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髓鞘相关抑制因子及其受体在脊髓损伤修复中的研究进展

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解剖学报 2024年第3期55卷 371-377页

作者：刘欣童彭清华刘怀存张卫光北京大学医学部北京大学基础医学院人体解剖学与组织学胚胎学系北京100083

脊髓损伤是一种严重的中枢神经系统创伤性疾病,常见于坠落伤、交通事故、重物砸伤等,可造成机体损伤平面以下的运动、感觉和自主神经功能障碍。髓鞘相关抑制因子(MAI)在损伤的脊髓微环境中具有促进生长锥塌陷、抑制轴突再生的作用,是造... 详细信息

脊髓损伤是一种严重的中枢神经系统创伤性疾病,常见于坠落伤、交通事故、重物砸伤等,可造成机体损伤平面以下的运动、感觉和自主神经功能障碍。髓鞘相关抑制因子(MAI)在损伤的脊髓微环境中具有促进生长锥塌陷、抑制轴突再生的作用,是造成脊髓损伤难以修复的主要原因。髓鞘相关抑制因子类蛋白,如神经轴突生长抑制因子(Nogo)、少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(OMgp)和髓鞘相关糖蛋白(MAG),及其受体蛋白如Nogo-A/Nogo-66受体1(NgR1)、配对免疫球蛋白样受体B(PirB)、鞘氨醇-1-磷酸受体(S1PR2),均是脊髓微环境中的重要调节因子,可通过影响神经元轴突生长的信号通路抑制脊髓损伤的修复过程。虽然目前脊髓损伤修复的机制还不清楚,但调节髓鞘相关抑制因子类蛋白及下游信号通路是脊髓损伤修复的重要治疗途径之一。我们通过本文对近年来MAI类蛋白及其受体在脊髓损伤修复中的作用进行综述,为脊髓损伤修复提供可探究的新靶点,并为脊髓损伤后的临床治疗提供更多思路。

关键词：脊髓损伤脊髓损伤修复轴突损伤髓鞘相关抑制因子

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模拟极端高原环境对大鼠海马转录组的影响

解剖学报 2024年第4期55卷 445-451页

作者：方璇汪涛程全成刘怀存张艳南燕陈春花张卫光北京大学基础医学院人体解剖学与组织学胚胎学系北京100083 北京大学国际医院北京102206

目的建立极端高原低压低氧环境急性暴露模型,探讨与大鼠学习记忆损伤相关的转录组学的变化。方法选取6周龄、200~250 g健康雄性SD大鼠,分为对照组和高原组。对照组经常压常氧处理(19只),高原组置于低压低氧舱内(19只),模拟8000米海拔高... 详细信息

目的建立极端高原低压低氧环境急性暴露模型,探讨与大鼠学习记忆损伤相关的转录组学的变化。方法选取6周龄、200~250 g健康雄性SD大鼠,分为对照组和高原组。对照组经常压常氧处理(19只),高原组置于低压低氧舱内(19只),模拟8000米海拔高度,处理72 h。每组取16只,利用场景恐惧和Morris水迷宫实验(各8只)检测行为学变化。每组取3只,全部海马组织提取RNA行转录组学测序,通过基因本体论(GO)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因集富集分析(GSEA)分析极端高原环境诱导学习记忆损伤的分子机制。结果行为学结果显示,与对照组相比,高原组大鼠恐惧记忆和空间学习记忆能力下降。GO和KEGG分析显示,极端高原环境重塑海马组织微环境,影响细胞间信号传递,GSEA显示,极端高原环境上调与质膜和细胞外基质相关的基因集。结论8000米海拔的极端高原环境通过影响大鼠海马组织微环境,破坏细胞间连接,损害细胞间通讯,进而诱导学习记忆功能损伤。

关键词：高原低压低氧学习记忆微环境细胞通讯 Morris水迷宫实验大鼠

过表达海马LINGO-1对小鼠学习和记忆能力及海马各亚区Spinophilin+树突棘的影响

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陆军军医大学学报 2024年第2期46卷 118-127页

