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转录因子激活蛋白2C对小鼠磨牙胚发育的影响

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中华口腔医学杂志 2024年第7期59卷 706-714页

作者：刘力维韩雪朱辙文王佐林同济大学口腔医学院·附属口腔医院口腔种植科、上海牙组织修复与再生工程技术研究中心上海200072 同济大学口腔医学院·附属口腔医院儿童口腔科、上海牙组织修复与再生工程技术研究中心上海200072

目的探究转录因子激活蛋白2家族的成员转录因子激活蛋白2C(TFAP2C)在小鼠磨牙胚发育过程中的表达及其影响。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析胚胎14.5(E14.5)天小鼠胚胎各器官及E12.5~E18.5天和出生后0~7(P0~P7)天的小鼠磨牙胚内Tfap2... 详细信息

目的探究转录因子激活蛋白2家族的成员转录因子激活蛋白2C(TFAP2C)在小鼠磨牙胚发育过程中的表达及其影响。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析胚胎14.5(E14.5)天小鼠胚胎各器官及E12.5~E18.5天和出生后0~7(P0~P7)天的小鼠磨牙胚内Tfap2c的相对表达水平,冰冻切片免疫荧光染色显示Tfap2c在小鼠磨牙胚内的表达位置。采用牙胚体外培养的方法,探究敲降Tfap2c对小鼠磨牙胚发育的影响,RT-qPCR检测成牙本质细胞表达相关基因的相对表达水平。分离并提取小鼠牙胚间充质细胞进行培养,探究敲降Tfap2c对小鼠牙胚间充质细胞的影响,划痕愈合实验检测细胞迁移,细胞计数(CCK-8)法检测细胞增殖。结果Tfap2c基因在小鼠磨牙胚发育早期相对表达水平较高。E13.5天,Tfap2c在小鼠磨牙胚上皮组织与间充质组织内均有表达,二者的相对表达水平差异无统计学意义(t=1.06,P=0.472)。E14.5天,Tfap2c在小鼠磨牙胚初级釉结附近的间充质组织内表达,小鼠磨牙胚间充质组织内Tfap2c的相对表达水平(1.000±0.036)显著高于上皮组织(0.199±0.008)(t=37.29,P实验显示,对照组细胞48 h划痕宽度显著小于敲降组(t=29.86,P=0.001);CCK-8法检测显示两组细胞间各时间点吸光度值的差异均无统计学意义(P>0.05);Tfap2c敲降组牙胚间充质细胞内成牙本质细胞表达相关基因Dspp和Dmp1相对表达水平显著低于对照组(t=3.86,P=0.031;t=4.36,P=0.022)。结论Tfap2c在小鼠磨牙胚发育早期表达,主要表达于小鼠磨牙胚间充质组织内,敲降Tfap2c影响小鼠磨牙胚牙尖形成,影响牙胚间充质细胞迁移。

关键词：转录因子牙发育转录因子激活蛋白2C 器官培养成牙本质细胞分化

牙周炎症环境中内皮细胞焦亡现象的体内外研究初探

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中华口腔医学杂志 2024年第5期59卷 486-495页

作者：李蕊王晓雨叶庆元王垭铮张曦戈葛晓彤王勤涛第四军医大学口腔医院牙周病科、口颌系统重建与再生全国重点实验室、国家口腔疾病临床医学研究中心、陕西省口腔疾病国际联合研究中心西安710032 第四军医大学口腔医院数字化口腔医学中心口颌系统重建与再生全国重点实验室国家口腔疾病临床医学研究中心陕西省口腔医学重点实验室西安710032

目的通过体内外模型观察牙周炎局部组织内皮细胞在炎症环境下是否发生焦亡,为探究牙周炎发病机制提供实验依据。方法根据牙周病2018年新分类标准收集无全身疾病、牙周健康者及Ⅲ~Ⅳ期C级牙周炎患者的牙龈组织,免疫组化染色检测牙龈组织... 详细信息

