速、有效地提取菌渣中的蛋白质。

关键词：头孢菌素C 抗生素菌渣溶菌酶蛋白质提取资源化利用

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重组ABHD17A的表达及功能验证

河南农业大学学报 2024年

作者：史雪盟王靖仪陈帅武张鑫彤温鑫毛琳许君河南农业大学生命科学学院

【目的】通过表达重组α/β水解酶超家族17A(α/β-hydrolase domain-containing 17A，ABHD17A)，验证其在蛋白质棕榈酰化修饰及病毒感染过程中的调控作用，为动物病毒性疾病的治疗提供理论依据及新思路。【方法】原核诱导重组ABHD17A... 详细信息

【目的】通过表达重组α/β水解酶超家族17A(α/β-hydrolase domain-containing 17A，ABHD17A)，验证其在蛋白质棕榈酰化修饰及病毒感染过程中的调控作用，为动物病毒性疾病的治疗提供理论依据及新思路。【方法】原核诱导重组ABHD17A表达，通过酰基–聚乙二醇交换法(Acyl-PEGyl Exchange Gel-Shift，APEGS)及实时荧光定量PCR、免疫印迹等技术检测重组ABHD17A对N-Ras棕榈酰化修饰以及乙脑病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)感染的影响。【结果】成功将abhd17a编码序列克隆至pGEX-4T-1原核表达载体，将其转化入BL21(DE3)大肠杆菌诱导表达，发现在22 ℃、1 mmol·L-1异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside，IPTG)诱导可得到高浓度的可溶性重组ABHD17A。利用亲和层析纯化出重组ABHD17A，经考马斯亮蓝染色及免疫印迹确认了该蛋白的特异性表达。将重组ABHD17A与表达有Flag-N-Ras的HEK293细胞裂解液在4 ℃孵育12 h，借助APEGS法检测N-Ras的棕榈酰化，结果显示，重组ABHD17A显著下调N-Ras棕榈酰化修饰水平，表明重组ABHD17A在体外可发挥去棕榈酰化酶的作用。将重组ABHD17A孵育HEK293细胞24 h后，感染JEV，24 h后采用实时荧光定量PCR以及免疫印迹法分别检测JEV mRNA及蛋白水平，发现孵育重组ABHD17A能显著抑制JEV感染，推测ABDH17A参与免疫调控。【结论】证实了纯化的重组ABHD17A可特异性去棕榈酰化N-Ras，并抑制JEV感染。

关键词： ABHD17A 蛋白表达纯化酰基-聚乙二醇交换法棕榈酰化修饰病毒感染

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蒸汽爆破忍冬藤饲料添加剂的益生功效研究

河南农业大学学报 2024年

作者：孙榕泽张旭屹彭仕乐谢慧毛国涛宋安东张宏森王风芹河南农业大学生命科学学院

【目的】探究蒸汽爆破忍冬藤（Lonicerae jaPonicae Caulis）的益生功效，为蒸汽爆破忍冬藤饲料添加剂的应用提供理论依据。【方法】以4种蒸汽爆破处理的忍冬藤（SELC-HOX、SELC-HCA、SELC-M1和SELC-M2）为研究对象，利用1，1-二苯基-2... 详细信息

