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半理性设计提升4-α-糖基转移酶歧化活性并应用于工业生产

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食品与发酵工业 2024年

作者：谢静雯李超慧韦猛赵伟张金祥山东福洋生物科技股份有限公司康彤(上海)生物研发有限公司

4-α-糖基转移酶（4-alpha-glucanotransferase， 4αGT）是一种多功能的糖基转移酶，在淀粉工业上具有广泛的应用，如淀粉改性及海藻糖、麦芽寡糖、大环糊精、糖原等淀粉深加工产品的制备。其中，以淀粉为原料制备海藻糖的工业生产过... 详细信息

4-α-糖基转移酶（4-alpha-glucanotransferase， 4αGT）是一种多功能的糖基转移酶，在淀粉工业上具有广泛的应用，如淀粉改性及海藻糖、麦芽寡糖、大环糊精、糖原等淀粉深加工产品的制备。其中，以淀粉为原料制备海藻糖的工业生产过程中，借助4αGT的歧化活性，能够减少葡萄糖、麦芽糖等副产物的含量，从而提升海藻糖产量。在该研究中，采用半理性设计策略对Synechocystis sp. PCC 6803来源4αGT进行了改造。研究基于HotSpot Wizard在线工具及残基所处空间位置选择突变热点，利用4-α-糖基转移酶水解淀粉产生透明圈的能力对18 000个转化子进行高通量筛选，确定了一个对4αGT活性起着关键性作用的位点，对其进行饱和突变，最终获得活性提升的突变体A470F，歧化活性较野生型提升了17%。在工业化生产的条件下，突变体A470F在海藻糖制备上，较野生型也有所提升。通过对突变位点附近底物通道及作用力进行分析，为4αGT的活性改造提供了理论支持，并且为淀粉糖工业的制造效率提升提供了新思路。

关键词：海藻糖 4-α-糖基转移酶半理性设计歧化活性

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溴虫氟苯双酰胺与氟噁唑酰胺生物活性对比

农药 2024年

作者：唐剑峰韩君迟会伟王盈民宋文涛山东中农联合生物科技股份有限公司

[目的]明确作为γ-氨基丁酸（GABA）门控氯离子通道变构调节剂类杀虫剂的溴虫氟苯双酰胺和氟噁唑酰胺的生物活性差异。[方法]采用浸虫浸叶、喷雾法等测定2个杀虫剂对小菜蛾、二化螟、烟粉虱、桃蚜、西花蓟马和朱砂叶螨的生物活性。[结... 详细信息

[目的]明确作为γ-氨基丁酸（GABA）门控氯离子通道变构调节剂类杀虫剂的溴虫氟苯双酰胺和氟噁唑酰胺的生物活性差异。[方法]采用浸虫浸叶、喷雾法等测定2个杀虫剂对小菜蛾、二化螟、烟粉虱、桃蚜、西花蓟马和朱砂叶螨的生物活性。[结果]2个杀虫剂对小菜蛾、二化螟、烟粉虱、桃蚜和西花蓟马的LC50值均在1.7 mg/L以下，溴虫氟苯双酰胺杀虫活性相对更高。氟噁唑酰胺对朱砂叶螨活性较高，而溴虫氟苯双酰胺活性较低。[结论]2个药剂均可用于农业害虫的防治，氟噁唑酰胺还可用于害螨的防治。

关键词： γ-氨基丁酸门控氯离子通道受体间苯二酰胺类杀虫剂异噁唑啉类杀虫剂生物活性溴虫氟苯双酰胺氟噁唑酰胺

20%螺虫乙酯·呋虫胺悬浮剂的HPLC分析

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农药 2024年

作者：唐剑峰牛纪胜王丹丹李颖刘杰山东中农联合生物科技股份有限公司山东智荟检测科技有限公司

[目的]建立检测20%螺虫乙酯·呋虫胺SC中有效成分的HPLC分析方法。[方法]采用ZORBAX Eclipse Plus-C18反相柱，以乙腈-0.05%磷酸水溶液（0～4 min体积比15:85；5～16 min体积比60:40）为流动相，在波长220 nm条件下检测试样中螺虫乙酯... 详细信息