作者：王舜蒋林何琦杨浩王依滢周宇宁梁芯张毅晁凤蕾张蕾唐勇重庆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的脑立体定位注射腺相关病毒特异性过表达海马LINGO-1,探讨其对小鼠空间学习和记忆能力以及海马各亚区体积和Spinophilin+树突棘的影响。方法将7月龄雄性C57小鼠按照简单随机法分为对照组和LINGO-1过表达组,对照组小鼠海马立体定位... 详细信息

目的脑立体定位注射腺相关病毒特异性过表达海马LINGO-1,探讨其对小鼠空间学习和记忆能力以及海马各亚区体积和Spinophilin+树突棘的影响。方法将7月龄雄性C57小鼠按照简单随机法分为对照组和LINGO-1过表达组,对照组小鼠海马立体定位注射携带绿色荧光的空载腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV),LINGO-1过表达组小鼠海马立体定位注射同时携带绿色荧光和LINGO-1过表达载体的AAV。运用Morris水迷宫评估小鼠的空间学习和记忆能力,荧光定量PCR及免疫荧光染色方法分别检测小鼠海马内LINGO-1基因表达水平和各亚区荧光强度,体视学三维定量小鼠海马各亚区体积及Spinophilin+树突棘总数。结果对照组和LINGO-1过表达组病毒注射前后体质量差异无统计学意义;LINGO-1过表达诱导小鼠海马LINGO-1的mRNA水平升高、荧光强度增强(P学习与记忆能力。

关键词： LINGO-1 树突棘突触海马学习记忆

水通道蛋白9商品化抗体和自制抗体识别位点的分析和应用

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解剖学报 2024年第2期55卷 237-240页

作者：程全成丁慧如王子元方金玉张晓丽张卫光北京大学基础医学院人体解剖学与组织学胚胎学系北京100191 北京卫生职业学院医学基础教研室北京102402

目的分析水通道蛋白9(AQP9)商品化抗体和自制抗体的抗原识别位点,并鉴别其应用效果。方法利用Western blotting对比3种商品化抗体与自制AQP9抗体鉴定基因型的效果。分析4种抗体的抗原识别位点,及其在实际应用中的特异性。结果Western bl... 详细信息

目的分析水通道蛋白9(AQP9)商品化抗体和自制抗体的抗原识别位点,并鉴别其应用效果。方法利用Western blotting对比3种商品化抗体与自制AQP9抗体鉴定基因型的效果。分析4种抗体的抗原识别位点,及其在实际应用中的特异性。结果Western blotting结果显示,3种商品化抗体在野生型(WT)和Aqp9^(-/-)小鼠中均可见蛋白条带。3种商品化抗体对应的血蓝蛋白(KLH)共轭合成肽依次为大鼠、人源和人源,与小鼠AQP9氨基酸序列存在一定差异。AQP3/7与AQP9分子量相近,且在肝中均有表达,同源性较高。自制抗体在WT鼠的27 kD位置可见一明显条带,但是Aqp9^(-/-)鼠的相应位置未见条带。结论1号和3号商品化抗体可用于辅助鉴别Aqp9^(-/-)鼠的基因型,自制抗体在蛋白水平上可以准确鉴定基因型。

关键词：水通道蛋白9 肝脏抗体基因敲除免疫印迹法小鼠大鼠人

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卵巢癌神经调控的研究进展

解剖学报 2024年第5期55卷 647-653页

作者：李凡舒孙艳荣张艳栾丽菊张卫光北京大学医学部北京100083 北京大学基础医学院人体解剖学与组织学胚胎学系北京100083

卵巢癌是世界上最为常见的女性癌症之一。在过去的数十年中,已经有大量关于癌症发生与进展机制的研究,多种神经以及神经介质参与其中。神经支配在卵巢癌中也存在,并且对于卵巢癌而言,各种神经以及神经递质发挥着不同的作用,卵巢癌细胞... 详细信息

