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表达鸡RSAD2蛋白的重组杆状病毒的构建与鉴定

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中国家禽 2024年第1期46卷 62-69页

作者：张婕柴家前苏帅山东农业大学动物科技学院(动物医学院) 山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安271018

为研究鸡S-腺苷甲硫氨酸基区域蛋白2(RSAD2)生物学功能,试验构建原核表达重组质粒pGEX-RSAD2,采用SDS-PAGE、Western blot验证RSAD2融合蛋白的表达,将融合蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。扩增RSAD2基因克隆至pFsatBac dual真核表达载体,... 详细信息

为研究鸡S-腺苷甲硫氨酸基区域蛋白2(RSAD2)生物学功能,试验构建原核表达重组质粒pGEX-RSAD2,采用SDS-PAGE、Western blot验证RSAD2融合蛋白的表达,将融合蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。扩增RSAD2基因克隆至pFsatBac dual真核表达载体,重组质粒经转座、蓝白斑筛选后,获得重组杆状病毒质粒pFastBac-RSAD2,重组杆粒转染至sf9昆虫细胞后收获重组杆状病毒rBac-RSAD2。用鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染孵育RSAD2蛋白的MDCC-MSB1细胞,通过荧光定量PCR检测病毒在细胞中的增殖情况。结果显示:成功构建原核表达质粒pGEX-RSAD2,诱导表达了69 ku的RSAD2融合蛋白,制备的多克隆抗体能够与表达RSAD2蛋白的DF-1细胞特异性结合;重组杆状病毒rBac-RSAD2能够引起sf9细胞病变,且感染后的sf9细胞与制备的RSAD2多克隆抗体能够特异性结合,rBac-RSAD2表达了43 ku的RSAD2蛋白;相较对照组,孵育蛋白后的MDCC-MSB1细胞中的病毒载量降低。研究表明,成功构建了表达鸡RSAD2蛋白的重组杆状病毒rBac-RSAD2,其表达的RSAD2蛋白能够抑制CIAV增殖。

关键词：鸡 RSAD2 多克隆抗体杆状病毒真核表达

江泉黑猪PLAG1基因多态性及其与生长性能的关联分析

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农业生物技术学报 2024年第7期32卷 1564-1576页

作者：马小燕王文文郑凤玲刘汇鑫许飞陈伟曾勇庆唐辉山东省动物生物工程与疫病防治重点实验室山东农业大学动物科技学院

多形性腺瘤基因1 (plemorphic adenoma gene 1, PLAG1)在调控畜、禽生长发育方面具有重要影响。为探究江泉黑猪PLAG1的单核苷酸多态性及其与生长性能的关系，本研究以277头体重100 kg左右的江泉黑猪为材料，通过Mass ARRAY分子量阵列技... 详细信息

多形性腺瘤基因1 (plemorphic adenoma gene 1, PLAG1)在调控畜、禽生长发育方面具有重要影响。为探究江泉黑猪PLAG1的单核苷酸多态性及其与生长性能的关系，本研究以277头体重100 kg左右的江泉黑猪为材料，通过Mass ARRAY分子量阵列技术检测其PLAG1基因的突变信息，并将SNP与生长性状进行关联分析。结果显示，在PLAG1基因的5'调控区存在3个SNP,3'调控区存在1个SNP。其中，g.75645278A>T和g.75693827A>G位点的多态信息含量(PIC)均为0.35，呈中度多态(0.25A和g.75686320T>C位点呈低度多态(PICA位点基因型频率的分布处于哈代-温伯格平衡，其余位点均显著偏离哈代-温伯格平衡(PT和g.75693827A>G位点为完全连锁，且与达100kg体重日龄、胸围和腹围呈极显著相关(PT位点中，AA型个体达100 kg体重日龄显著高于TT型和TA型(PA、g.75686320T>C和g.75693827A>G构建了GCA、GTG、GTA和ATG 4种优势单倍型和7种联合基因型。7种联合基因型显著影响达100 kg体重日龄(PT和g.75693827A>G位点可作为江泉黑猪生长性能的候选分子标记位点。本研究为江泉黑猪的选育工作提供理论支持。

