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尼罗罗非鱼主要组织相容性复合体IA基因克隆与多态分析

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山东大学学报（理学版） 2013年第11期48卷 14-22页

作者：李同明周芬娜崔志峰季相山王慧山东农业大学动物科技学院水产系山东泰安271018

采用touchdown PCR和RACE技术,获得了两条尼罗罗非鱼MHC IA基因3’端的新序列,其长度均为957 bp,分别命名为orni-DAA*0101和orni-DAA*0102,其分别编码了两种新发现的等位基因亚型。两条新序列均包含666 bp的CDS区和291 bp的3’-UTR区,CD... 详细信息

采用touchdown PCR和RACE技术,获得了两条尼罗罗非鱼MHC IA基因3’端的新序列,其长度均为957 bp,分别命名为orni-DAA*0101和orni-DAA*0102,其分别编码了两种新发现的等位基因亚型。两条新序列均包含666 bp的CDS区和291 bp的3’-UTR区,CDS区包含了部分多肽结合区、全部的IGC区以及跨膜区和胞质区。同源性比对显示,cDNA序列分别在388 bp和426 bp处发生了碱基转换,而其编码的氨基酸序列在第130位点存在谷氨酸与赖氨酸的差异。首次发现相对保守的IGC区也存在变异。研究结果对于揭示尼罗罗非鱼MHC IA基因的多态性及其与高抗病性的相关性有重要价值。

关键词：尼罗罗非鱼 MHC IA 基因克隆多态性 RACE

谷氨酰胺诱导小鼠肝脏细胞自噬相关蛋白质和氨基酸含量变化的研究

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动物营养学报 2023年第5期35卷 3313-3322页

作者：冯蕾刘伟张宇胡志勇山东农业大学动物科技学院泰安271018

本试验旨在通过探究谷氨酰胺(Gln)的不同浓度以及不同时间饥饿处理对小鼠肝脏细胞自噬程度的影响,为Gln在家畜上的应用提供基础的数据支撑。本试验选取小鼠肝脏细胞系(NCTC1469)为试验材料,在DMEM高糖培养基培养至密度约为90%。Gln浓度... 详细信息

本试验旨在通过探究谷氨酰胺(Gln)的不同浓度以及不同时间饥饿处理对小鼠肝脏细胞自噬程度的影响,为Gln在家畜上的应用提供基础的数据支撑。本试验选取小鼠肝脏细胞系(NCTC1469)为试验材料,在DMEM高糖培养基培养至密度约为90%。Gln浓度处理时,进行无血清饥饿培养12 h,12 h后分为8个处理,Gln浓度分别为0、2%、4%、8%、16%、32%、64%和100%,处理细胞12 h;饥饿时间处理时,进行无血清饥饿培养12 h,12 h后分为8个处理,饥饿时间分别为0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0和24.0 h,进行无Gln处理。结果表明:Gln浓度处理中,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达量均随着Gln浓度增加呈上升趋势,真核生物起始因子2α(eIF2α)、Unc-51样激酶1-555(ULK1-555)蛋白表达量以及微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)Ⅱ型与Ⅰ型的比值(LC3BⅡ/Ⅰ)、转录激活因子4(ATF4)的蛋白表达量均随着Gln浓度的增加而呈现下降趋势,且R2均大于0.5;饥饿时间处理中,ATF4、P62和mTOR蛋白表达量均随着Gln饥饿时间的延长而呈现上升趋势,R2均大于0.5;Gln浓度处理中,Gln浓度为0时,组氨酸(His)、甘氨酸(Gly)、苏氨酸(Thr)、赖氨酸(Lys)、酪氨酸(Tyr)、蛋氨酸(Met)、缬氨酸(Val)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe)和色氨酸(Trp)在细胞内含量显著高于其他处理(P系(NCTC1469)用不同浓度Gln处理12 h,Gln浓度增加会抑制自噬;经不同饥饿时间处理,因为一般性调控阻遏蛋白激酶2(GCN2)途径调控细胞摄取外源氨基酸使mTOR再激活,总体来说自噬程度随饥饿时间延长而减弱。

