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miR-1246靶向StarD13对乳腺癌细胞影响的研究

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中华肿瘤防治杂志 2024年第9期31卷 521-527页

作者：董杰李可欣董浩王雪洁段万理张宝刚山东第二医科大学基础医学院临床病理系山东潍坊261053

目的探讨miR-1246促进乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的分子机制.方法生物信息学分析miR-1246的表达及其与乳腺癌患者生存率的关系.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-RCR)评估miR-1246在乳腺癌细胞和乳腺癌组织中的表达,Transwell小室检... 详细信息

目的探讨miR-1246促进乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力的分子机制.方法生物信息学分析miR-1246的表达及其与乳腺癌患者生存率的关系.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-RCR)评估miR-1246在乳腺癌细胞和乳腺癌组织中的表达,Transwell小室检测细胞侵袭能力,EdU实验和克隆实验检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,生物信息学方法确定miR-1246的靶蛋白StarD13在乳腺癌中表达情况及生存率曲线,双荧光素酶报告基因检测miR-1246与StarD13的关系,蛋白质印迹法实验检测下调miR-1246后相关靶蛋白StarD13的表达情况.采用独立样本t检验分析两组之间的定量数据,采用单一因素方差分析进行多组之间的比较.结果miR-1246在乳腺癌组织和乳腺癌细胞MDA-MB-231中均高表达.Transwell实验结果显示,下调miR-1246后miR-1246 inhibitor组细胞较NC inhibitor组细胞侵袭能力降低,t=9.14,P<***实验结果显示,下调miR-1246后细胞增殖能力下降,t=6.81,P<0.01.克隆形成实验表明,下调miR-1246后细胞的增殖能力下降,t=5.41,P<0.01.划痕实验结果显示,miR-1246 inhibitor和NC inhibitor组的细胞迁移率分别为(0.21±0.02)%和(0.50±0.04)%,差异具有统计学意义,t=13.13,P<0.01.生物信息学预测miR-1246与StarD13之间存在互补序列;StarD13在乳腺癌组织中低表达,且低表达StarD13的乳腺癌患者预后较差,P<0.01.转染miR-1246抑制物时StarD13的表达量增加.双荧光素酶报告基因实验证实StarD13可作为miR-1246的靶基因.EdU实验结果显示,miR-1246 inhibitor+siStarD13组细胞[(55.89±1.95)%]比miR-1246 in-hibitor+NC组细胞[(25.24±6.17)%]EdU阳性率有提高,差异有统计学意义,t=8.21,P<***实验表明,与miR-1246 inhibitor+NC组(127.67±23.46)比较,miR-1246 inhibitor+siStarD13组(385.67±11.59)穿过基底膜细胞数量明显增多,差异具有统计学意义,t=17.08,P<0.001.结论miR-1246可通过靶向调控StarD13促进乳腺癌细胞增殖、迁移与侵袭能力.

关键词： miR-1246 StarD13 乳腺癌肿瘤侵袭增殖迁移

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MCM5在卵巢癌中的作用及机制分析

临床与实验病理学杂志 2024年第3期40卷 291-298页

作者：陈冬张明薇孙菲菲李丽山东省德州市妇女儿童医院病理科德州253000 山东大学基础医学院病理学系济南250012 山东大学齐鲁医院病理科济南250012

目的探讨MCM5在卵巢癌中的表达、作用机制和临床意义。方法利用GEO、TCGA等数据库分析MCM5 mRNA在卵巢癌中的表达与预后关系;采用免疫组化SP两步法染色分析卵巢癌中MCM5的表达;应用CCK-8法、EDU、平板克隆、Transwell小室和流式细胞术检... 详细信息

目的探讨MCM5在卵巢癌中的表达、作用机制和临床意义。方法利用GEO、TCGA等数据库分析MCM5 mRNA在卵巢癌中的表达与预后关系;采用免疫组化SP两步法染色分析卵巢癌中MCM5的表达;应用CCK-8法、EDU、平板克隆、Transwell小室和流式细胞术检测MCM5对细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的影响。结果生物信息学分析发现MCM5在卵巢癌中mRNA水平明显升高,且高表达者无进展生存期短(P<0.01)。免疫表型:MCM5在输卵管上皮中不表达(0/6),在卵巢癌中阳性率为48.3%(57/118),MCM5在卵巢癌中的表达显著高于输卵管上皮,在高级别浆液性癌中呈弥漫强表达,MCM5^(+)与ER-、Ki67增殖指数高相关。敲低MCM5的表达,抑制卵巢癌细胞增殖(P<0.05)、克隆形成(P<0.05)、侵袭和迁移(P<0.05),促进凋亡。结论MCM5在卵巢癌细胞和组织中表达升高,与预后不良相关,有望成为治疗卵巢癌的新靶标。

