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大鼠脊髓损伤早期PI3K/Akt/mTOR信号转导通路的活性改变及其与后肢运动功能恢复的关系

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上海交通大学学报（医学版） 2015年第6期35卷 804-808页

作者：刘杨苗宇船山西中医学院病理学教研室太原030619

目的探讨大鼠脊髓损伤(SCI)早期PI3K/Akt/mTOR信号转导通路活性改变及其对后肢运动功能恢复的影响。方法 SD大鼠随机分为正常组、对照组和4个实验组(伤后1、3、5、7 d组),其中对照组和实验组大鼠采用Allen's法建立SCI模型。对照组大鼠... 详细信息

目的探讨大鼠脊髓损伤(SCI)早期PI3K/Akt/mTOR信号转导通路活性改变及其对后肢运动功能恢复的影响。方法 SD大鼠随机分为正常组、对照组和4个实验组(伤后1、3、5、7 d组),其中对照组和实验组大鼠采用Allen's法建立SCI模型。对照组大鼠给予鞘内注射20μL LY294002(PI3K/Akt/mTOR信号转导通路抑制剂),正常组和实验组大鼠给予鞘内注射等体积无菌蒸馏水。采用联合行为评分(CBS)法对各组大鼠后肢运动能力进行评定;采用RT-PCR和免疫组织化学法检测损伤节段脊髓组织PI3K/Akt/mTOR信号转导通路活性的改变。结果在实验组,随着损伤时间的延长,大鼠双侧后肢运动功能好转,CBS评分降低;损伤节段脊髓组织中,PI3K、Akt、mTOR mRNA的相对表达量上调,PI3K、Akt、mTOR蛋白表达阳性细胞数增多。与伤后7 d组比较,对照组大鼠双侧后肢肌力恢复及运动功能均较差,损伤节段脊髓组织PI3K、Akt、mTOR mRNA的相对表达量及蛋白表达阳性细胞数较少。结论 PI3K/Akt/mTOR信号转导通路与大鼠SCI早期神经功能重建有关,可以作为临床治疗的靶点。

关键词：脊髓损伤 PI3K/Akt/mTOR信号转导通路 RT-PCR 免疫组织化学

大鼠不同程度脊髓损伤后再生基因蛋白-2的表达变化

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上海交通大学学报（医学版） 2013年第11期33卷 1454-1457页

作者：刘杨苗宇船山西中医学院病理学教研室太原030024

目的比较大鼠不同程度脊髓损伤(SCI)后再生基因蛋白(Reg)-2的表达差异。方法 30只SPF级Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、轻伤组(致伤能量25 g·cm)、中度损伤组(50 g·cm)和重伤组(75 g·cm)。各损伤组大鼠采用自制打击装置建立SC... 详细信息

目的比较大鼠不同程度脊髓损伤(SCI)后再生基因蛋白(Reg)-2的表达差异。方法 30只SPF级Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、轻伤组(致伤能量25 g·cm)、中度损伤组(50 g·cm)和重伤组(75 g·cm)。各损伤组大鼠采用自制打击装置建立SCI动物模型,并于伤后1、3、5和7 d采用联合行为评分(CBS)检查大鼠神经功能恢复情况。伤后7 d处死动物,取损伤节段脊髓组织,采用RT-PCR和免疫组织化学SABC法检测Reg-2 mRNA和Reg-2的表达。结果各损伤组大鼠CBS较正常组显著升高(P<0.05),并随损伤时间的延长而逐渐降低,各损伤组组内比较,差异具有统计学意义(P<0.05);Reg-2 mRNA表达量和Reg-2阳性细胞数在各损伤组均显著高于正常组(P<0.05),并且随损伤程度的加重而升高,各损伤组之间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。轻伤组Reg-2阳性细胞以神经元为主,而在重伤组以神经胶质细胞为主。结论 SCI后Reg-2表达开始升高,其表达水平具有一定的损伤程度依赖性。