关键词：江泉黑猪多形性腺瘤基因1(PLAG1) SNP 生长性能单倍型分析关联分析

饲粮蛋氨酸水平对安哥拉兔产毛性能和毛囊发育的影响

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畜牧兽医学报 2024年第7期 3024-3031页

作者：张莉蕊张北育李玉娟刘永需赵红李福昌刘磊山东农业大学动物科技学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室非粮饲料资源高效利用重点实验室(省部共建) 青岛康大佳惠饲料有限公司

旨在探究饲粮中蛋氨酸添加水平对安哥拉兔产毛性能和毛囊发育的影响。选取9月龄体重相近、生长状况良好的安哥拉兔200只，公母各半，随机分为5个处理，每个处理40个重复，每个重复1只。对照组饲喂基础饲粮(蛋氨酸含量为0.26%),试验组在... 详细信息

旨在探究饲粮中蛋氨酸添加水平对安哥拉兔产毛性能和毛囊发育的影响。选取9月龄体重相近、生长状况良好的安哥拉兔200只，公母各半，随机分为5个处理，每个处理40个重复，每个重复1只。对照组饲喂基础饲粮(蛋氨酸含量为0.26%),试验组在基础饲粮中分别添加0.15%、0.30%、0.45%和0.60%的蛋氨酸(试验组饲粮中蛋氨酸的总体水平分别为0.41%、0.56%、0.71%和0.86%),试验期70 d。试验结束后计算生长性能相关指标并采集毛发和皮肤样品，检测兔毛品质、皮肤毛囊密度以及毛囊发育相关基因的表达量。结果表明：与对照组相比，饲粮中添加0.30%和0.45%蛋氨酸显著提高了安哥拉兔的平均日采食量(P<0.05);与对照组相比，饲粮中添加0.15%蛋氨酸显著提高了安哥拉兔毛的伸长度和伸长率(P<0.05),显著降低了安哥拉兔初级毛囊密度(P<0.05);饲粮中添加0.30%蛋氨酸显著提高了安哥拉兔的产毛率和次级毛囊密度/初级毛囊密度(S/P)(P<0.05),显著降低了安哥拉兔毛25μm以上纤维含量、粗毛率和初级毛囊密度(P<0.05);饲粮中添加0.45%蛋氨酸显著提高了安哥拉兔的料毛比、伸长度、伸长率和S/P(P<0.05),显著降低了安哥拉兔毛25μm以上纤维含量、粗毛率和初级毛囊密度(P<0.05)。此外，与对照组相比，饲粮中添加0.30%蛋氨酸显著上调了安哥拉兔皮肤中表皮生长因子(EGF)mRNA表达水平(P<0.05)。综上所述，饲粮中适宜的蛋氨酸添加水平能够提高安哥拉兔的产毛性能，改善毛品质；促进家兔毛囊发育，EGF信号可能参与此过程。基于本研究，建议蛋氨酸在安哥拉兔饲粮中适宜的添加量为0.30%(饲粮中蛋氨酸的总体水平为0.56%)。

关键词：安哥拉兔蛋氨酸产毛性能毛囊发育

日粮非纤维性碳水化合物与中性洗涤纤维比例对德州驴生产性能、营养物质表观消化率及血清生化指标的影响

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中国饲料 2024年第6期 46-50页

作者：杨泉王云张晨张桂国张崇玉山东农业大学动物科技学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室农业农村部非粮饲料资源高效利用重点实验室(部省共建)山东泰安271018

文章旨在探究日粮非纤维性碳水化合物与中性洗涤纤维比例(NFC/NDF)对德州驴生产性能、营养物质表观消化率及血清生化指标的影响。试验选用7月龄健康状况良好、体重(116.24±9.5)kg的德州驴30头,随机分为3组,每组10头,分别饲喂NFC/NDF为0... 详细信息

