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Vps28基因敲除小鼠模型的构建及其对泌乳和免疫性状影响的研究

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生物技术通报 2022年第3期38卷 164-172页

作者：丁亚群丁宁谢深民黄梦娜张昱张勤姜力中国农业大学动物科学技术学院畜禽育种国家工程实验室农业农村部动物遗传育种与繁殖重点实验室北京100193 山东农业大学动物科技学院泰安271018

尽管基于QTL定位和关联分析研究挖掘了许多奶牛产奶性状候选功能基因,然而仅有少数几个基因经过体内外的功能验证。本课题组前期全基因组关联分析(GWAS)研究结果表明Vps28基因与奶牛产奶性状表型显著相关,并在奶牛乳腺组织中特异性高表... 详细信息

尽管基于QTL定位和关联分析研究挖掘了许多奶牛产奶性状候选功能基因,然而仅有少数几个基因经过体内外的功能验证。本课题组前期全基因组关联分析(GWAS)研究结果表明Vps28基因与奶牛产奶性状表型显著相关,并在奶牛乳腺组织中特异性高表达。为了深入了解该基因对泌乳性状的作用和功能,本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了Vps28基因敲除小鼠,对其进行体内功能研究。研究结果显示Vps28基因敲除纯合型小鼠(Vps28-/-)极可能导致胚胎早期死亡,故只获得杂合型基因敲除小鼠(Vps28+/-)。敲除小鼠模型构建成功后,检测乳腺组织和脾脏组织中Vps28基因mRNA和蛋白的表达,结果显示与野生型小鼠(Vps28+/+)相比,Vps28+/-杂合型小鼠Vps28的mRNA和蛋白表达量均显著下降。进一步对母鼠的泌乳量、乳房形态和血常规进行检测,发现Vps28敲除母鼠的泌乳量下降,乳头明显凹陷,且血常规中白细胞数量、中性粒细胞数量、淋巴细胞数量和中间细胞数量显著低于野生型小鼠,推测Vps28基因不但影响泌乳,而且影响相关免疫性状。

关键词： CRISPR/Cas9 基因敲除小鼠 Vps28基因泌乳免疫性状

鲁莱黑猪肌肉生长抑制素基因5′调控区单倍型多样性及育种应用

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中国兽医学报 2012年第5期32卷 779-782页

作者：邢慧君徐云华姜运良山东农业大学动物科技学院山东省动物生物技术与疾病控制重点实验室山东泰安271018 莱芜市畜牧兽医技术推广中心山东莱芜271100 南京农业大学动物科技学院江苏南京210095

肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)是肌肉生长发育的负调控因子,该基因的缺失或突变会导致动物机体肌肉总量和瘦肉率的增加。本试验对142头鲁莱黑猪MSTN基因5′调控区3个单核苷酸多态性位点(SNPs)进行了分析,结果表明,在鲁莱黑猪MSTN基因... 详细信息

肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)是肌肉生长发育的负调控因子,该基因的缺失或突变会导致动物机体肌肉总量和瘦肉率的增加。本试验对142头鲁莱黑猪MSTN基因5′调控区3个单核苷酸多态性位点(SNPs)进行了分析,结果表明,在鲁莱黑猪MSTN基因5′调控区435、447和879位点存在多态性,共检测到AA、AB、BB、AC、BC、CC、CD、AD和BD 9种基因型及435A-447G-879T(A),435G-447A-879T(B)、435A-447A-879A(C)和435A-447A-879T(D)4种单倍型,其中CC、BC和AC基因型及C单倍型在猪群中占绝对优势。哈代温伯格平衡检验结果显示,在这3个位点群体显著偏离平衡状态(P<0.005);3个单核苷酸多态性位点所产生的等位基因均表现出连锁不平衡。依据其遗传效应,在建系时,提高B和A单倍型的频率有望提高鲁莱黑猪的生长速度,而提高C单倍型的频率可保持鲁莱黑猪的优质和高繁特性。

关键词：鲁莱黑猪肌肉生长抑制素基因单倍型育种应用

盐碱地苜蓿对伊拉肉兔内脏器官发育及血液生化指标的影响

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经济动物学报 2020年第2期24卷 63-67+77页

作者：姚红梅李鹏庄梦晖李家军吴振宇刘公言郭慧君邱建华山东农业大学动物科学技术学院山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东省畜禽疫病防制工程技术研究中心

