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高效液相色谱-串联质谱法测定禽肉中24种抗虫药的残留量

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理化检验-化学分册 2024年

作者：王俊燕郭礼强田国宁张金玲战京芹潍坊市动物疫病预防控制中心潍坊海关潍坊市农业技术推广中心

为了同时监管禽肉中多种类型（四咪唑类、硝基咪唑类、三嗪类、氨基甲酸酯类和有机氮类）抗虫药，提出了题示研究。取已研磨混匀的样品（2±0.01）g，加入5 mL水和10 mL提取剂（由1 mL乙酸、600 mL乙腈和400 mL乙酸乙酯混合均匀），涡... 详细信息

为了同时监管禽肉中多种类型（四咪唑类、硝基咪唑类、三嗪类、氨基甲酸酯类和有机氮类）抗虫药，提出了题示研究。取已研磨混匀的样品（2±0.01）g，加入5 mL水和10 mL提取剂（由1 mL乙酸、600 mL乙腈和400 mL乙酸乙酯混合均匀），涡旋振荡20 min，加入无水MgSO40.5 g，离心5 min。取5 mL上层液于40 ℃氮气吹干，在净化管中加入20 mg C18粉、30 mg PSA粉和1 mL定容液（由1 mL甲酸、900 mL去离子水和100 mL乙腈混合均匀）后涡旋1 min，用0.22 μm双系微孔滤膜过滤。以GISTC18-AQ色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）为固定相，以不同体积比的0.1%（体积分数）甲酸溶液-乙腈混合液为流动相梯度洗脱分离滤液中24种抗虫药。质谱分析采用多反应监测模式，基质匹配法定量。结果表明，24种抗虫药的质量浓度在一定范围内与对应的响应值呈线性关系，检出限（3S/N）为0.01～0.40 μg·kg-1。按照标准加入法进行回收试验，回收率为61.2%～113%，测定值的相对标准偏差（n=6）不大于15%。方法用于分析30份实际样品，仅在1份鸭肉样品中检出羟基二甲硝咪唑，检出量为1.46 μg·kg-1，并且与农业农村部公告第197号-10-2019、SN/T 4809—2017标准方法中的测定结果基本一致。

关键词：禽肉高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS) 抗虫药 QuEChERS

上海5家宠物医院环境不动杆菌的耐药性检测及一株皮特不动杆菌的测序分析

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微生物学通报 2024年

作者：张玉杰王晓旭徐锋沈莉萍鞠龚讷唐聪圣齐新永徐平王建上海市动物疫病预防控制中心

【背景】不动杆菌属细菌是医院感染常见的条件致病菌，其耐药菌株的出现对公众的健康构成了严重的威胁。【目的】了解上海市宠物医院环境中不动杆菌属的流行现状及耐药性分析。【方法】从上海市5个区的5家宠物医院采集环境样品，经细菌... 详细信息

【背景】不动杆菌属细菌是医院感染常见的条件致病菌，其耐药菌株的出现对公众的健康构成了严重的威胁。【目的】了解上海市宠物医院环境中不动杆菌属的流行现状及耐药性分析。【方法】从上海市5个区的5家宠物医院采集环境样品，经细菌分离、纯化后利用细菌鉴定质谱仪鉴定分离株种属，并通过微量肉汤稀释法检测不动杆菌属分离株的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration， MIC)，并对其中1株耐碳青霉烯类分离菌进行基因组测序及遗传特征分析。【结果】730份环境样品共分离获得124株革兰氏阴性菌，经鉴定14株属于不动杆菌属(Acinetobacter spp.)，其中9株为鲁氏不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)。14株不动杆菌对米诺环素均敏感，但其中2株皮特不动杆菌(Acinetobacter pittii)和2株鲁氏不动杆菌为碳青霉烯类多重耐药不动杆菌，5株鲁氏不动杆菌对复方新诺明耐药，1株约氏不动杆菌(Acinetobacter johnsonii)对环丙沙星耐药。基因组测序结果表明，碳青霉烯类多重耐药皮特不动杆菌携带NDM-1、OXA-500和OXA-727等相关耐药基因，多位点序列分型(multilocus sequence typing， MLST)结果表明分离株为ST1037型，单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism， SNP)分析该菌株与来源于浙江省的临床尿液分离株A. pittii AP43的进化距离最近。【结论】上海市5家宠物医院环境中的不动杆菌分离株耐药率较低(<40%)，存在多重耐药现象(5株不动杆菌分别耐≥3种药物)且皮特不动杆菌携带多种耐药基因。

