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斑马鱼炎症模型及其在中药抗炎领域的应用

药物评价研究 2021年第8期44卷 1573-1580页

作者：段秀英马瑞娇张云刘可春齐鲁工业大学(山东省科学院)生物研究所山东济南250103 山东省人类疾病斑马鱼模型与药物筛选工程技术研究中心山东济南250103

中药抗炎在近年来已成为一个重要的研究领域,中药制剂的抗炎临床研究已经取得了一定进展,但具体活性成分及作用机制仍需进一步明确。斑马鱼由于其独特的生物学优势,目前已被广泛应用于中药抗炎活性的筛选。综合近年来国内外有关斑马鱼... 详细信息

中药抗炎在近年来已成为一个重要的研究领域,中药制剂的抗炎临床研究已经取得了一定进展,但具体活性成分及作用机制仍需进一步明确。斑马鱼由于其独特的生物学优势,目前已被广泛应用于中药抗炎活性的筛选。综合近年来国内外有关斑马鱼模型在中药抗炎领域的报道,从已构建的斑马鱼炎症模型、斑马鱼模型中的炎症介质、斑马鱼模型在中药抗炎药物筛选中的应用3个方面对斑马鱼炎症模型及其在中药抗炎领域的研究进展进行综述,以期为模式生物斑马鱼在中药抗炎领域的研究应用提供新思路,为抗炎中药的开发与利用提供借鉴参考。

关键词：斑马鱼转基因炎症模型炎症介质中药抗炎药物筛选

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香螺肽脱色工艺及其抗氧化活性

食品科学 2020年第6期41卷 252-258页

作者：张姗姗李晓彬张轩铭韩利文刘可春齐鲁工业大学(山东省科学院) 山东省科学院生物研究所山东省人类疾病斑马鱼模型与药物筛选工程技术研究中心山东省生物检测技术工程实验室山东济南250103

以香螺为原料,采用酸醇浸提法,制备香螺粗多肽。通过采用响应面试验,确定香螺粗多肽脱色优化的工艺:活性炭用量0.42%、脱色温度52℃、脱色时间50 min、反应体系pH 7.4。在此条件下,香螺多肽保留率为(67.63±0.80)%,脱色率为(68.70±0.5... 详细信息

以香螺为原料,采用酸醇浸提法,制备香螺粗多肽。通过采用响应面试验,确定香螺粗多肽脱色优化的工艺:活性炭用量0.42%、脱色温度52℃、脱色时间50 min、反应体系pH 7.4。在此条件下,香螺多肽保留率为(67.63±0.80)%,脱色率为(68.70±0.54)%。香螺肽对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除活性的EC50值为170.041μg/mL,利用新型斑马鱼模型的体内抗氧化活性研究发现,其在50μg/mL质量浓度条件下,表现出与阳性对照的VC相似的抗氧化能力,在200μg/mL质量浓度条件下,可抑制由斑马鱼模型的氧化损伤。肽的总氨基酸含量为853.46 mg/g,采用柱前衍生法分析,其碱性及酸性氨基酸含量的总和约占氨基酸总量的80%,其中精氨酸、丙氨酸以及脯氨酸含量最高。

关键词：香螺肽脱色工艺响应面法氨基酸组成抗氧化活性斑马鱼

纳米氧化铝暴露致斑马鱼神经发育毒性和帕金森样症状作用研究

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环境与职业医学 2024年第7期41卷 814-821页

作者：曾繁钊靳梦时瑞碟张秀军李宁华北理工大学公共卫生学院河北唐山063200 齐鲁工业大学(山东省科学院)生物研究所山东济南250103 山东省人类疾病斑马鱼模型与药物筛选工程技术研究中心山东济南250103

[背景]纳米氧化铝(nano-Al_(2)O_(3))是一种广泛应用的纳米材料,其对环境和生物的影响引起了广泛关注。斑马鱼是一种常用的模式生物,其基因组与人类有较高的同源性,被广泛用于毒性研究。[目的]探究nano-Al_(2)O_(3)暴露对斑马鱼的发育... 详细信息

