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荧光素酶免疫吸附法高灵敏检测蓝舌病病毒抗体方法的建立

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中国兽医科学 2024年第7期54卷 881-887页

作者：张鸿歌田占成独军政王琼洁康棣户鑫兵张忠辉关贵全殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为了建立一种高效检测动物血清中蓝舌病病毒(BTV)抗体的检测方法,以BTV血清群特异性VP7抗原与荧光素酶蛋白相融合表达的标记蛋白(VP7-NLuc)为检测抗原建立了荧光素酶免疫吸附(VP7-NLuc-LISA)方法,用于检测BTV抗体。结果表明:BTV阳性血... 详细信息

为了建立一种高效检测动物血清中蓝舌病病毒(BTV)抗体的检测方法,以BTV血清群特异性VP7抗原与荧光素酶蛋白相融合表达的标记蛋白(VP7-NLuc)为检测抗原建立了荧光素酶免疫吸附(VP7-NLuc-LISA)方法,用于检测BTV抗体。结果表明:BTV阳性血清能特异性识别VP7-NLuc融合蛋白;监测BTV-1灭活疫苗免疫绵羊血清中BTV抗体动态结果表明,VP7-NLucLISA方法与商品化竞争性ELISA(c-ELISA)试剂盒的检测结果呈高度相关性(R=0.76,P动物BTV流行病学调查和监测的新方法。

关键词：蓝舌病病毒 VP7蛋白荧光素酶免疫吸附试验 c-ELISA 血清学检测

O型口蹄疫Cathay拓扑型病毒单抗制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立

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畜牧兽医学报 2024年第9期55卷 4012-4020页

作者：廖焕程石正旺罗俊聪王婉莹冯露周静张帆石鑫泰田宏中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000

本研究旨在纯化O型口蹄疫Cathay拓扑型病毒抗原,并制备单克隆抗体,为口蹄疫新型Cathay毒株的研究提供生物材料。PEG沉淀法纯化O型口蹄疫Cathay毒株抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,用间接ELISA方法筛选阳性... 详细信息

本研究旨在纯化O型口蹄疫Cathay拓扑型病毒抗原,并制备单克隆抗体,为口蹄疫新型Cathay毒株的研究提供生物材料。PEG沉淀法纯化O型口蹄疫Cathay毒株抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合制备杂交瘤细胞,用间接ELISA方法筛选阳性细胞,有限稀释法进行亚克隆,获得2株能够稳定分泌特异性针对O型口蹄疫Cathay株病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为10E6与11C7。叠加试验表明,两株单抗的叠加率为49.45%,识别不同的抗原表位。间接ELISA和IFA试验显示,两株单抗与O型口蹄疫Cathay株病毒具有良好的反应性。单抗特异性检测结果表明,2株单抗均能特异性识别Cathay株口蹄疫病毒,不与其他口蹄疫病毒毒株交叉反应。抗体亚型鉴定结果显示,10E6单抗的轻链为Kappa链,11C7单抗的轻链为Lamda链,两株单抗重链类型均为IgG2a。结果表明,本研究成功制备了两株特异性结合O型口蹄疫Cathay拓扑型病毒的单克隆抗体,两株单抗均具有良好的反应性与特异性。应用两株单抗建立O型口蹄疫Cathay病毒的双抗体夹心ELISA检测方法,该ELISA检测方法特异性、重复性和敏感性良好,为O型口蹄疫Cathay毒株的快速诊断防控与研究建立了基础。

关键词： O型口蹄疫病毒 Cathay拓扑型杂交瘤细胞单克隆抗体 ELISA

枯草芽孢杆菌对肥育猪生长性能、养分表观消化率、肠道菌群、屠宰性能、肉品质和免疫功能的影响

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饲料工业 2024年第7期45卷 43-48页

作者：陈为峰谭善杰山东省莒南县动物疫病预防控制中心山东临沂276600 临沂市畜牧发展促进中心山东临沂276600

为了研究枯草芽孢杆菌对肥育猪生长性能、养分表观消化率、肠道菌群、屠宰性能、肉品质和免疫功能的影响,将80头育肥猪随机分为4组,即A、B、C、D组,分别在基础日粮中添加0、0.01%、0.05%、0.10%的枯草芽孢杆菌,测定生长性能、养分表观... 详细信息