[目的]建立检测20%螺虫乙酯·呋虫胺SC中有效成分的HPLC分析方法。[方法]采用ZORBAX Eclipse Plus-C18反相柱，以乙腈-0.05%磷酸水溶液（0～4 min体积比15:85；5～16 min体积比60:40）为流动相，在波长220 nm条件下检测试样中螺虫乙酯和呋虫胺的浓度。[结果]螺虫乙酯的线性相关系数为0.9998，呋虫胺的线性相关系数为0.9999，相对标准偏差均为0.4%，平均回收率分别为99.92%和99.86%。[结论]该方法易操作、精密度和准确度高，适用于复配制剂中螺虫乙酯和呋虫胺的定量分析。

关键词：螺虫乙酯呋虫胺高效液相色谱分析

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溴虫氟苯双酰胺与氟唑酰胺生物活性比较

农药 2024年第9期 680-684页

作者：唐剑峰韩君迟会伟王盈民宋文涛山东中农联合生物科技股份有限公司

[目的]明确作为γ-氨基丁酸（GABA）门控氯离子通道变构调节剂类杀虫剂的溴虫氟苯双酰胺和氟唑酰胺的生物活性差异。[方法]采用浸虫浸叶、喷雾法等测定2个杀虫剂对小菜蛾、二化螟、烟粉虱、桃蚜、西花蓟马和朱砂叶螨的生物活性。[结果]... 详细信息

[目的]明确作为γ-氨基丁酸（GABA）门控氯离子通道变构调节剂类杀虫剂的溴虫氟苯双酰胺和氟唑酰胺的生物活性差异。[方法]采用浸虫浸叶、喷雾法等测定2个杀虫剂对小菜蛾、二化螟、烟粉虱、桃蚜、西花蓟马和朱砂叶螨的生物活性。[结果]2个杀虫剂对小菜蛾、二化螟、烟粉虱、桃蚜和西花蓟马的LC50值均在1.7 mg/L以下，溴虫氟苯双酰胺杀虫活性相对更高。氟唑酰胺对朱砂叶螨活性较高，而溴虫氟苯双酰胺活性较低。[结论]2个药剂均可用于农业害虫的防治，氟唑酰胺还可用于害螨的防治。

关键词：氨基丁酸门控氯离子通道受体生物活性溴虫氟苯双酰胺氟唑酰胺

可变色ELISA样品稀释液制备及其性能检测

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畜牧与兽医 2024年第10期 57-62页

作者：董林谢金文孟卫芹王艳萍刘吉山王金良曲光刚山东省滨州畜牧兽医研究院山东绿都生物科技有限公司

为解决酶联免疫吸附法(ELISA)检测过程中样品错加、漏检问题，研制开发了一种可变色ELISA试剂盒样品稀释指示剂，明确了其制备方法，并开展了性能检测评价及其在检测过程的应用特性。可变色稀释指示剂制备方法为：在0.01 mol/L PBS(pH=7... 详细信息

为解决酶联免疫吸附法(ELISA)检测过程中样品错加、漏检问题，研制开发了一种可变色ELISA试剂盒样品稀释指示剂，明确了其制备方法，并开展了性能检测评价及其在检测过程的应用特性。可变色稀释指示剂制备方法为：在0.01 mol/L PBS(pH=7.2)基础缓冲液中，加入血清蛋白组分、0.01%可变色指示剂和特效稳定剂，充分溶解后再添加Krovin750防腐剂，定容后即可。结果：制备的可变色ELISA样品稀释显色反应明显，可用于ELISA试剂盒检测中的血清或血浆样本稀释，有效避免检测过程样品跳孔和错加现象；同时对样品具有良好保护，显著提高了检测结果的准确性和稳定性，实现了对样品的有效保护，降低了样品基质背景干扰，提高了检测结果的准确性和稳定性。

关键词：可变色 ELISA 样品稀释液性能评价

猪用疫苗中牛病毒性腹泻病毒和非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测方法的建立及验证

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中国生物制品学杂志 2024年第9期 1122-1126+1132页

作者：于新友李天芝张松林沈志强山东省滨州畜牧兽医研究院山东绿都生物科技有限公司

目的建立同时检测猪用疫苗中牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）和非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）2种病原的双重荧光PCR方法，并进行验证及初步应用。方法根据NCBI中收录的BVDV5'UTR和ASFV VP72... 详细信息