关键词：宠物医院不动杆菌属碳青霉烯耐药性测序

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4种布鲁氏菌病胶体金试纸条的比较研究

中国动物传染病学报 2024年

作者：黄晓兵杨磊刘爱军倪柏锋孙思琪浙江省动物疫病预防控制中心

旨在对比分析不同厂家布病胶体金法试纸条的检测效果，为牛羊定点屠宰场开展布病自检工作提供参考。本研究采用布病阳性血清标准品测定了4个厂家胶体金试纸条的Cut-off值，并通过对166份结果已知的家畜血清的检测，比较各个厂家试纸条... 详细信息

旨在对比分析不同厂家布病胶体金法试纸条的检测效果，为牛羊定点屠宰场开展布病自检工作提供参考。本研究采用布病阳性血清标准品测定了4个厂家胶体金试纸条的Cut-off值，并通过对166份结果已知的家畜血清的检测，比较各个厂家试纸条的敏感性、特异性等评价指标。结果表明：4个厂家试纸条的Cut-off值为标准血清抗体含量2.5 IU/mL～10 IU/mL，敏感性为8%～100%，特异性为93.10%～100%，符合率为72.29%～96.39%，AUC值为0.54～0.97；配对卡方检验结果显示：除厂家A外，厂家B、C、D的结果与真实结果均有显著性差异（P＜0.05）。A厂家试纸条的检测结果与真实结果符合率为95.18%，成本-效果分析结果表明，4个厂家的C/E值分别为15.76、31.52、19.71和20.75，厂家A试纸条准确诊断1份样品的成本最低。故推荐使用A厂家的胶体金试纸条开展宰前动物布病的筛查工作。

关键词：布鲁氏菌病胶体金法初筛比较分析

水貂阿留申病毒的微滴式数字PCR方法的建立及初步应用

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中国预防兽医学报 2024年第2期46卷 164-170页

作者：蔡晓庆姜世金张金叶孙圣福王贵升山东省动物疫病与预防控制中心山东济南250100 山东农业大学山东泰安271018 北京市华都峪口禽业有限责任公司北京平谷101200 潍坊市动物疫病预防控制中心山东潍坊261061

为建立水貂阿留申病毒(AMDV)微滴式数字PCR (ddPCR)检测方法,本研究根据AMDV VP2基因的保守区设计特异性引物和探针,通过PCR扩增AMDV VP2基因并克隆至p MD19-T载体,构建重组质粒p MD19-T-AMDV,并经PCR和测序鉴定后利用该质粒标准品作为... 详细信息

为建立水貂阿留申病毒(AMDV)微滴式数字PCR (ddPCR)检测方法,本研究根据AMDV VP2基因的保守区设计特异性引物和探针,通过PCR扩增AMDV VP2基因并克隆至p MD19-T载体,构建重组质粒p MD19-T-AMDV,并经PCR和测序鉴定后利用该质粒标准品作为模板,通过各反应条件的优化,初步建立了检测AMDV的ddPCR方法。分别以AMDV、水貂肠炎细小病毒、犬瘟热病毒、犬细小病毒、水貂流感病毒基因组为模板,按照本研究建立的ddPCR方法检测,评估其特异性;将1.43×10^(7)拷贝/μL~1.43×10^(0)拷贝/μL的重组质粒标准品作为模板,采用优化后的ddPCR和文献中的荧光定量PCR (qPCR)检测,评估该方法的敏感性;分别以不同浓度的重组质粒标准品作为模板,采用优化后的ddPCR分别进行批内和批间重复性试验,以变异系数(CV)评估该方法的重复性。优化结果显示,该方法的最佳引物终浓度为400 nmol/L (1.2μL)、探针终浓度为200 nmol/L (0.6μL)、退火温度为60℃。特异性试验结果显示,该方法仅可检测到AMDV和质粒标准品,而其他相关病毒均为阴性结果。敏感性试验结果显示,该方法对重组质粒标准品的检测限为1.43拷贝/μL,qPCR对质粒标准品的检测限为1.43×10^(2)拷贝/μL,前者比后者的敏感性高100倍。重复性试验结果,批内和批间重复性试验的变异系数均小于3%。对采集的70份病貂肝脏、脾、肾脏、环境拭子、肛拭子样品进行ddPCR和qPCR检测,结果显示,ddPCR对AMDV的检出率为24.28%(17/70);qPCR的检出率为15.7%(11/70),二者的阳性符合率为64.7%,阴性符合率为89.83%,总符合率为91.42%。上述结果表明,本研究建立的ddPCR方法特异性强、敏感性高和重复性好,可以检测各种临床样品及含量极低样品中的AMDV,为AMDV早期感染的检测、流行病学调查及AMD的防控提供有力技术手段。