卵巢癌是世界上最为常见的女性癌症之一。在过去的数十年中,已经有大量关于癌症发生与进展机制的研究,多种神经以及神经介质参与其中。神经支配在卵巢癌中也存在,并且对于卵巢癌而言,各种神经以及神经递质发挥着不同的作用,卵巢癌细胞的增殖、转移、凋亡以及肿瘤微环境的改变都与之相关。深入探讨和理解这些神经末梢在卵巢癌发展当中分别扮演了什么角色,是了解肿瘤进展机制的必要环节,对于后续针对肿瘤调控的研究具有重要作用。虽然糖皮质激素和交感神经释放的去甲肾上腺素能够促进卵巢癌的进展,但血清素可能会抑制癌细胞生长,同时,副交感神经和感觉神经也能够对卵巢肿瘤产生或正或负的影响。这些相关研究为肿瘤治疗方案提供了新的可能,或许通过较低价格的受体抑制剂或激动剂就能够缓解癌症的进展,有利于后续针对卵巢癌以及其他癌症相关治疗可行性的探索。我们通过本文综述了神经对卵巢癌发生、发展的调节作用,希望能够为卵巢癌临床诊疗提供新的思路。

关键词：卵巢癌慢性应激神经浸润神经递质肿瘤微环境

使用新型冻存保护剂进行人源脂肪组织冻存及移植的有效性评估

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中华整形外科杂志 2024年第2期40卷 202-211页

作者：赵润蕾王关卉儿安阳杨丹丽姚明解曹启龙初相伍李东北京大学第三医院成形外科北京100191 北京大学基础医学院病原生物学系北京100191 北京大学基础医学院人体解剖学与组织学胚胎学系北京100191 青岛海尔生物科技有限公司青岛266041

目的:探索使用新型冻存剂进行人源脂肪组织冻存及移植的有效性。方法:标本来源于2022年1至3月在北京大学第三医院成形外科进行吸脂术的健康成年女性,将获得的脂肪组织离心后随机分为9组,分别采用不同的冻存液[A组、B组、二甲基亚砜(DMSO... 详细信息

目的:探索使用新型冻存剂进行人源脂肪组织冻存及移植的有效性。方法:标本来源于2022年1至3月在北京大学第三医院成形外科进行吸脂术的健康成年女性,将获得的脂肪组织离心后随机分为9组,分别采用不同的冻存液[A组、B组、二甲基亚砜(DMSO)组]及冻存时长(1、2、3个月组)于液氮中冻存。A组冻存液组分为右旋糖苷40(DEX)+氨基酸+维生素+无机盐,B组冻存液组分为DMSO+DEX,DMSO组采用传统冻存液,组分及配比为10%DMSO+20%胎牛血清(FBS)+70%DMEM-12。采用5 ml冻存管,脂肪∶冻存液=3∶2,每组冻存6管。脂肪组织复温后,采用HE染色观察组织学形态,采用免疫组化染色进行脂滴包被蛋白(Perilipin)定量分析,通过阳性细胞数量与总细胞数量的比值计算Perilipin阳性率;采用CCK-8法测定脂肪细胞活性。选择健康无特定病原体级裸鼠38只,根据移植脂肪使用不同的冻存保护剂(A组、B组、DMSO组)分为3组,每组各12只,另外2只作为day 0对照组,各组脂肪冻存时间均为3个月。裸鼠腹腔麻醉后,每侧背部注射复温后的冻存脂肪各0.9 ml,分别于移植后1、2、3个月通过MRI扫描及三维软件计算脂肪组织存留率并进行组间比较;小鼠处死后取移植的脂肪组织,采用HE染色和免疫组化染色进行组织形态学观察及Perilipin定量分析。采用GraphPad Prism 8.0软件对数据进行统计学分析,符合正态分布的计量资料以x±s表示,整体多组间比较采用重复测量资料的方差分析,同一时间点组间数据比较采用Tukey多重检验。结果:在液氮中冻存1~3个月后不同冻存液组的脂肪组织形态接近正常新鲜脂肪组织,各组Perilipin阳性率差异无统计学意义(P>0.05);CCK-8法提示冻存1个月和3个月时DMSO组脂肪细胞活性优于A组和B组(P学意义(P>0.05),移植1~3个月后各组脂肪组织出现不同程度局部坏死伴炎症反应,Perilipin阳性率各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:使用新型冻存液冻存脂肪组织的效果与传统冻存液相比未见显著差异,且避免了使用DMSO或FBS作为冻存剂对人体潜在的不良作用,理论上更加安全。

