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忍冬VIGS基因沉默体系构建

中草药 2024年第4期55卷 1309-1315页

作者：褚洪月刘振华李佳张永清蒲高斌山东中医药大学山东济南250355 山东省中药质量控制与全产业链建设协同创新中心山东济南250355

目的以忍冬Lonicera japonica八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)基因为标记基因,利用ZMBJCMV载体建立基于病毒诱导的忍冬基因沉默体系。方法以忍冬为材料,通过选取同源性较高的片段设计PDS基因的特异性引物,克隆出片段长度为... 详细信息

目的以忍冬Lonicera japonica八氢番茄红素脱氢酶(phytoene desaturase,PDS)基因为标记基因,利用ZMBJCMV载体建立基于病毒诱导的忍冬基因沉默体系。方法以忍冬为材料,通过选取同源性较高的片段设计PDS基因的特异性引物,克隆出片段长度为135 bp的序列作为目的基因片段,经双酶切后与黄瓜花叶病毒载体连接构建VIGS重组载体,转化根癌农杆菌后,侵染忍冬幼苗。此外,还对农杆菌吸光度(A)值和侵染方法对PDS基因沉默效率的影响进行了比较。结果被侵染植株叶片PDS基因表达水平显著降低,叶绿素和类胡萝卜素含量显著下降,叶片出现白化表型。结论建立了以ZMBJ-CMV载体诱导的忍冬基因沉默体系,农杆菌A值为0.8、注射后再进行真空浸润,能够提高忍冬目标基因的沉默效率,为开展忍冬关键基因的功能研究提供了技术支撑。

关键词：忍冬 LjPDS VIGS 叶绿素类胡萝卜素沉默体系

基于单细胞转录组测序技术筛选蟾蜍耳后腺免疫修复基因

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山东农业科学 2024年

作者：郭媛媛陈晶陈文潇洪永健胡晶红山东中医药大学药学院山东省质量控制与中药全产业链建设协同创新中心

中华大蟾蜍是我国传统药源动物，是名贵中药材蟾酥的基原物种之一。为筛选中华大蟾蜍耳后腺免疫修复基因，本试验采用Illumina测序平台对成年中华大蟾蜍耳后腺组织样本进行单细胞转录组测序（single-cell RNA-sequencing，scRNA-seq）... 详细信息

中华大蟾蜍是我国传统药源动物，是名贵中药材蟾酥的基原物种之一。为筛选中华大蟾蜍耳后腺免疫修复基因，本试验采用Illumina测序平台对成年中华大蟾蜍耳后腺组织样本进行单细胞转录组测序（single-cell RNA-sequencing，scRNA-seq），完成scRNA-seq文库构建后进行细胞亚群分类，对细胞亚群中上调表达基因和免疫修复相关基因进行分析，并通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）对候选基因进行初步筛选与验证。结果表明，蟾蜍耳后腺组织中用于文库构建和对端测序的细胞数量为8 414个，每个细胞的平均读数和中位基因数为46 326和734，可用于进一步分析的高质量细胞数为7 687个。聚类分析得到12个细胞亚群，并推测Cluster 10是来源于结缔组织的浆细胞。通过GO和KEGG分析对Cluster 10中的217个上调表达基因进行分析，鉴定出多个参与机体免疫的生物过程和通路，包括淋巴细胞活化、淋巴细胞分化及白细胞活化等生物过程和细胞受体信号通路、Fc epsilon RI信号通路及趋化因子信号通路等免疫相关通路。从Cluster 10的差异基因中筛选出MYO1F基因和CYBB基因为中华大蟾蜍耳后腺免疫修复基因，并通过qRT-PCR对两基因进行验证，推测与免疫修复具有正向调节关系。本研究结果可为后续挖掘蟾蜍耳后腺免疫修复基因、研究蟾蜍耳后腺采酥后的修复机制提供理论依据，为蟾蜍耳后腺单细胞组学研究提供参考信息。

关键词：单细胞转录组测序中华大蟾蜍实时荧光定量PCR 免疫基因

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代谢组学在中药配伍减毒中的应用进展

中华中医药杂志 2024年第2期39卷 866-870页

作者：劳秋荣袁颢宸王花欣王宁马婷山东中医药大学济南250355 山东省中医经典名方协同创新中心济南250355

有毒中药毒性复杂,常通过配伍的方式达到减毒的目的,但配伍后的毒性改变尚未清楚,因此有毒中药配伍后的毒性评估至关重要,是临床用药前的重要环节。代谢组学在评估药物毒性方面具有显著的优势,但目前缺乏配伍减毒后毒性评估的系统性论述... 详细信息

