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YBX3通过调节UCP1的表达调控棕色脂肪产热和能量消耗

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山东大学学报（医学版） 2024年第6期62卷 38-47页

作者：王文琴高贤龙巩永凤冯科滨州医学院基础医学院生理教研室山东烟台264003

目的探讨棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)中Y盒蛋白3(Y-box binding protein 3,YBX3)水平对小鼠产热和能量消耗的影响作用机制。方法将小鼠置于4℃环境作为冷刺激方法。用慢病毒侵染法构建过表达YBX3或者抑制YBX3表达的人血管... 详细信息

目的探讨棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)中Y盒蛋白3(Y-box binding protein 3,YBX3)水平对小鼠产热和能量消耗的影响作用机制。方法将小鼠置于4℃环境作为冷刺激方法。用慢病毒侵染法构建过表达YBX3或者抑制YBX3表达的人血管基质组分细胞系。测量细胞的耗氧率用于评估细胞的线粒体功能。向小鼠BAT注射YBX3的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)构建抑制小鼠BAT中YBX3表达的模型。检测小鼠的O_(2)消耗速率、CO_(2)释放速率和能量消耗速率用于评估小鼠能量代谢情况。采用qRT-PCR、Western blotting、免疫荧光染色法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1α,PGC-1α)、解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)和YBX3基因的表达。采用苏木精-伊红法染色检测BAT中脂肪细胞脂滴大小。采用RNA结合蛋白免疫沉淀提取与YBX3特异性结合的mRNA。采用二代测序方法鉴定mRNA。采用双荧光素酶报告基因系统检测YBX3与目的序列结合的情况。结果在寒冷刺激下野生型小鼠BAT中YBX3的表达显著增加(P<0.05)。过表达YBX3的人血管基质组分细胞系诱导为成熟棕色脂肪细胞后可以促进产热基因PGC-1α和UCP1的表达(P<0.05)。抑制YBX3表达的人血管基质组分细胞系诱导为成熟棕色脂肪细胞后可以抑制PGC-1α和UCP1的表达(P<0.05)、抑制线粒体氧化磷酸化(P<0.05)。与对照组相比,小鼠注射si-Ybx3之后能量消耗显著降低(P<0.05),在寒冷环境难以维持体温(P<0.05),产热基因表达被显著抑制(P<0.01),BAT中脂肪细胞脂滴大小显著增加(P<0.05)。与在25℃相比,4℃环境刺激下BAT中YBX3在细胞核中的表达显著增加(P<0.05)。YBX3能够特异性地与PGC-1αmRNA 3′非翻译区特定位点相结合(P<0.05)。YBX3能够特异性地与PGC-1α和UCP1启动子区域相结合(P<0.05)。结论BAT中YBX3能够通过调控PGC-1α和UCP1的表达影响产热和能量代谢。

关键词： Y-盒蛋白3 产热能量消耗棕色脂肪组织解偶联蛋白1

抗大别班达病毒人源单克隆抗体Fab片段的噬菌体展示文库构建

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中国病原生物学杂志 2024年第11期19卷 1251-1254,1259页

作者：徐家馨王静静王琳徐睿杰吴玉龙李波清乔媛媛滨州医学院基础医学院病原生物学教研室山东烟台264003

目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,... 详细信息

目的构建具有潜在中和活性的人源抗大别班达病毒(SFTSV)抗体Fab片段的噬菌体展示文库。方法从具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血液样本中分离外周血单个核细胞(PBMC)并提取总RNA,逆转录PCR得到cDNA。以cDNA为模板进行第一轮PCR扩增,分别获得抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(Vκ和Vλ)序列。以pComb3XTT、pComb3Xλ质粒为模板,分别获得抗体重链恒定区(CH1)和轻链恒定区(Cκ、Cλ)序列。第二轮通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增VH和CH1得到Fd重链,同样扩增Vκ和Cκ、Vλ和Cλ得到完整的κ和λ抗体轻链。第三轮以上述扩增产物为模板再次进行SOE-PCR,得到完整的抗体Fab基因片段。将Fab基因片段插入到pComb3XSS噬菌粒中,构建噬菌体展示抗体文库。结果通过三轮PCR扩增出抗体Fab片段的序列,成功构建库容量为1.875×10^(9)的噬菌体展示抗体文库。结论利用具有交叉中和活性的SFTS恢复期患者血源建立了人源抗SFTSV Fab片段的噬菌体展示抗体文库,为下一步筛选特异性单克隆中和抗体建立了可靠的前期基础。

