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人CSF3蛋白的原核表达和纯化及其亚细胞定位

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中国病原生物学杂志 2024年第3期19卷 285-290,296页

作者：张平李贺刘晓宇李冰清岳盈盈山东第一医科大学(山东省医学科学院)临床与基础医学院(基础医学研究所)病原生物学系山东济南250000

目的粒细胞集落刺激因子(CSF3)作为免疫调控中的重要细胞因子,在中性粒细胞增殖分化的调控方面发挥关键作用。然而,在病原菌感染中CSF3的调控机制仍不清楚。本研究旨在通过原核表达人CSF3,并观察其在HEK-293T细胞中的亚细胞定位,为重组C... 详细信息

目的粒细胞集落刺激因子(CSF3)作为免疫调控中的重要细胞因子,在中性粒细胞增殖分化的调控方面发挥关键作用。然而,在病原菌感染中CSF3的调控机制仍不清楚。本研究旨在通过原核表达人CSF3,并观察其在HEK-293T细胞中的亚细胞定位,为重组CSF3药物开发以及揭示其在病原菌感染和免疫调控中的作用机制奠定基础。方法基于人CSF3的生物信息学分析,分别通过QuikChange和基因克隆获得CSF3 pGlO1和CSF3-pmCherry两种重组质粒。前者在大肠埃希菌原核表达系统中表达,并通过镍离子亲和层析和凝胶过滤层析进行蛋白纯化。后者通过jet-PEI试剂转染到HEK-293T细胞中,48 h后通过荧光共聚焦显微镜观察,确定其亚细胞定位。结果在原核系统中成功表达人CSF3蛋白,其相对分子质量为18.8×10^(3)。该蛋白的溶解性良好,PP酶酶切后蛋白浓度较高,但蛋白性质相对不稳定,对pH值和温度敏感,容易发生聚集和降解。将荧光融合质粒转染到HEK-293T细胞中48 h后观察,人CSF3-pmCherry蛋白定位在细胞质内,呈现出特定的定位和分布模式。结论成功构建人CSF3原核表达系统,获得纯度较高的CSF3蛋白。通过荧光融合技术确定CSF3-pmCherry蛋白主要定位在HEK-293T细胞质。为重组CSF3药物的开发及其在病原菌感染和免疫调控中的作用机制研究奠定了基础。

关键词：粒细胞集落刺激因子原核表达蛋白纯化亚细胞定位感染免疫

术中OCT引导的角膜精确缝合治疗严重急性水肿期圆锥角膜的疗效观察

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中华眼科杂志 2024年第2期60卷 147-155页

作者：李素霞王宁苏敏姜晓月高华史伟云山东第一医科大学附属眼科研究所、山东第一医科大学附属眼科医院(山东省眼科医院)山东省眼科学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地、山东第一医科大学眼科学院济南250021

目的观察术中相干光层析成像术(OCT)引导的精确角膜后弹力层裂口缝合术联合前房穿刺放液术、角膜热成型术治疗严重急性水肿期圆锥角膜的临床疗效。方法非随机对照试验。收集2017年6月至2021年7月间于山东省眼科医院行手术治疗的31例急... 详细信息