为了研究枯草芽孢杆菌对肥育猪生长性能、养分表观消化率、肠道菌群、屠宰性能、肉品质和免疫功能的影响,将80头育肥猪随机分为4组,即A、B、C、D组,分别在基础日粮中添加0、0.01%、0.05%、0.10%的枯草芽孢杆菌,测定生长性能、养分表观消化率、肠道菌群、屠宰性能、肉品质、免疫功能等指标。结果表明:B、C、D组的末重、CP消化率、乳酸杆菌数、芽孢杆菌数、屠体重、IgG含量均高于A组,其中C、D组显著高于A组(P<0.05),B、C、D组大肠杆菌数、滴水损失率均显著低于A组(P<0.05)。C、D组的平均日增重、粗脂肪消化率、粗纤维消化率、屠宰率、瘦肉率、pH_(24 h)、脾脏指数、IgA含量均较A组显著提高(P<0.05),料重比、沙门氏菌数、背膘厚、剪切力均较A组显著降低(P<0.05)。说明随着枯草芽孢杆菌添加剂量的增加,育肥猪的生长性能、养分表观消化率、肠道菌群、屠宰性能、肉品质、免疫功能逐步得到改善;适宜添加剂量为0.10%。

关键词：枯草芽孢杆菌育肥猪生长性能养分表观消化率肠道菌群屠宰性能肉品质免疫功能

羊肠道病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用

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中国动物传染病学报 2024年

作者：王勤欧云文何博刘俐君达州职业技术学院开江县动物疫病预防控制中心达州市动物疫病预防控制中心

为了建立一种快速的羊肠道病毒（CEV）抗体间接ELISA检测方法，试验采用原核表达系统对VP1蛋白进行体外表达，利用纯化后的重组蛋白建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示：VP1蛋白以包涵体形式表达，Western blot检测表明重组蛋白具有... 详细信息

为了建立一种快速的羊肠道病毒（CEV）抗体间接ELISA检测方法，试验采用原核表达系统对VP1蛋白进行体外表达，利用纯化后的重组蛋白建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示：VP1蛋白以包涵体形式表达，Western blot检测表明重组蛋白具有良好的反应活性，建立的间接ELISA方法检测BDV、BVDV、GPV、ORF、SPA阳性血清均为阴性，对CEV阳性血清的最低检出效价可达1︰25 600，与IFA方法的符合率为93.33%（28/30），检测四川地区816份羊血清样品的CEV阳性感染率达7.72%（63/816）。表明建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性、准确性和临床适用性，可用于CEV临床抗体检测及流行病学调查。

关键词：羊肠道病毒 VP1蛋白原核表达间接ELISA 抗体检测

甘肃某羊场免疫布鲁菌病疫苗后绵羊流产原因的调查及分析

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中国兽医科学 2024年第8期54卷 1103-1110页

作者：刘志杰刘萍吴锦艳尚佑军何继军王子坚蔡江聂帅帅李鹏飞杜国玉苟惠天曹小安甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州川730070 中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730046 甘肃省动物疫病预防控制中心甘肃兰州730046

应用疫苗免疫绵羊后,羊场依然出现大规模流产和不孕,为查明原因,收集该羊场31份流产羊和23份不孕羊的阴道分泌物拭子及其对应的羊血清进行检测。用竞争酶联免疫吸附试验(c ELISA)、布鲁菌抗体Ig G检测试验和试管凝集试验(SAT)检测血清;... 详细信息

应用疫苗免疫绵羊后,羊场依然出现大规模流产和不孕,为查明原因,收集该羊场31份流产羊和23份不孕羊的阴道分泌物拭子及其对应的羊血清进行检测。用竞争酶联免疫吸附试验(c ELISA)、布鲁菌抗体Ig G检测试验和试管凝集试验(SAT)检测血清;用荧光PCR做54份拭子流产相关的布鲁菌病、Q热和衣原体病的病原检测;对检测布鲁菌阳性的样本用AMOS-PCR进行布鲁菌种属鉴定,扩增利福平耐药基因(rpoB)并测序,将序列与其标准参考菌株比对后构建进化树。结果显示:用布鲁菌c ELISA检测54份血清,其中22份血清初筛阳性,阳性率为40.7%;SAT确诊其中16份样本为阳性,其中流产羊有6只阳性,阳性率为19.4%,不孕羊有10只阳性,阳性率为43.5%,总体阳性率为29.6%。用布鲁菌抗体Ig G检测试验检测感染的样本19份发现,流产羊有6只阳性,阳性率为19.4%,不孕羊有13只阳性,阳性率为56.5%,总体阳性率为35.2%。荧光PCR结果显示:拭子样本10份为布鲁菌阳性,阳性率为18.5%;12份为贝氏柯克斯体(Q热病原)阳性,阳性率为22.2%;衣原体阳性率为0。布鲁菌阳性样本AMOS-PCR扩增得到731 bp的条带,rpoB基因分析发现所有氨基酸序列都未发现利福平耐药突变,AMOS-PCR和rpoB基因系统进化树分析结果显示羊感染的为马耳他布鲁菌。结论:本场群发性流产的发生可能是由于布鲁菌病疫苗免疫失败后病原感染,并伴随着贝氏柯克斯体等病原的混合感染引起。