关键词：脊髓损伤损伤程度再生基因蛋白-2 RT—PCR 免疫组织化学

木犀草素改善脊髓损伤大鼠血清诱导的心肌细胞死亡

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中国组织工程研究 2025年第1期29卷 38-43页

作者：张稳稳徐梦如田园张立飞师姝王宁原媛王丽郝海虎山西中医药大学第一临床学院山西省晋中市030600 山西医科大学第三医院山西白求恩医院山西医学科学院骨科山西省太原市030000 山西医科大学基础医学研究中心山西省晋中市030600 山西医科大学基础医学院病理教研室山西省晋中市030600

背景:脊髓损伤导致的心功能不全是脊髓损伤患者死亡的重要原因,但具体机制并不清楚。因此,揭示脊髓损伤患者出现心功能不全的机制对于提高患者的生存质量和生存率有重要意义。目的:探讨木犀草素改善脊髓损伤大鼠血清诱导心肌细胞死亡的... 详细信息

背景:脊髓损伤导致的心功能不全是脊髓损伤患者死亡的重要原因,但具体机制并不清楚。因此,揭示脊髓损伤患者出现心功能不全的机制对于提高患者的生存质量和生存率有重要意义。目的:探讨木犀草素改善脊髓损伤大鼠血清诱导心肌细胞死亡的作用机制。方法:使用Allen’s冲击仪损伤雄性SD大鼠脊椎T9-T11,进行脊髓损伤造模,设置假手术组作为对照,取各组大鼠血清。将H9c2细胞分为空白对照组、假手术大鼠血清组、脊髓损伤大鼠血清组以及木犀草素预处理组,空白对照组为普通培养基培养,假手术大鼠血清组使用含体积分数10%假手术大鼠血清的培养基培养,脊髓损伤大鼠血清组使用含体积分数10%脊髓损伤大鼠血清的培养基培养,木犀草素预处理组预先使用含有终浓度为20μmol/L木犀草素的培养基培养心肌细胞4 h,之后更换含体积分数10%脊髓损伤大鼠血清的培养基培养,培养24 h后使用CCK-8法检测各组H9c2心肌细胞的存活率,采用Western blot检测各组H9c2心肌细胞自噬相关蛋白LC3及p62的蛋白表达。结果与结论:与空白对照组相比,假手术大鼠血清组细胞存活率无明显改变(P>0.05);与假手术大鼠血清组相比,脊髓损伤大鼠血清组细胞存活率显著降低(P<0.01),LC3蛋白表达显著降低(P<0.05),p62蛋白表达显著升高(P<0.05);与脊髓损伤大鼠血清组相比,木犀草素预处理组细胞存活率明显回升(P<0.0001),LC3蛋白表达显著升高(P<0.05),p62蛋白表达显著降低(P<0.05)。结果表明:木犀草素可能通过促进自噬进而改善脊髓损伤大鼠血清诱导的心肌细胞死亡。

关键词：脊髓损伤血清 H9c2细胞自噬木犀草素心功能不全

大鼠脊髓损伤模型的改良及伤后再生基因-2蛋白的表达变化

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中国康复医学杂志 2012年第12期27卷 1102-1105页

作者：刘杨苗宇船郭继龙山西中医学院病理学教研室太原030024

目的:制备改良的大鼠脊髓损伤(SCI)动物模型,并探讨再生基因(Reg)-2蛋白在SCI后的表达规律。方法:采用36只SD大鼠。参考Allen法,使用自制打击装置致大鼠T13段脊髓中度损伤。以行为联合评分法(CBS)评定模型的可靠性。免疫印迹法和免疫组... 详细信息

