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过表达溶质载体家族1成员5和敲低慢病毒载体构建及稳定转染RAW264.7细胞株

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中国组织工程研究 2025年第7期29卷 1414-1421页

作者：郭大鑫范苏苏朱振东侯建红张旋云南省第三人民医院/大理大学第二附属医院云南省昆明市650011 昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室/现代生物医药产业学院云南省昆明市650500

背景:溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用,但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供... 详细信息

背景:溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用,但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供有力的实验工具。目的:构建小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体,以建立稳定转染的RAW264.7细胞株,为深入探讨SLC1A5在炎症中的作用提供实验基础。方法:根据SLC1A5基因序列设计合成引物并使用聚合酶链反应扩增该基因片段。将目的基因定向接入经Age I/Nhe I酶切的载体质粒GV492中构建重组慢病毒质粒,对阳性克隆进一步筛选后测序比对结果;pHelper1.0质粒载体、pHelper2.0质粒载体、目的质粒载体与293T细胞共同培养并转染,获得慢病毒原液进行包装和滴度测定;在此基础上,通过体外培养RAW264.7细胞,确定嘌呤霉素工作质量浓度;不同滴度的慢病毒分别与RAW264.7细胞共同培养,根据荧光强度确定转染效率;用嘌呤霉素挑选出稳定转染细胞,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测稳定转染细胞株的SLC1A5基因和蛋白表达水平。结果与结论:(1)测序序列与目的序列一致提示重组慢病毒载体构建成功;(2)过表达SLC1A5慢病毒的滴度为1×10~9 TU/mL,敲低SLC1A5慢病毒的滴度为3×10~9 TU/mL;(3)确定RAW264.7细胞嘌呤霉素工作质量浓度为3μg/mL;(4)过表达/敲低SLC1A5慢病毒转染RAW264.7细胞的最佳条件皆为HiTransG P转染增强液且感染复数值等于50;(5)过表达SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量明显上调,而敲低SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量显著下调。结果表明,成功构建了小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体并获得稳定转染的RAW264.7细胞株。

关键词：慢病毒载体溶质载体家族1成员5 SLC1A5 过表达敲低 RAW264.7细胞稳转细胞株

鸡源产气荚膜梭菌分离鉴定和药敏试验及枯草芽孢杆菌对其抑制作用

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动物医学进展 2025年第1期46卷 16-22页

作者：叶碧锦欧兰欣王定爱方肆云申翰钦严专强戚南山孙铭飞黄福强佛山科学技术学院广东佛山528225 广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室广东广州510640 温氏食品集团股份有限公司广东新兴527400

为探究产气荚膜梭菌在黄羽肉鸡重要养殖区域的流行及耐药情况,采集广东、广西等华南地区,安徽、江苏、福建等华东地区6个规模化肉鸡养殖场9份肠道病变样品进行分离鉴定和毒素分型检测、耐药性分析,琼脂扩散试验检测野外分离枯草芽孢杆菌... 详细信息

为探究产气荚膜梭菌在黄羽肉鸡重要养殖区域的流行及耐药情况,采集广东、广西等华南地区,安徽、江苏、福建等华东地区6个规模化肉鸡养殖场9份肠道病变样品进行分离鉴定和毒素分型检测、耐药性分析,琼脂扩散试验检测野外分离枯草芽孢杆菌BSGZ7对产气荚膜梭菌的抑菌效果。结果显示,从肠道样品中分离到7株A型和2株G型产气荚膜梭菌,9株分离菌和1株标准菌均对阿莫西林、青霉素、头孢噻肟、氨苄西林、头孢氨苄、氟苯尼考、头孢曲松具有较高的敏感性,对庆大霉素、卡那霉素、四环素、多西环素、链霉素、磺胺异恶唑、林可霉素、红霉素、多黏菌素B等抗菌药物普遍耐药,枯草芽孢杆菌BSGZ7发酵液均对10株菌有抑菌效果。结果表明枯草芽孢杆菌对产气荚膜梭菌具有一定抑菌作用,有望成为防控鸡坏死性肠炎的新型绿色安全的抗菌制剂,同时也为临床上鸡坏死性肠炎的防控和治疗提供了参考依据。