关键词：谷氨酰胺小鼠肝脏细胞自噬氨基酸

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猪PRLR和RBP4基因多态性与产仔性能的关系

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遗传 2009年第1期31卷 63-68页

作者：孙延晓曾勇庆唐辉樊新忠陈其美李华钱源宋一萍山东农业大学动物科技学院泰安271018

采用PCR-RFLP方法,对莱芜黑猪、鲁莱黑猪、里岔黑猪、鲁烟白猪、新沂蒙黑猪5个山东地方/培育猪种和大约克夏、长白、杜洛克3个引进猪种共8个猪种323头繁殖母猪进行PRLR和RBP4基因的多态性检测,并采用最小二乘法分析其对产仔数影响的遗... 详细信息

采用PCR-RFLP方法,对莱芜黑猪、鲁莱黑猪、里岔黑猪、鲁烟白猪、新沂蒙黑猪5个山东地方/培育猪种和大约克夏、长白、杜洛克3个引进猪种共8个猪种323头繁殖母猪进行PRLR和RBP4基因的多态性检测,并采用最小二乘法分析其对产仔数影响的遗传效应。结果表明:两个基因位点在8个猪种的测定群体中均存在多态性,但山东地方/培育猪种与引进猪种间在基因型频率上存在较大差异。PRLR和RBP4基因对产仔数性状有显著影响(P山东地方/培育猪种内AA基因型母猪的总产仔数和活产仔数比BB基因型母猪平均多产1.03头和0.89头,引进猪种中AA基因型母猪比BB基因型母猪平均多产分别为1.26头和1.11头。对于RBP4基因,山东地方/培育猪种内AA基因型母猪的总产仔数和活产仔数比BB基因型母猪平均多产0.59头和0.51头,引进猪种中AA基因型母猪比BB基因型母猪平均多产分别为0.72头和0.64头。

关键词：猪 PRLR基因 RBP4基因多态性产仔数

尼罗罗非鱼MHC ⅡA基因的克隆、表达及多态性分析

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水产学报 2012年第8期36卷 1167-1178页

作者：周芬娜董忠典李同明傅咏王慧山东农业大学动物科技学院

为进一步了解鱼类MHC ⅡA基因的特点及其在免疫反应中的功能,采用同源克隆、RACE-PCR、巢式PCR等技术,从健康的尼罗罗非鱼体获得1 205 bp的MHC ⅡA基因cDNA全序列(Orni-DBA-0101,Genebank登录号:JF719813)及1 388 bp的基因组序列。序列... 详细信息

为进一步了解鱼类MHC ⅡA基因的特点及其在免疫反应中的功能,采用同源克隆、RACE-PCR、巢式PCR等技术,从健康的尼罗罗非鱼体获得1 205 bp的MHC ⅡA基因cDNA全序列(Orni-DBA-0101,Genebank登录号:JF719813)及1 388 bp的基因组序列。序列分析发现,尼罗罗非鱼MHC ⅡA基因含4个外显子和3个内含子,开放阅读框长720 bp,编码239个氨基酸。从4尾尼罗罗非鱼中共得到8条不同的cDNA序列,分别编码不同的氨基酸序列。氨基酸序列比对后发现,序列间存在丰富的多态性,且主要集中在α-1区,多态性位点数远远高于半滑舌鳎MHC ⅡA基因。生物信息学分析表明,尼罗罗非鱼MHC ⅡA编码的蛋白质分子包含1个信号肽、2个胞外结构域、1个跨膜区和1个胞质区,存在4个保守的半胱氨酸残基以及丰富的磷酸化位点,与其他物种的相似性为23%～65%。RT-PCR结果表明,MHC ⅡA基因在脾、肾、肠、鳃、性腺、肝、心脏表达量很高,在鳔和肌肉中表达量最低。人工感染嗜水气单胞菌后,肝、脾、肾、鳃、肠5个组织中MHC ⅡA基因的mRNA水平均发生了不同程度的变化,提示MHC ⅡA分子作为一种重要的免疫因子,在清除病原的免疫反应中起着重要作用。