目的通过体内外模型观察牙周炎局部组织内皮细胞在炎症环境下是否发生焦亡,为探究牙周炎发病机制提供实验依据。方法根据牙周病2018年新分类标准收集无全身疾病、牙周健康者及Ⅲ~Ⅳ期C级牙周炎患者的牙龈组织,免疫组化染色检测牙龈组织中焦亡标志性蛋白消皮素D(GSDMD)的表达水平及分布情况;每组通过结扎3只小鼠上颌第二磨牙2周建立牙周炎模型(结扎组),使用显微CT(micro-CT)检测小鼠牙槽骨吸收情况(以不做结扎处理的小鼠作为对照组);使用免疫荧光染色对健康及炎症小鼠牙龈组织中血管内皮细胞血小板内皮细胞黏附分子(CD31)与GSDMD共定位进行定量分析;体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分别以质量浓度为0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mg/L牙龈卟啉单胞菌(Pg)脂多糖(LPS)联合腺苷三磷酸(ATP)处理HUVECs,同期设置0 mg/L Pg-LPS组为对照组。使用扫描电镜观察HUVECs形态,蛋白质印迹法检测GSDMD的N端结构域(GSDMD-N)蛋白表达,细胞免疫荧光染色检测GSDMD蛋白表达及分布,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测HUVECs的增殖能力,碘化丙啶(PI)染色检测HUVECs细胞膜的完整性。结果免疫组化结果显示,牙周炎患者牙龈组织中GSDMD主要分布于血管周围,且表达水平较健康组织显著升高;micro-CT结果显示,结扎组小鼠上颌第二磨牙周围牙槽骨吸收较对照组小鼠显著增多(t=8.88,P组织中血管内皮细胞GSDMD与CD31存在明显的共定位;扫描电镜结果显示,在不同浓度Pg-LPS联合ATP模拟的炎症环境中,HUVECs细胞膜上出现不同大小的孔洞,呈现典型的细胞焦亡形态,其中2.5 mg/L Pg-LPS+ATP组细胞膜上孔洞最多且扩张融合,细胞有裂解死亡的趋势。蛋白质印迹法结果显示,2.5和5.0 mg/L Pg-LPS+ATP组焦亡标志性蛋白GSDMD-N表达显著高于对照组(F=3.86,P<0.01);细胞免疫荧光结果显示,2.5 mg/L Pg-LPS+ATP组较对照组GSDMD平均荧光强度升高最显著(F=35.25,P<0.001)。CCK-8结果显示,0.5、1.0、2.5、5.0和10.0 mg/L Pg-LPS+ATP组细胞增殖相对值(分别为0.52±0.07、0.57±0.10、0.58±0.04、0.55±0.04和0.61±0.03)均显著低于对照组(1.00±0.02)(F=39.95,P<0.001)。PI染色结果显示,PI阳性细胞数占比在2.5 mg/L Pg-LPS+ATP组最高[(56.07±3.22)%](F=88.24,P<0.001)。结论牙周炎症环境中内皮细胞发生明显的焦亡现象,提示内皮细胞焦亡可能是造成牙周炎发生的重要致病因素。

关键词：牙周炎内皮细胞细胞焦亡脂多糖腺苷三磷酸

甲氨蝶呤载药囊泡在小鼠实验性牙周炎治疗中的作用研究

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中华口腔医学杂志 2024年第7期59卷 681-689页

作者：杨建花何小宁刘治王文哲李蓓第四军医大学口腔医院口腔组织病理学教研室、口颌系统重建与再生全国重点实验室、国家口腔疾病临床医学研究中心、陕西省口腔疾病国际联合研究中心西安710032 第四军医大学口腔医院口腔正畸科、口颌系统重建与再生全国重点实验室、国家口腔疾病临床医学研究中心、陕西省口腔疾病临床医学研究中心西安710032

目的探究甲氨蝶呤载药囊泡对小鼠实验性牙周炎的治疗作用。方法分离人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)的细胞外囊泡(EVs)。构建甲氨蝶呤(MTX)载药囊泡(MTX-EVs)并通过扫描电镜及动态光散射仪(DLS)对构建的载药囊泡进行形态大小分析,通过蛋白... 详细信息