目的:制备改良的大鼠脊髓损伤(SCI)动物模型,并探讨再生基因(Reg)-2蛋白在SCI后的表达规律。方法:采用36只SD大鼠。参考Allen法,使用自制打击装置致大鼠T13段脊髓中度损伤。以行为联合评分法(CBS)评定模型的可靠性。免疫印迹法和免疫组织化学(SABC)法对正常对照组、伤后第1天、第2天、第3天、第5天和第7天的大鼠脊髓组织中的Reg-2蛋白进行检测。结果:SCI后大鼠一般情况符合临床损伤特点,且稳定性强;各损伤组大鼠神经功能联合评分均呈明显下降趋势,与正常对照组比较差异具有显著性意义(P<0.05);在正常对照组大鼠脊髓神经元内有微量的Reg-2蛋白表达(阳性细胞数为17.3±2.6,Reg-2相对表达量为0.038±0.007)。SCI后1天,大鼠脊髓内Reg-2表达的免疫阳性细胞随着损伤时间的推移逐渐增多,至伤后第7天仍呈高水平表达(阳性细胞数为90.0±3.6,相对表达量为0.694±0.018),各组间比较差异具有显著性意义(P<0.05)。伤后3天内,Reg-2免疫阳性细胞以后角神经元为主,而伤后7天以前角神经元和胶质细胞为主。结论:本实验装置制作的大鼠SCI模型稳定、可靠;SCI后Reg-2蛋白表达开始升高,对受损神经起保护和修复作用。

关键词：脊髓损伤再生基因-2蛋白免疫印迹免疫组化

独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的影响

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中国组织工程研究 2025年第23期29卷 4915-4923页

作者：岳进茹张育敏刘静淑步亚男吴婧若陈佳王建茹山西中医药大学基础医学院国家中医药管理局基因表达调控实验室山西省晋中市030606 山西医科大学基础医学院山西省太原市030012

背景:独活寄生汤是治疗类风湿关节炎的经典方剂,但具体作用机制尚不清楚,细胞外囊泡具有细胞间通讯及传递信号的强大功能,可能是该方剂发挥作用的信号载体。目的:探讨独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、... 详细信息

背景:独活寄生汤是治疗类风湿关节炎的经典方剂,但具体作用机制尚不清楚,细胞外囊泡具有细胞间通讯及传递信号的强大功能,可能是该方剂发挥作用的信号载体。目的:探讨独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法:肿瘤坏死因子α体外诱导构建类风湿关节炎滑膜成纤维细胞模型,实验分为5组:正常组、模型组、独活寄生汤含药血清组、独活寄生汤含药血清细胞外囊泡组、生理盐水血清细胞外囊泡组。采用CCK-8法筛选独活寄生汤含药血清及独活寄生汤含药血清细胞外囊泡作用的最佳浓度及时间;ELISA检测细胞上清炎症因子水平;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力及迁移能力;Hoechst染色检测细胞凋亡情况;qRT-PCR及Western blot检测细胞凋亡相关基因及蛋白表达。结果与结论:(1)独活寄生汤含药血清作用的最佳体积分数为10%,独活寄生汤含药血清细胞外囊泡作用的最佳质量浓度为10 ng/mL,二者作用的最佳时间均为24 h;(2)与模型组相比,独活寄生汤含药血清、独活寄生汤含药血清细胞外囊泡及生理盐水血清细胞外囊泡均能抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的炎症因子表达(P<0.05)、划痕愈合(P<0.05)、迁移及侵袭(P<0.05),且独活寄生汤含药血清细胞外囊泡的抑制作用更为突出(P<0.05);(3)独活寄生汤含药血清及独活寄生汤含药血清细胞外囊泡均可促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的凋亡;(4)与模型组相比,独活寄生汤含药血清、独活寄生汤含药血清细胞外囊泡及生理盐水血清细胞外囊泡均可增加促凋亡因子Caspase-3、Caspase-9、Bax表达(P<0.05),降低抑凋亡因子Bcl-2表达(P<0.05),且独活寄生汤含药血清细胞外囊泡对凋亡相关因子的调节作用更显著。上述实验结果表明独活寄生汤含药血清细胞外囊泡可以抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的过度增殖、迁移、侵袭并促进其凋亡。

关键词：独活寄生汤类风湿关节炎滑膜成纤维细胞细胞外囊泡增殖迁移侵袭凋亡

β-羟基丁酸改善β淀粉样蛋白1-42诱导小鼠海马神经元HT22细胞的能量障碍

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中国组织工程研究 2025年第13期29卷 2713-2719页

