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骨质疏松中衰老相关分泌表型调控机制的研究进展

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中国全科医学 2024年第29期27卷 3685-3695页

作者：杨超富谭国庆徐展望山东中医药大学山东中医药大学附属医院脊柱脊髓科

衰老相关分泌表型（SASP）是细胞衰老的重要特征，在调控疾病微环境中具有重要作用。目前，对于SASP干预骨代谢、诱导骨流失的作用机制了解有限，因此，本文探讨了在骨质疏松模型中SASP的调控机制，并归纳总结了其调控特点：SASP在衰老... 详细信息

衰老相关分泌表型（SASP）是细胞衰老的重要特征，在调控疾病微环境中具有重要作用。目前，对于SASP干预骨代谢、诱导骨流失的作用机制了解有限，因此，本文探讨了在骨质疏松模型中SASP的调控机制，并归纳总结了其调控特点：SASP在衰老骨细胞中充分表达，以自分泌/旁分泌的方式将衰老效应传递到间充质干细胞，从而干预其成骨分化；SASP激活免疫细胞，并促进其衰老，从而诱导炎性组织微环境的形成，加重骨流失；线粒体稳态失调、病理性血糖升高、肥胖诱导的脂肪蓄积均会促进SASP的表达，从而扰乱微环境稳态，将衰老效应传递到骨组织。所以，有必要深入了解SASP在骨质疏松中的作用，为后续开发抗SASP疗法治疗骨质疏松提供借鉴。

关键词：骨质疏松衰老相关分泌表型细胞衰老代谢紊乱免疫调节

来源：博看期刊

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中医药治疗子宫腺肌病的作用机制研究进展

中国实验方剂学杂志 2024年第16期30卷 295-302页

作者：王润涵刘洋师伟徐丽山东中医药大学济南250014 山东中医药大学附属医院济南250014 山东中医药大学第二附属医院济南250011

子宫腺肌病(AM)是临床常见的难治性妇科疾病之一,具有病机复杂、病程较长等特点。目前暂无治疗AM的标准统一方案,临床根据患者的不同症状和诉求制定个体化方案,但由于AM治疗周期长、易复发、难根治,患者依从性不佳。中医药通过多途径、... 详细信息

子宫腺肌病(AM)是临床常见的难治性妇科疾病之一,具有病机复杂、病程较长等特点。目前暂无治疗AM的标准统一方案,临床根据患者的不同症状和诉求制定个体化方案,但由于AM治疗周期长、易复发、难根治,患者依从性不佳。中医药通过多途径、多环节、多靶点治疗AM,具有临床疗效显著、不良反应少、复发率低等优势,已被广大患者接受认可。目前的文献以中医名家的经验总结、中医药改善AM临床症状和提高临床疗效等内容较多见,揭示中医药治疗AM作用机制的研究报道较少。故该文梳理国内外相关文献,归纳总结中药活性成分、中药药对、中药复方及中医外治法治疗AM的作用机制,主要包括抑制AM异位内膜细胞增殖、迁移与侵袭能力、诱导细胞凋亡、阻断细胞周期、抗子宫内膜纤维化、调节线粒体自噬水平、抑制血管生成、调控雌激素效应因子、调节免疫失衡及改善炎症反应等方面,并涉及多条信号通路及相关分子。综述中医药治疗AM的作用机制相关研究进展,以期为今后中医药临床治疗和实验研究AM提供一定的参考。

关键词：子宫腺肌病中医药作用机制实验研究研究进展

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中医药干预铁死亡治疗炎症性肠病的研究进展

中国实验方剂学杂志 2024年第11期30卷 245-254页

作者：商铭溶赵亚男张旭阳崔惠方赵义静刘明赵德杰山东中医药大学济南250014 山东中医药大学附属医院济南250014

炎症性肠病(IBD)主要包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD),是一种常见的消化道慢性炎症性疾病,发病率逐年攀升,因其治疗周期长,治疗难度大,迁延难愈,费用高昂,备受全球关注。探索安全有效持久的治疗方案已成为全球亟待解决的问题。IBD... 详细信息