关键词：脂肪组织冷冻保护剂二甲基亚砜胎牛血清右旋糖苷

天麻素经PI3K/AKT通路改善新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后小胶质细胞介导的炎症反应

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南方医科大学学报 2024年第9期44卷 1712-1719页

作者：左涵珺段兆达王朝郭涛石金沙石浩龙李娟娟昆明医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系云南昆明650500

目的探讨天麻素通过PI3K/AKT信号通路对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后活化小胶质细胞介导的炎症反应的作用机制。方法将39只3日龄新生SD大鼠随机分为假手术组(sham,n=9)、缺氧缺血模型组(HIBD,n=15)、天麻素处理组(HIBD+G,n=15)。采... 详细信息

目的探讨天麻素通过PI3K/AKT信号通路对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后活化小胶质细胞介导的炎症反应的作用机制。方法将39只3日龄新生SD大鼠随机分为假手术组(sham,n=9)、缺氧缺血模型组(HIBD,n=15)、天麻素处理组(HIBD+G,n=15)。采用Western blotting检测HIBD后TNF-α、IL-1β、IL-10和TGF-β1蛋白的表达;网络药理学筛选天麻素治疗HIBD的潜在作用靶点;Western blotting检测HIBD和氧糖剥夺(OGD)诱导活化的小胶质细胞中PI3K/AKT信号通路的表达;CCK8检测PI3K/AKT通路特异性抑制剂LY294002对BV-2小胶质细胞的细胞毒性作用;RT-qPCR检测LY294002干预后天麻素对TNF-α和TGF-β1的mRNA水平的影响。结果Western blotting显示,与HIBD组相比,天麻素降低缺血侧胼胝体区TNF-α和IL-1β的蛋白表达(P学显示,PI3K/AKT信号通路显著富集,且天麻素与PI3K之间具有较好的结合能力;Western blotting显示,与HIBD组、OGD组相比,天麻素促进PI3K和AKT的磷酸化水平(P<0.05);CCK8结果显示LY294002在0~120μmol/L浓度范围内对BV-2小胶质细胞没有细胞毒性作用;RT-qPCR结果显示,与对照组相比,OGD组TNF-α的mRNA水平升高,TGF-β1的mRNA水平降低(P<0.05);天麻素干预后降低TNF-α的mRNA水平,升高TGF-β1的mRNA水平(P<0.05);LY294002处理后TNF-α的mRNA水平进一步升高,TGF-β1的mRNA水平进一步降低(P<0.05);而LY294002与天麻素联合用药后TNF-α和TGF-β1的mRNA水平无明显变化。结论天麻素能抑制HIBD后活化小胶质细胞介导的炎症反应,其作用机制与PI3K/AKT信号通路有关。

关键词：缺氧缺血性脑损伤天麻素炎症反应氧糖剥夺小胶质细胞 PI3K/AKT

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天麻素通过调节CCR5/AKT信号传导缓解新生小鼠缺血缺氧后小胶质细胞介导的炎症反应

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南方医科大学学报 2024年第10期44卷 1850-1857页

作者：石金沙张皓南张幸霖石浩龙左涵珺郭涛王朝余航李娟娟昆明医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系云南昆明650500

目的研究天麻素(GAS)通过CCR5/AKT信号对新生小鼠缺血缺氧(HIBD)后小胶质细胞介导炎症反应的影响。方法选用36只10 d龄的C57BL/6J小鼠,随机分为假手术组(Sham)、缺血缺氧模型组(HIBD)、缺血缺氧+天麻素治疗组(HIBD+GAS),12只/组。模型... 详细信息