关键词：产气荚膜梭菌分离鉴定药敏试验枯草芽孢杆菌抑菌活性

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MXene基水凝胶在创面修复领域的应用

中国组织工程研究 2025年第16期29卷 3486-3493页

作者：何蕊李重一王瑞瑶曾丹范代娣西北大学化工学院陕西省可降解生物医用材料重点实验室陕西省生物材料与发酵工程技术研究中心陕西省西安市710127

背景:MXene基水凝胶是一类纳米复合的多功能性水凝胶材料,在慢性创面(如糖尿病足、压疮、癌症及外伤性溃疡等)修复领域有广阔的应用前景。目的:综述MXene基水凝胶的优势及其在创面修复领域的应用和相关作用机制。方法:检索中国知网、维... 详细信息

背景:MXene基水凝胶是一类纳米复合的多功能性水凝胶材料,在慢性创面(如糖尿病足、压疮、癌症及外伤性溃疡等)修复领域有广阔的应用前景。目的:综述MXene基水凝胶的优势及其在创面修复领域的应用和相关作用机制。方法:检索中国知网、维普、PubMed、Science Direct数据库中收录的文章,文献检索时限为2010年1月至2023年10月,中文检索关键词为“MXene,水凝胶,组织工程应用,创面修复”,英文检索关键词为“MXene,Hydrogel,Wound repair”,最终选取符合标准的70篇文献进行综述。结果与结论:MXene基水凝胶在创面组织工程应用中具有优异的力学、导电和光热性能及生物相容性和抗菌性等生物学功效,可以与其他有机物质和无机物质相结合,在水凝胶中产生更大的治疗作用。含有MXene的水凝胶可以结合创面监测、药物递送和缓释以及光热治疗等方式应用于皮肤创面。尽管MXene基水凝胶复合材料的设计和制备已经取得一些良好进展,但仍处于基础研究阶段,缺乏临床验证其功效性和安全性,具有很大发展潜力和应用空间。

关键词：纳米功能材料 MXene 水凝胶创面修复生物相容性创面监测药物缓释

液相色谱串联质谱法研究比格犬体内替格瑞洛片剂的药动学

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中国药学杂志 2021年第16期56卷 1320-1324页

作者：刘小雨蒋婀娜刘天斌戚敏陈凯山东省药学科学院山东省生物药物重点实验室济南250101

目的建立液相色谱-串联质谱法测定比格犬血浆中替格瑞洛浓度,并应用于比格犬的药动学研究。方法比格犬血浆样本加甲醇沉淀蛋白后,采用Thermo Hypersil Gold C_(18)(2.1 mm×50 mm,5μm),流动相A为水(0.1%甲酸)、B为甲醇(0.1%甲酸),流速0... 详细信息

目的建立液相色谱-串联质谱法测定比格犬血浆中替格瑞洛浓度,并应用于比格犬的药动学研究。方法比格犬血浆样本加甲醇沉淀蛋白后,采用Thermo Hypersil Gold C_(18)(2.1 mm×50 mm,5μm),流动相A为水(0.1%甲酸)、B为甲醇(0.1%甲酸),流速0.50 mL·min^(-1),柱温40℃,进样量5μL。质谱采集方法为ESI负离子及多反应监测(MRM)模式,m/z 521.1/361.1。12只比格犬,分为2组,分别给予替格瑞洛片和市售品,于不同时间点采集血浆,测定血浆中浓度并计算药动学参数。结果该方法选择性好,灵敏度高,替格瑞洛在(2.5~5000)ng·mL^(-1)内线性关系良好,回收率为85.6%~87.9%,批内和批间的准确度(RE%)为-1.7~6.9、精密度(RSD%)为4.5~12.3。比格犬经给予替格瑞洛片和市售品后ρ_(max)和AUC_(0-t),分别为2255.4、2200.4ng·mL^(-1),9624.19547.2ng·h·mL^(-1)。结论本研究方法经过方法学验证,可以准确测定比格犬血浆中替格瑞洛的浓度测定,可以应用于其药动学研究中。替格瑞洛片相对于市售品的相对生物利用度为100.8%。

关键词：液相色谱-串联质谱法替格瑞洛片比格犬血浆药动学

多糖类组分对大鼠肝微粒体酶CYP1A2的体外活性抑制作用

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中国现代应用药学 2021年第24期38卷 3155-3159页

作者：房绍英孙淑萌刘纯邵华荣程艳玲山东省药学科学院山东省生物药物重点实验室济南250101

目的建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定大鼠肝微粒体中对乙酰氨基酚含量,研究人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对大鼠肝微粒体细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)1A2的体外抑制作用。方法以格列齐特为内标,建立LC-MS/MS测定大鼠肝微粒... 详细信息