有毒中药毒性复杂,常通过配伍的方式达到减毒的目的,但配伍后的毒性改变尚未清楚,因此有毒中药配伍后的毒性评估至关重要,是临床用药前的重要环节。代谢组学在评估药物毒性方面具有显著的优势,但目前缺乏配伍减毒后毒性评估的系统性论述,故笔者梳理了近年来代谢组学运用于有毒中药配伍减毒中的相关文献。笔者从代谢组学的概况及代谢组学在含有毒中药药对、复方中展开论述,比较配伍前后的毒性生物标志物和代谢通路,将代谢过程中发生变化的代谢产物作为评估指标,探讨有毒中药配伍减毒的可能机制,以期为临床用药以及毒理学的研究提供参考。

关键词：代谢组学有毒中药配伍减毒中药复方毒性评估中药药对研究进展

海藻酸钠复合水凝胶的制备及在中药挥发油缓释领域的应用进展

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高分子材料科学与工程 2024年第4期40卷 175-181页

作者：俞树琴王芸周强陈晖刘雪枫刘雄施小宁高建德甘肃中医药大学药学院甘肃兰州730000 省部共建教育部西北中藏药协同创新中心甘肃兰州730000

海藻酸钠由于来源广泛、价格低廉,分子中含有大量的羧基、羟基,在较为温和的环境中,能够迅速地构成三维网状结构的水凝胶而受到了人们的广泛关注,但单一的海藻酸钠水凝胶力学性能和力学强度较差。当与其他物质形成复合水凝胶后则因其优... 详细信息

海藻酸钠由于来源广泛、价格低廉,分子中含有大量的羧基、羟基,在较为温和的环境中,能够迅速地构成三维网状结构的水凝胶而受到了人们的广泛关注,但单一的海藻酸钠水凝胶力学性能和力学强度较差。当与其他物质形成复合水凝胶后则因其优异的生物相容性、生物降解性和pH敏感性被广泛应用于敏感药物的缓控释领域。文中主要介绍了海藻酸钠复合水凝胶的相应制备方法和性能,以及在中药挥发油缓释领域的应用进展,同时指出了海藻酸钠复合水凝胶在中药挥发油缓释领域存在的问题及未来主要的研究方向。

关键词：海藻酸钠复合水凝胶中药挥发油缓释

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电化学不对称合成反应的研究进展

有机化学 2024年第3期44卷 673-727页

作者：高淳刘欣王明慧刘淑贤朱婷婷张怡康郝二军杨启亮河南师范大学化学化工学院、抗病毒性传染病创新药物全国重点实验室、平原实验室、绿色化学介质与反应教育部重点实验室、精细化学品绿色制造河南省协同创新中心河南新乡453007

不对称合成是有机化学最重要和最有价值的前沿领域之一.近年来,随着有机电化学的复兴和蓬勃发展,利用电化学的优势,拓展不对称催化的反应类型、活化模式、成键体系以及底物的适用范围,为完成传统化学难以实现或者无法实现的不对称转化... 详细信息

不对称合成是有机化学最重要和最有价值的前沿领域之一.近年来,随着有机电化学的复兴和蓬勃发展,利用电化学的优势,拓展不对称催化的反应类型、活化模式、成键体系以及底物的适用范围,为完成传统化学难以实现或者无法实现的不对称转化带来新的契机.因此,发展新型、高效、精准和可持续的电化学不对称合成策略,具有重要的研究意义.尽管具有诸多优势并取得了关键进展,不对称电化学合成依然极具挑战性,高对映选择性电化学转化的例子报道相对较少.近年来,国内外有机化学领域的学者们在电化学不对称催化领域开展了一系列原创性的研究工作,取得了令人瞩目的成果.全面梳理了过渡金属、有机小分子、生物酶、手性电极、手性电解质、手性溶剂和手性辅助剂参与的不对称电化学合成及其相关的反应机理;概述了不对称有机电化学合成领域的理论创新、技术突破和困难挑战;并展望了该领域的未来发展趋势.