关键词：卵巢肿瘤高级别浆液性癌 MCM5 侵袭迁移

基于HMGB1-TLR2/TLR4-NF-κB通路探索氧化苦参碱对小鼠微小隐孢子虫感染的影响

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中国血吸虫病防治杂志 2024年第3期36卷 286-293页

作者：史洁汲蕊管志玉张晓宁逯一龙山东第二医科大学基础医学院山东潍坊261053 山东省第二医科大学中医学院山东潍坊261053

目的探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility group box protein B1,HMGB1)-Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)/TLR4-核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)通路在微小隐孢子虫感染致肠黏膜损伤中的作用,以及氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对小鼠微小隐孢子虫感染的干预作用。方法 4周龄SPF级BALB/c小鼠40只随机分成4组,分别为对照组、感染组、甘草酸(glycyrrhizin,GA)组及OMT组。感染组、GA组及OMT组小鼠给予地塞米松免疫抑制1周后,每只灌胃1×10^(5)个微小隐孢子虫卵囊建立微小隐孢子虫肠道感染小鼠模型。模型建立成功后,GA组小鼠连续2周腹腔注射GA 25.9 mL/(kg·d),OMT组连续2周经口灌胃OMT 50 mg/(kg·d);对照组正常饮食、饮水。治疗2周后剖杀各组小鼠,取空肠近端组织。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察小鼠肠黏膜病理变化,测量肠绒毛高度、肠隐窝深度及两者比值;采用免疫组织化学染色检测小鼠肠上皮细胞中闭合蛋白(occludin)和紧密粘连蛋白1(zonula occludens protein 1,ZO1)表达水平,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测小鼠空肠组织中HMGB1、TLR2、TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response gene 88,MyD88)、NF-κB p65 mRNA相对表达量。结果 HE染色结果显示,与对照组比较,感染组小鼠肠绒毛明显萎缩变短、脱落,黏膜下层水肿;GA组和OMT组小鼠肠绒毛结构趋于完整,排列趋于整齐。各组小鼠肠绒毛高度(F=6.207,P=0.000 5)、肠隐窝深度(F=6.903,P=0.000 3)及两者比值(F=37.190,P 0.05);OMT组小鼠肠隐窝深度[(121.5±27.3)μm]显著低于感染组[(185.0±35.9)μm](t=4.133,P 0.05)。感染组小鼠肠绒毛高度与肠隐窝深度比值[(1.8±0.2)]显著低于对照组[(3.1±0.3)](t=10.540,P 0.05)。免疫组织化学染色结果显示,各组小鼠肠上皮细胞中occludin(F=28.031,P 0.05)。感染组小鼠肠上皮细胞中ZO1阳性表达率[(14.4±1.8)%]显著低于对照组[(24.2±2.8)%](t=4.485,P 0.05)。qPCR检测结果显

关键词：微小隐孢子虫高迁移率族蛋白B1 Toll样受体核因子κB 氧化苦参碱甘草酸肠黏膜屏障小鼠

着丝粒蛋白H在肾上腺皮质癌的表达及对肾上腺皮质癌细胞活力和迁移的影响

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中国病理生理杂志 2024年第3期40卷 404-410页

作者：邹存茹王丹张玉刘呈悦蒋荷坪何文玺张鑫源苏文霞山东第二医科大学基础医学院山东潍坊261053 山东第二医科大学附属医院病理科山东潍坊261031 山东第二医科大学临床医学院山东潍坊261053

目的:研究着丝粒蛋白H(CENP-H)在肾上腺皮质癌(ACC)的表达,分析其与疾病进展和预后的关系;探索敲减CENP-H表达对ACC细胞活力和迁移的影响。方法:应用GEPIA2数据库分析CENP-H在76例ACC患者和128例健康对照中的mRNA表达,并分析其在不同肿... 详细信息