关键词：尼罗罗非鱼表达多态性基因克隆 MHC

ALV-J相关的鸡急性纤维肉瘤发病模型的建立

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中国农业科学 2012年第3期45卷 548-555页

作者：李传龙张恒赵鹏崔治中山东农业大学动物科技学院

【目的】证明纤维肉瘤病料中含有的ALV-J相关病毒能够诱发急性纤维肉瘤。【方法】将含ALV-J相关病毒的病料过滤液经不同部位接种1日龄817肉杂鸡;将该过滤液不同倍数稀释后接种1日龄SPF鸡和817肉杂鸡;将该过滤液接种细胞培养后的上清液接... 详细信息

【目的】证明纤维肉瘤病料中含有的ALV-J相关病毒能够诱发急性纤维肉瘤。【方法】将含ALV-J相关病毒的病料过滤液经不同部位接种1日龄817肉杂鸡;将该过滤液不同倍数稀释后接种1日龄SPF鸡和817肉杂鸡;将该过滤液接种细胞培养后的上清液接种1日龄817肉杂鸡,连续动态观测30 d。【结果】颈部皮下、胸肌、腹腔3个部位攻毒鸡的肿瘤发生率分别为100%(20/20)、95.2%(20/21)、100%(20/20)。病料过滤液未经稀释接种817肉杂鸡和SPF鸡的肿瘤发生率均为100%(10/10),10倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为80%(8/10)和100%(10/10),100倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为100%(10/10)和80%(8/10),1 000倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为40%(4/10)和50%(5/10),更高倍数稀释后攻毒鸡没有肿瘤发生。接种病料的细胞培养上清也能使33.3%(2/6)的鸡只发生肉瘤。病理组织学检测显示:诱发的急性肿瘤系典型的纤维肉瘤。【结论】817肉杂鸡肉瘤病料中含有ALV-J相关的急性致肿瘤病毒,不论是病料过滤液本身还是其接种DF-1细胞培养后的上清液都能在不同品种鸡复制出急性纤维肉瘤,最快在接种后7 d出现,且肿瘤发生的时间、动态和肿瘤发生率与接种量密切相关。

关键词：鸡急性纤维肉瘤 ALV-J(J亚群禽白血病病毒) 鸡体致病试验

草鱼天然抗性相关巨噬蛋白基因的表达特征与蛋白表达

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中国水产科学 2015年第5期22卷 908-915页

作者：杨康王艺雅刘铁柱李同明季相山王慧山东农业大学动物科技学院

为探讨Nramp基因在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)免疫应答中的作用,采用实时荧光定量PCR技术,对比研究了Nramp基因在草鱼不同发育阶段、不同组织及嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)攻毒感染后4个组织不同时间的差异表达,并利用原... 详细信息

为探讨Nramp基因在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)免疫应答中的作用,采用实时荧光定量PCR技术,对比研究了Nramp基因在草鱼不同发育阶段、不同组织及嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)攻毒感染后4个组织不同时间的差异表达,并利用原核表达技术对草鱼Nramp基因ORF区642 bp的目的片段进行蛋白表达,获得40 k D的融合蛋白。实时荧光定量PCR分析结果表明,Nramp在草鱼胚胎发育过程中的表达量随着发育时间的增加而逐渐增强,在幼鱼期的表达量达到最大。成年健康草鱼不同组织中的表达量差异显著(P<0.05),在肝中的表达量最高,其次是在脾、头肾、肠中的表达量较高,而在眼和鳔中的表达量最低。草鱼感染嗜水气单胞菌后,在头肾、肝、脾、肠中Nramp的表达量都显著上升(P<0.05),在头肾中感染12 h后显著上升,48 h达到最大,在72 h和96 h时又显著下调,在7 d时表达量继续下调而逐渐回归到初始水平;在肝中Nramp基因的表达量在4 h时出现下调,在12 h又显著上调,随后在24 h出现下调,在48 h又上调,72 h达到最大并保持较高水平到7 d;在肠中m RNA表达量在12 h显著上调,48 h达到最大,在72 h和96 h显著下调,在7 d时表达量基本回归到初始水平;在脾中m RNA表达量在4 h开始上升,12 h达到最大,在24 h和48 h表达水平显著下调,在7 d时表达量回归到初始水平。草鱼感染致病菌可引起免疫相关组织中Nramp的表达量上升,说明Nramp在硬骨鱼类的天然免疫反应过程中发挥着重要作用。