【目的】探究蒸汽爆破忍冬藤（Lonicerae jaPonicae Caulis）的益生功效，为蒸汽爆破忍冬藤饲料添加剂的应用提供理论依据。【方法】以4种蒸汽爆破处理的忍冬藤（SELC-HOX、SELC-HCA、SELC-M1和SELC-M2）为研究对象，利用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和2，2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）法对比分析了不同蒸汽爆破忍冬藤的自由基清除能力；借助体外模拟试验和16S rRNA基因扩增子测序技术研究了不同蒸汽爆破忍冬藤对猪肠道微生物多样性、菌群结构的影响。【结果】与未蒸汽爆破忍冬藤相比，蒸汽爆破忍冬藤具有更强的自由基清除能力。体外模拟试验结果表明，蒸汽爆破忍冬藤能够显著降低猪肠道梭菌属1(Clostridium＿sensu＿stricto＿1)、致病性肠埃希氏菌属-志贺氏菌属（Escherichia-Shigella）和柠檬酸杆菌属（Citrobacter）的相对丰度，显著提高乳杆菌属（Lactobacillus）相对丰度；相关性分析结果表明，蒸汽爆破忍冬藤的自由基清除能力及猪肠道乳杆菌属、链球菌属（StrePtococcus）、肠球菌属（Enterococcus）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）等益生菌属相对丰度与低聚木糖含量显著正相关，梭菌属1、致病性肠埃希氏菌属-志贺氏菌属和柠檬酸杆菌属相对丰度与低聚木糖含量显著负相关。【结论】蒸汽爆破忍冬藤SELC-HOX具有更强的自由基清除能力和肠道微生物菌群调控功效，益生功效显著，可作为饲料添加剂用于畜牧养殖。

关键词：忍冬藤蒸汽爆破低聚木糖绿原酸益生功效

侵染河北土贝母的中国南瓜曲叶病毒分子特征分析

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植物病理学报 2023年第3期53卷 539-545页

作者：杜江张丽崔丽艳马振男王晨燕王德富牛颜冰山西农业大学生命科学学院太谷030801

0引言双生病毒是一类单链环状DNA病毒,为害多种农作物并造成巨大的经济损失。按照基因组结构、寄主范围和传播介体的不同,双生病毒科(Geminiviridae)被划分为14个属,其中菜豆金色黄花叶病毒属(Begomovirus)是双生病毒科中病毒种类最多,... 详细信息

0引言双生病毒是一类单链环状DNA病毒,为害多种农作物并造成巨大的经济损失。按照基因组结构、寄主范围和传播介体的不同,双生病毒科(Geminiviridae)被划分为14个属,其中菜豆金色黄花叶病毒属(Begomovirus)是双生病毒科中病毒种类最多,且造成危害最严重的病毒属[1-2]。中国南瓜曲叶病毒(squash leaf curl china virus,SLCCNV)属于菜豆金色黄花叶病毒属成员,主要由烟粉虱传播,其基因组包含大小为2.5~3.0kb的DNA-A和DNA-B,DNA-A编码AV1、AV2、AC1、AC2、AC3和AC56个蛋白,DNA-B编码BV1和BC12个蛋白[3-4]。

关键词：中国南瓜双生病毒曲叶病毒寄主范围传播介体土贝母基因组结构病毒属

环核苷酸门控离子通道蛋白在植物生长发育及胁迫响应中的研究进展

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河南农业大学学报 2024年

作者：王亚玲闫鹏涛张丽娟左传顺杨浩河南农业大学生命科学学院

通过分析环核苷酸门控离子通道（Cyclic nucleotide gated ion channels，CNGC）蛋白结构、组织和细胞定位及CNGC通道活性调节机制，对CNGC蛋白在植物生长发育和胁迫响应中的作用进行全面综述，重点探讨了CNGC蛋白调控植物花粉管生长的... 详细信息

通过分析环核苷酸门控离子通道（Cyclic nucleotide gated ion channels，CNGC）蛋白结构、组织和细胞定位及CNGC通道活性调节机制，对CNGC蛋白在植物生长发育和胁迫响应中的作用进行全面综述，重点探讨了CNGC蛋白调控植物花粉管生长的机制，并对植物CNGC未来的研究方向进行了展望，能够为深入理解CNGC在植物中的作用机制提供理论参考。

关键词：环核苷酸门控离子通道环核苷酸生长发育胁迫响应花粉管生长

制药工程专业实践教学改革初探——以内蒙古农业大学生命科学学院生物技术制药课程改革为例

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内蒙古师范大学学报（教育科学版） 2017年第1期30卷 149-151页

作者：巩培刘竟然牧骑勒赵世敏王玉珍孟建宇内蒙古农业大学生命科学学院内蒙古呼和浩特010020

课程设置不合理,教学形式单一,内容偏重验证性实验;实验学分比例过低,所占学时少,考核形式单一,是目前生物技术制药实践教学存在的问题。只有进一步加强和改进实验教学(即增加实验课学分,提高实验课成绩比例;引导学生提早进入实验室,增... 详细信息