炎症性肠病(IBD)主要包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD),是一种常见的消化道慢性炎症性疾病,发病率逐年攀升,因其治疗周期长,治疗难度大,迁延难愈,费用高昂,备受全球关注。探索安全有效持久的治疗方案已成为全球亟待解决的问题。IBD病机复杂,包括肠黏膜损伤、内环境紊乱、炎症反应等,近年研究发现铁死亡也是IBD的重要致病因素之一。铁死亡作为一种新的非凋亡性细胞死亡方式,主要特点表现为铁依赖性、脂质过氧化和氧化还原系统失衡,有研究表明,抑制肠上皮细胞铁死亡可以起到肠黏膜保护作用,靶向干预铁死亡或许是治疗IBD的新方向。IBD以药物治疗为主,包括皮质类固醇、氨基水杨酸盐、生物制剂和免疫调节剂等,但是易耐药、不良反应较多,而中医药具有价格低廉、耐药性低、不良反应少等独特的优势,在治疗IBD方面积累了丰富的经验。有学者证实中医药可以抑制铁死亡的发生,最新研究表明中医药一方面可以抑制肠道细胞铁依赖性脂质过氧化,另一方面可以提高肠道黏膜抗氧化、抗炎能力,从而起到治疗IBD的作用,越来越多的研究表明中医药或许通过干预铁死亡治疗IBD。该文通过探讨中医药干预铁死与中医药治疗炎症性肠病的相关性,讨论铁死亡在IBD中的可能作用机制,以期为IBD的诊疗提供依据。

关键词：炎症性肠病溃疡性结肠炎克罗恩病铁死亡中医药研究进展

基于PI3K/Akt/HIF-1α通路探讨桂枝茯苓胶囊-散结镇痛胶囊-宫血宁胶囊联用抑制子宫腺肌病进展的作用机制

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中草药 2024年第3期55卷 842-852页

作者：王楚矗王信于敏敏王哲曹涵师伟刘志勇山东中医药大学山东济南250355 山东中医药大学附属医院山东济南250014

目的探究桂枝茯苓胶囊-散结镇痛胶囊-宫血宁胶囊联用(GSG)方案对人子宫腺肌病异位内膜衍生细胞(adenomyosis derived cells,AMDC)异常增殖的抑制作用,评价对子宫腺肌病(adenomyosis,AM)模型小鼠的改善效果,并探讨相关分子机制。方法提取... 详细信息

目的探究桂枝茯苓胶囊-散结镇痛胶囊-宫血宁胶囊联用(GSG)方案对人子宫腺肌病异位内膜衍生细胞(adenomyosis derived cells,AMDC)异常增殖的抑制作用,评价对子宫腺肌病(adenomyosis,AM)模型小鼠的改善效果,并探讨相关分子机制。方法提取AMDC原代细胞并培养,采用CCK-8法检测GSG对AMDC活力的影响;采用克隆形成实验、EdU增殖检测实验确定GSG对AMDC克隆形成和增殖能力的影响。新生ICR小鼠滴喂他莫昔芬制备AM模型,分为对照组、模型组、复方米非司酮(3.25 mg/kg)组和GSG低、中、高剂量(0.635、1.270、2.539 g/kg)组,给药干预后,采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察小鼠子宫、肝、脾和肾的形态学改变;免疫组化法检测子宫组织中磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)的表达;检测血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)活性和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平。结果GSG能有效抑制AMDC活力和克隆形成能力,并呈剂量相关性地抑制AMDC增殖能力(P<0.001)。子宫HE染色结果显示,模型组子宫内膜与肌层边界模糊,多处腺体深度侵入子宫肌层;GSG低剂量组边界欠清晰,有腺体侵入子宫肌层,浸润深度减轻,数量减少;复方米非司酮组和GSG中剂量组边界较清晰,偶见腺体侵入肌层;GSG高剂量组边界清晰,少见明显腺体侵入肌层。免疫组化结果表明,与对照组比较,模型组子宫组织p-PI3K、p-Akt和HIF-1α表达显著增加(P<0.01、0.001);与模型组比较,各给药组p-PI3K、p-Akt的表达显著降低(P<0.01、0.001),复方米非司酮组和GSG中、高剂量组HIF-1α的表达显著降低(P<0.05、0.01)。各组肝、脾和肾形态学均未见明显改变,血清ALT活性和BUN水平无显著性差异。结论GSG方案在体内实验中可通过抑制PI3K/Akt/HIF-1α通路阻断AM进展,所选GSG剂量在动物体内未见明显不良反应,是潜在的AM治疗方案。

关键词：桂枝茯苓胶囊-散结镇痛胶囊-宫血宁胶囊联用子宫腺肌病子宫腺肌病异位内膜衍生细胞增殖小鼠模型磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/缺氧诱导因子-1α通路

激活α7nAchR促进肥胖小鼠的脂肪稳态和米色脂肪生成及产热作用

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南方医科大学学报 2024年第3期44卷 499-506页