目的:研究着丝粒蛋白H(CENP-H)在肾上腺皮质癌(ACC)的表达,分析其与疾病进展和预后的关系;探索敲减CENP-H表达对ACC细胞活力和迁移的影响。方法:应用GEPIA2数据库分析CENP-H在76例ACC患者和128例健康对照中的mRNA表达,并分析其在不同肿瘤分期的表达及与预后的相关性;运用UALCAN数据库进一步分析CENP-H在ACC不同肿瘤分期的mRNA表达及与预后的相关性;采用免疫组织化学染色检测CENP-H蛋白在ACC和正常肾上腺石蜡切片的表达。构建敲减CENP-H表达的siRNA(siCENP-H),将人ACC细胞系H295R分为siCENP-H组和siNC组;CCK-8实验检测细胞活力的变化,划痕实验检测细胞迁移能力的变化,Western blot实验检测CENP-H、p-ERK1/2、t-ERK1/2、p-P38、t-P38、p-JNK1/2和t-JNK1/2蛋白水平。结果:CENP-H在ACC中表达较健康对照显著升高,且与肿瘤分期和预后显著相关;CENP-H蛋白在ACC组织中的表达水平显著高于正常肾上腺;敲减CENP-H后,H295R细胞活力和迁移能力较对照组显著降低,p-P38和p-JNK1/2蛋白水平显著降低,以p-JNK1/2的降低尤为显著。结论:CENP-H在ACC中高表达;敲减CENP-H表达能抑制ACC细胞活力和迁移,其机制可能与抑制P38和JNK信号通路的活化有关。

关键词：肾上腺皮质癌着丝粒蛋白H 细胞活力细胞迁移 MAPK信号通路

糖尿病肝脏病变中GLUTs和SIRTs表达水平的研究

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中国病理生理杂志 2024年第2期40卷 326-334页

作者：郭玉白文帆田亚平罗飞扬贾淑元罗明秀姚青宁夏医科大学基础医学院宁夏银川750004

目的:研究糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠肝脏组织及高糖培养下的人肝细胞系LO2中葡萄糖转运体(glucose transporters,GLUTs)和沉默信息调节因子(silent information regulators,SIRTs/sirtuins)的表达情况。方法:(1)选取雄性SD大鼠20只,随机分为正常对照(normal control,NC)组和DM组。DM组大鼠禁食12 h后给予一次性腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ;60 mg/kg)建立DM模型;NC组大鼠一次性腹腔注射等体积的柠檬酸缓冲液。每2周用血糖测试仪检测大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)和体质量。饲养12周后,1%戊巴比妥钠麻醉大鼠,取材,检测相关血液生化指标;计算肝脏指数;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和过碘酸-席夫(periodic acid-Schiff,PAS)染色观察肝组织病理形态学变化;油红O染色检测肝组织脂质积聚情况;Western blot检测大鼠肝脏组织中GLUTs和SIRTs蛋白表达水平。(2)将LO2细胞在不同葡萄糖浓度中培养48 h后,用光镜观察LO2细胞形态;CCK-8法检测各组细胞活力;Western blot检测高浓度葡萄糖下细胞中GLUTs和SIRTs蛋白表达情况。结果:(1)与NC组相比,DM组大鼠精神萎靡,体质量明显下降,FBG显著升高,肝脏指数显著增加;HE染色显示,DM大鼠肝组织近中央静脉和血窦扩张充血,肝细胞轻度水肿,少量炎症细胞散在浸润;油红O染色显示,DM大鼠肝细胞内弥漫分散红色脂肪小滴;PAS染色显示,DM组大鼠中央静脉区肝细胞内有多量浅紫色圆形小滴弥漫分布于细胞浆内;Western blot结果显示,DM组GLUTs蛋白表达高于NC组,SIRTs蛋白表达低于NC组(P0.05),150、175和200 mmol/L葡萄糖组细胞活力显著减弱(均P系LO2的活力,而且能够使大鼠肝脏组织和LO2细胞中GLUTs表达升高,SIRTs表达降低。因此,GLUTs和SIRTs家族成员有可能是糖尿病肝损伤的靶蛋白。

关键词：糖尿病肝损伤葡萄糖转运体沉默信息调节因子

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saRNA激活ABCG2表达增强肾和肠细胞排泄尿酸的研究