目的建立同时检测猪用疫苗中牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）和非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）2种病原的双重荧光PCR方法，并进行验证及初步应用。方法根据NCBI中收录的BVDV5'UTR和ASFV VP72基因序列，分别设计1对特异性引物和1条TaqMan探针，建立一种能同时检测BVDV和ASFV的双重荧光PCR方法。对建立的方法进行灵敏度、特异性和精密性验证。采用建立的方法分别检测猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）活疫苗和猪瘟病毒（classical swine fever virus,CSFV）活疫苗（76批次）以及添加BVDV和重组质粒pMD-VP72的猪PRV活疫苗（各5瓶）中的BVDV和ASFV，并按照《中华人民共和国兽药典》三部（2020版）和中华人民共和国农业农村部公告第172号规定的方法分别对BVDV和ASFV进行复核检测。结果建立的双重荧光PCR法最低可检测浓度为4.2拷贝/μL的BVDV重组质粒和浓度为8.7拷贝/μL的ASFV重组质粒；不与其他常见病原体发生交叉反应；重复性和试验间精密性检测的变异系数（CV）均不高于2%。结论本实验建立的双重荧光PCR方法灵敏度高，特异性强，精密性好，可用于猪用疫苗中外源病毒的快速检测及猪用疫苗等生物制品的质量控制。

关键词：牛病毒性腹泻病毒非洲猪瘟病毒荧光PCR TaqMan探针

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裸藻β-1,3-葡聚糖对断奶仔猪生长性能、血清炎症细胞因子含量及肠道菌群结构的影响

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动物营养学报 2024年第3期36卷 1588-1598页

作者：杨馥嘉陈静刘显军李海东葛冬冬曲盛卿刘景军沈阳农业大学动物科学与医学学院沈阳110866 沈阳博睿农牧科技有限公司沈阳110300 山东纳美达生物科技有限公司济南250100

本试验旨在研究裸藻β-1,3-葡聚糖对仔猪生长性能、血清炎症细胞因子含量及肠道菌群结构的影响,为裸藻β-1,3-葡聚糖的开发和应用提供依据。选取150头40日龄左右、体重[(13.06±0.26)kg]相近的“杜洛克×长白×大白猪”三元杂断奶仔猪,... 详细信息

本试验旨在研究裸藻β-1,3-葡聚糖对仔猪生长性能、血清炎症细胞因子含量及肠道菌群结构的影响,为裸藻β-1,3-葡聚糖的开发和应用提供依据。选取150头40日龄左右、体重[(13.06±0.26)kg]相近的“杜洛克×长白×大白猪”三元杂断奶仔猪,随机分为5个组,每组5个重复,每个重复6头猪。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加50、100、150 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖及100 mg/kg的酵母β-1,3-葡聚糖。预试期3 d,正试期28 d。结果表明:1)与对照组相比,饲粮中添加100 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖显著提高了断奶仔猪平均日采食量和平均日增重(P<0.05),显著降低了料重比(P<0.05)。2)与对照组相比,饲粮中添加50、100、150 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖及100 mg/kg的酵母β-1,3-葡聚糖显著提高了血清白细胞介素-1、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α含量(P<0.05)。3)与对照组相比,饲粮中添加50 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖显著提高了软壁菌门(Tenericutes)相对丰度(P<0.05),饲粮中添加50和100 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖显著提高了乳杆菌科(Lactoba⁃cillaceae)相对丰度(P<0.05),饲粮中添加50和150 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖显著降低了瘤胃球菌属(Ruminococcus)相对丰度(P<0.05)。4)与对照组相比,饲粮中添加100 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖显著提高了Chao1指数(P<0.05),饲粮中添加150 mg/kg的裸藻β-1,3-葡聚糖显著降低了Simpson指数(P<0.05)。Beta多样性分析发现,饲粮中添加100 mg/kg裸藻β-1,3-葡聚糖组与对照组物种相似性最高。由此可见,饲粮中添加适量裸藻β-1,3-葡聚糖能提高断奶仔猪生长性能,降低炎症反应,改善肠道菌群多样性和结构。本试验条件下,饲粮中添加100 mg/kg裸藻β-1,3-葡聚糖效果最好。

