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基于生物信息学分析的弓形虫TgSUB3多抗制备

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中国病原生物学杂志 2024年第6期19卷 690-694页

作者：李瑾张欣雷战谢金晶王龙江尹昆徐超魏庆宽孙慧山东第一医科大学(山东省医学科学院) 山东省寄生虫病防治研究所山东济宁272033 山东第一医科大学(山东省医学科学院)

目的在利用生物信息学全面分析TgSUB3序列的基础上,制备针对该蛋白B细胞抗原表位的兔源多克隆抗体。方法采用生物信息学软件对TgSUB3蛋白的理化性质、空间结构、磷酸化/糖基化位点、B细胞抗原表位等进行分析。用原核表达、纯化的TgSUB3... 详细信息

目的在利用生物信息学全面分析TgSUB3序列的基础上,制备针对该蛋白B细胞抗原表位的兔源多克隆抗体。方法采用生物信息学软件对TgSUB3蛋白的理化性质、空间结构、磷酸化/糖基化位点、B细胞抗原表位等进行分析。用原核表达、纯化的TgSUB3重组蛋白免疫新西兰大白兔,于4次加强免疫后第7 d制备兔血清,采用Protein A亲和纯化抗体蛋白,分别利用SDS-PAGE和ELISA分析抗体纯度和效价。结果生物信息学分析TgSUB3为不稳定亲水性蛋白,无信号肽,跨膜区为19-39aa,包含1个Peptidases_S8结构域(358-617aa)。二级结构中无规卷曲占51.29%,α螺旋占26.11%。TgSUB3包含65个磷酸化位点和126个糖基化位点。B细胞抗原表位区集中在45-290aa和715-937aa。SDS-PAGE显示纯化的TgSUB3多抗为单一55 ku条带,ELISA检测TgSUB3抗体滴度为1:102400。结论成功制备了兔源TgSUB3抗血清,经纯化获得高纯度高滴度的多抗。

关键词：弓形虫 SUB3蛋白多克隆抗体生物信息学

2021—2022年山东省土源性线虫感染监测结果分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第4期42卷 537-541页

作者：王龙江许艳孙慧李曰进卜灿灿吕文祥张本光孔祥礼闫歌王用斌山东省寄生虫病防治研究所山东第一医科大学(山东省医学科学院)山东济宁272033

为了解山东省人体土源性线虫感染现状,为优化防控策略提供科学依据,2021—2022年采取整群抽样方法随机抽取山东省27个县(市、区)作为监测点,各监测点按地理方位划分为东、西、南、北、中5个片区,每片区随机抽取1个乡镇的1个行政村,每行... 详细信息

为了解山东省人体土源性线虫感染现状,为优化防控策略提供科学依据,2021—2022年采取整群抽样方法随机抽取山东省27个县(市、区)作为监测点,各监测点按地理方位划分为东、西、南、北、中5个片区,每片区随机抽取1个乡镇的1个行政村,每行政村3周岁以上常住人口抽取不少于200人作为监测对象。收集监测对象的基本信息及粪便样品,用改良加藤厚涂片法(Kato‑Katz法,一粪二检)检测蠕虫卵并计数,试管滤纸培养法鉴别钩虫虫种,透明胶纸肛拭法检查3~9岁儿童蛲虫感染情况。建立数据库,利用SPSS 26.0软件进行统计分析,计算感染率、感染度,感染率间的比较采用卡方检验。2021—2022年共检测29622人,土源性线虫总感染率为0.55%(162/29622)。钩虫、蛔虫、鞭虫的感染率分别为0.02%(7/29622)、0.02%(6/29622)、0.51%(152/29622),钩虫经培养鉴定均为十二指肠钩虫。152名鞭虫感染者中,重度感染2人,中度感染6人,其余均为轻度感染;6名蛔虫感染者和7名钩虫感染者均为轻度感染。鲁南、鲁东、鲁西北、鲁中地区土源性线虫感染率分别为0.97%(118/12208)、0.84%(43/5117)、0.01%(1/7140)、0(0/5157)。男性、女性土源性线虫感染率分别为0.55%(79/14362)和0.54%(83/15260)(χ^(2)=0.005,P>0.05);各年龄组中,60~99岁组土源性线虫感染率最高,为1.11%(107/9612)(χ^(2)=86.274,P山东省土源性线虫感染呈现地区、人群分布不均衡的特征,提示今后应在土源性线虫病监测的基础上,加强重点地区的防治,做好重点人群健康宣教,持续降低人群感染率。

