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家蝇抗真菌肽-1的cDNA克隆及其编码蛋白序列的生物信息学分析(英文)

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2011年第4期29卷 279-284页

作者：付萍吴建伟国果贵阳医学院寄生虫学教研室贵阳550004

目的克隆家蝇抗真菌肽-1(MAF-1)的cDNA序列并对其编码的蛋白序列进行生物信息学分析。方法根据MAF-1的N端30个氨基酸序列设计简并引物,采用RACE法和巢式PCR技术克隆MAF-1的3′端和5′端cDNA序列,获得MAF-1的cDNA序列和氨基酸序列。根据... 详细信息

目的克隆家蝇抗真菌肽-1(MAF-1)的cDNA序列并对其编码的蛋白序列进行生物信息学分析。方法根据MAF-1的N端30个氨基酸序列设计简并引物,采用RACE法和巢式PCR技术克隆MAF-1的3′端和5′端cDNA序列,获得MAF-1的cDNA序列和氨基酸序列。根据所得MAF-1成熟肽部分的cDNA序列设计引物进行RT-PCR,对序列进行验证并运用生物信息学软件进行分析。结果 MAF-1的3′端cDNA序列长度为568bp,开放阅读框长度为441 bp,编码蛋白序列共147个氨基酸,3′端非编码区127bp。经NCBI中Blast比对未找到同源序列,提示该基因为一全新序列,登录到GenBank,获得登录号HM178948。该基因编码的147个氨基酸加上MAF-1的N端未用来设计引物的9个氨基酸,全长共156个氨基酸。由5′RACE获得139 bp cDNA序列,分析所得MAF-1成熟肽的氨基酸序列与前述一致。RT-PCR结果证实了RACE所得MAF-1序列的正确性。根据生物信息学分析方法对所推导的MAF-1蛋白全长序列进行分析,其理论相对分子质量和等电点均与其实际检测值相近。利用ExPASy的各种分析工具对MAF-1分析得知,该蛋白具有信号肽,富含α螺旋,有3个α螺旋区,亚细胞定位分析其主要分布于细胞核内。利用PredictProtein分析发现,MAF-1序列中有2个蛋白激酶C磷酸化位点、1个N端酰基化位点,并预测MAF-1为非球形蛋白。最后,利用ExPASy中的3D-pssm(Phyre Version0.2)模建了MAF-1的三维空间结构图。结论成功克隆了家蝇抗真菌肽-1(MAF-1)的cDNA序列,获知其编码的氨基酸序列和生物信息学信息。

关键词：家蝇抗真菌肽 RACE cDNA 生物信息学

云南西部两地区HIV阳性者弓形虫感染血清学调查

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第5期30卷 418-418,F0003页

作者：尤英霞李伟申丽洁聂大平大理学院基础医学院寄生虫学教研室大理671000 昆明医学院寄生虫学教研室昆明650500

采集2010年6月～2011年8月云南西部两个地州(大理、德宏)的HIV阳性者(927份)血清和HIV阴性者(80份)血清,用ELISA法检测血清中弓形虫IgG抗体。结果显示,两地区HIV阳性者和HIV阴性者的弓形虫特异性抗体IgG阳性率分别为35.1%(325/927)和23.... 详细信息

采集2010年6月～2011年8月云南西部两个地州(大理、德宏)的HIV阳性者(927份)血清和HIV阴性者(80份)血清,用ELISA法检测血清中弓形虫IgG抗体。结果显示,两地区HIV阳性者和HIV阴性者的弓形虫特异性抗体IgG阳性率分别为35.1%(325/927)和23.8%(19/80)。HIV阳性血清的检测结果显示,德宏州和大理州的阳性率分别为30.3%(178/588)和43.4%(147/339);各民族间的弓形虫IgG阳性率之间的差异有统计学意义(χ2=28.433,P学意义(χ2=4.248,P>0.05),41～60岁阳性率最高(36.1%,103/285);但不同性别间[男性(35.6%,203/571)、女性(34.3%,122/356)]的差异无统计学差异(χ2=0.158,P>0.05)。