作者：叶育采付朝晶李燕李欣儒柴世凡蔡红艳王昭君山西医科大学基础医学院生理学系细胞生理学教育部重点实验室山西省太原市030000 山西医科大学医学科学院山西省太原市030000 山西医科大学基础医学院微生物与免疫学教研室山西省太原市030000

背景:阿尔茨海默病患者存在严重的脑能量障碍,近年来基于酮体干预的脑能量拯救策略在阿尔茨海默病的治疗中越来越受到重视。目的:探讨β-羟基丁酸能否改善β淀粉样蛋白1-42(β-amyloid protein 1-42,Aβ_(1-42))诱导的小鼠海马神经元HT2... 详细信息

背景:阿尔茨海默病患者存在严重的脑能量障碍,近年来基于酮体干预的脑能量拯救策略在阿尔茨海默病的治疗中越来越受到重视。目的:探讨β-羟基丁酸能否改善β淀粉样蛋白1-42(β-amyloid protein 1-42,Aβ_(1-42))诱导的小鼠海马神经元HT22细胞能量障碍。方法:将HT22细胞分为4组,分别为对照组、β-羟基丁酸组、Aβ_(1-42)组、Aβ_(1-42)+β-羟基丁酸组。使用相应试剂盒检测HT22细胞的存活率、ATP水平、α-酮戊二酸脱氢酶活性、Na^(+)K^(+)-ATP酶活性、线粒体膜电位及活性氧水平。结果与结论:与对照组相比,Aβ_(1-42)组HT22细胞的存活率、ATP水平、α-酮戊二酸脱氢酶活性、Na^(+)K^(+)-ATP酶活性、线粒体膜电位均显著降低(P<0.05),活性氧水平显著升高(P<0.05)。与Aβ_(1-42)组相比,Aβ_(1-42)+β-羟基丁酸组HT22细胞的存活率、ATP水平、α-酮戊二酸脱氢酶活性、Na^(+)K^(+)-ATP酶活性、线粒体膜电位均显著升高(P<0.05),活性氧水平显著降低(P<0.05)。结果表明:β-羟基丁酸提高了线粒体生物能量功能和细胞存活率,最终改善了Aβ_(1-42)诱导的HT22细胞能量障碍。

关键词：阿尔茨海默病 HT22细胞 β-羟基丁酸线粒体生物能量功能能量障碍三磷酸腺苷

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胃黏膜活检幽门螺杆菌染色方法比较

中华病理学杂志 2009年第2期38卷 129-130页

作者：徐爱凤梁锐杨建民郝利芬山西中医学院病理学教研室太原030024 山西中医学院中西医结合医院病理科

幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，HP）是一种革兰阴性杆菌，人群中HP的感染率较高，其感染与慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌等相关，清除HP有利于胃黏膜炎症程度的减轻。检测HP感染是诊断、药物疗效分析等方面的重要手段，检测方法较多，... 详细信息

幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，HP）是一种革兰阴性杆菌，人群中HP的感染率较高，其感染与慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌等相关，清除HP有利于胃黏膜炎症程度的减轻。检测HP感染是诊断、药物疗效分析等方面的重要手段，检测方法较多，每种方法各有优点及不足，

关键词：幽门螺杆菌胃黏膜活检染色方法革兰阴性杆菌 HP感染消化性溃疡慢性胃炎炎症程度

二仙丸加减方含药血清抑制巨噬细胞焦亡的物质基础和作用机制

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 4029-4037页

作者：李思源王瑜茹徐烨郭地南楠刘杨赵杰郝慧琴山西中医药大学第三临床学院山西省晋中市030619 山西中医药大学中西医结合基础实验室山西省晋中市030619 经方扶阳山西省重点实验室山西省太原市030013

