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鸭疫里默氏杆菌CH-1株37℃和42℃的转录组测序及比较分析

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微生物学报 2024年第7期64卷 2368-2380页

作者：汪思懿郭方程安春刘马峰西南动物疫病防控技术教育部工程研究中心四川成都611130 四川省动物疫病防控国际联合研究中心四川成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130 四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心四川成都611130

【目的】鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)是一种感染鸭的革兰氏阴性菌,给养鸭业造成较大经济损失。由于鸭体内温度为42℃,当鸭疫里默氏杆菌感染鸭后必然会调节自身基因表达来适应鸭体内温度。为鉴定鸭疫里默氏杆菌CH-1株感染... 详细信息

【目的】鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)是一种感染鸭的革兰氏阴性菌,给养鸭业造成较大经济损失。由于鸭体内温度为42℃,当鸭疫里默氏杆菌感染鸭后必然会调节自身基因表达来适应鸭体内温度。为鉴定鸭疫里默氏杆菌CH-1株感染鸭的适应性机制,本研究测定和比较了鸭疫里默氏杆菌CH-1株在37℃和42℃下的转录组。【方法】将鸭疫里默氏杆菌RA-CH-1株在37℃培养至对数生长期后,分别在37℃和42℃热应激1 h,收集菌体,提取总RNA。利用转录组测序(RNA-seq)技术获得RA-CH-1在37℃和42℃下的转录组原始数据,筛选得到差异表达基因,通过基因本体论(geneontology,GO)数据库和京都基因与基因组百科全书(Kyotoencyclopediaof genes and genomes,KEGG)数据库对差异表达基因进行富集分析。选取dnaK作为热应激反应基因进行功能初步鉴定。【结果】共筛选获得234个显著差异表达基因,其中169个基因显著上调,65个基因显著下调。显著差异表达基因通过GO富集分析主要富集在核苷代谢过程、糖基化合物代谢过程和核心RNA聚合酶结合转录因子活性等;显著差异表达基因通过KEGG富集分析主要富集在氧化磷酸化、核糖体和细菌分泌系统等通路。与37℃条件下生长能力比较,dnaK缺失后导致鸭疫里默氏杆菌在42℃条件下生长能力受损。【结论】RA-CH-1在37℃和42℃下生长不受影响,通过热休克反应相关蛋白等因子表达上调或下调来应对温度升高后的应激状况。

关键词：鸭疫里默氏杆菌转录组温度

PCIF1基因敲低细胞系的构建及其对猪流行性腹泻病毒复制影响的探究

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江西农业大学学报 2024年

作者：房梦桃刘众吴琪黄冬艳叶昱万根宋德平江西农业大学动物科学技术学院江西省动物疫病防控制剂工程研究中心

【目的】旨在构建甲基转移酶——磷酸化C端结构域相互作用因子1（PCIF1）敲低细胞系，为探索PCIF1对猪流行性腹泻病毒（PEDV）复制及其分子机制研究提供试验基础。【方法】本研究利用RNA干扰（RNAi）技术构建PCIF1基因敲低（PCIF1-KD）... 详细信息

【目的】旨在构建甲基转移酶——磷酸化C端结构域相互作用因子1（PCIF1）敲低细胞系，为探索PCIF1对猪流行性腹泻病毒（PEDV）复制及其分子机制研究提供试验基础。【方法】本研究利用RNA干扰（RNAi）技术构建PCIF1基因敲低（PCIF1-KD）细胞系。首先构建PCIF1基因特异性靶向干扰载体——pcDNA3.1-Double U6-mCherry-shPCIF1，后经脂质体介导转染至非洲绿猴肾细胞（Vero-81），并通过遗传霉素筛选、富集PCIF1-KD重组细胞，以RT-qPCR和Western blotting检测PCIF1基因的敲低效果，最后经RT-qPCR和Western blotting验证PEDV在获得的重组敲低细胞上的增殖能力。【结果】重组干扰质粒经测序显示基因序列正确，证明成功构建PCIF1干扰质粒。经RT-qPCR和Western blotting试验结果表明，重组Vero-81细胞中PCIF1被显著敲低，获得了稳定的PCIF1-KD重组细胞系sh-△PCIF1-Vero-81。以PEDV感染验证，发现PEDV在sh-△PCIF1-Vero-81细胞的增殖水平被显著抑制，且在感染后24至36h病毒mRNA表达水平和蛋白表达水平均被进一步抑制。【结论】本研究利用RNAi技术成功构建了一株稳定敲低PCIF1基因的细胞系sh-△PCIF1-Vero-81，PCIF1基因的沉默对PEDV的复制具有显著的抑制作用，且抑制程度随着时间增加而增加。研究结果可为进一步探究PCIF1对PEDV的影响或相互作用的分子机制提供有力工具和基础。