[背景]纳米氧化铝(nano-Al_(2)O_(3))是一种广泛应用的纳米材料,其对环境和生物的影响引起了广泛关注。斑马鱼是一种常用的模式生物,其基因组与人类有较高的同源性,被广泛用于毒性研究。[目的]探究nano-Al_(2)O_(3)暴露对斑马鱼的发育毒性和神经毒性及相应的作用机制。[方法]将受精后6 h(6 hpf)的斑马鱼胚胎随机分为空白对照组和不同剂量nano-Al_(2)O_(3)暴露组(200、400、600、800和1000μg·mL^(-1))。每组30颗胚胎,每24 h更换一次培养液,培养至144 hpf。统计48和72 hpf时斑马鱼孵化率和累计至144 hpf的畸形率。144 hpf时利用斑马鱼行为分析仪记录斑马鱼的运动轨迹,分析各组斑马鱼运动的总距离和平均速度。144 hpf时,在荧光显微镜下观察转基因斑马鱼vmat2:GFP的多巴胺能神经元、vegf:GFP的脑部血管和elavl3:EGFP的中枢神经系统神经元的发育状况,并用Image Pro Plus进行相应的统计分析。利用实时荧光定量PCR检测144 hpf时斑马鱼神经元发育相关基因(syn2α、gap43、dat)、路易小体形成相关基因(α-syn)和自噬相关基因(pink1、parkin)的表达情况。[结果]与空白对照组相比,nano-Al_(2)O_(3)暴露组在48 hpf时孵化率降低,累计畸形率升高(P鱼鳔发育迟缓、鱼鳔缺失、身体弯曲等现象。自主行为学检测结果显示,与空白对照组相比,nano-Al_(2)O_(3)暴露组斑马鱼游动的总距离降低(P斑马鱼多巴胺能神经元长度减小(P斑马鱼脑部血管明显缺失,elavl3:EGFP转基因斑马鱼中枢神经系统神经元荧光强度减弱(P斑马鱼的α-syn、syn2α、dat和gap43(除400μg·mL^(-1)暴露组外)基因表达上调(P斑马鱼的parkin和除200μg·mL^(-1)暴露组外的所有暴露组pink1基因均表达出现下调(P斑马鱼幼鱼具有发育毒性,并诱导斑马鱼出现帕金森病样症状,初步推测其机制可能与nano-Al_(2)O_(3)诱导线粒体自噬障碍有关。

关键词：纳米氧化铝斑马鱼发育毒性神经毒性帕金森病

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缺氧损伤模型及抗缺氧药物筛选研究进展

药物评价研究 2023年第9期46卷 2037-2045页

作者：张思岳张惠雯夏青王荣春张云刘可春齐鲁工业大学(山东省科学院) 山东省科学院生物研究所山东济南250103 山东省人类疾病斑马鱼模型与药物筛选工程技术研究中心山东济南250103

在临床上,缺氧是引起机体损伤甚至导致机体死亡的最常见因素,因此建立了一系列缺氧损伤模型,如体外细胞模型上,通过液态石蜡封闭法、厌氧袋产气法、混合气体培养法等方法建立缺氧损伤模型。在动物模型(如大、小鼠和斑马鱼模型)上,通过... 详细信息

在临床上,缺氧是引起机体损伤甚至导致机体死亡的最常见因素,因此建立了一系列缺氧损伤模型,如体外细胞模型上,通过液态石蜡封闭法、厌氧袋产气法、混合气体培养法等方法建立缺氧损伤模型。在动物模型(如大、小鼠和斑马鱼模型)上,通过混合气体培养法、钠石灰吸收法、动脉结扎法以及化学试剂处理建立缺氧损伤模型;并通过检测缺氧后存活时间、酶学指标、血气指标、组织病理切片及缺氧相关因子的变化情况进行抗缺氧药物的筛选和评价。综述缺氧损伤模型及抗缺氧药物筛选的研究进展,以期为临床治疗缺氧提供理论依据和参考。

关键词：缺氧损伤细胞模型动物模型活性评价指标抗缺氧药物药物筛选

基于斑马鱼模型的蟾酥甲醇提取物抑制血管生成和抗炎活性研究

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药物评价研究 2021年第7期44卷 1392-1397页

作者：朱成悦张姗姗杨飞张长青刘可春张云齐鲁工业大学(山东省科学院) 山东省科学院生物研究所山东济南250103 山东省人类疾病斑马鱼模型与药物筛选工程技术研究中心山东济南250103

目的对蟾酥甲醇提取物中化学成分进行初步分析,并利用斑马鱼模型评价其抑制血管生成及抗炎活性。方法采用液质联用(LC-MS)技术,用反相C_(18)色谱柱,以0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾-三重四级杆飞行时间质谱正/负离... 详细信息