为研究盐碱地种植苜蓿饲喂肉兔,对其内脏及生殖器官、胃肠道发育和血液生化指标的影响,分别以盐碱地种植苜蓿、常规苜蓿、常规花生秧为日粮中草粉来源,制成肉兔颗粒料,设计3组,每组20只断奶伊拉肉兔,正式试验期40 d。结果表明:与其他两... 详细信息

为研究盐碱地种植苜蓿饲喂肉兔,对其内脏及生殖器官、胃肠道发育和血液生化指标的影响,分别以盐碱地种植苜蓿、常规苜蓿、常规花生秧为日粮中草粉来源,制成肉兔颗粒料,设计3组,每组20只断奶伊拉肉兔,正式试验期40 d。结果表明:与其他两组相比,盐碱地苜蓿组肉兔的心、脾、胸腺、睾丸和小肠发育影响不显著(P>0.05),肝质量显著高于普通苜蓿组(P普通花生秧组>普通苜蓿组;高密度脂蛋白、血糖、球蛋白、甘油三酯水平与其他两组相比差异不显著(P>0.05),总胆固醇、低密度脂蛋白水平显著低于普通普通苜蓿组(P技术,盐碱地种植苜蓿可以作为生长期肉兔日粮的草粉来源,不影响心、脾、胸腺、睾丸、小肠的发育以及血糖、甘油三酯、高密度脂蛋白和球蛋白水平。

关键词：盐碱地苜蓿伊拉肉兔内脏器官发育血液生化指标生殖腺

纤维高效降解微生物的选育及其在畜禽生产中的应用研究进展

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动物营养学报 2024年第10期36卷 6234-6247页

作者：秦世宁姜淑贞杨维仁杨立杰山东农业大学动物科技学院农业农村部非粮饲料资源高效利用重点实验室泰安271018

优质饲料资源不足严重制约着我国畜牧业发展。纤维是自然界中分布最广且数量最多的可再生资源,因其结构复杂且许多动物缺乏相应降解酶而难以被利用。然而,部分微生物可通过分泌相应纤维降解酶系,将纤维降解为低聚糖或被自身利用产生益... 详细信息

优质饲料资源不足严重制约着我国畜牧业发展。纤维是自然界中分布最广且数量最多的可再生资源,因其结构复杂且许多动物缺乏相应降解酶而难以被利用。然而,部分微生物可通过分泌相应纤维降解酶系,将纤维降解为低聚糖或被自身利用产生益生物质。因此,纤维高效降解微生物的选育,对新型饲料资源开发和纤维饲料利用具有重要的意义。本文针对近年来国内外纤维高效降解微生物的筛选、改造和应用进行综述,旨在为我国优质微生物种质资源的挖掘和新型饲料资源的开发提供新思路。

关键词：纤维微生物酶诱变育种

山东省地方品种羊先天性免疫指标主成分聚类分析及与抗病力的相关性

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中国兽医学报 2017年第10期37卷 1980-1987页

作者：周建波胡莉萍张忠花王建民马宁宁董雯雯朱丽君魏凯朱瑞良山东农业大学动物科技学院山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室山东泰安271018 山东省动物疫病预防与控制中心山东济南250022 枣庄市市中区畜牧兽医局山东枣庄277100

运用化学计量学方法,结合SPSS统计软件对山东省6个地方山羊品种和5个地方绵羊品种的7项先天性免疫指标进行定量定性综合评定,检测指标包括血清IL-1、IL-2、IL-6、IL-18、IFN-γ、NK细胞和血清溶菌酶(LYS)含量。通过对地方山羊和绵羊品... 详细信息

运用化学计量学方法,结合SPSS统计软件对山东省6个地方山羊品种和5个地方绵羊品种的7项先天性免疫指标进行定量定性综合评定,检测指标包括血清IL-1、IL-2、IL-6、IL-18、IFN-γ、NK细胞和血清溶菌酶(LYS)含量。通过对地方山羊和绵羊品种的先天性免疫指标进行主成分分析和聚类分析研究,分析不同地方山羊和绵羊品种非特异性抗病力的差异。主成分分析结果表明,莱芜黑山羊、沂蒙黑山羊、崂山奶山羊以及小尾寒羊、鲁中山地绵羊的7项主要先天性免疫指标水平突出。聚类分析结果表明,地方山羊品种先天免疫水平可划分为3类,莱芜黑山羊和鲁北白山羊为一类,济宁青山羊和沂蒙黑山羊为一类,文登奶山羊和崂山奶山羊为一类;地方绵羊品种也可划分成三类,小尾寒羊为一类,鲁中山地绵羊和洼地绵羊为一类,大尾寒羊和泗水裘皮羊为一类。综合分析表明,山东地区不同地方山羊和绵羊品种间的非特异性抗病力存在差异,其中莱芜黑山羊、沂蒙黑山羊、崂山奶山羊以及小尾寒羊、鲁中山地绵羊非特异性抗病力较强,且部分品种之间先天性免疫指标具有相似性,这可能与山东地区地方山羊和绵羊的育种历程有关。本研究为山东地方山羊和绵羊品种非特异性抗病力评估体系的建立提供了理论依据。