关键词：布鲁菌病 Q热流产 rpoB基因

豆状囊尾蚴小胞外囊泡可抑制家兔外周血淋巴细胞NLRP3活化

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中国兽医科学 2024年第10期 1295-1301页

作者：蒲桂婷王立群刘婷丽王得先曹珊菱郭小腊殷宏骆学农中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室扬州大学江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

本研究旨在探究家兔感染豆状囊尾蚴过程中炎症小体的表达。取豆状带绦虫的孕卵节片感染家兔，分离不同感染时期的外周血淋巴细胞，检测NLRP3、IL-1β等炎症小体相关基因的表达水平。同时，收集豆状囊尾蚴的分泌排泄产物，并通过超速离... 详细信息

本研究旨在探究家兔感染豆状囊尾蚴过程中炎症小体的表达。取豆状带绦虫的孕卵节片感染家兔，分离不同感染时期的外周血淋巴细胞，检测NLRP3、IL-1β等炎症小体相关基因的表达水平。同时，收集豆状囊尾蚴的分泌排泄产物，并通过超速离心分离小胞外囊泡，用分泌排泄产物和小胞外囊泡分别处理外周血淋巴细胞，24小时后，qPCR和Western-blot分析炎症小体相关基因的表达变化。结果显示，家兔感染后第30天和60天，炎症小体相关基因NLRP3、IL-1β、Caspase-1及GSDMD的表达水平明显升高，而在感染第90天时明显下降；用分泌排泄产物处理PBLC后，NLRP3、IL-1β、Caspase-1及GSDMD的表达水平也明显升高；而用小胞外囊泡处理细胞后，虽然IL-1β的表达水平升高，但NLRP3、Caspase-1及GSDMD的表达水平明显受到了抑制。说明豆状囊尾蚴可通过其分泌排泄产物或小胞外囊泡调控家兔外周血淋巴细胞炎症小体的活化，从而达到其长期生存和持续感染的目的。

关键词：豆状囊尾蚴 NLRP3炎症小体分泌排泄产物小胞外囊泡

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猪流行性腹泻病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立及初步应用

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畜牧兽医学报 2024年第1期55卷 413-418页

作者：周建浩王东方刘影王淑娟马震原谢彩华赵雪丽杨海波冯桂丹康台生胡煜锋李博文闫若潜河南农业大学动物医学院郑州450046 河南省动物疫病预防控制中心/河南省重大动物疫病监测预警及防控重点实验室郑州450008 河南科技大学动物科技学院洛阳471000 上海市动物疫病预防控制中心上海201103

旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法。本研究根据GenBank登录的PEDV(MK862249.1)M基因序列保守区设计合成特异... 详细信息

旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法。本研究根据GenBank登录的PEDV(MK862249.1)M基因序列保守区设计合成特异性引物对和探针;通过对反应体系和反应条件的优化,成功建立了可用于检测PEDV的荧光定量PCR(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR)方法,将自行建立的FQ-PCR方法的引物对/探针用来确定ddPCR方法;对ddPCR方法进行敏感性、特异性、重复性和初步应用试验。结果显示:自行建立的FQ-PCR方法在敏感性、重复性等方面均优于行标FQ-PCR方法;根据自行设计的FQ-PCR方法建立的ddPCR方法最低检测极限为0.15 copies·μL^(-1),敏感性高于行业标准(SN/T 1699—2017)FQ-PCR方法(1.0×10^(1)copies·μL^(-1));模板浓度为1.0×10^(0)~1.0×10^(4)copies·μL^(-1)时,具有良好的线性关系(R 2>0.99);批内、批间变异系数(CV%)为1.52%~7.40%;对猪丁型冠状病毒、猪伪狂犬病毒等11种对照病毒核酸检测结果均为阴性;分别用建立的ddPCR方法、行业标准FQ-PCR方法对150份临床样品进行PEDV核酸检测,ddPCR方法对行业标准FQ-PCR方法检测阳性样品的检测符合率为10^(0)%。本研究成功建立的PEDV ddPCR检测方法可用于临床上PEDV感染的早期检测和定量检测,为PEDV核酸标准物质的研制提供了定量手段。