文章旨在探究日粮非纤维性碳水化合物与中性洗涤纤维比例(NFC/NDF)对德州驴生产性能、营养物质表观消化率及血清生化指标的影响。试验选用7月龄健康状况良好、体重(116.24±9.5)kg的德州驴30头,随机分为3组,每组10头,分别饲喂NFC/NDF为0.38、0.55和0.91的3种颗粒型全混合日粮(TMR)。试验为期45 d,其中预饲期15 d,正试期30 d,每头驴每天饲喂3.5 kg TMR颗粒饲料。结果表明,德州驴在采食3种NFC/NDF日粮时,0.91组日增重、料重比和经济效益优于0.55组和0.38组(P<0.05);德州驴在采食3种NFC/NDF日粮时,0.91组对消化能(DE)、干物质(DM)、有机物(OM)、粗蛋白质(CP)、无氮浸出物(NFE)、碳水化合物(CHO)和中性洗涤纤维(NDF)的表观消化率均显著高于0.55组和0.38组(P<0.05);0.55组NFE、CHO、NDF和NFC的表观消化率显著高于0.38组(P<0.05);德州驴在采食3种NFC/NDF日粮时,血清乳酸脱氢酶(LDH)和尿素氮(UIEA)含量随着日粮NFC水平升高而降低,葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TCHO)和低密度脂蛋白(LDL)含量随NFC水平的升高而升高。由此可见,在本试验日粮NFC/NDF(0.38~0.91)范围内,饲喂高NFC/NDF(0.91)日粮能提高德州驴的平均日增重和经济效益,同时提高日粮营养物质的表观消化率。

关键词： NCF/NDF 德州驴生产性能表观消化率血清生化

不同饲粮铜水平对安哥拉兔生产性能及毛囊发育的影响

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畜牧兽医学报 2024年第7期 3032-3039页

作者：王小松李冬李淑陈佳力刘永需赵红李福昌刘磊山东农业大学动物科技学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室农业农村部非粮食饲料资源高效利用重点实验室(部省共建) 青岛康大佳惠饲料有限公司

旨在研究饲粮不同水平铜对安哥拉兔生产性能以及毛囊发育的影响。选取5月龄安哥拉兔180只，随机分成5组（每组36个重复，每个重复1只）,分别饲喂铜添加量为0、5、10、20和40 mg·kg-1的日粮，预试期3 d,正式试验76 d。结果显示：1)当铜... 详细信息

旨在研究饲粮不同水平铜对安哥拉兔生产性能以及毛囊发育的影响。选取5月龄安哥拉兔180只，随机分成5组（每组36个重复，每个重复1只）,分别饲喂铜添加量为0、5、10、20和40 mg·kg-1的日粮，预试期3 d,正式试验76 d。结果显示：1)当铜的添加水平为5 mg·kg-1时，产毛量达到最大值，料毛比也相对较低（P0.05）。2)与对照组相比，铜添加量为40 mg·kg-1时，显著增加了兔毛的断裂强力、断裂强度、断裂功（P动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的mRNA表达量（P0.05）。综上所述，饲料中添加铜可以提高安哥拉兔的产毛性能，改善兔毛品质，促进皮下毛囊发育，家兔可能通过Wnt10b、mTOR和Kap6.1基因来调控毛囊发育。在本试验条件下，安哥拉兔饲粮中铜水平为13.72 mg·kg-1最为适宜。

关键词：安哥拉兔铜生产性能毛囊发育

江泉黑猪GPAT 3基因多态性及其与生长性状的关联分析

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中国畜牧兽医 2024年第4期51卷 1549-1560页

作者：刘汇鑫王文文许飞马小燕李晓敏唐辉山东农业大学动物科技学院山东省动物生物工程与疫病防治重点实验室农业农村部非粮饲料资源高效利用重点实验室(部省共建)泰安271018

【目的】探究江泉黑猪甘油-3-磷酸酰基转移酶3(glycerol-3-phosphate acyltransferase 3,GPAT3)基因多态性及其与生长性状的相关性,为江泉黑猪的遗传改良和优化繁殖计划提供理论和技术支持。【方法】采集292头江泉黑猪的耳组织样并提取D... 详细信息