目的建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定大鼠肝微粒体中对乙酰氨基酚含量,研究人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对大鼠肝微粒体细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)1A2的体外抑制作用。方法以格列齐特为内标,建立LC-MS/MS测定大鼠肝微粒体中对乙酰氨基酚含量方法。以α-萘黄酮为阳性对照药,分别将系列多糖溶液、CYP1A2酶的特异性探针底物非那西丁及大鼠肝微粒体进行孵育,LC-MS/MS测定代谢产物对乙酰氨基酚的含量,计算半数抑制浓度(IC_(50)),评价人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对大鼠肝微粒体CYP1A2酶的抑制活性。结果对乙酰氨基酚在10~1000 ng·mL^(-1)内线性良好,精密度试验RSD均100μmol·L^(-1)。结论在正常剂量下,人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对CYP1A2酶亚型均无抑制作用,可以与其底物联合用药。

关键词：人参多糖贻贝多糖黄原胶 CYP1A2

基于GEO数据库结合网络药理学和分子对接技术探究玉竹抗抑郁作用机制

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食品工业科技 2025年第1期46卷 359-366页

作者：姜振旭王朝兴王宇亮赵宏沈宇孙诗晴马永哲宋明明张宇佳木斯大学药学院黑龙江佳木斯154007 黑龙江省新药创制与药效毒理评价重点实验室黑龙江佳木斯154007

目的:基于生物信息学和网络药理学方法筛选玉竹治疗抑郁症的潜在药物靶点和信号通路,并通过PC12细胞实验初步证实其抗抑郁药效。方法:下载GSE98793表达矩阵和GPL570平台信息进行差异表达基因筛选;通过检索TCMSP数据库进行成分筛选,利用C... 详细信息

目的:基于生物信息学和网络药理学方法筛选玉竹治疗抑郁症的潜在药物靶点和信号通路,并通过PC12细胞实验初步证实其抗抑郁药效。方法:下载GSE98793表达矩阵和GPL570平台信息进行差异表达基因筛选;通过检索TCMSP数据库进行成分筛选,利用Cytoscape3.7.1软件,构建玉竹“药物-成分-靶点”相互作用网络图和PPI网络图;利用DAVID数据库,进行GO和KEGG富集分析;使用SYBYL-X 2.0软件对主要活性成分及靶点进行分子对接验证;采用谷氨酸(Glu)诱导PC12细胞模型后,将玉竹醇提物按低、中、高剂量进行分组给药,考查其对PC12细胞损伤的保护作用。结果:筛选得到玉竹抗抑郁活性成分23个,活性靶点34个;“药物-成分-靶点”网络图显示棕榈酸、月桂酸、(+)-雪松醇等为玉竹抗抑郁的主要活性成分;PPI网络图显示PTGS2、PTGS1、SLC6A2、GABRA1、TNF等为关键靶点;通过GO富集分析得到GO条目共209个,其中包括生物过程(BP)149个,细胞组分(CC)23个,分子功能(MF)37个;主要涉及Chemical carcinogenesis-receptor activation、Small cell lung cancer和Adipocytokine signaling pathway等信号通路;分子对接结果显示,玉竹主要活性成分与抑郁症主要靶点对接结果具有良好稳定性;体外细胞实验结果表明,600μg/mL的玉竹醇提物对Glu诱导的PC12细胞损伤具有明显恢复作用。结论:玉竹可能通过炎症反应、氧化应激和前列腺素合成等途径发挥抗抑郁作用。

关键词：玉竹抑郁症网络药理学 GEO 数据库作用机制

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靶向蛋白质降解技术研究进展

生物化学与生物物理进展 2022年第1期49卷 171-182页

作者：张晓元张艳艳孙晓康张林军陈勉刘飞山东省药学科学院山东省生物药物重点实验室山东省多糖类药物工程实验室多糖类药物发酵与精制国家地方联合工程实验室济南250101

靶向蛋白质降解技术可有效克服DNA敲除、RNA干扰等传统药物靶点确认及干扰策略的局限性。近年来,一系列新型靶向蛋白质降解技术不断涌现,在药物研发领域展现出极好的应用前景。本文综述了靶向蛋白质降解技术的最新研究进展,重点介绍各... 详细信息

靶向蛋白质降解技术可有效克服DNA敲除、RNA干扰等传统药物靶点确认及干扰策略的局限性。近年来,一系列新型靶向蛋白质降解技术不断涌现,在药物研发领域展现出极好的应用前景。本文综述了靶向蛋白质降解技术的最新研究进展,重点介绍各种技术的作用机制、应用情况、技术优势及目前存在问题,以期为药物靶点确认及新药开发提供有力理论及技术支持。