目的观察术中相干光层析成像术(OCT)引导的精确角膜后弹力层裂口缝合术联合前房穿刺放液术、角膜热成型术治疗严重急性水肿期圆锥角膜的临床疗效。方法非随机对照试验。收集2017年6月至2021年7月间于山东省眼科医院行手术治疗的31例急性水肿期圆锥角膜患者资料进行研究,其中男性30例,女性1例,年龄(19.80±5.80)岁(11~32岁)。其中18例应用术中OCT判断角膜后弹力层裂口的大小、位置和撕裂方向,行术中OCT引导的精确角膜后弹力层裂口缝合联合前房穿刺放液术、角膜热成型术的患者作为缝合组,与另外13例未进行缝合的患者进行对照。收集患者术前视力、角膜水肿直径、角膜厚度、后弹力层裂口长度等数据,采用裂隙灯显微镜、前节OCT等对两组患者首次手术后角膜水肿消退时间及后弹力层闭合情况等进行评估。水肿消退后2~4周进一步行深板层角膜移植术,比较两组患者术后角膜植床瘢痕修复情况及视力。结果缝合组18例患者术中角膜均准确缝合至近后弹力层的深基质层。缝合组和对照组术后角膜水肿消退时间分别为2.50(1.00,6.25)和7.00(6.00,10.50)d,后弹力层裂口愈合时间分别为7.50(7.00,12.00)和14.00(9.00,14.00)d,差异均有统计学意义(均P部顺利完成深板层角膜移植术,其中6例(6/18)发生术中角膜植床轻度植床渗水但未影响深板层角膜移植术。缝合组和对照组术后1年视力(最小分辨角的对数)分别为0.23±0.12和0.33±0.11,差异有统计学意义(P<0.05)。结论术中OCT引导的精确角膜后弹力层裂口缝合联合前房穿刺放液术、角膜热成型术治疗严重急性水肿期圆锥角膜,能够迅速减轻角膜水肿、促进后弹力层裂口的愈合,为后期板层角膜移植手术赢得更佳的视力。应用术中OCT引导能够准确定位角膜后弹力层裂口的位置、方向及角膜基质空洞的深度,有助于手术者精准缝合。

关键词：圆锥角膜角膜水肿角膜后弹力层缝合技术体层摄影术光学相干治疗结果

鼠伤寒沙门菌效应因子SteA蛋白的表达纯化与晶体培养

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中国病原生物学杂志 2024年第4期19卷 424-429,435页

作者：范丙乾刘晴刘瑞瑞王玉珍李冰清山东第一医科大学(山东省医学科学院)临床与基础医学院(基础医学研究所)病原生物学系山东济南250000

目的对鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteA进行原核表达与纯化,以期获得高质量蛋白和晶体,为SteA的活性检测及结构解析奠定基础。方法利用生物信息学分析方法,对SteA的氨基酸及核苷酸序列进行分析,了解蛋白性状与序列保守性;使用基因工程方法,将s... 详细信息

目的对鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteA进行原核表达与纯化,以期获得高质量蛋白和晶体,为SteA的活性检测及结构解析奠定基础。方法利用生物信息学分析方法,对SteA的氨基酸及核苷酸序列进行分析,了解蛋白性状与序列保守性;使用基因工程方法,将steA基因克隆到原核表达载体pGLO1上;使用大肠埃希菌BL21(DE3)进行SteA蛋白的外源表达;使用镍离子亲和层析,离子交换层析,凝胶过滤层析的方法对SteA蛋白进行体外纯化;使用蛋白结晶试剂盒对提纯的SteA蛋白进行晶体普筛,摸索适合的晶体生长条件并进行优化,培养高质量单晶用于结构解析。结果克隆出SteA全长及SteA 35-173 aa片段基因,并构建了SteA35-173 aa C58S突变体。SteA全长和SteA 35-173 aa C58S蛋白在大肠埃希菌感受态细胞BL21中成功表达,获得了无聚集的SteA蛋白,浓度为7.6 mg/mL。发现在1.2 mol/L Sodium phosphate monobasic/0.8 mol/L Potassium phosphate dibasic;0.1 mol/L CAPS/Sodium hydroxide pH 10.5;0.2 mol/L Lithium sulfate条件下能够获得晶体,条件优化获得可用于数据收集的高质量单晶。结论鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteA可在原核表达系统中稳定表达,且可溶性良好,Cys58对SteA二聚体的形成起到重要作用。SteA 35-173 C58S蛋白在磷酸盐和硫酸盐环境中易结晶。

关键词：鼠伤寒沙门菌 SteA 蛋白纯化晶体培养

眼外肌转位改良Yokoyama术治疗高度近视眼限制性内斜视的临床效果

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中华眼科杂志 2024年第1期60卷 72-77页

作者：杨莎单凤梅李洁冯雪莹王富华山东第一医科大学附属眼科研究所、山东第一医科大学附属眼科医院(山东省眼科医院)山东省眼科学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地、山东第一医科大学眼科学院济南250021