作者：包汉生王苏童吕穆杰王永成姜萍李晓山东中医药大学山东济南250355 山东中医药大学附属医院山东济南250014

目的观察肥胖小鼠脂肪组织形态学改变以及脂代谢、炎症等相关指标的异常表现,探索激活α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAchR)促进肥胖机体白色脂肪米色化产热的作用机制。方法取诱导成肥胖小鼠40只和10只低脂进食小鼠,分为空白组、高脂组、... 详细信息

目的观察肥胖小鼠脂肪组织形态学改变以及脂代谢、炎症等相关指标的异常表现,探索激活α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAchR)促进肥胖机体白色脂肪米色化产热的作用机制。方法取诱导成肥胖小鼠40只和10只低脂进食小鼠,分为空白组、高脂组、模型组、激动剂组、抑制剂组(10只/组)。苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠附睾白色脂肪组织,评估细胞数量、大小及形态。ELISA检测白色脂肪组织肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1(IL1β)、白细胞介素10(IL10)、转化生长因子-β(TGF-β)表达水平。qRT-PCR检测白色脂肪一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)mRNA。PCR检测解偶联蛋白(UCP-1)、PR结构域蛋白16(PRDM-16)、线粒体生成的关键调节因子(PGC-1α)mRNA水平。Western blot检测白色脂肪核转录因子P65(NF-κB P65)、磷酸化蛋白酪氨基酸激酶2(p-JAK2)、磷酸化传导及转录激活因子3(p-STAT3)表达水平。结果与空白组比较,高脂组体质量明显增加(P<0.01),白色脂肪组织中出现较多脂肪空泡,脂滴明显增大,iNOS mRNA及TNF-α、IL-1β水平升高(P<0.01),而Arg-1 mRNA及IL-10、TGF-β水平降低(P<0.01);而与模型组相比,药物干预的3组体质量均有所减轻(P<0.05),白色脂肪中脂滴缩小。激动剂组白色脂肪中PRDM-16、PGC-1α、UCP-1 mRNA下降最为明显。而激动剂组TNF-α、IL-1β水平降低(P<0.05,P<0.01),IL-10、TGF-β水平升高(P<0.01),M1/M2巨噬细胞比值降低。结论激活α7 nAchR后可以改善应用β3受体激动剂产生的白色脂肪组织稳态受损,促进白色脂肪中M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化减轻白色脂肪炎症反应,促进白色脂肪组织米色化,提高米色化产热效能。

关键词：肥胖白色脂肪组织 α7 nAchR 产热炎症反应

再生障碍性贫血患者外周血全外显子组高通量基因测序分析

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中国病理生理杂志 2024年第4期40卷 729-734页

作者：王金鑫李昌年王腾魏文健史镜铂王琰徐瑞荣崔思远山东中医药大学附属医院山东济南250014 山东中医药大学山东济南250355

目的:对再生障碍性贫血(再障)患者进行外周血全外显子测序,观察基因突变的类型及突变率以探讨再障的发病机制。方法:采集19例再障患者的外周血并提取单个核细胞进行全外显子测序,对所得基因进行GO和KEGG富集分析。数据采用SPSS 22.0进... 详细信息

目的:对再生障碍性贫血(再障)患者进行外周血全外显子测序,观察基因突变的类型及突变率以探讨再障的发病机制。方法:采集19例再障患者的外周血并提取单个核细胞进行全外显子测序,对所得基因进行GO和KEGG富集分析。数据采用SPSS 22.0进行统计分析,以P<0.05为存在显著差异。结果:测得19例再障患者共有2006个基因突变,参照GeneCards及OMIM数据库及患者测序结果筛选出49个基因,绘制患者基因突变图谱,发现MUC5B基因可能与再障发病相关,其突变率达100%,其余基因如ERCC6、SYNE1和WFS1等突变率均超过40%,亦可能参与再障的形成。在GO分析中其主要与细胞运动、细胞骨架及组成、蛋白结合等功能相关。KEGG通路分析中,主要是在Hippo通路、ECM-受体相互作用通路等地方富集。结论:MUC5B基因可能是造成T细胞比例失调,进而导致再障的关键基因。此外,Hippo通路可能通过调节T细胞比例、端粒酶活性等参与再障的发病机制。

关键词：再生障碍性贫血外显子测序基因突变 Hippo信号通路

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脉络舒通丸对精索静脉曲张模型大鼠线粒体介导内源性细胞凋亡的影响