关键词： SFTSV 噬菌体展示抗体文库库容量人源单克隆抗体

一次离心法制备兔贫白细胞富血小板血浆的离心条件研究

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中国修复重建外科杂志 2024年第2期38卷 183-188页

作者：张克凡张晨晨任强王德宁孙力王鑫王耀敏石辉滨州医学院附属医院骨关节与运动医学科山东滨州256603 滨州医学院附属医院手术室山东滨州256603 南阳市中心医院骨科河南南阳473009

目的探究使用一次离心法制备兔贫白细胞富血小板血浆(leukocyte-poor platelet-rich plasma,LPPRP)的最佳离心条件。方法取16只3~4月龄健康新西兰兔,于兔耳背中央动脉采集15 mL抗凝血,分别于1、2个月后重复取血步骤。将所取血液标本于... 详细信息

目的探究使用一次离心法制备兔贫白细胞富血小板血浆(leukocyte-poor platelet-rich plasma,LPPRP)的最佳离心条件。方法取16只3~4月龄健康新西兰兔,于兔耳背中央动脉采集15 mL抗凝血,分别于1、2个月后重复取血步骤。将所取血液标本于离心半径16.7 cm分别以转速1200、1300、1400、1500 r/min(对应离心力分别为269×g、315×g、365×g、420×g)下离心2、3、4、5 min,共计16组。各组离心后采集分离平面1.5 mL以上的血浆,计算并比较不同离心条件下各组LP-PRP的体积、血小板富集系数及血小板回收率。结果所有离心条件下获得的LP-PRP体积范围为1.8~7.6 mL。相同离心转速时,随离心时间延长,LP-PRP体积显著增大,同时LP-PRP血小板富集系数呈降低趋势。离心2 min时,1200、1300 r/min转速下LP-PRP体积2.0,其中1200 r/min转速下离心2 min能够获得最高的LP-PRP血小板富集系数。1200 r/min转速下离心4、5 min与1400 r/min转速下离心5 min获得的LP-PRP血小板回收率均>60%,1200 r/min转速下离心4、5 min组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用一次离心法制备兔LP-PRP时,采集15 mL血液以离心半径16.7 cm、1200 r/min转速下离心4 min即可制备体积>2.0 mL、血小板富集系数>2.0且血小板回收率>60%的LP-PRP,在最短时间达到LP-PRP的最佳作用参数。

关键词：一次离心法贫白细胞富血小板血浆离心条件兔

刚地弓形虫感染孕鼠胎盘组织中中性粒细胞和IL-17与不良妊娠结局的关系

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第1期42卷 48-54页

作者：郑广福刘现兵姜昱竹李新雨胡雪梅张海霞滨州医学院免疫学教研室山东烟台264003 邹平市卫生健康局宣传教育股山东邹平256200

目的探究孕鼠胎盘中性粒细胞和炎性因子白细胞介素17(IL-17)在孕期刚地弓形虫(简称弓形虫)感染致不良妊娠结局中的作用机制。方法将C57BL/6孕鼠随机分为未感染组和感染组(每组6只),感染组孕鼠在孕8 d腹腔注射0.2 ml弓形虫RH株速殖子悬液... 详细信息