关键词：裸藻β-1,3-葡聚糖断奶仔猪生长性能炎症细胞因子肠道菌群结构

微生物发酵斑蝥黄对蛋鸡生产性能、蛋品质及血清生化指标的影响

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动物营养学报 2024年第8期36卷 4944-4956页

作者：曲丽马欣欣张柏林刘雯雯陈正杰王述柏青岛农业大学动物科技学院青岛266109 山东微研生物科技有限公司滨州256600

本试验旨在饲粮中研究添加不同水平微生物发酵斑蝥黄对蛋鸡生产性能、蛋品质及血清生化指标的影响。将540只海兰褐蛋鸡按体重和产蛋率均等原则分为6组,每组6个重复,每个重复15只鸡。1组为空白对照组,饲喂基础饲粮;2组为化学合成斑蝥黄... 详细信息

本试验旨在饲粮中研究添加不同水平微生物发酵斑蝥黄对蛋鸡生产性能、蛋品质及血清生化指标的影响。将540只海兰褐蛋鸡按体重和产蛋率均等原则分为6组,每组6个重复,每个重复15只鸡。1组为空白对照组,饲喂基础饲粮;2组为化学合成斑蝥黄对照组,在基础饲粮中添加6 mg/kg的化学合成斑蝥黄;3~6组为试验组,分别在基础饲粮中添加4、6、8、12 mg/kg的微生物发酵斑蝥黄。预试期7 d,正试期21 d。结果表明:1)各组之间产蛋率、平均蛋重、平均日采食量、料蛋比均无显著差异(P>0.05)。2)第7天,3组蛋壳强度显著高于1组(P0.05)。3)第7天,3、4组蛋黄胆固醇含量极显著低于1、2、6组(P0.05)。综上所述,饲粮中添加4~12 mg/kg的微生物发酵斑蝥黄可改善海兰褐蛋鸡蛋壳品质,提高蛋黄卵磷脂含量,降低蛋黄胆固醇含量,但对蛋黄的着色效果不及化学合成斑蝥黄。本试验条件下,饲粮中微生物发酵斑蝥黄的适宜添加水平为6~7 mg/kg。

关键词：微生物发酵斑蝥黄蛋鸡生产性能蛋品质血清生化指标

新型杀线虫剂三氟杀线酯拓展应用及抗性风险初探

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农药 2024年第5期63卷 386-390页

作者：赵恭文刘杰袁雪赵宝修杨绎崔建华唐剑峰山东中农联合生物科技股份有限公司济南250100

[目的]拓展三氟杀线酯作用靶标和应用作物,初步分析三氟杀线酯的抗性风险。[方法]采用离体浸虫法、田间药效试验、酶活性测定等方法筛选三氟杀线酯作用靶标和应用作物,分析三氟杀线酯的抗性风险。[结果]拓展应用方面,20 mg/L三氟杀线酯... 详细信息

[目的]拓展三氟杀线酯作用靶标和应用作物,初步分析三氟杀线酯的抗性风险。[方法]采用离体浸虫法、田间药效试验、酶活性测定等方法筛选三氟杀线酯作用靶标和应用作物,分析三氟杀线酯的抗性风险。[结果]拓展应用方面,20 mg/L三氟杀线酯对南方根结线虫、拟禾本科根结线虫、大豆孢囊线虫、小麦孢囊线虫室内杀线活性达到100%,明显优于20 mg/L噻唑膦处理;田间有效成分用量为2250 g a.i./hm^(2)时,三氟杀线酯对黄瓜、番茄、大姜、火龙果根结线虫的防治效果也显著高于噻唑膦,防效均超过80%。抗性风险分析方面,三氟杀线酯对乙酰胆碱酯酶抑制作用较弱,作用机理与噻唑膦不同;在噻唑膦高抗性区域,三氟杀线酯对黄瓜根结线虫依然有很好的防治效果,防效超过80%;三氟杀线酯和噻唑膦处理南方根结线虫后的中毒状态明显不同。[结论]三氟杀线酯是一种应用范围广,且与噻唑膦不存在交互抗性风险的新型杀线虫剂。

关键词：三氟杀线酯根结线虫杀线虫剂拓展应用抗性风险