目的对蟾酥甲醇提取物中化学成分进行初步分析,并利用斑马鱼模型评价其抑制血管生成及抗炎活性。方法采用液质联用(LC-MS)技术,用反相C_(18)色谱柱,以0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾-三重四级杆飞行时间质谱正/负离子双重扫描方式,对提取物中的样品进行分析;采用受精后24 h(24 hpf)绿色荧光标记血管的转基因斑马鱼作为实验动物模型,荧光显微镜下观察背部节间血管生成情况,计算节间血管长度,研究PTK787(阳性药,0.2μg/mL)和蟾酥甲醇提取物2、4、6μg/mL浓度对斑马鱼血管生成的影响;采用受精后3 d(3 dpf)健康绿色荧光标记炎症细胞的转基因斑马鱼作为实验动物模型,设置对照组、模型(CuSO_(4),20μmol/L)组、布洛芬(阳性药,20μmol/L)组和蟾酥甲醇提取物(0.4、0.8μg/mL)组,计数神经丘周围炎症细胞个数。结果蟾酥甲醇提取物中共检测出33个色谱峰,并鉴定出其中7个为结合型蟾蜍二烯酸内酯。与对照组比较,蟾酥甲醇提取物4、6μg/mL浓度组斑马鱼血管生成受到抑制,血管长度变短,具有显著性差异(P模型组斑马鱼迁移到神经丘侧线部位的炎症细胞数量显著增多(P模型组比较,蟾酥甲醇提取物0.8μg/mL组炎症细胞迁移减少,具有显著差异(P<0.01)。结论通过LC-MS法从蟾酥甲醇提取物中鉴定出7个结合型蟾蜍二烯酸内酯,蟾酥甲醇提取物具有抑制血管生成和抗炎活性。

关键词：蟾酥甲醇提取物斑马鱼血管生成抗炎蟾蜍二烯酸内酯

基于网络药理学的双丹方治疗冠心病的作用机制研究

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中草药 2019年第20期50卷 4985-4994页

作者：李昊楠孔浩天史永平李晓彬张姗姗张轩铭张云田青平韩利文刘可春齐鲁工业大学(山东省科学院)山东省科学院生物研究所山东省人类疾病斑马鱼模型与药物筛选工程技术研究中心山东济南250103 山西医科大学药学院山西太原030001

目的利用网络药理学的方法探索双丹方治疗冠心病(CHD)的活性成分和分子作用机制。方法采取类药五原则筛选双丹方活性成分;经TCMSP数据库获得双丹方活性成分的靶蛋白,并在OMIN数据库查找CHD的靶点蛋白;运用Cytoscape软件构建双丹方活性成... 详细信息

目的利用网络药理学的方法探索双丹方治疗冠心病(CHD)的活性成分和分子作用机制。方法采取类药五原则筛选双丹方活性成分;经TCMSP数据库获得双丹方活性成分的靶蛋白,并在OMIN数据库查找CHD的靶点蛋白;运用Cytoscape软件构建双丹方活性成分-潜在靶点、双丹方活性成分-CHD疾病靶点的相互作用网络,通过度等网络拓扑特征评价筛选出双丹方在CHD作用的核心靶点;通过STRING数据库进行蛋白质相互作用分析;采用斑马鱼模型研究双丹颗粒的促进血管生成作用。结果从TCMSP数据库得到双丹方中丹参酮、丹皮酚等39个活性成分和205个蛋白质靶点,筛选出与双丹方作用CHD的IL6、MAPK1、TP53、AKT1、VEGFA等核心靶点111个,GO分析共包含RNA调节、炎症反应、G蛋白偶联、类固醇激素受体活性、细胞分化、血管收缩等19条富集结果。利用DAVID数据库对相关通路富集,筛选出对冠心病具有作用的VEGF信号通路、FXO信号通路、ErBb信号通路等13条通路。结论通过网络药理学验证了双丹方多成分、多靶点、整体调节的作用特点,预测了双丹方在CHD中的主要作用机制。

关键词：双丹方网络药理学冠心病丹皮丹参作用机制

一株海绵共附生青霉Penicillium sp.的次级代谢产物研究

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中草药 2024年第10期55卷 3223-3229页

作者：谢冬冬李嘉欣李培海尚如意刘可春林厚文焦伟华癌基因与相关基因国家重点实验室海洋药物研究中心上海交通大学医学院附属仁济医院上海200127 山东省斑马鱼人类疾病模型与药物筛选工程技术研究中心齐鲁工业大学(山东省科学院)生物研究所山东济南250103

目的研究海绵共附生青霉Penicillium ***5975的化学成分。方法采用减压硅胶柱色谱、十八烷基硅烷键合硅胶填料(ODS)中压柱色谱和半制备高效液相色谱等技术进行分离纯化,得到的单体化合物通过高分辨-电喷雾-质谱(HRESI-MS)、核磁共振波谱... 详细信息

目的研究海绵共附生青霉Penicillium ***5975的化学成分。方法采用减压硅胶柱色谱、十八烷基硅烷键合硅胶填料(ODS)中压柱色谱和半制备高效液相色谱等技术进行分离纯化,得到的单体化合物通过高分辨-电喷雾-质谱(HRESI-MS)、核磁共振波谱(NMR)以及与文献比对等方法进行鉴定。对分离得到的化合物进行斑马鱼促血管生成活性评价。结果从Penicillium ***5975中分离纯化出9个生物碱类化合物,包括1个新的化合物,命名为青霉吲哚碱甲(1);以及8个已知化合物,分别为17-羟基短密青霉酰胺N(2)、苯并玛尔维碱A(3)、苯并玛尔维碱B(4)、苯并玛尔维碱C(5)、苯并玛尔维碱D(6)、苯并玛尔维碱E(7)、(−)-苯并玛尔维碱E(8)和N-甲基诺喔苯并玛尔维碱A(9)。化合物2和7在50µg/mL质量浓度下对斑马鱼节间血管的生长有促进作用。结论化合物1为新化合物,化合物2和9为青霉属内首分化合物,化合物2和7具有一定的促血管生成活性。