目的探究孕鼠胎盘中性粒细胞和炎性因子白细胞介素17(IL-17)在孕期刚地弓形虫(简称弓形虫)感染致不良妊娠结局中的作用机制。方法将C57BL/6孕鼠随机分为未感染组和感染组(每组6只),感染组孕鼠在孕8 d腹腔注射0.2 ml弓形虫RH株速殖子悬液(约400个速殖子),未感染组孕鼠腹腔注射等量灭菌PBS。于孕14 d采用颈椎脱臼法处死孕鼠,解剖观察并记录妊娠结局。取胎盘组织,制备石蜡切片,经苏木苏-伊红(HE)染色后观察胎盘组织学改变和多形核粒细胞的浸润情况,并计算浸润指数。制备胎盘组织单细胞悬液,采用流式细胞术检测胎盘免疫细胞中中性粒细胞。采用免疫组织化学染色检测胎盘组织中弓形虫的分布、定位及IL-17的表达水平(灰度值),采用Spearman相关性分析方法分析IL-17的表达水平与中性粒细胞浸润指数的关系。两组间数据比较采用独立样本Student’s t检验。结果感染组孕鼠出现弓背、耸毛和行动迟缓等症状,胎鼠和胎盘出现明显出血及淤血点,胎鼠发育不良;未感染组孕鼠无异常表现,胎鼠和胎盘发育正常。感染组孕鼠的流产率为82.35%(42/51),高于未感染组的4.08%(2/49)。HE染色结果显示,感染组孕鼠胎盘组织细胞轮廓性增强,并伴有大量的多形核粒细胞浸润,浸润指数为14.500±0.965,高于未感染组的3.917±0.633(t=9.168,P<0.01)。流式细胞术结果显示,感染组孕鼠胎盘组织中中性粒细胞占胎盘细胞的绝对百分数为(13.700±1.790)%,高于未感染组孕鼠的(4.783±0.723)%(t=5.107,P<0.01)。免疫组织化学染色结果显示,感染组孕鼠胎盘组织中检测到大量弓形虫,并且主要集中分布于中性粒细胞内;感染组孕鼠胎盘组织中IL-17的灰度值为17.510±1.372,高于未感染组孕鼠的8.178±1.293(t=4.951,P<0.05)。相关性分析结果显示,孕鼠胎盘组织中IL-17的表达水平与中性粒细胞的浸润指数呈正相关(R2=0.652,P<0.01)。结论刚地弓形虫感染可导致孕鼠胎盘组织出现大量中性粒细胞浸润和高水平IL-17的表达,IL-17表达水平的升高可能与中性粒细胞在母胎界面的募集有关。

关键词：刚地弓形虫不良妊娠结局胎盘中性粒细胞炎症反应 IL-17

GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响

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Chinese Medical Sciences Journal 2024年第1期39卷 9-18,I0002页

作者：李鋆崔雯雯杨中法刘文豪边茂旺邓炯王彤山东第二医科大学基础医学院生理教研室潍坊市261021 滨州医学院附属医院医学研究中心滨州市256600

目的ATP结合盒B亚家族成员1(ATP binding cassette subfamily B member 1,ABCB1)的异常表达在多种癌症的发生发展中发挥关键作用。然而,G蛋白偶联受体C家族5组A型(G protein coupled receptor family C group5 type A,GPRC5A)调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响仍不清楚。本研究探讨了GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响。方法我们采用RT-PCR、Western-blot或免疫组化实验,分析ABCB1在肺腺癌细胞系、人肺腺癌组织以及GPRC5A基因敲除小鼠和野生型小鼠的气管上皮细胞和肺组织中的表达。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析GPRC5A基因敲除小鼠气管上皮细胞对化疗药物的敏感性。采用皮下肿瘤形成实验探讨下调ABCB1表达是否可抑制体内肺腺癌增殖。采用免疫荧光和免疫沉淀实验研究GPRC5A和ABCB1之间潜在的调控关系。结果ABCB1在肺腺癌细胞系和人类肺腺癌组织中表达上调。GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞及肺组织的ABCB1表达高于野生型小鼠。与GPRC5A野生型小鼠的气管上皮细胞相比,GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞对塔立奇达和多柔比星更敏感。注射移植细胞28天后,接受ABCB1基因敲除细胞移植的GPRC5A-/-C57BL/6小鼠的肺肿瘤的体积和重量均明显低于野生型细胞移植小鼠(P=0.0043,P=0.0060)。此外,免疫荧光和免疫沉淀实验表明,GPRC5A通过直接结合方式调控ABCB1的表达。结论GPRC5A通过抑制ABCB1表达降低肺腺癌增殖。GPRC5A调节ABCB1表达的途径有待研究。