关键词：有机电合成不对称催化对映选择性过渡金属催化有机催化

基于RNA-seq技术的不同发育期中华大蟾蜍耳后腺和腹皮转录组比较分析

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基因组学与应用生物学 2024年第6期43卷 1039-1053页

作者：陈文潇陈晶郭媛媛洪永健胡晶红张金山东中医药大学药学院济南250355 山东省质量控制与中药全产业链建设协同创新中心济南250355

通过对中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans)5个不同发育时期的耳后腺和腹皮进行转录组测序分析,挖掘参与毒素合成的关键因子,为深入研究毒素合成调控机理提供理论依据。分别取3月龄、6月龄、12月龄、24月龄、36月龄等5个发育时期的中华... 详细信息

通过对中华大蟾蜍(Bufo bufo gargarizans)5个不同发育时期的耳后腺和腹皮进行转录组测序分析,挖掘参与毒素合成的关键因子,为深入研究毒素合成调控机理提供理论依据。分别取3月龄、6月龄、12月龄、24月龄、36月龄等5个发育时期的中华大蟾蜍耳后腺和腹皮进行转录组测序,利用GO和KEGG对差异表达基因功能进行分析,利用加权共表达网络分析筛选关键基因。将处于相同发育时期腹皮与耳后腺的转录组数据进行比较,分别筛选出3053、3026、1516、1028和2061个差异表达基因。由GO分类统计结果可知,差异表达基因在生物过程类别主要集中于细胞过程、单一生物体过程、代谢过程和生物调节;在分子功能类别主要富集于结合、催化活性等方面;在细胞组分类别主要聚集于细胞、细胞组分和细胞器。KEGG通路分析结果表明,差异表达基因在蟾蜍发育过程中参与多条通路,如酪氨酸代谢、过氧化物酶体和初级胆汁酸代谢等。将5个发育时期的共同差异表达基因进行比较,筛选出与类固醇代谢、初级胆汁酸代谢和过氧化物酶体相关的21个基因,利用加权共表达网络分析筛选出4个模块的6个关键基因。在不同发育时期中华大蟾蜍的腹皮与耳后腺差异表达基因中,大量代谢途径基因发生了富集,这些基因可能在调控耳后腺毒素合成中具有重要作用,为解析蟾蜍产毒分子机制奠定了基础。

关键词：中华大蟾蜍产毒基因转录组分析差异表达基因

加味孔圣枕中丹含药血清调控SIRT1/PGC-1α通路改善氧糖剥夺再灌注PC12细胞的线粒体功能

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中药新药与临床药理 2024年第7期35卷 985-992页

作者：吴俏兰欧春雪武筱林高祖王嘉昀于华芸山东中医药大学中医学院山东济南250355 山东省中医经典名方协同创新中心山东济南250355

目的基于SIRT1/PGC-1α通路探讨加味孔圣枕中丹含药血清对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤PC12细胞的线粒体功能的改善作用及机制。方法采用大鼠PC12细胞构建体外OGD/R细胞模型。细胞分组:正常组(10%FBS)、模型组(10%FBS)、10%含药血清组、5... 详细信息

目的基于SIRT1/PGC-1α通路探讨加味孔圣枕中丹含药血清对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤PC12细胞的线粒体功能的改善作用及机制。方法采用大鼠PC12细胞构建体外OGD/R细胞模型。细胞分组:正常组(10%FBS)、模型组(10%FBS)、10%含药血清组、5%含药血清组(5%含药血清+5%空白血清)、10%空白血清组(对照组)。采用CCK-8法检测细胞存活率,筛选合适的氧糖剥夺时间(2、4、6、8 h);MTT法检测细胞活性;线粒体压力测试(MST)法检测细胞氧气消耗速率(OCR);流式细胞术(Annexin V-PE/7-AAD双染法)检测细胞凋亡情况;Western Blot法检测PC12细胞SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平。结果与正常组比较,氧糖剥夺2、4、6、8 h后的PC12细胞活性均明显下降(P<0.05),选择氧糖剥夺6 h作为后续实验造模时间。与正常组比较,模型组的细胞活性明显下降(P<0.05);细胞基础呼吸值、最大呼吸值、质子漏、ATP产生、备用呼吸能力的OCR值均明显降低(P<0.05);细胞凋亡率明显升高(P<0.05);细胞中SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。与模型组比较,加味孔圣枕中丹10%、5%含药血清组的细胞活性明显提高(P<0.05);细胞基础呼吸值、最大呼吸值、质子漏、ATP产生、备用呼吸能力的OCR值均明显升高(P<0.05);细胞凋亡率明显降低(P<0.05);细胞中SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论加味孔圣枕中丹含药血清能改善OGD/R损伤PC12细胞的线粒体功能障碍,抑制神经元凋亡,促进神经元存活,其作用机制可能与激活SIRT1/PGC-1α信号通路有关。

关键词：加味孔圣枕中丹缺血性脑卒中脑缺血再灌注损伤大鼠含药血清 PC12细胞氧糖剥夺再灌注线粒体功能 SIRT1/PGC-1α通路

基于血清代谢组学和流式细胞术探讨百药煎不同炮制品及其复方治疗溃疡性结肠炎作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第15期30卷 172-181页