目的探究甲氨蝶呤载药囊泡对小鼠实验性牙周炎的治疗作用。方法分离人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)的细胞外囊泡(EVs)。构建甲氨蝶呤(MTX)载药囊泡(MTX-EVs)并通过扫描电镜及动态光散射仪(DLS)对构建的载药囊泡进行形态大小分析,通过蛋白质印迹法对其表面特异性蛋白进行鉴定。选取4~5周C57BL/6J雄性小鼠,其中通过盲抓法随机抽取8只不做处理,正常饲养作为对照组(由第四军医大学实验动物中心提供),其余小鼠利用脂多糖(LPS)(2 g/L,5μl)牙周局部注射诱导小鼠牙周炎模型,间隔1天注射1次,诱导2周。将成功诱导牙周炎模型小鼠通过盲抓法随机分为4组,每组8只。分别为LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组。牙周局部治疗2周后,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测牙龈组织炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的质量浓度。通过显微CT(micro-CT)、HE染色评估对照组、LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组小鼠的牙槽骨吸收情况。流式细胞仪分析牙龈组织中γ干扰素(IFN-γ)阳性细胞的占比。结果扫描电镜结果显示EVs和MTX-EVs呈圆形或椭圆形,DLS粒径分析证明EVs粒径在200 nm左右,MTX-EVs粒径在300 nm左右。ELISA结果显示,对照组、LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组IL-1β质量浓度分别为(28.86±2.76)、(51.50±2.04)、(35.26±2.40)、(45.49±2.04)、(35.77±3.49)ng/L;LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组IL-1β质量浓度均显著低于LPS组(均P<0.05);LPS+MTX-EVs组IL-1β质量浓度显著低于LPS+EVs组(P<0.05)。对照组、LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组IL-6质量浓度分别为(125.44±4.12)、(221.64±10.59)、(178.16±16.90)、(181.09±18.22)、(170.15±9.04)ng/L;LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组IL-6质量浓度均显著低于LPS组(均P<0.05);LPS+MTX-EVs组IL-6质量浓度显著低于LPS+EVs组和LPS+MTX组(均P<0.05)。对照组、LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组TNF-α质量浓度分别为(320.27±38.68)、(479.62±40.94)、(342.18±25.89)、(415.88±12.01)、(325.75±30.83)ng/L;LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组TNF-α质量浓度均显著低于LPS组(均P<0.05);LPS+MTX-EVs组TNF-α质量浓度显著低于LPS+EVs组及LPS+MTX组(均P<0.05)。micro-CT扫描结果显示,对照组、LPS组、LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组小鼠右上颌第一磨牙第一牙根处釉质子骨质界到牙槽嵴顶的距离分别为(0.11±0.03)、(0.28±0.02)、(0.23±0.03)、(0.20±0.04)、(0.18±0.03)mm,与LPS组相比,LPS+MTX组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组骨吸收均得到不同程度的抑制,差异均有统计学意义(均P<0.05),其中LPS+MTX-EVs组与LPS+MTX组及LPS+EVs组相比,骨吸收抑制效果最好,且差异均有统计学意义(均P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,LPS组、LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组IFNγ阳性细胞占比分别为(11.77±1.02)%、(6.87±0.65)%及(4.15±0.92)%,LPS+EVs组及LPS+MTX-EVs组中IFN-γ阳性细胞占比均显著低于LPS组(均P<0.05),LPS+MTX-EVs组中IFN-γ阳性细胞占比显著低于LPS+EVs组(P<0.05)。结论MTX-EVs可有效改善牙周炎模型小鼠牙周局部炎症环境,减少小鼠牙槽骨骨吸收。

关键词：牙周炎细胞外囊泡甲氨蝶呤载药囊泡牙槽骨质丢失促炎因子

牙源性间充质干细胞外泌体在牙髓再生中的作用机制

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国际口腔医学杂志 2024年第4期51卷 467-474页