关键词：土源性线虫感染率监测山东省

鼠伤寒沙门菌效应因子SteA蛋白的表达纯化与晶体培养

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中国病原生物学杂志 2024年第4期19卷 424-429,435页

作者：范丙乾刘晴刘瑞瑞王玉珍李冰清山东第一医科大学(山东省医学科学院)临床与基础医学院(基础医学研究所)病原生物学系山东济南250000

目的对鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteA进行原核表达与纯化,以期获得高质量蛋白和晶体,为SteA的活性检测及结构解析奠定基础。方法利用生物信息学分析方法,对SteA的氨基酸及核苷酸序列进行分析,了解蛋白性状与序列保守性;使用基因工程方法,将s... 详细信息

目的对鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteA进行原核表达与纯化,以期获得高质量蛋白和晶体,为SteA的活性检测及结构解析奠定基础。方法利用生物信息学分析方法,对SteA的氨基酸及核苷酸序列进行分析,了解蛋白性状与序列保守性;使用基因工程方法,将steA基因克隆到原核表达载体pGLO1上;使用大肠埃希菌BL21(DE3)进行SteA蛋白的外源表达;使用镍离子亲和层析,离子交换层析,凝胶过滤层析的方法对SteA蛋白进行体外纯化;使用蛋白结晶试剂盒对提纯的SteA蛋白进行晶体普筛,摸索适合的晶体生长条件并进行优化,培养高质量单晶用于结构解析。结果克隆出SteA全长及SteA 35-173 aa片段基因,并构建了SteA35-173 aa C58S突变体。SteA全长和SteA 35-173 aa C58S蛋白在大肠埃希菌感受态细胞BL21中成功表达,获得了无聚集的SteA蛋白,浓度为7.6 mg/mL。发现在1.2 mol/L Sodium phosphate monobasic/0.8 mol/L Potassium phosphate dibasic;0.1 mol/L CAPS/Sodium hydroxide pH 10.5;0.2 mol/L Lithium sulfate条件下能够获得晶体,条件优化获得可用于数据收集的高质量单晶。结论鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteA可在原核表达系统中稳定表达,且可溶性良好,Cys58对SteA二聚体的形成起到重要作用。SteA 35-173 C58S蛋白在磷酸盐和硫酸盐环境中易结晶。

关键词：鼠伤寒沙门菌 SteA 蛋白纯化晶体培养

人CSF3蛋白的原核表达和纯化及其亚细胞定位

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中国病原生物学杂志 2024年第3期19卷 285-290,296页

作者：张平李贺刘晓宇李冰清岳盈盈山东第一医科大学(山东省医学科学院)临床与基础医学院(基础医学研究所)病原生物学系山东济南250000

目的粒细胞集落刺激因子(CSF3)作为免疫调控中的重要细胞因子,在中性粒细胞增殖分化的调控方面发挥关键作用。然而,在病原菌感染中CSF3的调控机制仍不清楚。本研究旨在通过原核表达人CSF3,并观察其在HEK-293T细胞中的亚细胞定位,为重组C... 详细信息

目的粒细胞集落刺激因子(CSF3)作为免疫调控中的重要细胞因子,在中性粒细胞增殖分化的调控方面发挥关键作用。然而,在病原菌感染中CSF3的调控机制仍不清楚。本研究旨在通过原核表达人CSF3,并观察其在HEK-293T细胞中的亚细胞定位,为重组CSF3药物开发以及揭示其在病原菌感染和免疫调控中的作用机制奠定基础。方法基于人CSF3的生物信息学分析,分别通过QuikChange和基因克隆获得CSF3 pGlO1和CSF3-pmCherry两种重组质粒。前者在大肠埃希菌原核表达系统中表达,并通过镍离子亲和层析和凝胶过滤层析进行蛋白纯化。后者通过jet-PEI试剂转染到HEK-293T细胞中,48 h后通过荧光共聚焦显微镜观察,确定其亚细胞定位。结果在原核系统中成功表达人CSF3蛋白,其相对分子质量为18.8×10^(3)。该蛋白的溶解性良好,PP酶酶切后蛋白浓度较高,但蛋白性质相对不稳定,对pH值和温度敏感,容易发生聚集和降解。将荧光融合质粒转染到HEK-293T细胞中48 h后观察,人CSF3-pmCherry蛋白定位在细胞质内,呈现出特定的定位和分布模式。结论成功构建人CSF3原核表达系统,获得纯度较高的CSF3蛋白。通过荧光融合技术确定CSF3-pmCherry蛋白主要定位在HEK-293T细胞质。为重组CSF3药物的开发及其在病原菌感染和免疫调控中的作用机制研究奠定了基础。