作者：王瑞生侯娅芳曹文文赵亚红张振凌河南中医药大学豫药全产业链研发河南省协同创新中心河南省中药特色炮制技术工程研究中心河南省中药生产一体化工程技术研究中心河南省中药饮片炮制中医药重点实验室呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心郑州450008

目的:通过比较百药煎不同炮制品及其复方香梅丸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠的药效学与代谢组学差异,探讨其治疗UC的潜在作用机制。方法:80只SD大鼠适应性饲养3 d,随机分为空白组、模型组、美沙拉嗪组(0.4 g·kg^(-1)),百药煎组(1.89 g·kg^(... 详细信息

目的:通过比较百药煎不同炮制品及其复方香梅丸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠的药效学与代谢组学差异,探讨其治疗UC的潜在作用机制。方法:80只SD大鼠适应性饲养3 d,随机分为空白组、模型组、美沙拉嗪组(0.4 g·kg^(-1)),百药煎组(1.89 g·kg^(-1))、焦百药煎组(1.89 g·kg^(-1))、百药煎炭组(1.89 g·kg^(-1))、香梅丸低、高剂量组(1.89、5.67 g·kg^(-1)),每组10只。空白组灌胃给予生理盐水,其余7组每日灌胃给予5%右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液5 m L,连续给药8 d,诱导UC模型。造模完成后,各给药组分别灌胃给予相应剂量药液,空白组和模型组灌胃等量生理盐水,连续给药8 d。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-1β水平;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理变化;流式细胞仪检测各组大鼠外周血中辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)比例;利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)检测大鼠血清代谢物,结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对差异代谢物进行表征,根据变量重要性投影(VIP)值>1.0且P香梅丸低剂量组>百药煎炭组>焦百药煎组>百药煎组。代谢组学结果共筛选出26个差异代谢物,与空白组比较,模型组中有14个代谢物上调,5个代谢物下调,百药煎组、焦百药煎组、百药煎炭组、香梅丸低、高剂量组可分别回调14、9、14、12、17个代谢物。主要涉及柠檬酸盐循环通路、泛酸和辅酶A生物合成通路、芳香烃受体(Ah R)信号通路、糖酵解/糖异生通路等代谢通路。结论:百药煎炒炭后治疗UC效果明显提高,与白芷和乌梅炭配伍后疗效更加突出,可为百药煎复方制剂的开发提供依据。

关键词：百药煎溃疡性结肠炎血清代谢组学流式细胞技术辅助性T细胞17(Th17) 调节性T细胞(Treg) 炎症因子超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)

金银花新品种“华金6号”长蕾期表型形成机制解析

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药学学报 2024年第2期59卷 476-481页

作者：李润竹梁从莲刘振华李佳张永清刘海燕蒲高斌山东中医药大学药学院山东济南250355 山东省中药质量控制与全产业链建设协同创新中心山东济南250355 平邑县林业发展中心山东临沂273300

围绕金银花新品种“华金6号”长蕾期表型,以“华金6号”及“大毛花”为材料,探究其表型形成机制。检测内源茉莉酸类植物激素(jasmonic acid hormones,JAs)含量;对忍冬进行转录组分析,确定与茉莉酸(jasmonic acid,JA)合成相关基因;采集... 详细信息

围绕金银花新品种“华金6号”长蕾期表型,以“华金6号”及“大毛花”为材料,探究其表型形成机制。检测内源茉莉酸类植物激素(jasmonic acid hormones,JAs)含量;对忍冬进行转录组分析,确定与茉莉酸(jasmonic acid,JA)合成相关基因;采集不同时期“华金6号”及“大毛花”的花蕾及花,利用qRT-PCR(quantitative real-time PCR)技术,分析合成相关酶基因在金银花花蕾期表达量的变化趋势。研究发现“华金6号”金银花中JAs含量显著低于“大毛花”;对“华金6号”喷施外源茉莉酸甲酯(methyl-jasmonate,MeJA)可以恢复其开花表型,使其趋近于“大毛花”;2个丙二烯氧化物合酶基因(allene oxide synthase,AOS)、3个脂氧合酶基因(lipoxygenase,LOX)及2个丙二烯环氧化酶基因(allene oxide cyclase,AOC)在“华金6号”和“大毛花”不同时期花及花蕾中的表达量具有显著差异。推测JA合成相关酶基因在“华金6号”中的低表达导致JA合成受阻,从而引起长蕾期表型的形成。本研究为忍冬的遗传育种奠定了一定的基础,为忍冬品种改良提供新思路,为JAs在植物花器官方面的研究提供参考。

关键词：华金6号金银花茉莉酸生物合成