【目的】探究江泉黑猪甘油-3-磷酸酰基转移酶3(glycerol-3-phosphate acyltransferase 3,GPAT3)基因多态性及其与生长性状的相关性,为江泉黑猪的遗传改良和优化繁殖计划提供理论和技术支持。【方法】采集292头江泉黑猪的耳组织样并提取DNA,PCR扩增GPAT 3基因片段,结合Sanger测序与MassARRAY核酸质谱分析系统检测单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点及基因分型。利用R语言3.6.2、HaploView、PHASE等软件进行GPAT 3基因SNP位点的遗传效应、连锁不平衡和单倍型分析。利用SAS 9.2软件分析GPAT 3基因SNP位点及其构成的单倍型块与江泉黑猪生长性状的相关性。【结果】在GPAT 3基因及其5′-调控区共发现10个SNPs,其中4个为低度多态,6个为中度多态;7个SNPs位点基因型频率分布处于哈代-温伯格平衡状态。关联分析发现,9个SNPs与江泉黑猪生长性状呈显著关联(PA、g.134957930 G>T、g.134958013 G>A和g.134976983 T>C存在极强连锁,构建的AGGT/AGGT双倍型在胸围、体高方面具有显著优势(PA、g.135002627 C>T、g.135002680 C>T存在极强连锁,构建的ATC/ATC双倍型在胸围、腹围方面具有显著优势(P<0.05),CCC/ATC双倍型在背膘厚方面具有显著优势(P<0.05),ATT单倍型在腹围方面具有显著优势(P<0.05)。【结论】江泉黑猪GPAT 3基因具有丰富的多态性位点,9个SNPs及其构成的2个单倍型块与江泉黑猪胸围、腹围、体高等有显著关联性,可作为江泉黑猪生长性状选育的分子遗传标记。

关键词：江泉黑猪 GPAT 3基因单核苷酸多态性生长性状

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猪流感病毒的演化

中国动物检疫 2024年第3期41卷 80-88页

作者：赵玉仲韩乐斌桑浩田刘思当肖一红侯衍猛山东农业大学动物科技学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安271018

猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)是感染猪的一种。呼吸道病毒,可对公共卫生产生重要影响。以往研究通过全基因组测序以及分子生物学、流行病学等多方面的手段,全面揭示了SIV的演化进程。为了更好地理解和应对SIV演化,对其演化历... 详细信息

猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)是感染猪的一种。呼吸道病毒,可对公共卫生产生重要影响。以往研究通过全基因组测序以及分子生物学、流行病学等多方面的手段,全面揭示了SIV的演化进程。为了更好地理解和应对SIV演化,对其演化历程进行了简要回顾,系统梳理了其分类、基本特征、演化及流行。通过对SIV演化的深入分析,发现其基因变异频率较高,不断发生基因重配和突变,推动病毒不断演化。此外,在猪群中发现了多种亚型SIV,而且不同地区的SIV演化存在显著差异,其中一些地区的SIV可能存在感染人的潜在风险。总体而言,SIV演化是一个复杂而动态的过程,其演化趋势可能对人类和动物健康构成潜在威胁。因此,加强对SIV演化的研究,提高对其监测和控制的能力,对于维护畜牧业健康发展和公共卫生安全具有极为重要的意义。

关键词：猪流感病毒演化基因重配基因突变

高脂饮食诱导胰岛素抵抗过程中肝脏能量代谢特征的研究

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畜牧兽医学报 2024年

作者：王靖萱代立志王振宇刘滢禹桐严敏王瑞龙肖建华东北农业大学动物医学院黑龙江省普通高等学校动物普通疾病防治重点实验室

本研究旨在通过建立胰岛素抵抗全过程的小鼠模型，研究在这个过程中，肝脏内线粒体功能和能量代谢的变化情况。试验选取60只雄性C57BL6小鼠，随机选取30只饲喂普通维持饲料作为对照组（Con组），另外30只饲喂高脂饲料作为高脂饮食组（HF... 详细信息