作者：陆慧郑烨新赵玮中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院儿童口腔科、广东省口腔医学重点实验室广州510055

牙髓再生是一种基于组织工程治疗牙髓坏死的新策略,应用种子细胞结合支架和生长因子,实现牙本质、血管和神经的新生。外泌体是一类直径约为30~150 nm的细胞外囊泡,在调控细胞间信息和物质传递中发挥重要作用。2016年以来,牙源性间充质... 详细信息

牙髓再生是一种基于组织工程治疗牙髓坏死的新策略,应用种子细胞结合支架和生长因子,实现牙本质、血管和神经的新生。外泌体是一类直径约为30~150 nm的细胞外囊泡,在调控细胞间信息和物质传递中发挥重要作用。2016年以来,牙源性间充质干细胞分泌的外泌体因其在牙髓组织再生领域展现出的巨大潜力而备受瞩目。本文介绍了牙源性间充质干细胞来源外泌体的种类和培养环境,并对牙源性间充质干细胞外泌体调控细胞成牙本质向分化、血管生成、神经再生和成骨向分化的作用和机制作一综述。

关键词：外泌体牙髓再生牙源性间充质干细胞

树突状细胞肝激酶B1信号对FimH黏膜佐剂效应的影响

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口腔医学研究 2024年第5期40卷 393-400页

作者：刘馨远林玉红陈君兰黄冰冰李宇红口颌系统重建与再生全国重点实验室口腔生物医学教育部重点实验室口腔医学湖北省重点实验室武汉大学口腔医(学)院湖北武汉430079 烟台市口腔医院牙体牙髓科山东烟台264000

目的:探究口腔黏膜树突状细胞(dendritic cells,DCs)肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)表达对于应用黏膜疫苗佐剂反应的影响。方法:使用CD11^(ccre-GFP);LKB1^(fl/fl)条件性敲除(conditional knockout,cKO)小鼠,同窝LKB1 fl/fl小鼠作为野生型(wild type,WT)对照组。首先选6~8周龄cKO与WT小鼠各12只,流式细胞术分选小鼠口腔黏膜DCs,进行转录组高通量测序;其次使用cKO与WT小鼠各16只,建立小鼠黏膜免疫模型,在第0、2和4周用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)模式抗原颊黏膜下注射免疫(cKO-OVA,WT-OVA),鼠伤寒沙门氏菌来源的FimH(***,FimH-ST)佐剂联合OVA模式抗原颊黏膜下注射免疫(cKO-OVA+FimH-ST,WT-OVA+FimH-ST)。在接种后第3周收集小鼠血清和唾液,通过免疫酶联吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中OVA特异性IgG1和IgG2b、唾液中OVA特异性IgA抗体水平;在接种后第6周,使用流式细胞术检测小鼠颊黏膜和包括下颌下、颈部淋巴结的口腔引流淋巴结(draining lymph node,dLN)中各免疫细胞数目和比例。结果:cKO组口腔黏膜DCs的上调基因在基因本体论(gene ontology,GO)数据库富集到先天免疫反应、B细胞介导的免疫反应;基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)中富集到Toll样受体信号通路和mTOR信号通路。WT-OVA+FimH-ST组相对WT-OVA组血清OVA特异性IgG1和IgG2b、唾液中OVA特异性IgA抗体水平升高;黏膜局部免疫B细胞与浆细胞数目与比例升高。cKO-OVA组血清IgG1和IgG2b、唾液中IgA抗体水平较WT-OVA组升高;dLN中滤泡辅助T细胞(follicular helper T,Tfh)及B细胞比例升高(P口腔黏膜下注射具有佐剂效应;DCs激活口腔黏膜免疫反应依赖LKB1,DCs上LKB1缺陷导致FimH-ST佐剂效应丧失。