关键词：磷酸化C端结构域相互作用因子1 猪流行性腹泻病毒非洲绿猴肾细胞 RNA干扰

非洲猪瘟病毒感染调控炎症反应机制的研究进展

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中国预防兽医学报 2024年第6期46卷 653-658页

作者：许凤明杨作丰山东省单县动物疫病预防控制中心山东单县274300 辽宁省动物疫病预防控制中心辽宁沈阳110164

炎症反应是一种常见的病理过程,可发生在机体各组织中,是机体识别危险信号并激活天然免疫系统的重要途径。作为一种自我保护机制,机体内产生的炎症反应能够在一定程度上清除不利于机体的刺激信号,但一旦超过机体可承受的范围,炎症反应... 详细信息

炎症反应是一种常见的病理过程,可发生在机体各组织中,是机体识别危险信号并激活天然免疫系统的重要途径。作为一种自我保护机制,机体内产生的炎症反应能够在一定程度上清除不利于机体的刺激信号,但一旦超过机体可承受的范围,炎症反应则会破坏机体的平衡,加剧炎症效应,最终引发疾病。非洲猪瘟(Africanswinefever,ASF)是一种高度传染性疾病,其致死率接近100%,自发现以来已给全球养猪业造成重大经济损失。其病原非洲猪瘟病毒(ASFV)感染后可观察到宿主淋巴结组织单核细胞严重破碎,扁桃体等免疫相关组织内单核细胞/巨噬细胞的数量增加,并检测到促炎细胞因子的过量表达,尤其是TNF-α和IL-1,这种现象的发生同时伴随着淋巴细胞的凋亡[1-2]。

关键词：重大经济损失非洲猪瘟病毒刺激信号传染性疾病养猪业淋巴结组织天然免疫系统自我保护机制

鸭疫里默氏杆菌耐药基因传播方式的鉴定及分布

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微生物学报 2024年

作者：杨宇豪姚弈舟朱德康张相德程安春刘马峰西南动物疫病防控技术教育部工程研究中心四川省动物疫病防控国际联合研究中心动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心江苏益客食品集团股份有限公司

【目的】鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer， RA）是一种感染鸭、鹅等禽类的革兰氏阴性病原菌。该菌的临床分离株具有多重耐药性且具有逐年增加的趋势，然而耐药基因在该菌的传播方式未被明确鉴定。本研究旨在鉴定耐药基因在... 详细信息

【目的】鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer， RA）是一种感染鸭、鹅等禽类的革兰氏阴性病原菌。该菌的临床分离株具有多重耐药性且具有逐年增加的趋势，然而耐药基因在该菌的传播方式未被明确鉴定。本研究旨在鉴定耐药基因在鸭疫里默氏杆菌的传播方式，以及这些耐药基因在该菌临床分离株中的分布情况。【方法】测定参考菌株RA ATCC 11845、临床分离株RA CH-1、RA CH-2对10类28种药物的耐药表型；通过基因组分析和基因缺失株的构建鉴定耐药基因；自然转化实验鉴定其耐药基因传播方式；通过PCR检测这些耐药基因在不同临床菌株的分布情况。【结果】耐药检测结果表明，鸭疫里默氏杆菌RA CH-1株、RA CH-2株对β-内酰胺类、四环素类、大环内酯类、林可胺类及酰胺醇类等药物均具有耐药性，而RA ATCC 11845株对以上药物敏感；13个耐药基因分别缺失后对相关药物变的敏感，表明其参与耐药；以上耐药基因均可通过自然转化方式转移至敏感菌株RA ATCC11845；相关耐药基因在2017-2023年分离的100株临床株的检出率最低为3%，最高为89%。【结论】耐药基因在鸭疫里默氏杆菌可通过自然转化的形式进行传播，不同耐药基因在该菌临床分离株中的分布不同，其中tetX1耐药基因携带率最高，blaOXA2耐药基因携带率最低。

关键词：鸭疫里默氏杆菌耐药基因传播方式自然转化

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牧草青贮的调控技术研究

中国畜牧业 2024年第1期 54-55页

作者：蔡丽春甘肃省庆城县动物疫病防控中心

牧草生长有明显的季节性,夏天牧草生长比较旺盛,能较好满足动物生长所需。但在冬春季节却极易出现牧草长势差,供给不足的现状,对畜牧业的发展产生了极大制约。为了更好地解决该问题,相关人员需不断加强技术研究,对牧草进行加工,使其变... 详细信息