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中国药学杂志 2024年第8期59卷 713-723页

作者：贾少平葛科立杨柳张志霞张金玉葛银林青岛大学基础医学院生物化学与分子生物学系山东青岛266071 青岛大学基础医学院免疫学系山东青岛266011 山东商业职业技术学院济南250103

目的筛选、研究小激活RNA(small activating RNA,saRNA)增强ABCG2基因表达对肾、肠细胞排泄尿酸(uric acid,UA)的影响,探索促进UA排泄的全新一类治疗机制药物。方法设计靶向小鼠和人ABCG2基因的saRNA,转染小鼠肾小管上皮细胞(TCMK-1)和... 详细信息

目的筛选、研究小激活RNA(small activating RNA,saRNA)增强ABCG2基因表达对肾、肠细胞排泄尿酸(uric acid,UA)的影响,探索促进UA排泄的全新一类治疗机制药物。方法设计靶向小鼠和人ABCG2基因的saRNA,转染小鼠肾小管上皮细胞(TCMK-1)和人肾小管上皮细胞(HK-2)细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western Blot筛选强激活效果的saRNA;检测强激活saRNA增强TCMK-1和HK-2细胞排泄UA的作用。筛选的saRNA通过尾静脉注射高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)模型小鼠,检测血尿酸(serum uric acid,SUA)、尿尿酸(urine uric acid,UUA)、肠道UA、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和血清肌酐(serum creatinine,SCr)含量,以及肝脏黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)活性,验证所选saRNA促进UA排泄的作用。苏木精-伊红染色法(H&E)染色观察小鼠肾脏和小肠病理改变。RT-qPCR,Western blot和免疫组化分析肾脏和小肠ABCG2基因表达水平。结果筛选到小鼠和人ABCG2 saRNA各2条,分别命名为saRNA-1/2和hsaRNA-1/2,能够提高TCMK-1和HK-2细胞ABCG2基因的表达(P0.05)。结论所筛选的saRNA能够提高ABCG2基因的表达,并促进细胞内和小鼠体内UA的排泄,降低SUA水平。

关键词：高尿酸血症尿酸小激活RNA ABCG2 基因表达

肿瘤相关巨噬细胞对有氧糖酵解调控机制的研究进展

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国际免疫学杂志 2024年第1期47卷 99-104页

作者：章佳隆刘颖复旦大学基础医学院病理系上海200032

近年来有氧糖酵解和肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)在肿瘤微环境中的密切关系逐渐受到人们关注。TAMs不仅能够降低自身的糖酵解水平间接助长有氧糖酵解,还能通过特定的细胞因子和非编码RNA调控有氧糖酵解。这些... 详细信息

近年来有氧糖酵解和肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)在肿瘤微环境中的密切关系逐渐受到人们关注。TAMs不仅能够降低自身的糖酵解水平间接助长有氧糖酵解,还能通过特定的细胞因子和非编码RNA调控有氧糖酵解。这些机制是TAMs促进肿瘤生长、转移和抵抗化疗的重要因素,并且有望提供抗肿瘤治疗的新靶点。文章综述了TAMs调控有氧糖酵解机制,TAMs和有氧糖酵解对免疫逃逸的影响及与之相关的治疗策略。

关键词：有氧糖酵解肿瘤相关巨噬细胞免疫逃逸抗肿瘤治疗

YBX3通过调节UCP1的表达调控棕色脂肪产热和能量消耗

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山东大学学报（医学版） 2024年第6期62卷 38-47页

作者：王文琴高贤龙巩永凤冯科滨州医学院基础医学院生理教研室山东烟台264003

目的探讨棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)中Y盒蛋白3(Y-box binding protein 3,YBX3)水平对小鼠产热和能量消耗的影响作用机制。方法将小鼠置于4℃环境作为冷刺激方法。用慢病毒侵染法构建过表达YBX3或者抑制YBX3表达的人血管... 详细信息