关键词： FimH 口腔黏膜免疫树突状细胞肝激酶B1 口腔黏膜疫苗

iRoot SP和AH Plus对牙周炎患牙根管封闭能力比较

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上海口腔医学 2024年第5期33卷 455-460页

作者：鹿敏刘双王雅楠宋爱梅山东大学齐鲁医学院口腔医学院·口腔医院牙周病科山东省口腔组织再生重点实验室口腔生物材料与组织再生山东省工程研究中心山东省口腔疾病临床医学研究中心石嘴山市第三人民医院口腔科

目的：比较i Root SP和AH Plus对牙周炎患牙根管封闭性的差异，探讨牙本质小管在牙周-牙髓交通途径中发挥的重要作用，为牙周-牙髓联合病变患牙根管治疗时机及糊剂选择提供理论依据。方法：选取因重度牙周炎拔除的单根前牙50颗，清创并... 详细信息

目的：比较i Root SP和AH Plus对牙周炎患牙根管封闭性的差异，探讨牙本质小管在牙周-牙髓交通途径中发挥的重要作用，为牙周-牙髓联合病变患牙根管治疗时机及糊剂选择提供理论依据。方法：选取因重度牙周炎拔除的单根前牙50颗，清创并刮除根面牙骨质。分为A、B 2组，每组实验牙21颗，对照牙4颗。根管预备后，分别采用iRoot SP(A组)、AH Plus(B组)加牙胶尖冷侧压根管充填。将牙根均分为冠方段组（A1、B1）、根方段根尖孔未封闭组（A2、B2）和根尖孔封闭组（A3、B3）。根据分组使用铸造蜡封闭冠、根方，侧面不封闭。将样本置于亚甲蓝染液中浸泡14 d后，牙根纵剖成两半，测量染液在各组根管内壁渗入的长度。采用Image Pro Plus软件测量染液在牙本质小管内渗透的面积百分比。利用单因素方差分析及组内LSD方法分析A、B 2组组内及组间差异。采用SPSS 26.0软件包对数据进行统计学分析。结果：A2组渗透长度显著大于A3组（P0.05）。A1组牙本质小管染色面积百分比显著小于A2组（P0.05）。结论：采用i Root SP和AH Plus 2种根充糊剂结合牙胶尖冷侧压根管充填法，对重度牙周炎患牙进行根管治疗，对牙周炎患牙根管封闭性的影响无显著差异。牙本质小管并非牙周-牙髓互相交通的主要途径，根方1/2段的交通途径在牙周牙髓联合病变中发挥更重要作用，提示牙周附着丧失到达根方1/2以上时才可考虑根管治疗。

关键词：牙周炎牙周牙髓联合病变根充糊剂根管微渗漏牙本质小管

关节腔内注射脂肪干细胞对颞下颌关节骨关节炎模型兔关节软骨破坏的修复作用及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2024年第1期50卷 71-78页

作者：何静孙高李男男帕丽孜·阿不力克木吴国民吉林大学口腔医院口腔颌面外一科与口腔整形美容外科吉林长春130021 吉林大学口腔医院吉林省牙发育及颌骨重塑与再生重点实验室吉林长春130021

目的:探讨关节腔内注射脂肪干细胞(ADSCs)对颞下颌关节骨关节炎(TMJOA)模型兔关节软骨破坏的修复作用,并阐明其可能的作用机制。方法:27只兔随机分为对照组、模型组和ADSCs组。提取兔ADSCs进行培养,采用碘乙酸钠(MIA)注射法制备兔TMJOA... 详细信息