牧草生长有明显的季节性,夏天牧草生长比较旺盛,能较好满足动物生长所需。但在冬春季节却极易出现牧草长势差,供给不足的现状,对畜牧业的发展产生了极大制约。为了更好地解决该问题,相关人员需不断加强技术研究,对牧草进行加工,使其变为青贮饲料,提升牧草利用效率,较好地改善了将牧草调制成青干草的不足,促进动物生长。因此,笔者对牧草青贮调控技术进行了探究。

关键词：牧草生长青贮饲料动物生长冬春季节青干草牧草青贮调控技术牧草长势

鸡滑液囊支原体ZP-1株的分离鉴定及其致病性和免疫保护效果的评估

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中国预防兽医学报 2024年第5期46卷 455-460页

作者：李真亚孔嫄嫄杨红玉李允刘洁贾荣玲李生涛南阳农业职业学院河南南阳473000 河南省动物疫病防控工程技术研究中心河南南阳473000

为分离鉴定鸡滑液囊支原体(MS),并评估其致病性和免疫保护效果,本实验无菌采集南阳市多家鸡场35份疑似MS发病鸡的关节腔粘液和关节组织,通过病原分离培养后观察菌落、PCR鉴定并测序。结果显示,在改良Friis固体培养基上可见圆形、边缘整... 详细信息

为分离鉴定鸡滑液囊支原体(MS),并评估其致病性和免疫保护效果,本实验无菌采集南阳市多家鸡场35份疑似MS发病鸡的关节腔粘液和关节组织,通过病原分离培养后观察菌落、PCR鉴定并测序。结果显示,在改良Friis固体培养基上可见圆形、边缘整齐、隆起的“煎蛋样”菌落形态;PCR可以扩增到16S r RNA基因目的条带,扩增产物测序后与NCBI中登录的ATCC 25204标准菌株16S r RNA基因序列比对,结果显示二者的同源性达99%以上,本实验共分离到5株MS。选择ZP-1株进行生物学特性研究,通过颜色变化单位(CCU)试验测定其生长滴度、采用试剂盒测定其代谢产生的H_(2)O_(2)水平。结果显示,在培养24 h~36 h后,ZP-1株的生长滴度最高可达10^(12)CCU/mL,具有生长速度快、滴度高的特点。在甘油存在的情况下,ZP-1株产生H_(2)O_(2)的相对水平极显著高于弱毒疫苗株(P<0.001)。将ZP-1株分别通过足垫和静脉注射感染SPF鸡,评估其致病性;利用该菌株制备灭活疫苗经皮下接种鸡后攻毒,分析ZP-1株的免疫保护效果。结果显示,该分离株可复制出MS典型症状及病变;利用该菌株制备的灭活疫苗对鸡的攻毒保护率可达80%,高于商品化疫苗,其降低MS关节组织定植水平和MS抗体水平与商品化疫苗一致。本研究获得了具有较高生长滴度(10^(12)CCU/mL)的MS分离株ZP-1,发现利用该MS分离株制备的灭活疫苗具有较好的免疫保护效果,为MS疫苗的研发奠定了基础。

关键词：鸡滑液囊支原体分离鉴定致病性免疫原性

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稀土尾矿王草产量和根系生长对施肥的响应

生态学杂志 2024年第7期43卷 2093-2101页

作者：邱静芸雷小文连海郭海宁陈荣强欧翔钟云平张强吴丽娟赣州市畜牧水产研究所江西赣州341401 赣州市畜牧业发展和动物疫病防控中心江西赣州341099

研究施肥处理对稀土尾矿植物生长的影响,可为尾矿废弃地的生态治理和饲草生产提供理论支撑。本研究以王草为试验材料,设置6组施肥处理,分别为对照组(CK)、沼液组(T1)、牛粪组(T2)、牛粪+沼液组(T3)、蚯蚓粪组(T4)和蚯蚓粪+沼液组(T5),... 详细信息