关键词：地方山羊绵羊先天性免疫主成分分析聚类分析抗病力

猪Hal、GH、AREG、ESR和BF基因多态性及其对部分经济性状的影响

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畜牧与兽医 2017年第10期49卷 1-7页

作者：王辉陈伟刘宗立杨丹丹孙强薛慧曾勇庆山东农业大学动物科技学院山东泰安271000 山东省动物生物工程与疾病防治重点实验室山东泰安271000 山东鼎泰牧业有限公司山东济南250300

采用PCR-RFLP方法,以大白、长白、杜洛克3个猪种共400头繁殖母猪为研究对象,研究Hal、GH、AREG、ESR和BF基因的多态性,并与繁殖和生长性状进行关联分析,为猪的分子标记辅助育种和提高选种的准确性提供依据。结果表明:5个基因在3个猪种... 详细信息

采用PCR-RFLP方法,以大白、长白、杜洛克3个猪种共400头繁殖母猪为研究对象,研究Hal、GH、AREG、ESR和BF基因的多态性,并与繁殖和生长性状进行关联分析,为猪的分子标记辅助育种和提高选种的准确性提供依据。结果表明:5个基因在3个猪种的测定群体中存在多态性,但在基因型频率上不同猪种间存在较大差异。各猪群5个基因的优势等位基因均为A。其中Hal基因在大白猪群体中初产母猪AA型个体总产仔数和产活仔数分别比AB型多19头和272头(P育种工作提供了参考。

关键词：猪繁殖性能生长性能基因多态性关联分析

聚肌胞浓度和免疫刺激时间对猪外周血单核细胞基因表达的影响

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中国农业科学 2015年第3期48卷 583-593页

作者：王继英王彦平王怀中王海飞刘剑锋郭建凤山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室中国农业大学动物科技学院/农业部畜禽遗传育种与繁殖重点实验室

【目的】聚肌胞(Poly I:C)是聚肌苷酸和聚胞苷酸的共聚物,能够模拟病毒感染后所形成的ds RNA,刺激机体产生抗病毒免疫反应和炎症反应。利用Poly I:C作为免疫刺激剂对猪外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)的免疫... 详细信息