本研究旨在通过建立胰岛素抵抗全过程的小鼠模型，研究在这个过程中，肝脏内线粒体功能和能量代谢的变化情况。试验选取60只雄性C57BL6小鼠，随机选取30只饲喂普通维持饲料作为对照组（Con组），另外30只饲喂高脂饲料作为高脂饮食组（HFD组）进行造模，分别于饲喂的第4、6、8、10和12周，各组随机选取6只小鼠进行处理，经胰岛素抵抗评估和病理组织学检查确认成功建立胰岛素抵抗全过程的模型。在第8周和第12周，采集鼠尾血液，进行IGTT和ITTs。在第4、6、8、10和12周，采集小鼠的血清和肝组织样品进行试验：1）检测空腹血糖和血清含量；2）ELISA法检测肝组织中的Srebp-1c酶、PFK1 和COX-Ⅰ含量；3）生化检测血清中的ALT和AST含量；4）Western blot法检测肝组织中的PI3K、Akt、P-Akt、GLUT4、GSK-3β、P-GSK-3β、FOXO1、P-FOXO1、SIRT1、AMPK、P-AMPK、PGC-1α蛋白表达量；5）采用透射电镜、HE染色、油红O染色、PAS染色检测肝病理组织和结构的变化。结果表明：1）12周的高脂日粮引起小鼠肥胖、HOMA-IR增加，油红O染色显示明显的脂肪沉积，成功诱导小鼠胰岛素抵抗全过程模型；2）胰岛素抵抗过程中，小鼠ALT和AST增加，HE结果显示出明显的脂滴空泡、肝细胞结构紊乱；3）在饲喂高脂日粮的第4周之后，肝脏胰岛素上游信号开始受到影响；4）与Con-6组相比，HFD-6组小鼠肝脏内的GLUT4蛋白表达量和P-FOXO1/FOXO1比值、PFK1含量显著下降（P＜0.01）；与Con-4组相比，HFD-4组小鼠肝内的GSK-3β磷酸化、Srebp-1c酶水平逐渐降低（P＜0.05）；PAS结果显示从第8周开始，HFD组小鼠肝细胞内糖原含量减少；5）与Con-4组相比，HFD-4组小鼠肝脏的AMPK、P-AMPK、SIRT1含量显著降低（P＜0.01和P＜0.001）；6）HFD组小鼠肝脏中Mfn2在第10周出现上升，Drp1蛋白的表达呈现先降低后升高的趋势；7）与HFD-6组相比，HFD-6组小鼠肝脏中的PINK1和Parkin蛋白明显下降（P＜0.05）。综上表明，肝脏作为代谢的主要器官，在饲喂60%高脂饲料后，会发生选择性胰岛素抵抗，在抵抗后整体上能量分解代谢减弱、线粒体损伤增强，而清除损伤线粒体的自噬功能却减弱，另外在第8、10周时出现了短暂的线粒体生物发生与融合增强现象，说明由于肝脏能量缺乏导致了短暂的代偿作用。本研究从发生全过程的角度阐释了肝脏胰岛素抵抗中的能量代谢特征和规律，为进一步深入研究营养过剩影响细胞能量代谢的机制提供了参考。

关键词：高脂饮食(HFD) 胰岛素抵抗肝脏线粒体能量代谢小鼠

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噬菌体疗法及其在畜禽养殖过程中的应用

山东畜牧兽医 2024年第4期45卷 87-89页

作者：李嗣源赵婷婷陈羽翔柳洪洁柴家前山东农业大学动物医学院/山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安271018

噬菌体是一种专门裂解细菌的微生物,可作为一种天然的抗菌制剂,具有特异性强、副作用小、无药物残留等特点。本文论述了噬菌体作用机制、疗法及其在畜禽养殖生产上的应用进展。

关键词：噬菌体噬菌体疗法畜禽养殖实际应用