背景:课题组前期研究发现二仙丸加减方可以缓解胶原诱导性关节炎大鼠炎症反应,但其作用机制尚需进一步验证。目的:分析二仙丸加减方入血成分,观察二仙丸加减方含药血清对J774A.1巨噬细胞焦亡的影响。方法:①二仙丸加减方入血成分分析:... 详细信息

背景:课题组前期研究发现二仙丸加减方可以缓解胶原诱导性关节炎大鼠炎症反应,但其作用机制尚需进一步验证。目的:分析二仙丸加减方入血成分,观察二仙丸加减方含药血清对J774A.1巨噬细胞焦亡的影响。方法:①二仙丸加减方入血成分分析:采用超高效液相色谱-高分辨质谱(UHPLC-HRMS)对二仙丸加减方及入血成分进行检测和鉴定。②二仙丸加减方含药血清对J774A.1巨噬细胞焦亡的影响:采用分子对接技术对二仙丸加减方入血成分倍半萜类化合物与NLRP3进行初步验证。将J774A.1巨噬细胞随机分为空白对照组、脂多糖+三磷酸腺苷组及脂多糖+三磷酸腺苷+二仙丸加减方含药血清低(2.5%)、中(5%)、高(10%)剂量组。根据试剂盒说明书检测各组细胞上清液中乳酸脱氢酶释放情况;ELISA检测各组细胞上清液中白细胞介素1β、白细胞介素18水平;Hoechst/PI染色法检测各组细胞膜受损情况;Western blot检测各组细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD及GSDMD-N蛋白表达水平。结果与结论:①共鉴定出二仙丸加减方药效成分32个,入血成分21个,其中入血成分主要包括多种倍半萜类化合物;②分子对接结果显示3-O-Acetyl-13-deoxyphomenone、Incensol oxide、Atractylenolide Ⅲ、Rupestonic acid、3,7-Dihydroxy-9,11-eremophiladien-8-one与NLRP3之间结合活性较好;③与空白对照组相比,脂多糖+三磷酸腺苷组细胞上清中乳酸脱氢酶活性及白细胞介素1β、白细胞介素18水平均显著升高(P<0.001),Hoechst/PI染色可见PI阳性细胞数量显著增加。脂多糖+三磷酸腺苷+二仙丸加减方含药血清各组上述指标均显示不同程度降低;④与空白对照组相比,脂多糖+三磷酸腺苷组NLRP3、Caspase-1、GSDMD及GSDMD-N蛋白表达显著升高(P<0.05);与脂多糖+三磷酸腺苷组相比,脂多糖+三磷酸腺苷+二仙丸加减方含药血清各组细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD及GSDMD-N蛋白表达均有不同程度降低(P<0.05),且具有一定的剂量依赖性。结果表明:二仙丸加减方含药血清可能通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路抑制J774A.1巨噬细胞焦亡。

关键词：二仙丸加减方含药血清细胞焦亡 J774A.1巨噬细胞倍半萜类

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喉返神经对大鼠甲状腺激素分泌的影响

生理学报 1995年第1期47卷 85-88页

作者：康玉明张桂芳山西中医学院病理教研室佳木斯医学院生理教研室

观察了喉返神经对大鼠血清甲状腺素水平和甲状腺摄碘功能的影响：（１）切断大鼠单侧喉返神经后血清甲状腺素（Ｔ４）水平升高，如于切断后立即电刺激其外周端，在３０ｍｉｎ内血清Ｔ４水平甚至降至对照值之下，事先给以阿托品，可阻断... 详细信息

观察了喉返神经对大鼠血清甲状腺素水平和甲状腺摄碘功能的影响：（１）切断大鼠单侧喉返神经后血清甲状腺素（Ｔ４）水平升高，如于切断后立即电刺激其外周端，在３０ｍｉｎ内血清Ｔ４水平甚至降至对照值之下，事先给以阿托品，可阻断电刺激引起的效应。（２）切断单侧喉返神经后该侧甲状腺摄碘增多。以上结果表明，喉返神经抑制甲状腺素的分泌，这作用可能是由Ｍ受体介导调节的。

关键词：喉返神经甲状腺激素摄碘功能分泌