目的探讨眼外肌转位改良Yokoyama术治疗高度近视眼限制性内斜视的临床效果。方法回顾性病例系列研究。收集2017年2月至2022年2月在山东第一医科大学附属眼科医院就诊,接受眼外肌转位改良Yokoyama术治疗高度近视眼限制性内斜视的患者。... 详细信息

目的探讨眼外肌转位改良Yokoyama术治疗高度近视眼限制性内斜视的临床效果。方法回顾性病例系列研究。收集2017年2月至2022年2月在山东第一医科大学附属眼科医院就诊,接受眼外肌转位改良Yokoyama术治疗高度近视眼限制性内斜视的患者。术中充分分离上直肌及外直肌,于肌腹中央纵向钝性剖开向后延伸至肌止点后12~14 mm,将上直肌颞侧及外直肌上方1/2肌腹交叉转位固定到对侧肌肉止点,同时联合内直肌后退。于术后1周、1个月、3个月和6个月复诊,记录患者眼位、眼球运动、代偿头位改善情况,同视机检查客观斜视度数,眼眶CT检查眼外肌和眼球位置的改变,同时记录手术并发症。结果共纳入患者5例(8只眼),其中女性4例(7只眼),男性1例(1只眼);年龄(63±11)岁,眼轴长度(34.58±2.25)mm,术中内直肌后退(7.6±2.3)mm。所有患者术前眼位均为内下转位,角膜映光点水平范围为+15~>+45°,垂直范围为+15~+45°;外转及上转明显受限,运动受限程度均为-3(-4~-1)级。3例双眼患病和1例单眼患病患者代偿头位明显,1例单眼患病患者无代偿头位。术前眼眶CT提示上直肌向鼻侧移位、外直肌向下方移位,眼球从肌锥的颞上方疝出。术后6个月,所有患者眼位基本正位,同视机检查客观斜视度数水平范围为-4~+7°,垂直范围为0~+6°。所有患者眼球运动均明显改善,外转运动程度为-1级(-2~-1)、上转运动程度为-2级(-3~-1);代偿头位消失;眼眶CT提示眼球位于肌锥内;无眼前节缺血、肌肉粘连、病情复发、继发性青光眼、球壁刺穿等严重并发症发生。结论眼外肌转位改良Yokoyama术治疗高度近视眼限制性内斜视初步临床效果较好。

关键词：近视内斜视动眼肌眼外科手术

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组织工程角膜内皮移植研究进展

中华实验眼科杂志 2024年第2期42卷 192-197页

作者：贾艳妮(综述) 周庆军(审校) 史伟云(审校) 山东第一医科大学附属眼科研究所山东第一医科大学附属眼科医院(山东省眼科医院)山东省眼科学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地山东第一医科大学眼科学院济南250021

由于角膜供体材料严重短缺,穿透角膜移植术及角膜内皮移植术的临床广泛开展受到严重制约,其根本原因在于健康角膜内皮的增生能力有限。随着组织工程技术和细胞工程技术不断发展,组织工程角膜研究已取得一定进展,应用组织工程技术体外培... 详细信息

由于角膜供体材料严重短缺,穿透角膜移植术及角膜内皮移植术的临床广泛开展受到严重制约,其根本原因在于健康角膜内皮的增生能力有限。随着组织工程技术和细胞工程技术不断发展,组织工程角膜研究已取得一定进展,应用组织工程技术体外培养高密度、具备健康内皮功能的角膜内皮细胞进行移植是当前研究的热点。组织工程角膜内皮技术研发的关键在于种子细胞、载体材料和移植方式的选择。目前,国内外大量研究的种子细胞来源包括人角膜内皮细胞、干细胞、血管内皮细胞及人羊膜上皮细胞等。常见的载体材料包括羊膜、脱细胞角膜基质、后弹力层、晶状体前囊膜等。体外培养的细胞采用穿透角膜移植术、角膜内皮移植术或前房注射细胞的方式进行移植。本文从角膜内皮种子细胞来源、移植载体选择以及角膜内皮移植方法等方面就组织工程角膜内皮移植研究进展进行综述,总结目前研究面临的问题并展望其前景。