关键词： ATP结合盒B亚家族成员1 G蛋白偶联受体家族C5组成员A 肺腺癌小鼠

脂肪间充质干细胞外泌体可减轻过氧化氢诱导PC12细胞的凋亡

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中国组织工程研究 2024年第19期28卷 2988-2995页

作者：谷成旭张乃丽孟永春刘卿郭绮萱付丽张璐萍黄飞滨州医学院基础医学院人体解剖学教研室山东省烟台市264003 滨州医学院烟台附属医院山东省烟台市264100 山东大学齐鲁医学院基础医学院人体解剖学教研室山东省济南市250021 康复大学健康与生命科学学院山东省青岛市266071

背景:间充质干细胞外泌体在组织损伤修复中可能发挥关键作用,而miRNA是外泌体发挥治疗作用的重要成分,其中miR-29b-3p具有减少细胞凋亡、促进轴突再生和血管生成的作用。目的:研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对过氧化氢诱导P... 详细信息

背景:间充质干细胞外泌体在组织损伤修复中可能发挥关键作用,而miRNA是外泌体发挥治疗作用的重要成分,其中miR-29b-3p具有减少细胞凋亡、促进轴突再生和血管生成的作用。目的:研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对过氧化氢诱导PC12细胞损伤模型的保护作用,并探讨相关机制。方法:①首先采用胶原酶消化法提取大鼠脂肪间充质干细胞,通过miR-29b-3p模拟物及抑制物转染脂肪间充质干细胞,采用超速离心法从培养上清中提取外泌体并进行鉴定,从而构建高表达和敲低miR-29b-3p的脂肪间充质干细胞外泌体;②通过过氧化氢诱导PC12细胞模拟神经细胞损伤模型,研究脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p对神经元细胞损伤模型发挥保护作用的相关机制。结果与结论:①脂肪间充质干细胞外泌体具有典型的杯状形态,直径分布在50-140 nm范围内,表达外泌体表面特异性标志膜蛋白Alix、CD63及TSG101,并可被PC12细胞成功摄取;②脂肪间充质干细胞外泌体预处理可减轻过氧化氢诱导PC12细胞的凋亡,并且这种保护作用随着外泌体中miR-29b-3p表达的增加而增强,随着外泌体中miR-29b-3p表达的降低而减弱,其发挥作用的机制与脂肪间充质干细胞外泌体通过miR-29b-3p促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达及抑制凋亡蛋白Bax的表达相关。

关键词：脂肪间充质干细胞外泌体 miR-29b-3p PC12细胞凋亡 miRNA

血清PLGF/sFlt-1联合胎盘3D-PDI对子痫前期的预测价值

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中国医科大学学报 2024年第2期53卷 136-141页

作者：田飞刘玉芳李保卫张金俏滨州医学院附属医院超声医学科山东滨州256603 滨州医学院附属医院妇产科山东滨州256603

目的探讨血清胎盘生长因子(PLGF)/可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)联合胎盘三维能量多普勒指数(3D-PDI)对子痫前期(PE)的预测价值。方法选取2021年1月至2022年12月于我院就诊且有PE高危因素的孕妇120例,随访至分娩后1周。于孕14~2... 详细信息