关键词：青霉生物碱青霉吲哚碱甲海洋天然产物促血管生成活性 17-羟基短密青霉酰胺N 苯并玛尔维碱E

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基于斑马鱼模型的纯绿青霉醇抗炎活性研究

中国抗生素杂志 2023年第2期48卷 172-178页

作者：李风玲张云李培海李华杨桂文刘可春山东师范大学生命科学学院济南250014 齐鲁工业大学(山东省科学院)生物研究所济南250103 山东省斑马鱼人类疾病模型与药物筛选工程技术研究中心济南250103

目的利用斑马鱼急性炎症模型,对纯绿青霉醇(viridicatol)抗炎作用及其机制进行初步研究。方法采用硫酸铜(CuSO4)构建斑马鱼急性炎症模型,评价纯绿青霉醇的抗炎活性。将炎症状态下的斑马鱼(3 dpf)暴露在不同浓度的纯绿青霉醇(30、60和90... 详细信息

目的利用斑马鱼急性炎症模型,对纯绿青霉醇(viridicatol)抗炎作用及其机制进行初步研究。方法采用硫酸铜(CuSO4)构建斑马鱼急性炎症模型,评价纯绿青霉醇的抗炎活性。将炎症状态下的斑马鱼(3 dpf)暴露在不同浓度的纯绿青霉醇(30、60和90μg/mL)中2 h,布洛芬(ibuprofen,IBF)作为阳性对照,观察斑马鱼神经侧线炎症细胞迁移和聚集的数量变化情况并计算荧光强度;利用RT-PCR技术测定各组斑马鱼炎症相关基因的转录水平。结果与炎症模型组相比,布洛芬组和纯绿青霉醇组斑马鱼炎症细胞迁移和聚集的数量以及荧光强度均显著降低,同时30、60、90μg/mL剂量下的纯绿青霉醇能显著提高pparγ的mRNA表达水平,抑制炎症相关因子iκbαa、ap-1、nf-κb、il-1b、il8、ptges和myd88的mRNA表达。结论本研究通过建立斑马鱼急性炎症模型探究了纯绿青霉醇的抗炎作用,首次发现其机制可能是纯绿青霉醇激活pparγ表达,抑制nf-κb和ap-1转录活性,降低炎症因子表达,从而缓解炎症,为纯绿青霉醇的应用开发提供了新思路。

关键词：纯绿青霉醇斑马鱼抗炎作用机制

白屈菜红碱对腺样囊性癌细胞生长的抑制作用及机制研究

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药物评价研究 2021年第7期44卷 1361-1367页

作者：李磊杨学亮张云刘可春王雪王荣春齐鲁工业大学(山东省科学院) 生物研究所山东济南250014 山东省人类疾病斑马鱼模型与药物筛选工程技术研究中心山东济南250014 山东省生物检测技术工程实验室山东济南250014

目的探究白屈菜红碱(CHE)对腺样囊性癌细胞(ACC2)生长的抑制作用及机制。方法利用CCK8法、EdU法、Hoechst33342/PI双染色法、试剂盒法检测CHE对ACC2细胞活力、细胞增殖、细胞凋亡和活性氧(ROS)水平的影响;通过Western blotting技术检测... 详细信息

目的探究白屈菜红碱(CHE)对腺样囊性癌细胞(ACC2)生长的抑制作用及机制。方法利用CCK8法、EdU法、Hoechst33342/PI双染色法、试剂盒法检测CHE对ACC2细胞活力、细胞增殖、细胞凋亡和活性氧(ROS)水平的影响;通过Western blotting技术检测CHE对Cleaved-Caspase 3、PARP、NF-κB、p-JNK、p-p38蛋白表达的影响;利用斑马鱼移植瘤模型检测CHE对斑马鱼体内ACC2细胞生长的抑制作用。结果CCK-8结果显示:与对照组比较,2、3、4、5、6、7、8、9、10µmol/L的CHE显著降低ACC2细胞的存活率(P斑马鱼体内肿瘤的生长(P斑马鱼移植瘤模型证明,CHE可以有效抑制ACC2细胞生长,其机制与提高细胞ROS水平,上调NF-κB、p-JNK、p-p38表达,从而抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡相关。

关键词：白屈菜红碱细胞增殖细胞凋亡活性氧腺样囊性癌细胞(ACC2) 斑马鱼 NF-κB