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沙眼衣原体、淋球菌、解脲脲原体核酸快速检测方法的建立

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中国病原生物学杂志 2025年第2期 158-163+170页

作者：李雨欣周华誉张瑜高静蔡亦梅逯素梅任鲁风马鲁豫山东第一医科大学北京中科生仪科技有限公司山东第一医科大学第一附属医院(山东省千佛山医院)检验医学科

目的建立一种基于微流控芯片平台的可同时鉴别沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)、淋球菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)、解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,UU)的现场化全自动检测方法。方法选取CT的隐蔽性质粒、NG的porA基因和UU... 详细信息

目的建立一种基于微流控芯片平台的可同时鉴别沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)、淋球菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)、解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum,UU)的现场化全自动检测方法。方法选取CT的隐蔽性质粒、NG的porA基因和UU的16S rRNA中的保守序列作为检测靶标，设计特异性引物和TaqMan探针；分别制备CT、NG、UU三种病原体的阳性克隆菌株进行灵敏度初步测试。开发基于全自动检测设备的一体化微流控芯片，实现“样本进-结果出”的核酸提取纯化及实时荧光PCR全过程。使用经过数字PCR定量的CT、NG、UU三种病原体的液体室内质控品对全自动检测方法的灵敏度、特异性和重复性进行评价。用建立的全自动检测方法与已上市的多重实时荧光PCR法检测试剂盒同时检测160例临床样本，评价其一致性。结果阳性克隆菌株经琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定，构建正确。建立的全自动检测方法检测CT、NG和UU的检出限均可达到1×10～2 copies/test,检测范围1×10～2～1×10～7 copies/test;该方法特异性好，不受单纯疱疹病毒Ⅰ型/Ⅱ型、腺病毒、肠道病毒71型、肺炎衣原体、肺炎支原体以及人免疫缺陷病毒Ⅰ型的干扰；该方法重复性好，变异系数均0.05);全自动检测方法与对比试剂盒检测CT、NG和UU结果的阳性符合率分别为96.2%、94.4%和93.4%,阴性符合率均为100%,总符合率分别为99.4%、99.4%和97.5%。结论建立的现场化全自动检测方法具有良好的灵敏度、特异性和重复性，该方法自动化程度高，检测时间短，操作简便、快速，不受实验室场地限制，适合于CT、NG、UU的临床快速诊断。

关键词：沙眼衣原体淋球菌解脲脲原体微流控芯片现场化核酸检测

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喉神经内分泌肿瘤临床病理及影像分析

临床放射学杂志 2025年第1期44卷 64-68页

作者：李小芹刘善凤赵慧胡娜李进叶孙立新王林省杨珞战海宇山东省第二人民医院影像科济南250022 山东省第二人民医院病理科济南250022 山东第一医科大学第一附属医院(山东省千佛山医院)影像科济南250014

目的探讨喉神经内分泌肿瘤的临床病理及影像表现。方法回顾性分析经病理证实的13例喉神经内分泌肿瘤患者的临床病理及影像学资料。结果男11例,女2例,年龄48~74岁。G1神经内分泌瘤2例,G2神经内分泌瘤5例,小细胞神经内分泌癌4例,混合神经... 详细信息

目的探讨喉神经内分泌肿瘤的临床病理及影像表现。方法回顾性分析经病理证实的13例喉神经内分泌肿瘤患者的临床病理及影像学资料。结果男11例,女2例,年龄48~74岁。G1神经内分泌瘤2例,G2神经内分泌瘤5例,小细胞神经内分泌癌4例,混合神经内分泌和非神经内分泌肿瘤(神经内分泌癌+鳞癌)2例。声门上型10例,声门型1例,跨区(侵及声门区及声门上区)2例。CT示7例病灶呈结节型,6例病灶呈浸润型。13例病灶CT增强扫描呈轻中度渐进性不均匀强化。结论喉神经内分泌肿瘤好发于长期吸烟的老年男性,镜下多为黏膜下结节样、浸润性肿块,影像表现肿瘤常发生于声门上区,病灶形态主要分结节型和浸润型两种,增强扫描呈轻中度渐进性不均匀强化,但确诊仍依靠术后病理及免疫组织化学指标。

关键词：喉神经内分泌肿瘤病理体层摄影术 X线计算机

黄芩汤调控肠道菌群治疗小鼠肠道急性移植物抗宿主病的机制

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中国组织工程研究 2025年第1期29卷 95-102页