关键词：粒细胞集落刺激因子原核表达蛋白纯化亚细胞定位感染免疫

儿童经皮室间隔缺损封堵术后完全性左束支传导阻滞25例临床分析

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中华实用儿科临床杂志 2024年第10期39卷 743-749页

作者：马冰玉李一凡梁东坡孙凌黄旭曾少颖温树生王树水张智伟谢育梅广东省心血管病研究所广东省人民医院广东省医学科学院心儿科广州510080

目的:总结经皮室间隔缺损(VSD)封堵术后完全性左束支传导阻滞(CLBBB)患儿的治疗经验。方法:病例系列研究。收集2010年1月至2023年12月在广东省人民医院行VSD封堵术,术后发生CLBBB的25例患儿的治疗经过及随访结局。采用配对样本t检验评... 详细信息

目的:总结经皮室间隔缺损(VSD)封堵术后完全性左束支传导阻滞(CLBBB)患儿的治疗经验。方法:病例系列研究。收集2010年1月至2023年12月在广东省人民医院行VSD封堵术,术后发生CLBBB的25例患儿的治疗经过及随访结局。采用配对样本t检验评估治疗效果。结果:本研究25例患儿中,男12例(48%),女13例(52%),手术年龄为3.18(2.51~3.86)岁,术前身高为95.0(90.0~97.5)cm,术前体重为13(12~15)kg。14例为早发型(≤1个月发现),11例为迟发型(>1个月发现),随访时间为(6.63±3.93)年。14例早发型患儿中,6例于1个月内行封堵器取出术,术后恢复正常心律或不完全性右束支传导阻滞;4例于术后1个月取封堵器,2例恢复正常,1例仍为CLBBB,1例出现完全性房室传导阻滞(CAVB);4例经内科药物治疗后,2例恢复正常心律,1例为左前分支传导阻滞,1例因心源性休克、心力衰竭死亡。11例迟发型患儿经内科治疗后,3例恢复正常心律,8例为持续CLBBB(1例术后8个月行封堵器取出后恢复正常心律,1例出现CAVB,6例仍为CLBBB)。结论:VSD封堵术后CLBBB内科治疗效果欠佳,且易复发,建议发现CLBBB后立即行封堵器取出术;持续性CLBBB建议密切随访,必要时行起搏器植入术。

关键词：室间隔缺损完全性左束支传导阻滞封堵器取出术起搏器植入术

肝气郁滞型三阴性乳腺癌伴肝转移小鼠模型的构建与效果评价

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中华肿瘤防治杂志 2024年第5期31卷 292-299页

作者：李洋张志钦韩超王玮王海永李振祥林家茂薛洪范山东省肿瘤防治研究院(山东省肿瘤医院放射免疫与分子影像实验室)山东第一医科大学(山东省医学科学院)山东济南250117 山东省肿瘤防治研究院(山东省肿瘤医院乳腺外科二病区)山东第一医科大学(山东省医学科学院)山东济南250117 山东省肿瘤防治研究院(山东省肿瘤医院胸部放疗一病区)山东第一医科大学(山东省医学科学院)山东济南250117 山东省肿瘤防治研究院(山东省肿瘤医院内三科)山东第一医科大学(山东省医学科学院)山东济南250117 山东省肿瘤防治研究院(山东省肿瘤医院中西医结合病区)山东第一医科大学(山东省医学科学院)山东济南250117 山东省肿瘤防治研究院(山东省肿瘤医院门诊管理部)山东第一医科大学(山东省医学科学院)山东济南250117 山东第一医科大学(山东省医学科学院)生物医学科学学院山东济南250118