目的探讨血清胎盘生长因子(PLGF)/可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)联合胎盘三维能量多普勒指数(3D-PDI)对子痫前期(PE)的预测价值。方法选取2021年1月至2022年12月于我院就诊且有PE高危因素的孕妇120例,随访至分娩后1周。于孕14~20周常规产检时检测血清PLGF和sFlt-1水平,并计算PLGF/sFlt-1比值,同时超声检测胎盘3D-PDI,包括血管化指数(VI)、血流指数(FI)、血管化-血流指数(VFI)。根据孕20周后是否发生PE,分为PE组(55例)和对照组(65例),根据病情轻重将PE组进一步分为非重度PE组(35例)和重度PE组(20例)。比较各组PLGF/sFlt-1及3D-PDI,并分析PLGF、sFlt-1与3D-PDI的相关性,绘制受试者操作特征(ROC)曲线,分析各指标单独或联合预测PE的价值。结果2组孕妇年龄、检测孕周、妊娠高血压史及生育史等均无差异(P>0.05)。PE组收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、24 h尿蛋白水平、早产率、新生儿重症监护室入住率及孕前体质量指数均高于对照组(P<0.05),新生儿体质量低于对照组(P<0.05)。PE组血清PLGF/sFlt-1、3D-PDI均低于对照组,重度PE组血清PLGF/sFlt-1、3D-PDI均低于非重度PE组(均P<0.05)。PLGF与VFI呈显著正相关(P<0.01),sFlt-1与VFI呈显著负相关(P<0.01)。ROC曲线分析显示,PLGF/sFlt-1、VI、FI、VFI对PE均有预测价值,VI、FI、VFI联合预测PE的价值高于各参数指标[曲线下面积(AUC)=0.951],血清PLGF/sFlt-1、VI、FI、VFI四者联合预测价值最高(AUC=0.987)。结论PE患者孕早期血清PLGF、sFlt-1与胎盘VFI均具有显著相关性,且孕早期血清PLGF/sFlt-1及胎盘VI、FI、VFI均减低,4种指标联合应用预测PE的效能最高,可为临床早期筛查或预测PE提供参考。

关键词：血清胎盘生长因子/可溶性血管内皮生长因子受体-1 三维能量多普勒指数子痫前期超声诊断

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洋葱伯克霍尔德菌下呼吸道感染流行病学调查

中华医院感染学杂志 2024年第18期34卷 2828-2831页

作者：孙吉花宋洪芳樊国爱刘欣张洁孙丽刘芳魏佳纪冰崔景晶滨州医学院附属医院感染管理办公室山东滨州256603 滨州医学院附属医院消毒供应中心山东滨州256603 滨州医学院附属医院检验科山东滨州256603 滨州医学院附属医院质管办山东滨州256603

目的对心脏外科重症监护室(CSICU)患者下呼吸道洋葱伯克霍尔德菌(BC)疑似医院感染暴发进行流行病学调查,为感染防控提供科学依据。方法2020年3月16日-28日心脏大血管外科手术后入住重症监护室的患者中,先后出现5例下呼吸道感染,细菌培... 详细信息

目的对心脏外科重症监护室(CSICU)患者下呼吸道洋葱伯克霍尔德菌(BC)疑似医院感染暴发进行流行病学调查,为感染防控提供科学依据。方法2020年3月16日-28日心脏大血管外科手术后入住重症监护室的患者中,先后出现5例下呼吸道感染,细菌培养均为洋葱伯克霍尔德菌,考虑为“疑似医院感染暴发”。对5例感染患者的三间分布进行调查,采集CSICU及手术室环境卫生学标本、共同侵入性操作医疗用品、医务人员手卫生、食道超声探头、呼吸机及其附件等标本,进行病原菌培养鉴定及药敏试验。结果5例患者手术均在10号手术间进行,麻醉师均为H医生,手术间内已开启及未开启的大瓶装非消毒型耦合剂检出BC阳性率为100%,与患者痰培养分离的BC耐药谱基本一致;CSICU及手术室环境卫生学标本不合格率为14.29%,均无致病菌及目标菌(BC)生长。结论此次事件因麻醉师进行食道超声探头插入时,使用大瓶非消毒型耦合剂介导,大瓶非消毒型耦合剂为BC污染耦合剂,导致5例患者术后发生BC下呼吸道感染,停用大瓶非消毒型耦合剂改用单包装消毒型耦合剂后,未再发生BC致下呼吸道聚集感染。