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中草药 2024年第2期55卷 499-508页

作者：贾志超李啸林吕东方杨恩华巩文娇高兆旺仲崇副山东中医药大学山东济南250014 山东中医药大学附属医院男科山东济南250014

目的探讨脉络舒通丸对精索静脉曲张模型大鼠线粒体介导的内源性细胞凋亡的影响。方法 36只雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和脉络舒通丸低、中、高剂量(0.162、0.324、0.648 g/kg)组,精索静脉曲张模型制备成功7 d后,连续i... 详细信息

目的探讨脉络舒通丸对精索静脉曲张模型大鼠线粒体介导的内源性细胞凋亡的影响。方法 36只雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和脉络舒通丸低、中、高剂量(0.162、0.324、0.648 g/kg)组,精索静脉曲张模型制备成功7 d后,连续ig给药4周。苏木素-伊红(HE)染色法检测各组大鼠睾丸及附睾组织病理变化;透射电镜观察各组大鼠生精细胞线粒体超微结构;免疫荧光检测各组大鼠睾丸组织中线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(B-cell lymphoma-2 associated X protein,Bax)和细胞色素C氧化酶IV(cytochrome C oxidaseⅣ,COXⅣ)的表达;免疫组化检测各组大鼠睾丸组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(cystein-asparate protease-9,Caspase-9)和Caspase-3的表达。结果假手术组与空白组大鼠睾丸及附睾组织病理染色结果相似,睾丸及附睾组织结构完整;与假手术组比较,模型组大鼠睾丸及附睾组织出现明显的病理性损伤;药物治疗后大鼠睾丸及附睾的病理性损伤得到不同程度的改善。假手术组与空白组大鼠睾丸线粒体形态结构相似,均可见大量线粒体广泛分布;与假手术组比较,模型组睾丸组织线粒体结构遭到严重破坏;药物治疗后线粒体仍可见不同程度的损伤,但较模型组明显改善。免疫荧光结果显示,Drp1与Bax在假手术组与空白组中荧光表达微弱,模型组较假手术组二者的荧光表达水平显著升高;Drp1与Bax在各治疗组的荧光表达趋势相似,经药物治疗后二者的荧光强度较模型组均降低。免疫组化结果显示,Caspase-9与Caspase-3在细胞间质及生精小管管壁周围分别呈褐色及棕色表达;假手术组与空白组二者均零星分布;与假手术组比较,模型组Caspase-9、Caspase-3表达增加(P<0.01);与模型组比较,各治疗组中Caspase-9、Caspase-3的表达水平明显降低(P<0.05、0.01)。结论精索静脉曲张模型大鼠睾丸及附睾组织结构损伤明显,线粒体结构遭到明显破坏,睾丸中Drp1、Bax、Caspase-9及Caspase-3表达显著升高。脉络舒通丸可能是通过对睾丸中线粒体结构的保护作用,抑制生精细胞中Caspase级联反应,从而调控线粒体介导的内源性细胞凋亡。

关键词：脉络舒通丸精索静脉曲张生精功能细胞凋亡线粒体

丁元庆运用调气通脉法治疗中青年中风后抑郁症经验

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中医杂志 2024年第19期 1972-1977页

作者：胡春雨李雪君王瑾唐赛雪李佳静于成徐向青丁元庆山东中医药大学山东中医药大学附属医院

总结丁元庆教授运用调气通脉法治疗中青年中风后抑郁症（PSD）的临证经验。PSD是在中风血脉损伤、脑髓神机受累基础上因病致郁的病证，提出卫阳变动、气机逆乱、血脉病损是其发病关键。中青年中风后不良生活方式、原有慢性疾病控制不当... 详细信息

总结丁元庆教授运用调气通脉法治疗中青年中风后抑郁症（PSD）的临证经验。PSD是在中风血脉损伤、脑髓神机受累基础上因病致郁的病证，提出卫阳变动、气机逆乱、血脉病损是其发病关键。中青年中风后不良生活方式、原有慢性疾病控制不当及睡眠障碍等各种因素既可单独为害，又可相互叠加作用，导致卫阳困遏、气机逆乱、血脉不利，卫阳郁滞日久，致生风化火，灼津为痰，炼血为瘀，郁热与痰瘀相互胶结，可进一步损伤脉道，则卫伐营涩，脑髓失养，神机不用，形成抑郁症。临床应用调气通脉法，通过疏气清气益气、和血通脉宣络、开郁振颓怡神达到治疗PSD目的，选取桂枝汤、保元汤等经典方剂及二丹汤、二竹方等自拟方加减治疗。