课程设置不合理,教学形式单一,内容偏重验证性实验;实验学分比例过低,所占学时少,考核形式单一,是目前生物技术制药实践教学存在的问题。只有进一步加强和改进实验教学(即增加实验课学分,提高实验课成绩比例;引导学生提早进入实验室,增加对实验的接触;开设创新型实验,激发学生的学习兴趣;改革实验课考核方法),建立制药工程(生物)实践基地,才能全面提高本科生实践教学效果,培养基础牢、素质高、能力强的复合型生物医药和研发人才。

关键词：生物技术制药实践教学改革

生命科学类专业毕业实习实践与改革——以内蒙古农业大学生命科学学院为例

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内蒙古农业大学学报（社会科学版） 2017年第3期19卷 65-68页

作者：杨燕王瑞刚李国婧内蒙古农业大学生命科学学院内蒙古呼和浩特010018

为提高生命科学专业学生毕业实习效果,增强学生综合运用所学专业知识的能力,进一步完善人才培养体系,根据目前毕业实习中存在的实习形式单一、实习时间少和实习效果差三个主要问题,提出解决这些主要问题的方案,提高学生对毕业实习重要... 详细信息

为提高生命科学专业学生毕业实习效果,增强学生综合运用所学专业知识的能力,进一步完善人才培养体系,根据目前毕业实习中存在的实习形式单一、实习时间少和实习效果差三个主要问题,提出解决这些主要问题的方案,提高学生对毕业实习重要性的认识,进一步开拓和巩固校外实习基地,倡导形式多样的毕业实习,机动学生毕业实习时间和要求形式多样的实习论文。

关键词：理科生命科学毕业生实习实践改革

基于转录组测序研究健康三益菌对肉鸡脂质代谢的影响

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畜牧兽医学报 2022年第4期53卷 1154-1164页

作者：张利环贾浩王燕飞张若男刘璇山西农业大学生命科学学院太谷030801

旨在探讨健康三益菌调控肉鸡脂质代谢的主要基因和通路,阐明其影响脂质代谢的作用机理。本研究选取200只1日龄雄性黄麻肉鸡随机分为2组,每组5个重复,每个重复20只,对照组正常饮水,益生菌组在饮水中添加1%健康三益菌复合制剂(干酪乳杆菌... 详细信息

旨在探讨健康三益菌调控肉鸡脂质代谢的主要基因和通路,阐明其影响脂质代谢的作用机理。本研究选取200只1日龄雄性黄麻肉鸡随机分为2组,每组5个重复,每个重复20只,对照组正常饮水,益生菌组在饮水中添加1%健康三益菌复合制剂(干酪乳杆菌∶嗜酸乳杆菌∶双歧杆菌=1∶1∶2),试验期为42 d。测定肉鸡肉质品质,并对回肠进行转录组测序分析。结果表明,与对照组相比,添加健康三益菌组肉鸡腹脂率和剪切力有降低趋势,胸肌率和肌内脂肪有增加趋势(P>0.05)。转录组测序结果分析表明,与脂质代谢相关显著差异基因有12个,较对照组而言,益生菌组中LPL、PLIN1、GOS2、FABP4、RBP7、THRSP、FABP3、SCD、THEM4和CYP2C18表达量显著上调(P<0.05),CYP7B1和GGT5表达量显著下调(P<0.05);这些基因主要富集在对脂肪酸的反应、乳糜微粒重构、对脂质的反应、白脂肪细胞分化和长链脂肪酸结合等GO条目以及甾类激素生物合成、PPAR信号通路、花生四烯酸代谢、脂肪细胞中的脂肪分解等相关的重要通路。结果表明,健康三益菌可以通过调控脂肪沉积、转运、分解等相关基因的表达和相关通路来影响肉鸡脂质代谢,可能降低腹脂含量,促进肌内脂肪沉积。

关键词：健康三益菌肉鸡脂质代谢转录组