关键词：角膜内皮移植组织工程种子细胞载体

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纵隔肿瘤粒子治疗现状与展望

中华肿瘤防治杂志 2024年第5期31卷 305-311页

作者：宋晓玉李莉袁双虎潍坊医学院临床医学院山东潍坊261053 山东省肿瘤防治研究院(山东省肿瘤医院)放疗科山东第一医科大学(山东省医学科学院)山东济南250117

目的综述纵隔肿瘤粒子治疗的原理、临床现状并展望其发展前景。方法使用PubMed及中国知网数据库检索系统,以“纵隔肿瘤、放射治疗、质子治疗、碳离子放射治疗、硼中子俘获治疗、粒子治疗”等为中文关键词,“mediastinal tumors,proton t... 详细信息

目的综述纵隔肿瘤粒子治疗的原理、临床现状并展望其发展前景。方法使用PubMed及中国知网数据库检索系统,以“纵隔肿瘤、放射治疗、质子治疗、碳离子放射治疗、硼中子俘获治疗、粒子治疗”等为中文关键词,“mediastinal tumors,proton therapy,carbon-ion radiotherapy,boron neutron capture therapy,particle therapy”为英文关键词进行检索。纳入标准:(1)纵隔肿瘤的粒子治疗;(2)纵隔淋巴瘤的粒子治疗;(3)胸腺瘤的粒子治疗。排除标准:(1)数据陈旧文献;(2)内容相似或重复。最终共纳入59篇文献。结果纵隔肿瘤的多样性决定了其临床诊治的复杂性。质子、重离子、中子治疗均能够最大限度地保护危及器官,从而改善患者的生存状况,然而最佳的治疗方式仍存在争议。结论粒子治疗在治疗纵隔肿瘤方面取得了迅速的发展,但仍需对患者进行筛选,并采取合理的措施推广粒子治疗。

关键词：纵隔肿瘤放射治疗质子治疗碳离子放射治疗硼中子俘获治疗综述文献

蛋白质棕榈酰化修饰与消化系统肿瘤关系研究进展

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中华肿瘤防治杂志 2024年第8期31卷 506-512页

作者：于航管睿柴杰山东省肿瘤防治研究院(山东省肿瘤医院)胃肠外一科山东第一医科大学(山东省医学科学院)山东济南250117 潍坊医学院临床医学院山东潍坊261053

目的总结蛋白质棕榈酰化的机制及与癌症发生发展的关系,通过分析棕榈酰化在消化系统肿瘤中的研究进展,探索靶向棕榈酰化过程用于消化系统肿瘤治疗方面的潜在策略.方法以"棕榈酰化、翻译后修饰、消化系统肿瘤、肿瘤治疗"为中文检索词,以"... 详细信息

目的总结蛋白质棕榈酰化的机制及与癌症发生发展的关系,通过分析棕榈酰化在消化系统肿瘤中的研究进展,探索靶向棕榈酰化过程用于消化系统肿瘤治疗方面的潜在策略.方法以"棕榈酰化、翻译后修饰、消化系统肿瘤、肿瘤治疗"为中文检索词,以"protein palmitoylation、post-translational modification、digestive system cancer、tumor therapy"为英文检索词,检索PubMed和中国知网数据库2007年1月-2023年7月的相关文献.纳入标准:(1)棕榈酰化的生化反应机制和特点;(2)棕榈酰化过程与癌症相关机制;(3)棕榈酰化在消化系统肿瘤中的作用;(4)靶向棕榈酰化途径对于肿瘤治疗的潜在作用.排除标准:(1)研究机制模糊文献;(2)会议性和评论类文献;(3)内容相似或重复文献.最终共纳入符合条件文献70篇.结果蛋白质棕榈酰化对于癌基因(如N-Ras和表皮生长因子受体)的功能至关重要.在调控蛋白质的转运、细胞定位和稳定性等方面都具有重要的作用,参与诸多生物学过程,并与消化系统肿瘤的发生发展关系密切.靶向棕榈酰化过程或联合肿瘤免疫治疗具有潜在治疗价值.结论棕榈酰化在消化系统肿瘤的发生发展及侵袭转移中具有重要地位,并影响肿瘤免疫.棕榈酰化研究有望为消化系统肿瘤的治疗提供新靶点.