关键词：靶向蛋白质降解药物靶点新药开发

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共载姜黄素及顺铂pH敏感脂质体制备及其体外抗乳腺癌活性评价

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中草药 2025年第1期 52-67页

作者：赵笑雨陈怡莹张海亮唐钧泽喻锟潘蕊程欣云南中医药大学中药学院云南省傣医药与彝医药重点实验室云南省南药可持续利用研究重点实验室云南省高校外用给药系统与制剂技术研究重点实验室

目的制备共载姜黄素及顺铂pH敏感脂质体（cisplatin and curcumin co-loaded pH sensitive liposomes,CCL），初步考察其体外抗乳腺癌活性。方法半效法筛选两药联用的最佳比例；薄膜分散法制备CCL；单因素考察最佳处方工艺，并用Box-B... 详细信息

目的制备共载姜黄素及顺铂pH敏感脂质体（cisplatin and curcumin co-loaded pH sensitive liposomes,CCL），初步考察其体外抗乳腺癌活性。方法半效法筛选两药联用的最佳比例；薄膜分散法制备CCL；单因素考察最佳处方工艺，并用Box-Behnken设计-响应面法优化最优处方；激光粒度仪、透射电子显微镜（transmission electron microscope,TEM）考察CCL的粒径、ζ电位及形态；HPLC法测定药物含量；透析袋法考察体外释放规律；CCK-8考察4T1细胞增殖抑制作用；细胞划痕、细胞克隆、DAPI核染细胞实验分别考察4T1细胞迁移能力、增殖能力以及细胞凋亡；溶血实验考察其生物相容性。结果两药联用的最佳比例为顺铂-姜黄素1∶6;CCL的最优处方参数为药脂比1∶29.83，胆脂比1∶11.23，脱氧胆酸钠的用量14.08 mg;CCL在pH 7.0和pH 5.0条件下的粒径分别为（156.54±2.56）、（318.92±12.82）nm,ζ电位分别为（-34.48±2.67）、（-11.07±1.05）m V;TEM下，CCL在pH 7.0条件下形态较规整，呈类球形，无明显裂痕，在pH 5.0条件下粒径增大，形态不规则，出现裂痕；HPLC法测定CCL中姜黄素和顺铂的包封率和载药量分别为（96.45±0.53）%、（79.85±0.20）%和（1.43±0.13）%、（0.30±0.05）%；体外释放结果显示，CCL具有一定的缓释作用，符合一级释放模型；CCK-8实验结果显示，CCL对乳腺癌4T1细胞具有增殖抑制作用，并与药物质量浓度呈正相关；细胞划痕实验结果表明，同一时间下与对照组和其他给药组比较，CCL抑制细胞迁移能力显著增强（P实验结果表明，CCL组细胞核固缩、细胞数目少于其他给药组；细胞克隆形成实验结果表明，CCL组抑制细胞克隆的能力比其他组显著增强（P实验结果表明，CCL生物相容性良好。结论成功制备CCL，且姜黄素和顺铂两药联用比其单用的体外抗乳腺癌效果好，为药物联用治疗乳腺癌的研究提供新思路。

关键词：姜黄素顺铂 pH敏感脂质体薄膜分散法乳腺癌 Box-Behnken设计-响应面法

噁二唑类化合物的设计、合成及黄嘌呤氧化酶抑制活性研究

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药学学报 2025年第1期 164-171页

作者：王宏占杨亚军杨颖叶菲田金英张传明肖志艳内蒙古科技大学包头医学院药学院中国医学科学院北京协和医学院药物研究所活性物质发现与适药化研究北京市重点实验室中国医学科学院北京协和医学院药物研究所新药作用机制研究与药效评价北京市重点实验室

黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase,XO）是高尿酸血症及痛风治疗药物的重要靶点。基于前期获得的高活性XO抑制剂1,采用生物电子等排策略,设计并合成了噁二唑类化合物及其开环类似物共17个。其中,化合物2l、2n、3b在10μmol·L-1浓度下具... 详细信息

黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase,XO）是高尿酸血症及痛风治疗药物的重要靶点。基于前期获得的高活性XO抑制剂1,采用生物电子等排策略,设计并合成了噁二唑类化合物及其开环类似物共17个。其中,化合物2l、2n、3b在10μmol·L-1浓度下具有显著的XO抑制活性;化合物3b抑制XO的IC50值达到1.45μmol·L-1。

关键词：黄嘌呤氧化酶黄嘌呤氧化酶抑制剂噁二唑类化合物高尿酸血症痛风

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