目的以乳腺癌原位移植模型为基础,通过慢性不可预知性应激联合孤养法构建肝气郁滞型三阴性乳腺癌伴肝转移小鼠模型。方法采用随机数字表法将6周龄BALB/c雌性小鼠40只分为4组,每组10只:对照组,正常饲养2周后予以乳腺垫接种4T1-luc乳腺癌... 详细信息

目的以乳腺癌原位移植模型为基础,通过慢性不可预知性应激联合孤养法构建肝气郁滞型三阴性乳腺癌伴肝转移小鼠模型。方法采用随机数字表法将6周龄BALB/c雌性小鼠40只分为4组,每组10只:对照组,正常饲养2周后予以乳腺垫接种4T1-luc乳腺癌细胞株,后期不给于刺激处理;模型组,慢性不可预知性应激(CUS)联合孤养;6-羟基多巴胺组(6-OHDA组),CUS联合孤养+6-OHDA;解郁消癥颗粒组,CUS联合孤养+解郁消癥颗粒。观察对比各组小鼠一般状况、旷场试验、蔗糖水偏嗜实验、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、皮质酮(CORT)及去甲肾上腺素(NE)水平、肝脏HE染色和肝转移细胞凋亡水平,并行小鼠活体成像检测感兴趣区域(ROI)肿瘤荧光强度,磁共振成像检测肝脏转移灶数量。结果对照组、模型组、解郁消癥颗粒组和6-OHDA组糖水偏好、旷场试验中心区域的活动距离和穿梭次数得分,组间比较差异均有统计学意义(F=0.34,P基础,应用CUS联合孤养法能够良好模拟三阴性乳腺癌伴肝转移肝气郁滞证,可为探索肝气郁滞在三阴性乳腺癌伴肝转移中的证候实质及相关治疗药物的药理机制提供实验载体。

关键词：三阴性乳腺癌肝转移肝气郁滞证慢性不可预知性应激动物模型

降解苯丙氨酸的工程益生菌构建及其喂养苯丙酮尿症小鼠的效果分析

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食品与发酵工业 2024年第17期50卷 75-81页

作者：马欣付加芳林赓张佩佩曹广祥山东第一医科大学(山东省医学科学院)生物医学科学学院(省医药生物技术研究中心) 山东济南250117 国家卫健委医药生物技术重点实验室(山东省医学科学院) 山东济南250117 山东省罕少见病重点实验室山东济南250117

苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)是一种常染色体隐性遗传病,低蛋白饮食是目前临床治疗的主要方法,而采用工程益生菌治疗尚处于研发阶段。为了探究工程益生菌对PKU的治疗效果,该研究基于大肠埃希菌Nissle 1917(EcN)菌株,构建了一株表达... 详细信息

苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)是一种常染色体隐性遗传病,低蛋白饮食是目前临床治疗的主要方法,而采用工程益生菌治疗尚处于研发阶段。为了探究工程益生菌对PKU的治疗效果,该研究基于大肠埃希菌Nissle 1917(EcN)菌株,构建了一株表达苯丙氨酸裂解酶的工程益生菌EcN-PAL。通过λ-Red同源重组系统在EcN中导入经优化设计的苯丙氨酸裂解酶基因,并通过体外降解实验和小鼠喂养实验验证其功能性。实验结果表明,工程益生菌EcN-PAL成功表达苯丙氨酸裂解酶,并且可降解苯丙氨酸和有效降低PKU小鼠的血液苯丙氨酸浓度。该研究成功构建的工程益生菌EcN-PAL对苯丙氨酸有良好的降解效果,动物实验证实可有效治疗PKU小鼠,为用于PKU患者的益生菌治疗奠定了基础。

关键词：苯丙酮尿症 λ-Red同源重组系统工程益生菌苯丙氨酸降解苯丙酮尿症小鼠

主动脉搏动指数对射血分数保留的心力衰竭患者无事件生存的影响及预测价值

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中华医学杂志 2024年第8期104卷 594-599页