关键词：手术洋葱伯克霍尔德菌下呼吸道感染疑似医院感染暴发现场流行病学调查应急干预措施

咪达唑仑与丙泊酚用于老年体外循环心脏术后机械通气患者的临床研究

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中国临床药理学杂志 2024年第7期40卷 963-967页

作者：吴恩刚董圣军盖宁刘宝辉刘典晓王锋杨凯强王倩倩滨州医学院附属医院心脏大血管外科山东滨州256600 滨州医学院附属医院麻醉科山东滨州256600

目的分析咪达唑仑与丙泊酚用于老年体外循环(CPB)心脏术后机械通气患者对镇静效果及血气指标的影响。方法将老年CPB心脏术后机械通气患者按队列法分为咪达唑仑组(M组)、丙泊酚组(P组)和咪达唑仑与丙泊酚联合给药组(M-P组)。M组静脉注射0... 详细信息

目的分析咪达唑仑与丙泊酚用于老年体外循环(CPB)心脏术后机械通气患者对镇静效果及血气指标的影响。方法将老年CPB心脏术后机械通气患者按队列法分为咪达唑仑组(M组)、丙泊酚组(P组)和咪达唑仑与丙泊酚联合给药组(M-P组)。M组静脉注射0.05~0.10mg·kg^(-1)咪达唑仑进行镇静诱导,再通过微量泵持续静脉泵入0.05~0.15mg·kg^(-1)·h^(-1)咪达唑仑;P组静脉注射0.5~1.0mg·kg^(-l)丙泊酚进行镇静诱导,再通过微量泵持续静脉泵入0.5~2.0mg·kg^(-1)h^(-1)丙泊酚;M-P组首先静脉注射0.02~0.05mg·kg^(-l)咪达唑仑及0.2~0.5mg·kg^(-l)丙泊酚进行镇静诱导,再继续持续静脉泵入0.05~0.1 mg·kg^(-l)咪达唑仑及0.5~0.8mg·kg^(-l)·h^(-l)丙泊酚。比较3组患者的镇静效果、血气指标、血流动力学指标、拔管时间、重症监护病房(ICU)滞留时间及治疗费用,并记录镇静治疗期间的药物不良反应发生情况。结果M组、P组和M-P组分别有43例、44例和39例。M组、P组和M-P组的药物起效时间分别为(77.94±12.05)、(18.18±5.20)和(21.25±9.36)s,达到满意镇静效果时间分别为(42.57±11.41)、(22.63±8.17)和(23.98±10.25)min,停药后苏醒时间分别为(59.30±14.86)、(19.83±5.44)和(22.16±6.29)min,拔管时间分别为(1.61±0.20)、(1.45±0.22)和(1.37±0.15)d,ICU滞留时间分别为(2.17±0.29)、(1.91±0.36)和(1.84±0.25)d,治疗费用分别为(186.59±60.83)、(922.97±164.34)和(375.03±71.16)千元,药物不良反应总发生率分别为34.88%、4.55%和7.69%,在统计学上差异均有统计学意义(均P0.05)。结论咪达唑仑与丙泊酚联合给药用于老年CPB心脏术后机械通气患者具有显著的镇静效果,有利于减少镇静药物用量,且对患者血气指标及血流动力学指标的影响较小,较单一使用咪达唑仑有利于缩短拔管时间和ICU滞留时间,并降低药物不良反应总发生率,而较单一使用丙泊酚有利于减少治疗费用,是一种更加理想的镇静给药模式。

关键词：咪达唑仑丙泊酚老年体外循环机械通气镇静血气指标