关键词：猪流行性腹泻病毒微滴式数字PCR 方法建立

日粮中添加不同水平杜仲叶提取物对肉牛生长性能、血清生化指标及血清免疫指标的影响

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中国饲料 2024年第16期 61-64页

作者：张莉李勇生牛琼赵雯梁斌甘肃省动物疫病预防控制中心甘肃兰州730046

文章旨在研究日粮中添加不同水平杜仲叶提取物对肉牛生长性能、血清生化指标及血清免疫指标的影响。试验选取72头月龄相近,初重为(436.18±25.42)kg的西门塔尔公牛,随机按4组×3重复×6头分组。各组肉牛分别饲喂日粮+0%、0.1%、0.2%、0... 详细信息

文章旨在研究日粮中添加不同水平杜仲叶提取物对肉牛生长性能、血清生化指标及血清免疫指标的影响。试验选取72头月龄相近,初重为(436.18±25.42)kg的西门塔尔公牛,随机按4组×3重复×6头分组。各组肉牛分别饲喂日粮+0%、0.1%、0.2%、0.3%的杜仲叶提取物。预饲期7d,正试期40d。结果表明:(1)与0%杜仲叶提取物组相比,0.1%杜仲叶提取物组肉牛平均日增重显著提高21.71%(P<0.05),饲料转化率显著降低10.98%(P<0.05)。(2)与0%杜仲叶提取物组相比,0.2%、0.3%杜仲叶提取物组肉牛血清中总蛋白含量显著提高(P<0.05),谷草转氨酶活性显著降低(P<0.05)。(3)与0%杜仲叶提取物组相比,0.1%、0.2%、0.3%杜仲叶提取物组肉牛血清中IgA含量显著提高(P<0.05),0.3%杜仲叶提取物组肉牛血清中IgG含量显著提高(P<0.05),0.2%、0.3%杜仲叶提取物组肉牛血清中肿瘤坏死因子-α含量显著降低(P<0.05)。结论 :日粮添加低水平(0.1%)杜仲叶提取物,肉牛生长性能最佳;日粮添加中高水平(0.2%、0.3%)杜仲叶提取物能提高肉牛血清免疫力。

关键词：杜仲叶提取物肉牛生长性能血清生化指标血清免疫指标

2020－2023甘肃猪繁殖与呼吸综合征病毒的基因遗传变异分析

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中国兽医科学 2024年

作者：焦守德张婧李平花王健韩庆彦张雨星魏达礼王方洲白兴文卢曾军马雪青孙普甘肃农业大学中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃省动物疫病预防控制中心

为了了解甘肃地区猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 的流行及遗传变异情况，采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对2020－2023年收集的猪组织样品进行PRRSV ORF5、NSP2和ORF3基因扩增并测序，通过MEGA软件构建遗传进化树进行遗传... 详细信息

为了了解甘肃地区猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 的流行及遗传变异情况，采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对2020－2023年收集的猪组织样品进行PRRSV ORF5、NSP2和ORF3基因扩增并测序，通过MEGA软件构建遗传进化树进行遗传变异分析。结果显示，共检测了52份猪临床样品，PRRSV核酸阳性率为52%（32/52），成功获得了32条ORF5、15条NSP2和14条ORF3基因序列。ORF5基因遗传进化分析表明，2020－2023年甘肃地区猪群中PRRSV流行毒株中存在美洲型1.5谱系（4株）、1.8谱系（24株）、5.1谱系（2株）、8.7谱系（2株）；NSP2基因遗传进化分析表明，获得的15条NSP2序列均为1.8谱系；ORF3基因遗传进化分析表明，获得的14条ORF3序列包括1.5谱系（2株）、1.8谱系（11株）、3.5谱系（1株）。基因核苷酸序列与参考毒株的同源性分别为ORF5 82.3%～99.7%、NSP2 85.9%～90%和ORF3 89.8%～95.7%；基因编码氨基酸序列与参考毒株的同源性分别为ORF5 79.6%～99%、NSP2 83.4%～87.7%和ORF3 85.1%～94.5%。ORF5基因编码的GP5蛋白的信号肽区、高变区、细胞表位区等区域均存在不同程度的变异，其中5株毒株的第33位氨基酸出现了缺失；15株NSP2蛋白氨基酸序列的缺失模式与NADC30株一致。上述结果表明，当前甘肃地区猪群中PRRSV呈现以1.8毒株谱系为优势的美洲型多谱系共循环流行，这对甘肃地区防控PRRSV提供了重要的流行病学数据。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 NSP2 ORF3 遗传变异