关键词：微滴式数字PCR 检测水貂阿留申病毒

猫泛白细胞减少症病毒分离鉴定及VP2基因的遗传变异分析

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动物医学进展 2024年第8期45卷 28-34页

作者：张启龙李振河程敏姮栗云鹏高晓龙傅彩霞王林高敏余琦周德刚张玮李志军北京市动物疫病预防控制中心北京102629 北京市平谷区动物疫病预防控制中心北京101200

为分析北京地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行毒株及其VP2基因遗传变异情况,对FPV胶体金试纸条检测结果为阳性的病死猫组织进行病毒分离,通过细胞病变、荧光定量PCR、间接免疫荧光和全基因组测序等试验,... 详细信息

为分析北京地区猫泛白细胞减少症病毒(Feline panleukopenia virus,FPV)的流行毒株及其VP2基因遗传变异情况,对FPV胶体金试纸条检测结果为阳性的病死猫组织进行病毒分离,通过细胞病变、荧光定量PCR、间接免疫荧光和全基因组测序等试验,分离鉴定到1株FPV,命名为FPVBJ-CP/2022株。对决定病毒宿主范围和抗原性的VP2基因系统进化树分析表明,分离株与FPVJF-3株、FPVBeijing-01/2018聚为一支,与FPV疫苗株、CPV群亲缘关系较远。VP2蛋白主要功能位点分析结果显示,VP2蛋白中决定病毒抗原性和宿主嗜性的10个关键位点氨基酸均未发生突变,但该分离株的VP2蛋白序列与GenBank其他FPV毒株的VP2蛋白相比,91位氨基酸由丙氨酸(A)突变为丝氨酸(S),505位氨基酸由天冬酰胺(N)突变为天冬氨酸(D),该突变是否对FPVBJ-CP/2022株VP2蛋白的功能和生物学特性造成改变,有待于进一步研究。论文通过对毒株的遗传变异分析,为更好地预防和控制FPV感染提供了研究基础。

关键词：猫泛白细胞减少症病毒分离鉴定 VP2基因遗传进化分析

日粮中添加复合益生菌对西门塔尔犊牛生长性能、血清指标及瘤胃发酵性能的影响

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中国饲料 2024年第13期 76-79页

作者：陈敏艳安加俊贾培龙陕西省动物疫病预防控制中心陕西西安710016 咸阳市动物疫病预防控制中心陕西咸阳713899

为研究日粮中添加复合益生菌对西门塔尔犊牛生长性能、血清指标及瘤胃发酵性能的影响,试验选取体重相近、70日龄的健康西门塔尔牛犊牛共18头,随机分为对照组、试验I组、试验II组。试验I组和II组分别在基础日粮基础上,额外添加1.5 g和3 ... 详细信息

为研究日粮中添加复合益生菌对西门塔尔犊牛生长性能、血清指标及瘤胃发酵性能的影响,试验选取体重相近、70日龄的健康西门塔尔牛犊牛共18头,随机分为对照组、试验I组、试验II组。试验I组和II组分别在基础日粮基础上,额外添加1.5 g和3 g益生菌,试验60 d。结果表明:(1)试验II组犊牛平均日增重较对照组提高了18.31%(P 0.05)。(2)血液生化指标中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总蛋白、白蛋白、胆固醇和甘油三酯各组之间差异不显著(P> 0.05);试验II组Ig G和IL-6等免疫指标较对照组分别提高了26.08%和20.17%(P 0.05)。(3)试验II组瘤胃氨态氮和丁酸含量较对照组分别提高了49.85%和45.17%,乙酸含量降低了34.24%(P 0.05)。以上结果表明,犊牛日粮中添加复合益生菌能够促进犊牛的生长性能,提高免疫功能和瘤胃发酵功能。本试验中,以添加3 g/(头·d)的复合益生菌较适宜。