研究施肥处理对稀土尾矿植物生长的影响,可为尾矿废弃地的生态治理和饲草生产提供理论支撑。本研究以王草为试验材料,设置6组施肥处理,分别为对照组(CK)、沼液组(T1)、牛粪组(T2)、牛粪+沼液组(T3)、蚯蚓粪组(T4)和蚯蚓粪+沼液组(T5),测定不同施肥处理下王草的农艺性状、产量、根系生长指标,分析不同施肥处理对王草地上和地下的影响。结果表明:与CK组相比,施用有机肥后,王草年鲜草产量提高4.57%~1066.11%,其中T5组鲜草产量最高,种植第二年达83.26 t·hm^(-2),T2、T3、T4、T5四组株高、分蘖数和茎粗均较对照组显著增加(P<0.05);同时,施用有机肥后,王草根长、根尖数、交叉数均显著增加(P<0.05),其中T5组根长最长且交叉数最多,分别为CK组的1.79倍和2.55倍;T5组根系生物量显著增加(P<0.05),为2.52 g;施用有机肥后,王草细根(0~0.5 mm径级)根长和根尖数显著增加(P<0.05),根系构型趋向于鱼尾状结构。相关性分析发现,鲜草产量与根系长、根系生物量和0~0.5 mm径级根长呈极显著相关(P<0.01),与0~0.5 mm径级根根尖数和拓扑指数呈显著相关(P<0.05)。综上,有机肥可提高王草鲜草产量,促进根系生长,蚯蚓粪沼液组合效果更优,是王草植物修复稀土尾矿的最佳施肥处理。

关键词：有机肥尾矿治理植物修复王草根系指标

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4种布鲁氏菌病胶体金试纸条的比较研究

中国动物传染病学报 2024年

作者：黄晓兵杨磊刘爱军倪柏锋孙思琪浙江省动物疫病预防控制中心

旨在对比分析不同厂家布病胶体金法试纸条的检测效果，为牛羊定点屠宰场开展布病自检工作提供参考。本研究采用布病阳性血清标准品测定了4个厂家胶体金试纸条的Cut-off值，并通过对166份结果已知的家畜血清的检测，比较各个厂家试纸条... 详细信息

旨在对比分析不同厂家布病胶体金法试纸条的检测效果，为牛羊定点屠宰场开展布病自检工作提供参考。本研究采用布病阳性血清标准品测定了4个厂家胶体金试纸条的Cut-off值，并通过对166份结果已知的家畜血清的检测，比较各个厂家试纸条的敏感性、特异性等评价指标。结果表明：4个厂家试纸条的Cut-off值为标准血清抗体含量2.5 IU/mL～10 IU/mL，敏感性为8%～100%，特异性为93.10%～100%，符合率为72.29%～96.39%，AUC值为0.54～0.97；配对卡方检验结果显示：除厂家A外，厂家B、C、D的结果与真实结果均有显著性差异（P＜0.05）。A厂家试纸条的检测结果与真实结果符合率为95.18%，成本-效果分析结果表明，4个厂家的C/E值分别为15.76、31.52、19.71和20.75，厂家A试纸条准确诊断1份样品的成本最低。故推荐使用A厂家的胶体金试纸条开展宰前动物布病的筛查工作。

关键词：布鲁氏菌病胶体金法初筛比较分析

基因Ⅰ型日本脑炎病毒NS1蛋白的多克隆抗体制备及鉴定

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中国兽医科学 2024年

作者：柴风雪田占成杨吉飞张鸿歌牛庆丽独军政关贵全殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

乙型脑炎(Japanese encephalitis，JE)是由三带喙库蚊媒介传播的日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)感染引起的，临床表现以神经症状为主。NS1蛋白作为JEV编码的非结构蛋白，能够诱导机体产生非中和作用的保护性抗体，是J... 详细信息

乙型脑炎(Japanese encephalitis，JE)是由三带喙库蚊媒介传播的日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)感染引起的，临床表现以神经症状为主。NS1蛋白作为JEV编码的非结构蛋白，能够诱导机体产生非中和作用的保护性抗体，是JE诊断和疫苗研发的主要靶标。本研究以基因Ⅰ型JEV的NS1蛋白为靶标，将构建的重组质粒pET30a-His-NS1转化至Rosetta(DE3)表达菌，以0.5 mmol/L IPTG诱导表达。结果显示，与预期蛋白分子量大小一致的重组NS1蛋白以包涵体形式表达。经亲和层析柱纯化获得浓度为2.568 mg/mL的重组NS1-His蛋白。免疫印迹和间接免疫荧光结果表明，制备的高效价抗NS1蛋白多克隆抗体能够特异性识别蛋白分子量分别为46和55 ku的天然NS1蛋白。此外，本研究首次发现制备的抗NS1蛋白多克隆抗体与JEV预孵育能够剂量依赖性的显著降低JEV感染BHK-21细胞的病毒产量。将抗NS1蛋白多克隆抗体作为免疫沉淀抗体，用于JEV感染PK-15细胞的免疫沉淀质谱分析，结果表明，NS1蛋白能够与囊膜E蛋白相互作用。总之，本研究为深入了解NS1蛋白的生物学功能、JE诊断方法的建立和疫苗研制提供了基础材料。

关键词：日本脑炎病毒 NS1蛋白多克隆抗体制备鉴定