作者：夏梦婷孙润洁付佳琪李素贞于漫亚崔兴山东中医药大学第一临床医学院山东中医药大学千佛山校区山东省济南市250014 山东中医药大学中医学院山东省济南市250014 山东中医药大学第二附属医院肿瘤中心山东省济南市250000

背景:肠道急性移植物抗宿主病是异基因造血干细胞移植后最凶险的并发症之一,具有较高的致死率,如何通过应用中药改善肠道炎症、调节自噬以治疗肠道急性移植物抗宿主病是当下值得研究的问题。目的:探讨黄芩汤调控肠道菌群治疗肠道急性移... 详细信息

背景:肠道急性移植物抗宿主病是异基因造血干细胞移植后最凶险的并发症之一,具有较高的致死率,如何通过应用中药改善肠道炎症、调节自噬以治疗肠道急性移植物抗宿主病是当下值得研究的问题。目的:探讨黄芩汤调控肠道菌群治疗肠道急性移植物抗宿主病的机制。方法:CB6F1小鼠经总剂量8 Gy的60Co X射线照射后通过尾静脉输入Balb/c H-2d小鼠的单个核细胞悬液(骨髓+脾)制备急性移植物抗宿主病模型,随机分为模型组及黄芩汤高、中、低剂量组。造模后分别给予不同剂量黄芩汤或等体积生理盐水连续灌胃14 d,进行临床急性移植物抗宿主病评分并记录生存时间,取小肠组织做苏木精-伊红染色行小肠黏膜病理分级评分。使用16S rDNA测序检测各组小鼠肠道菌群,行免疫荧光、免疫组化染色、PCR等检测自噬相关标志物的表达。结果与结论:(1)与模型组相比,黄芩汤中、高剂量组小鼠存活时间显著延长(P<0.01),临床急性移植物抗宿主病评分显著降低(P<0.01),小肠黏膜病理分级评分显著降低(P<0.01),小肠组织炎症因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6水平显著下降(P<0.01),小鼠小肠黏膜上皮结构完整性部分恢复;(2)肠道菌群研究发现,与模型组相比,黄芩汤中剂量组促炎菌株肠球菌显著减少(P<0.05),而有益菌如梭状芽孢杆菌及促自噬的红球菌显著增多(P<0.05);(3)与模型组相比,黄芩汤中剂量组的自噬标志物显著升高(P<0.05);透射电镜下,黄芩汤中剂量组自噬泡数量显著增多;(4)结果表明:黄芩汤显著降低条件性致病菌丰度和小肠组织炎症因子水平,并提高有益菌相对丰度,同时促进小肠黏膜自噬的表达,从而明显改善急性移植物抗宿主病小鼠肠道症状。

关键词：肠道急性移植物抗宿主病黄芩汤造血干细胞移植肠道菌群梭状芽孢杆菌肠球菌抗炎自噬

山东大学附属千佛山医院“三级质控、四级网络”质量管理体系建设

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中国医院 2016年第12期20卷 26-28页

作者：赵瑞萍张兆旭许冬梅山东大学附属千佛山医院济南市经十路16766号250014

为更好地激发员工的工作热情,山东大学附属千佛山医院以"人际关系理论"为指导,构建并推行"三级质控、四级网络"质量管理体系,取得优异成效。"三级质控"包括以院长为第一责任人的决策级、由各专业委员会及各职能部门组成的控制级和由科... 详细信息

为更好地激发员工的工作热情,山东大学附属千佛山医院以"人际关系理论"为指导,构建并推行"三级质控、四级网络"质量管理体系,取得优异成效。"三级质控"包括以院长为第一责任人的决策级、由各专业委员会及各职能部门组成的控制级和由科主任、护士长、科级质控员组成的执行级;"四级网络"指质控中心抽查、质控中心与各职能部门每月联合检查、科室质控小组每月自控和药医技质控员定期互控。

关键词：霍桑试验质量控制质量管理

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全覆膜自膨胀金属支架在气管瘘中的临床应用

中华结核和呼吸杂志 2013年第6期36卷 431-436页

作者：朱强臧琦蒋仲敏王伟曹明山东大学附属千佛山医院胸外科济南250014

目的评价全覆膜自膨胀气管一支气管支架治疗气管瘘的临床价值。方法回顾性分析2005年8月至2011年11月山东大学附属千佛山医院胸外科应用全覆膜气管一支气管支架治疗的9例气管瘘患者的临床资料，其中男7例，女2例，年龄28～65岁，平均46... 详细信息