关键词：犊牛复合益生菌生长性能免疫瘤胃发酵

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鸭病毒性肝炎的预防及防治

中国畜牧业 2024年第2期 118-119页

作者：王玉芝山东省潍坊市动物疫病预防控制中心

鸭病毒性肝炎是由鸭病毒引起的一种急性、传染性肝炎。该病主要发生在鸭子、鹅和鹤等禽类中,尤以1~4周龄的幼鸭多见。该病主要通过消化道传播,也可经呼吸道传播。患病鸭子常出现食欲减退、嗜睡、体温升高、腹泻等症状,严重者可出现黄疸... 详细信息

鸭病毒性肝炎是由鸭病毒引起的一种急性、传染性肝炎。该病主要发生在鸭子、鹅和鹤等禽类中,尤以1~4周龄的幼鸭多见。该病主要通过消化道传播,也可经呼吸道传播。患病鸭子常出现食欲减退、嗜睡、体温升高、腹泻等症状,严重者可出现黄疸、肝脾肿大等症状。因此,预防和控制鸭病毒性肝炎对维护家禽养殖业的健康可持续发展具有重要意义。

关键词：鸭病毒性肝炎传染性肝炎家禽养殖业食欲减退肝脾肿大呼吸道传播消化道传播鸭子

羊肠道病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用

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中国动物传染病学报 2024年

作者：王勤欧云文何博刘俐君达州职业技术学院开江县动物疫病预防控制中心达州市动物疫病预防控制中心

为了建立一种快速的羊肠道病毒（CEV）抗体间接ELISA检测方法，试验采用原核表达系统对VP1蛋白进行体外表达，利用纯化后的重组蛋白建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示：VP1蛋白以包涵体形式表达，Western blot检测表明重组蛋白具有... 详细信息

为了建立一种快速的羊肠道病毒（CEV）抗体间接ELISA检测方法，试验采用原核表达系统对VP1蛋白进行体外表达，利用纯化后的重组蛋白建立间接ELISA抗体检测方法。结果显示：VP1蛋白以包涵体形式表达，Western blot检测表明重组蛋白具有良好的反应活性，建立的间接ELISA方法检测BDV、BVDV、GPV、ORF、SPA阳性血清均为阴性，对CEV阳性血清的最低检出效价可达1︰25 600，与IFA方法的符合率为93.33%（28/30），检测四川地区816份羊血清样品的CEV阳性感染率达7.72%（63/816）。表明建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性、准确性和临床适用性，可用于CEV临床抗体检测及流行病学调查。

关键词：羊肠道病毒 VP1蛋白原核表达间接ELISA 抗体检测

2010—2021年甘肃省山羊传染性胸膜肺炎流行病学调查分析

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中国兽医杂志 2024年第9期60卷 47-55页

作者：康新华韩庆彦毋艳萍柴刚王亮甘肃省动物疫病预防控制中心甘肃兰州730046 兰州市城关区动物疫病预防控制中心甘肃兰州730031

为了解甘肃省山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)的流行情况,本试验采用流行病学调查方法对全省2010—2021年羊群CCPP的发病情况进行了调查,并从地区、物种、季节、性别、年龄、养殖规模、疫点类型和是否采取治疗措施方面对数据进行了统计分析。... 详细信息

为了解甘肃省山羊传染性胸膜肺炎(CCPP)的流行情况,本试验采用流行病学调查方法对全省2010—2021年羊群CCPP的发病情况进行了调查,并从地区、物种、季节、性别、年龄、养殖规模、疫点类型和是否采取治疗措施方面对数据进行了统计分析。调查结果显示,2010—2021年全省CCPP平均发病率为8.15%(11 077/135 860),病死率为29.49%(3 267/11 077),CCPP发病率与物种、季节、年龄和是否采取治疗措施有关。山羊CCPP发病率(9.79%,9 038/92 306)极显著高于绵羊(4.68%,2 039/43 554)(P0.05),CCPP的发病也无明显地域性。结果表明,CCPP在甘肃省普遍流行,山羊比绵羊更易感,在年龄较大、寒冷季节和缺乏治疗的情况下发病率增加。因此,养殖场户应当针对风险因素制定预防策略,并通过采取定期调查监测、预防接种和治疗等措施,降低CCPP在甘肃省的发病率。

关键词：山羊传染性胸膜肺炎(CCPP) 流行病学调查分析甘肃省