目的:探讨关节腔内注射脂肪干细胞(ADSCs)对颞下颌关节骨关节炎(TMJOA)模型兔关节软骨破坏的修复作用,并阐明其可能的作用机制。方法:27只兔随机分为对照组、模型组和ADSCs组。提取兔ADSCs进行培养,采用碘乙酸钠(MIA)注射法制备兔TMJOA模型。ADSCs组TMJOA模型兔颞下颌关节腔内连续2次注射1.0×10^(6)mL^(-1)ADSCs,对照组和模型组兔颞下颌关节腔内注射等量生理盐水,8周后取各组兔颞下颌关节行显微CT(Micro-CT)扫描,分析各组兔髁突组织的骨体积分数(BV/TV)、骨表面积/骨体积比(BS/BV)、骨小梁厚度(***)、骨小梁间距(***)和骨小梁数(Tb.N),HE染色观察各组兔髁突组织病理形态表现,免疫组织化学染色法检测各组兔髁突组织中SRY相关高迁移率族盒基因9(SOX9)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)和血管内皮生长因子(VEGF)的定位情况和蛋白表达水平,Western blotting法检测各组兔髁突组织中SOX9、MMP-13和VEGF蛋白表达水平。结果:Micro-CT扫描,与对照组比较,模型组兔髁突组织的BV/TV、***和Tb.N明显降低(P组织的BV/TV、***和Tb.N明显升高(P组织病理损伤明显减轻。免疫组织化学染色,与对照组和ADSCs组比较,模型组兔髁突组织中棕褐色颗粒增多,主要集中在肥大层,特别是骨软骨结合部位,髁突组织中SOX9、MMP-13和VEGF蛋白表达水平明显升高(P组织肥大层和骨软骨结合部位棕褐色颗粒明显减少,髁突组织中SOX9、MMP-13和VEGF蛋白表达水平明显降低(P组织中SOX9、MMP-13和VEGF蛋白表达水平明显升高(P组织中SOX9、MMP-13和VEGF蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:关节腔内注射ADSCs可有效修复TMJOA的软骨破坏,减轻软骨损伤,减缓骨关节炎进展。

关键词：颞下颌关节骨关节炎脂肪干细胞软骨损伤软骨修复

血管生成相关生长因子促进创口愈合的研究进展

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化学与生物工程 2024年第9期41卷 1-6页

作者：王雪珂李效宇李保胜欧燕珍段静旖孟维艳吉林大学口腔医院口腔种植科吉林长春130021 吉林省牙发育及颌骨重塑与再生重点实验室吉林长春130021

在创口愈合过程中,血管生成是组织修复的起始和关键,新生血管可为组织输送所需的氧气、细胞及营养,同时带走代谢废物。在血管生成过程中,相关生长因子起到至关重要的作用。作为优异的输送载体,支架材料在生物递送和组织再生方面具有显... 详细信息

在创口愈合过程中,血管生成是组织修复的起始和关键,新生血管可为组织输送所需的氧气、细胞及营养,同时带走代谢废物。在血管生成过程中,相关生长因子起到至关重要的作用。作为优异的输送载体,支架材料在生物递送和组织再生方面具有显著成效,有望使生长因子成为加速创口愈合的重要治疗靶点。综述了创口愈合中血管生成过程、血管生成相关生长因子的作用及其在组织工程中的应用。

关键词：血管生成生长因子创口愈合组织工程支架

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局限性口面部肉芽肿病联合治疗1例

口腔医学研究 2024年第7期40卷 657-659页

作者：谭雅芹周刚口颌系统重建与再生全国重点实验室口腔生物医学教育部重点实验室口腔医学湖北省重点实验室武汉大学口腔医院口腔黏膜科湖北武汉430079

口面部肉芽肿病(orofacial granulomatosis)是一种少见的以局限于口面部组织持续性肿胀为主要临床表现的特发性肉芽肿性疾病。该病的病因及发病机制尚不明确,目前尚无公认的规范化诊疗方案。本文报道1例唇部、颏部反复肿胀的局限性口面... 详细信息

口面部肉芽肿病(orofacial granulomatosis)是一种少见的以局限于口面部组织持续性肿胀为主要临床表现的特发性肉芽肿性疾病。该病的病因及发病机制尚不明确,目前尚无公认的规范化诊疗方案。本文报道1例唇部、颏部反复肿胀的局限性口面部肉芽肿病,探讨该病的临床特点及诊治过程,为临床诊疗提供参考。

关键词：口面部肉芽肿病唇炎治疗