目的评价全覆膜自膨胀气管一支气管支架治疗气管瘘的临床价值。方法回顾性分析2005年8月至2011年11月山东大学附属千佛山医院胸外科应用全覆膜气管一支气管支架治疗的9例气管瘘患者的临床资料，其中男7例，女2例，年龄28～65岁，平均46岁。9例中支气管胸膜瘘7例，气管胸膜瘘1例，左主支气管一食管瘘1例，8例伴有脓胸；瘘口直径为3．5～25．0mm，平均8．4mm。在局部麻醉和X线透视引导下，6例放置L型支架，3例放置I型支架，伴脓胸者于支架置入后给予胸腔冲洗治疗。结果所有患者均成功置人支架，从插入导丝至支架成功释放所需时间5—16min，平均（10±4）min，未发生与操作相关的并发症。1例胸腔引流管仍有少量气泡溢出，其余8例引流管气泡均立即消失，造影检查示瘘口无造影剂外溢。1例在支架置入后第5天由于剧烈咳嗽将支架咳出，重新置人新支架后未再发生移位。8例脓胸患者中1例行支架置人，术后8d因脓胸合并败血症去世，另1例6个月后脓胸未治愈，死于肺癌脑转移，其他6例在支架置入术后2～5个月（平均3．7个月）治愈。7例患者共随访3～36个月，中位随访时间为13．5个月，随访中1例于支架置入术后8个月取出支架，未发现脓胸复发；其他患者对支架耐受良好，无移位，无脓胸复发，饮食良好。结论使用全覆膜自膨胀金属支架治疗气管瘘是一种安全、有效、快速的微创治疗方法，尤其适合不能耐受手术或其他治疗方法失败的患者。

关键词：呼吸道瘘支架治疗

K562细胞TMS1基因甲基化状态及三氧化二砷对其去甲基化作用

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中华血液学杂志 2014年第3期35卷 197-201页

作者：李洪丽董小锋王焱徐文伟董琳毕可红朱传升山东大学附属千佛山医院血液科济南250014 山东大学附属千佛山医院普外科济南250014

目的探讨慢性髓性白血病细胞系K562细胞甲基化诱导静止基因（TMS1）甲基化程度及三氧化二砷（As2O3）对其甲基化状态的逆转作用及其机制。方法K562细胞经不同浓度As2O3处理48h，采用甲基化特异性PCR（MsP）法检测As2O3处理前后K562细胞T... 详细信息

目的探讨慢性髓性白血病细胞系K562细胞甲基化诱导静止基因（TMS1）甲基化程度及三氧化二砷（As2O3）对其甲基化状态的逆转作用及其机制。方法K562细胞经不同浓度As2O3处理48h，采用甲基化特异性PCR（MsP）法检测As2O3处理前后K562细胞TMS1基因甲基化程度；RT-PCR及Westernblot法检测As2O3处理前后K562细胞TMS1mRNA及蛋白表达，Westemblot法检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达水平的变化；用细胞凋亡检测试剂盒（Annexin V／PI）标记、流式细胞术检测细胞凋亡。结果K562细胞TMS1基因呈完全甲基化，TMS1mRNA及蛋白呈低表达状态，相对表达水平分别为0．01＋0．01、0．09~0．02；2jgnol／LAs2O3可完全逆转K562细胞TMS1的甲基化水平，TMS1mRNA及蛋白相对表达水平分别为0．72±0．04和1．3±0．06，与处理前相比明显升高（P〈0．01）；细胞凋亡检测结果显示，与对照组相比，2gmol／LAs2O3处理组细胞凋亡率明显增加[（2．05±0．16）％对（12．24±1．06）％，P〈0．05）]。与对照组相比，2μmol／LAs2O3处理组K562细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低，促凋亡蛋白Bax表达明显增高，Bcl-2／Bax比值明显降低（1．94±0．14对0．56士0．12，P〈0．01）。结论As2O3可通过逆转抑癌基因TMS1的甲基化状态，恢复其表达，并通过下调Bcl．2／Bax比值促进K562细胞凋亡。

关键词： K562细胞基因 TMS1 DNA甲基化细胞凋亡砷剂

OSF1在毕赤酵母菌中的分泌表达及其生物活性

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生物工程学报 2014年第2期30卷 274-283页

作者：康东红王燕张洪美冯潇雨曹维王萍山东大学附属千佛山医院山东济南250014

为了研究人成骨细胞刺激因子(Human osteoblast-stimulating factor,OSF-1)的生物学活性,构建OSF-1高效毕赤酵母表达菌株并表达纯化具有生物活性的OSF-1。首先通过全基因人工合成的方法合成人osf-1基因,并克隆至毕赤酵母分泌表达载体pPI... 详细信息