作者：吴易航张宇辉张健中国医学科学院北京协和医学院国家心血管病中心阜外医院心血管疾病国家重点实验室心力衰竭中心，北京100037

目的探索主动脉搏动指数(API)对射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)患者无事件生存的影响及预测价值。方法回顾性纳入2014年11月至2022年8月在中国医学科学院阜外医院心力衰竭中心行漂浮导管检查的121例HFpEF患者。API的计算公式为脉压差/... 详细信息

目的探索主动脉搏动指数(API)对射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)患者无事件生存的影响及预测价值。方法回顾性纳入2014年11月至2022年8月在中国医学科学院阜外医院心力衰竭中心行漂浮导管检查的121例HFpEF患者。API的计算公式为脉压差/肺动脉楔压。根据基线API的三分位数值将患者分为API>3.77组(n=40)、1.89室辅助装置植入或因心力衰竭再住院等事件。比较3组患者临床资料的差异,采用Spearman相关性分析计算API与左心功能指标的相关性,多因素Cox比例风险回归模型分析API与HFpEF患者无事件生存的关系,受试者工作特征曲线计算API预测HFpEF患者无事件生存的曲线下面积(AUC)。定量资料采用M(Q_(1),Q_(3))表示。结果121例HFpEF患者的年龄为59.0(46.0,66.5)岁,其中男性占69.4%(84例)。API与左心每搏功(r=0.478,P3.77组N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)水平[492(163,2776)比2962(722,5831)比3823(1419,10262)ng/L]、左房前后径[38(34,42)比43(39,48)比45(42,53)mm]、右房压[5(2,8)比8(4,13)比13(8,16)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)]、平均肺动脉压[15(11,20)比22(17,26)比33(26,37)mmHg]均低于1.89研究的随访时间为366.0(189.8,648.5)d,随访结束时共有51例患者达到主要临床终点。API>3.77组、1.89室舒张末内径后,API(HR=0.849,95%CI:0.728~0.989,P=0.035)为HFpEF患者无事件生存的相关因素。API预测无事件生存的AUC(95%CI)为0.700(0.607~0.793)(P基础上,API可提供额外的预测价值。

关键词：心力衰竭左心功能主动脉搏动指数血流动力学预后

抗病毒免疫调节因子RNF2蛋白的生物信息学分析及原核表达纯化

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中国病原生物学杂志 2024年第10期19卷 1129-1135页

作者：王琦张俊梅朱文菊谢环环解晓曼赵桂华徐超尹昆孙航董宏杰山东省寄生虫病防治研究所山东第一医科大学(山东省医学科学院)山东济宁272033

目的 RNF2是一种转录抑制因子,其N端保守的RING结构域使其能够发挥E3泛素连接酶的功能。本研究采用生物信息学工具对人源RNF2蛋白进行序列和结构分析,同时在大肠埃希菌表达系统中进行高效表达与纯化,为后续探索其生物学功能和潜在的药... 详细信息

目的 RNF2是一种转录抑制因子,其N端保守的RING结构域使其能够发挥E3泛素连接酶的功能。本研究采用生物信息学工具对人源RNF2蛋白进行序列和结构分析,同时在大肠埃希菌表达系统中进行高效表达与纯化,为后续探索其生物学功能和潜在的药物靶点奠定基础。方法利用ClustalX、Expasy、TMHMM及SignalP等软件对RNF2进行多序列比对、理化性质分析、跨膜区、信号肽及疏水性分析。通过分子克隆构建pGEX-4T-RNF2重组质粒,随后转入大肠埃希菌BL21(DE3)中进行目的蛋白的诱导表达。收集菌体后通过高压破碎释放重组蛋白,进一步使用GST亲和层析柱纯化。结果 RNF2全长共336个氨基酸,带负电,无跨膜区,无信号肽,属于亲水蛋白,且在不同物种中较为保守。成功构建了pGEX-4T-RNF2重组菌株,经IPTG诱导表达后,发现RNF2能够在BL21(DE3)中大量表达。GST层析柱纯化结果显示RNF2的挂柱效果较差,但仍能得到少量高纯度蛋白。结论使用大肠埃希菌原核表达系统成功获得性状较好的RNF2重组蛋白,为后续功能实验和药物开发奠定了基础。

关键词： RNF2 泛素化异源表达 GST亲和层析重组蛋白