关键词：草鱼 Nramp基因表达分析原核表达蛋白纯化

紫外诱变选育高活性蛋白酶枯草芽孢杆菌及其降解饲料能力评价

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中国水产科学 2016年第6期23卷 1351-1357页

作者：王晓云王慧赵燕陈红菊季相山山东农业大学动物科技学院

以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖池塘底泥中分离的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BC2为出发菌株,利用紫外诱变的方法培育蛋白酶活性高的枯草芽孢杆菌菌株,并评价其降解饲料的能力。结果表明:(1)经6次紫外诱变,突变菌株B38的... 详细信息

以凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖池塘底泥中分离的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)BC2为出发菌株,利用紫外诱变的方法培育蛋白酶活性高的枯草芽孢杆菌菌株,并评价其降解饲料的能力。结果表明:(1)经6次紫外诱变,突变菌株B38的透明圈直径(H)与菌落直径(C)之比(H/C值)达到6.42,提高了2.13倍;(2)福林酚法测得B38的蛋白酶活性为86.82 U/m L,是出发菌株BC2的3.14倍,但紫外诱变对B38纤维素酶活性影响不显著;(3)连续传代培养10代后发现B38产蛋白酶和纤维素酶能力保持稳定,证明诱变菌株具有较好的遗传稳定性;(4)利用凯氏定氮法评价B38降解饲料蛋白的能力,发现与BC2相比,B38降解饲料中可溶性蛋白的能力提高了2.57倍,而降解不溶性蛋白的能力变化不大。本研究诱变选育的枯草芽孢杆菌B38为开发优良的水产微生态制剂产品提供了重要的前提和基础。

关键词：枯草芽孢杆菌蛋白酶紫外诱变蛋白降解率虾池底泥

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青山羊皮肤组织差显快速银染技术的优化研究

山东农业大学学报（自然科学版） 2008年第1期39卷 59-61页

作者：张兆远康文霞董彬崔志峰王慧山东农业大学动物科技学院水产系山东泰安271018

差异显示PCR(differential display PCR,DDRT-PCR)技术是快速分离差异表达基因的强有力工具,但是其繁琐的染色程序和较高的假阳性率给研究者带来了不便。为了提高DDRT-PCR技术的效率和试验结果的清晰度和重复率,本研究以济宁青山羊皮肤... 详细信息

差异显示PCR(differential display PCR,DDRT-PCR)技术是快速分离差异表达基因的强有力工具,但是其繁琐的染色程序和较高的假阳性率给研究者带来了不便。为了提高DDRT-PCR技术的效率和试验结果的清晰度和重复率,本研究以济宁青山羊皮肤组织的总RNA为试验材料,对影响DDRT-PCR的因素,如:反转录条件、反应体系和染色条件进行了优化研究。通过对染色程序和温度等染色条件的反复对比试验,建立了快速银染技术,得到了十分清晰的DDRT-PCR电泳图谱。快速银染技术既缩短了染色时间,又可以得到清晰的电泳图谱。

关键词：差异显示PCR 快速银染技术反应体系优化

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泰山赤鳞鱼人工配合饵料研究初报

水产学报 1995年第4期19卷 354-357页

作者：岳永生王慧曾勇庆王哲张庆朝宋憬愚丁雷山东农业大学动物科技学院

泰山赤鳞鱼人工配合饵料研究初报岳永生，王慧，曾勇庆，王哲，张庆朝，宋憬愚，丁雷（山东农业大学动物科技学院，泰安２７１０１８）关键词泰山赤鳞鱼，人工配合饲料ＡＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＯＮＴＨＥＡＲＴＩ... 详细信息

泰山赤鳞鱼人工配合饵料研究初报岳永生，王慧，曾勇庆，王哲，张庆朝，宋憬愚，丁雷（山东农业大学动物科技学院，泰安２７１０１８）关键词泰山赤鳞鱼，人工配合饲料ＡＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＥＸＰＥＲＩＭＥＮＴＯＮＴＨＥＡＲＴＩＦＩＣＩＡＬＤＩＥＴＦＯＲＴＡＩＳ...

关键词：泰山赤鳞鱼人工配合饲料