为了研究人成骨细胞刺激因子(Human osteoblast-stimulating factor,OSF-1)的生物学活性,构建OSF-1高效毕赤酵母表达菌株并表达纯化具有生物活性的OSF-1。首先通过全基因人工合成的方法合成人osf-1基因,并克隆至毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K,构建重组表达质粒pPIC9K/osf-1,线性化后电转化酵母宿主菌GS115,构建*** GS115/pPIC9K/osf-1,经MD、G418-YPD平板和PCR法筛选,获得多拷贝转化子。阳性表达菌株在25℃,经1%的甲醇诱导表达96 h,重组蛋白的表达量达到最大。经SDS-PAGE电泳分析所表达的重组蛋白约为18 kDa,与人成骨细胞刺激因子相符。表达上清经SP-Sephadex C-50离子交换层析进行纯化,得到纯度达98%以上的OSF-1。Western blotting鉴定该蛋白对人成骨细胞刺激因子抗体具有良好的抗原性。生物活性测定表明提纯的OSF-1能促进鼠成骨细胞MC3T3-E1的增殖和分化。利用重组毕赤酵母高效分泌表达了有生物活性的OSF-1,为进一步开展其抗骨质疏松活性研究及产业化开发奠定了基础。

关键词： OSF-1 毕赤酵母蛋白表达纯化生物活性

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氧化苦参碱体外诱导膀胱癌T24细胞凋亡

第二军医大学学报 2013年第5期34卷 565-568页

作者：李顺魏学斌黄世明徐留玉黄生亮赵庆利李青山东大学附属千佛山医院泌尿外科济南250014

目的观察氧化苦参碱对膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法不同浓度(0.625、1.25、2.5 mg/mL)氧化苦参碱作用于膀胱癌T24细胞,采用流式细胞术、光镜及电镜观察其诱导膀胱癌T24细胞的凋亡作用。用RT-PCR检测细胞... 详细信息

目的观察氧化苦参碱对膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法不同浓度(0.625、1.25、2.5 mg/mL)氧化苦参碱作用于膀胱癌T24细胞,采用流式细胞术、光镜及电镜观察其诱导膀胱癌T24细胞的凋亡作用。用RT-PCR检测细胞凋亡相关基因survivin及caspase-3转录水平的改变。免疫印迹法检测survivin和caspase-3蛋白的表达情况。结果氧化苦参碱作用人膀胱癌细胞后,光镜及电镜下均见到典型的细胞凋亡形态,流式细胞术观察发现凋亡峰。同时观察到氧化苦参碱抑制survivin的转录和表达,对caspase-3有上调作用(P<0.05)。结论氧化苦参碱可能通过抑制survivin、上调caspase-3表达诱导膀胱癌T24细胞发生凋亡。

关键词：氧化苦参碱膀胱肿瘤凋亡存活素半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶

染料介导光氧化法处理的同种异体动脉体内近期生物稳定性和细胞毒性研究

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生物医学工程学杂志 2009年第2期26卷 390-393页

作者：刘文一谷志涛刘鲁祁山东大学附属千佛山医院心脏外科济南250014

观察染料介导光氧化(DMP)法处理的家兔胸主动脉用于同种异体腹主动脉置换后,在体内血流环境下的生物稳定性和细胞毒性。以经染料介导的光氧化反应处理的家兔胸主动脉为研究对象,以戊二醛(GA)处理的家兔胸主动脉以及自体腹主动脉原位移... 详细信息

观察染料介导光氧化(DMP)法处理的家兔胸主动脉用于同种异体腹主动脉置换后,在体内血流环境下的生物稳定性和细胞毒性。以经染料介导的光氧化反应处理的家兔胸主动脉为研究对象,以戊二醛(GA)处理的家兔胸主动脉以及自体腹主动脉原位移植作为对照,建立家兔胸-腹主动脉移植模型;实验动物观察饲养1个月后,取出标本观察,通过光学显微镜半定量计数观察移植血管的体内生物稳定性;通过扫描电镜半定量计数观察移植血管内皮覆盖情况,以此评价移植血管的细胞毒性。结果显示:DMP组生物稳定性指数较自体动脉移植组低,差异不具统计学意义(P>0.05),DMP组生物稳定性指数较GA组高,差异具显著统计学意义(P<0.01);DMP组内皮覆盖率较GA组高,差异具显著统计学意义(P<0.01)。表明:光氧化反应处理的家兔胸主动脉在家兔胸-腹主动脉移植的动物模型中,生物稳定性高,细胞毒性低。

关键词：染料介导光氧化同种异体动脉移植生物稳定性细胞毒性