关键词：中风后抑郁症调气通脉法名医经验丁元庆

黄芪-白花蛇舌草调控Sp1-miR-582-3p-p27轴抑制肺腺癌增殖分子机制

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：孙海鹏许露凡刘学刘思远山东中医药大学附属医院山东中医药大学

目的：从细胞水平探讨特异性蛋白1（Sp1）-MicroRNA-582-3p（miR-582-3p）-细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（p27）轴过度激活对A549肺腺癌细胞周期、增殖影响，以研究黄芪-白花蛇舌草可能调控该轴抑制A549增殖的相关机制。方法：采用慢... 详细信息

目的：从细胞水平探讨特异性蛋白1（Sp1）-MicroRNA-582-3p（miR-582-3p）-细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂（p27）轴过度激活对A549肺腺癌细胞周期、增殖影响，以研究黄芪-白花蛇舌草可能调控该轴抑制A549增殖的相关机制。方法：采用慢病毒质粒转染技术，获得shRNA-Sp1+LV-miR-582-3p mimic、shRNA-Sp1+LV-mNC、shRNA-NC+LV-miR-582-3p mimic、shRNA-NC+LV-mNC的A549四组稳转株。Real-time PCR检测Sp1对A549肺腺癌细胞miR-582-3p表达影响；活性检测-8（CCK-8）、平板克隆形成实验检测Sp1通过miR-582-3p对A549肺腺癌细胞增殖影响；流式细胞术检测Sp1通过miR-582-3p对A549肺腺癌细胞周期影响；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Sp1通过miR-582-3p对A549肺腺癌细胞周期蛋白的影响。CCK-8检测不同浓度（5%、10%、20%、40%、80%）黄芪-白花蛇舌草含药血清对A549细胞活力影响，并筛选出最佳浓度用于后续机制探究。上述转染技术构建oe-Sp1稳转株及对照株oe-NC，RT-PCR检测黄芪-白花蛇舌草对A549肺腺癌细胞miR-582-3p表达影响；WB检测黄芪-白花蛇舌草对A549肺腺癌细胞Sp1、细胞周期依赖性激酶特异性抑制蛋白p27表达影响。结果：与shRNA-NC+LV-mNC组比较，shRNA-Sp1+LV-mNC组miR-582-3p表达明显降低（P＜0.01）；与shRNA-Sp1+LV-mNC组对比，shRNA-Sp1+LV-miR-582-3p mimic组显著逆转miR-582-3p表达（P＜0.01），提示，Sp1对miR-582-3p具有明显调控作用。与shRNA-Sp1+LV-mNC组对比，shRNA-Sp1+LV-miR-582-3p mimic组显著逆转细胞增殖（P＜0.01），提示，miR-582-3p可部分逆转Sp1对A549肺腺癌增殖作用；与shRNA-Sp1+LV-mNC组比较，shRNA-Sp1+LV-miR-582-3p mimic组G0/G1期、S期比例显著升高，G2/M期比例明显降低（P＜0.01），提示，miR-582-3p可部分逆转Sp1对A549细胞周期影响；与shRNA-Sp1+LV-mNC组对比，shRNA-Sp1+LV-miR-582-3p mimic组显著逆转各蛋白水平，即p27的下降与细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖激酶4（CDK4）、细胞周期蛋白E（Cyclin E）、细胞周期蛋白依赖激酶2（CDK2）、磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白（p-Rb）、E2F转录因子3（E2F3）的上调（P＜0.01），提示，miR-582-3p可部分逆转Sp1对A549肺腺癌细胞周期影响。与空白组比较，黄芪-白花蛇舌草含药血清明显抑制A549细胞活力，且呈浓度依赖性，故选用10%黄芪-白花蛇舌草血清干预24h进行后续机制实验。发现，与黄芪-白花蛇舌草＋oe-Vector组对比，黄芪-白花蛇舌草＋oe-Sp1组显著逆转Sp1、miR-582-3p的下调与p27的上调（P＜0.01），提示，Sp1可部分逆转黄芪-白花蛇舌草对A549肺腺癌miR-582-3p、p27水平。结论：Sp1-miR-582-3p-p27轴过度激活显著促进A549肺腺癌细胞增殖，且黄芪-白花蛇舌草对A549肺腺癌细胞增殖的抑制作用，潜在机制可能与其抑制Sp1-miR-582-3p-p27轴过度兴奋有关。

关键词：黄芪-白花蛇舌草 Sp1-miR-582-3p-p27轴 A549肺腺癌细胞周期增殖