关键词：棕榈酰化翻译后修饰消化系统肿瘤肿瘤治疗综述文献

一种基于表面增强拉曼光谱技术的环境水中啶虫脒现场快速检测试剂盒

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化学研究与应用 2024年第4期36卷 898-904页

作者：王硕邹薇张梦萍张鑫垚王辉于颐光王瑞王翠娟张宏山东省职业卫生与职业病防治研究院山东第一医科大学(山东省医学科学院)山东济南250062

啶虫脒(acetamiprid,AC)在环境中的蓄积可对生态系统和人体健康产生不利影响。本研究利用表面增强拉曼光谱(Surface-enhanced Raman spectroscopy,SERS)技术,构建了一种快速定性及定量检测环境水中啶虫脒的检测试剂盒。采用化学合成法... 详细信息

啶虫脒(acetamiprid,AC)在环境中的蓄积可对生态系统和人体健康产生不利影响。本研究利用表面增强拉曼光谱(Surface-enhanced Raman spectroscopy,SERS)技术,构建了一种快速定性及定量检测环境水中啶虫脒的检测试剂盒。采用化学合成法制备了粒径为40~60 nm的纳米金溶胶作为SERS活性基底,以包覆铝箔的24孔板为反应平台,将一定量的聚沉盐负载到反应孔中诱导信号热点,并与便携式拉曼光谱仪集成为适用于现场检测的试剂盒。通过对聚沉盐负载量、聚沉时间等条件进行优化,在浓度为25~750 ng·mL^(-1)范围内,啶虫脒浓度与SERS信号强度呈现良好的线性关系,R2=0.988。试剂盒检出限低至15.56 ng·mL^(-1),平均加标回收率为90.04%~106.10%,在5 min内实现了环境水中啶虫脒的现场检测。与传统方法相比,该试剂盒便携、操作简单、快速、成本低廉、可同时进行多样本检测,为环境水体中啶虫脒的现场检测分析提供了新选择。

关键词：表面增强拉曼光谱便携式试剂盒快速检测啶虫脒纳米金胶体

科教融合、医教研结合背景下的足踝医学发展现状及愿景——以山东第一医科大学(山东省医学科学院)为例

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足踝外科电子杂志 2020年第3期7卷 10-16页

作者：丁晓琳张玲韩锦学李雪飞张辉张建中丁慧山东第一医科大学第二附属医院足踝外科山东泰安271000 山东第一医科大学第二附属医院检验科山东泰安271000 北京医科大学附属北京同仁医院足踝外科北京100730 山东力明科技职业学院山东泰安271000

现阶段科教融合、医教研结合成为医学高等院校和研究机构改革发展的新方式、新方向。足踝医学专业在我国表现出极其迅猛的发展态势,人们对于足踝部健康越来越重视,对足部疾病的诊疗需求日益突出。然而,足踝医学教育应该如何进行、足踝... 详细信息

现阶段科教融合、医教研结合成为医学高等院校和研究机构改革发展的新方式、新方向。足踝医学专业在我国表现出极其迅猛的发展态势,人们对于足踝部健康越来越重视,对足部疾病的诊疗需求日益突出。然而,足踝医学教育应该如何进行、足踝部疾病专科医生应该怎样培养,这些重要问题在我国仍缺乏较为系统的探索和研究,我国在该领域的专业人才依然十分匮乏。科教融合、医教研结合战略思想的提出为足踝医学专业的发展提供了一个良好的契机。本文以山东第一医科大学为例,分析足踝医学发展现状,探讨足踝医学在科技融合、医教研结合背景下的发展愿景。

关键词：科教融合足踝医学医教研结合现状愿景