目的研究天麻素(GAS)通过CCR5/AKT信号对新生小鼠缺血缺氧(HIBD)后小胶质细胞介导炎症反应的影响。方法选用36只10 d龄的C57BL/6J小鼠,随机分为假手术组(Sham)、缺血缺氧模型组(HIBD)、缺血缺氧+天麻素治疗组(HIBD+GAS),12只/组。模型组和治疗组均行左颈总动脉分离并结扎,1 h后置于缺氧环境中40 min后放回母笼,治疗组在术前1 h、缺氧后2 h及缺氧后12 h腹腔注射剂量为100 mg/kg的GAS。体外培养BV2小胶质细胞验证天麻素对CCR5/AKT及炎症因子TNF-α、IL-1β的影响,将其分为:对照组(Control)、氧糖剥夺组(OGD)、OGD+GAS处理组(OGD+GAS)、GAS处理组(GAS);为进一步验证CCR5拮抗剂Maraviroc(M)的作用以及其与GAS联合干预的作用,将细胞分为:Control组、(OGD)组、M组、OGD+M组、OGD+M+GAS组。Control组用高糖培养基正常培养,含GAS组用GAS 0.34μmol/L处理1 h,含M组用Maraviroc 10μmol/L处理1 h,最后将含OGD组均更换为无糖培养基并置于缺氧小室2 h以构建OGD模型。通过Western blotting检测CCR5、AKT、p-AKT、TNF-α、IL-1β的蛋白表达,免疫荧光双标染色检测新生小鼠胼胝体CCR5以及BV2小胶质细胞中CCR5和p-AKT的表达变化。结果与Sham组相比,HIBD组中CCR5、TNF-α表达显著增加,p-AKT表达显著减低(P学意义。结论GAS可能通过靶向CCR5激活AKT的磷酸化表达水平,抑制炎症因子的表达,发挥神经保护作用。

关键词：天麻素缺血缺氧性脑损伤氧糖剥夺小胶质细胞 CCR5/AKT

天麻素通过调节CCR5/AKT信号传导缓解新生小鼠缺血缺氧后小胶质细胞介导的炎症反应

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南方医科大学学报 2024年

作者：石金沙张皓南张幸霖石浩龙左涵珺郭涛王朝余航李娟娟昆明医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系

目的研究天麻素（GAS）通过CCR5/AKT信号对新生小鼠缺血缺氧（HIBD）后小胶质细胞介导炎症反应的影响。方法选用36只10 d龄的C57BL/6J小鼠，随机分为假手术组（Sham）、缺血缺氧模型组（HIBD）、缺血缺氧+天麻素治疗组（HIBD+GAS）,12... 详细信息

目的研究天麻素（GAS）通过CCR5/AKT信号对新生小鼠缺血缺氧（HIBD）后小胶质细胞介导炎症反应的影响。方法选用36只10 d龄的C57BL/6J小鼠，随机分为假手术组（Sham）、缺血缺氧模型组（HIBD）、缺血缺氧+天麻素治疗组（HIBD+GAS）,12只/组。模型组和治疗组均行左颈总动脉分离并结扎，1 h后置于缺氧环境中40 min后放回母笼，治疗组在术前1 h、缺氧后2 h及缺氧后12 h腹腔注射剂量为100 mg/kg的GAS。体外培养BV2小胶质细胞验证天麻素对CCR5/AKT及炎症因子TNF-α、IL-1β的影响，将其分为：对照组（Control）、氧糖剥夺组（OGD）、OGD+GAS处理组（OGD+GAS）、GAS处理组（GAS）；为进一步验证CCR5拮抗剂Maraviroc(M)的作用以及其与GAS联合干预的作用，将细胞分为：Control组、（OGD）组、M组、OGD+M组、OGD+M+GAS组。Control组用高糖培养基正常培养，含GAS组用GAS0.34μmol/L处理1h，含M组用Maraviroc 10μmol/L处理1 h，最后将含OGD组均更换为无糖培养基并置于缺氧小室2 h以构建OGD模型。通过Western blotting检测CCR5、AKT、p-AKT、TNF-α、IL-1β的蛋白表达，免疫荧光双标染色检测新生小鼠胼胝体CCR5以及BV2小胶质细胞中CCR5和p-AKT的表达变化。结果与Sham组相比，HIBD组中CCR5、TNF-α表达显著增加，p-AKT表达显著减低（P学意义。结论 GAS可能通过靶向CCR5激活AKT的磷酸化表达水平，抑制炎症因子的表达，发挥神经保护作用。

关键词：天麻素缺血缺氧性脑损伤氧糖剥夺小胶质细胞 CCR5/AKT