目的探讨棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)中Y盒蛋白3(Y-box binding protein 3,YBX3)水平对小鼠产热和能量消耗的影响作用机制。方法将小鼠置于4℃环境作为冷刺激方法。用慢病毒侵染法构建过表达YBX3或者抑制YBX3表达的人血管基质组分细胞系。测量细胞的耗氧率用于评估细胞的线粒体功能。向小鼠BAT注射YBX3的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)构建抑制小鼠BAT中YBX3表达的模型。检测小鼠的O_(2)消耗速率、CO_(2)释放速率和能量消耗速率用于评估小鼠能量代谢情况。采用qRT-PCR、Western blotting、免疫荧光染色法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1α,PGC-1α)、解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)和YBX3基因的表达。采用苏木精-伊红法染色检测BAT中脂肪细胞脂滴大小。采用RNA结合蛋白免疫沉淀提取与YBX3特异性结合的mRNA。采用二代测序方法鉴定mRNA。采用双荧光素酶报告基因系统检测YBX3与目的序列结合的情况。结果在寒冷刺激下野生型小鼠BAT中YBX3的表达显著增加(P系诱导为成熟棕色脂肪细胞后可以促进产热基因PGC-1α和UCP1的表达(P系诱导为成熟棕色脂肪细胞后可以抑制PGC-1α和UCP1的表达(P<0.05)、抑制线粒体氧化磷酸化(P<0.05)。与对照组相比,小鼠注射si-Ybx3之后能量消耗显著降低(P<0.05),在寒冷环境难以维持体温(P<0.05),产热基因表达被显著抑制(P<0.01),BAT中脂肪细胞脂滴大小显著增加(P<0.05)。与在25℃相比,4℃环境刺激下BAT中YBX3在细胞核中的表达显著增加(P<0.05)。YBX3能够特异性地与PGC-1αmRNA 3′非翻译区特定位点相结合(P<0.05)。YBX3能够特异性地与PGC-1α和UCP1启动子区域相结合(P<0.05)。结论BAT中YBX3能够通过调控PGC-1α和UCP1的表达影响产热和能量代谢。

关键词： Y-盒蛋白3 产热能量消耗棕色脂肪组织解偶联蛋白1

基于肠道菌群维生素K2调控肝脏胰岛素抵抗作用机制

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中国微生态学杂志 2024年第10期 1117-1122页

作者：宋婷李佳张茜苏向妮空军军医大学基础医学院空军军医大学护理系

目的探讨维生素K2（VK2）改善小鼠肝脏胰岛素抵抗（IR）的作用是否与肠道菌群有关。方法将50只4～5周龄、体重14～15 g的C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常饮食组（n=10）和高脂饮食（HFD）组（n=40），采用HFD持续喂养16周诱导肥胖建立I... 详细信息

目的探讨维生素K2（VK2）改善小鼠肝脏胰岛素抵抗（IR）的作用是否与肠道菌群有关。方法将50只4～5周龄、体重14～15 g的C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常饮食组（n=10）和高脂饮食（HFD）组（n=40），采用HFD持续喂养16周诱导肥胖建立IR模型，模型建立成功后给予VK2进行干预，干预结束后检测小鼠空腹血糖耐量（IPGTT）、胰岛素耐量（ITT）及空腹胰岛素（FINS）和血糖（FBG）水平等指标，采用16S r RNA基因测序检测各组小鼠粪便肠道微生物；为进一步明确VK2与肠道菌群的作用，采用抗生素鸡尾酒法持续14 d喂养HFD诱导肥胖小鼠，清扫肠道菌群模拟无菌小鼠，运用菌群移植实验（FMT）将VK2处理组小鼠粪便混悬液通过灌胃移植入无菌HFD小鼠体内，持续灌胃14 d，结束后检测各组小鼠IR相关指标，肝、肠组织进行油红O染色和HE染色，观察其病理形态。结果 ANOVA方差分析显示，与正常饮食组比较HFD组小鼠IPGTT、ITT曲线下面积以及FBG、FINS水平均显著增加，VK2干预后小鼠IPGTT、ITT曲线下面积以及FBG、FINS水平均显著降低（均P病理检测结果也显示VK2干预组和Atb+FTM组小鼠肝脏脂滴减少、肠黏膜形态紊乱改善，炎症因子水平显著降低（均P<0.05）。结论 VK2具有改善肥胖小鼠IR作用，该作用与其改善肥胖小鼠肠道菌群紊乱，减轻肠道通透性和炎症因子有关。

关键词：维生素K2 胰岛素抵抗肠道菌群双歧杆菌