【目的】聚肌胞(Poly I:C)是聚肌苷酸和聚胞苷酸的共聚物,能够模拟病毒感染后所形成的ds RNA,刺激机体产生抗病毒免疫反应和炎症反应。利用Poly I:C作为免疫刺激剂对猪外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)的免疫刺激试验中Poly I:C的最佳作用浓度和体外免疫刺激培养时间的研究还未见报道。本研究探讨不同的Poly I:C免疫剂量和免疫刺激时间对猪PBMC各细胞因子和受体基因表达的影响,确定Poly I:C进行免疫试验的最佳作用浓度和体外免疫刺激培养时间,为利用Poly I:C进行RNA病毒感染的免疫应答调控机理研究提供试验依据。【方法】以长白仔猪为研究对象,利用分离的PBMC和1﹕5稀释的EDTA-抗凝血,设置Poly I:C浓度梯度(0、10、20和40μg·m L-1)和不同的体外免疫刺激培养时间(4、8、12和24 h),通过荧光定量PCR方法测定Poly I:C免疫刺激下机体激活或者诱导表达的主要细胞因子(IL6,IL8,TNFα,IL10,IRF3,IFNα和IFNγ)和模式识别受体(TLR3和TLR4)的相对表达量,分析利用Poly I:C对猪全血和PBMC进行免疫刺激试验的最佳作用浓度和时间。【结果】猪PBMC中细胞因子和受体基因的表达量受Poly I:C浓度和免疫刺激时间的影响。各基因具有特征性的表达量变化曲线,达到最高表达变化倍数的浓度和体外培养时间各不相同。对于两个干扰素基因IFNα和IFNγ,最高表达量出现在Poly I:C免疫刺激培养4 h,而后随着培养时间的延长表达量逐渐降低,而其他5个细胞因子(IL6,IL8,TNFα,IL10和IRF3)和2个模式识别受体(TLR3和TLR4)基因随着Poly I:C浓度的增加和免疫刺激时间的延长变化倍数逐渐增加,在Poly I:C浓度为20-40μg·m L-1,免疫刺激时间为12-24 h达到最高表达量。但是,对于最高表达量出现在浓度20μg·m L-1和培养时间12 h的基因,其在浓度为40μg·m L-1和培养时间24 h表达变化量只有小幅下降。另外本研究还对比检测了1﹕5稀释血在Poly I:C免疫刺激下主要细胞因子和受体的表达变化,结果表明全血中各细胞因子和受体的整体表达变化倍数比PBMC低很多,特别是对于IL6和IL8这两个PBMC中表达变化很大的基因,全血中表达变化量不仅很小,而且变化趋势相反。相对于PBMC,稀释全血完整地保存了机体的原始状态,但是利用全血进行免疫试验的主要缺点是抗凝剂保留在全血中。研究中EDTAK2抗凝剂能与血液中的钙离子结合成为螯合物,从而阻止血液凝固,但是钙离子是细胞的重要信号分子,钙离子与EDTA的结合对后续的细胞功能可能产生一定的影响。另外,全血中的某些化合物与血浆蛋白的等成分可能参与免疫细胞对Poly I:C免疫刺激的调节,减少了对Poly I:C免疫刺激的应答。【结论】(1)综合分析所检测的细胞因子和受体的变化趋势,利用Poly I:C进行猪PBMC免疫刺激试验的最佳浓度和体外培养时间分别为20μg·m L-1和24 h。(2)1﹕5稀释的EDTA-抗凝血对Poly I:C免疫反应反应小,与PBMC对Poly I:C免疫应答有不同的应答反应趋势。

关键词：猪聚肌胞(Poly I:C) 外周血单核细胞(PBMC) 基因表达

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CRISPR/Cas9系统的脱靶效应

生物技术通报 2016年第3期32卷 31-37页

作者：尹珅贺桂芳赖方秾谢凤云马俊宇青岛农业大学生殖科学研究院动物生殖与种质创新山东省高校重点实验室青岛农业大学动物科技学院青岛266109

在细菌中发现的免疫系统CRISPR/Cas9,已经成为最有效的基因工程编辑工具,甚至大有希望可以治疗人类遗传性疾病。但是CRISPR/Cas9系统在使用时会产生严重的脱靶问题,导致假表型和错误的解释。提高与靶点结合的高效率,同时减少脱靶效应,... 详细信息

在细菌中发现的免疫系统CRISPR/Cas9,已经成为最有效的基因工程编辑工具,甚至大有希望可以治疗人类遗传性疾病。但是CRISPR/Cas9系统在使用时会产生严重的脱靶问题,导致假表型和错误的解释。提高与靶点结合的高效率,同时减少脱靶效应,将是今后CRISPR/Cas9技术的挑战。综述关注与CRISPR/Cas9脱靶效应相关的内容,总结了影响其靶点专一性的因素,减少CRISPR/Cas9脱靶效应的可行性方法和设计工具等,供大家学习讨论。

关键词：脱靶靶点专一性 CRISPR/Cas9

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鸡种系嵌和体的研制及其AFLP检测

遗传 2005年第3期27卷 367-371页

作者：胡小芬谢蓓于瑞嵩黄启忠张德福黄路生李震上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 江西农业大学江西省动物生物技术重点开放实验室

利用密度梯度离心等方法从孵化51～56h的石歧杂鸡胚血液中提取PGCs,用自制的玻璃注射针将PGCs注射到孵化2.5d的H系受体鸡胚中制备种系嵌和体鸡;通过筛选AFLP引物建立起家禽嵌和体的AFLP检测方法;经检测20个发育的PGCs受体鸡胚中有8个种... 详细信息

利用密度梯度离心等方法从孵化51～56h的石歧杂鸡胚血液中提取PGCs,用自制的玻璃注射针将PGCs注射到孵化2.5d的H系受体鸡胚中制备种系嵌和体鸡;通过筛选AFLP引物建立起家禽嵌和体的AFLP检测方法;经检测20个发育的PGCs受体鸡胚中有8个种系嵌和体,嵌和率为40%。

关键词：家禽原始生殖细胞种系嵌和体扩增片段长度多态性