关键词： HIV 弓形虫 IgG抗体云南

猪带绦虫重组双歧杆菌（pGEX-TSO45W-4B）疫苗构建及鉴定

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中华地方病学杂志 2014年第6期33卷 591-595页

作者：周必英刘美辰贺莉芳遵义医学院寄生虫学教研室 563003

目的构建和鉴定猪带绦虫重组双歧杆菌（Bb）（pGEX-TSO45W-4B）疫苗.方法通过全基因合成猪带绦虫TSO45W-4B基因,预期该基因中的片段长度为351 bp.将该基因定向克隆到大肠埃希菌-Bb穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B... 详细信息

目的构建和鉴定猪带绦虫重组双歧杆菌（Bb）（pGEX-TSO45W-4B）疫苗.方法通过全基因合成猪带绦虫TSO45W-4B基因,预期该基因中的片段长度为351 bp.将该基因定向克隆到大肠埃希菌-Bb穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-TSO45W-4B,电穿孔法将该质粒导入长双歧杆菌,构建猪带绦虫重组Bb（pGEX-TSO45W-4B）疫苗,通过酶切、PCR和测序进行鉴定,证实猪带绦虫重组Bb （pGEX-TSO45W-4B）疫苗中含有片段长度为351 bp的基因.结果全基因合成351 bp的TSO45W-4B基因片段.酶切、PCR和测序鉴定证明猪带绦虫重组Bb （pGEX-TSO45W-4B）疫苗构建成功,均获得了351 bp基因片段.结论成功构建了猪带绦虫重组Bb （pGEX-TSO45W-4B）疫苗,为该疫苗的表达及免疫原性研究奠定了基础.

关键词：猪带绦虫重组Bb (pGEX-TSO45W-4B)疫苗构建鉴定

ProDer f 1多肽疫苗免疫治疗粉螨性哮喘小鼠的效果

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中国血吸虫病防治杂志 2015年第5期27卷 490-496页

作者：宋红玉段彬彬李朝品皖南医学院医学寄生虫学教研室芜湖241002

目的探讨粉尘螨1类变应原（Pro Der f 1）两种酶解产物（木瓜蛋白酶水解产物、胰蛋白酶水解产物）对过敏性哮喘特异性免疫治疗的效果。方法 50只6~8周龄的SPF雌性小鼠随机分为磷酸盐缓冲液（PBS）组、哮喘组、Pro Der f 1蛋白治疗组、... 详细信息

目的探讨粉尘螨1类变应原（Pro Der f 1）两种酶解产物（木瓜蛋白酶水解产物、胰蛋白酶水解产物）对过敏性哮喘特异性免疫治疗的效果。方法 50只6~8周龄的SPF雌性小鼠随机分为磷酸盐缓冲液（PBS）组、哮喘组、Pro Der f 1蛋白治疗组、木瓜蛋白酶水解产物免疫治疗组和胰蛋白酶水解产物免疫治疗组5组,每组各10只。用纯化的Pro De rf1蛋白于第0、7、14天腹腔注射致敏小鼠,第21天开始雾化吸入激发、连续7 d。各免疫治疗组于第25~27天雾化前30 min分别用Pro De rf1蛋白和其酶解产物进行特异性免疫治疗,PBS组用PBS进行腹腔注射和雾化激发。最后一次雾化激发后24 h内,各组小鼠引颈处死。观察各组小鼠肺组织病理变化,ELISA测定支气管肺泡灌洗液（BALF）和脾细胞培养上清中IL-4、IL-10、IL-17和IFN-γ含量及血清特异性抗体Ig E、Ig G2a水平。结果各免疫治疗组对Pro Der f 1哮喘小鼠进行免疫治疗后,肺组织切片观察表明：酶解产物治疗组和Pro Der f 1蛋白治疗组变态反应性炎症较哮喘组显著减轻,且炎性细胞浸润较哮喘组也显著减少,气道上皮结构与PBS组相近。Pro Der f 1蛋白治疗组、木瓜蛋白酶水解产物免疫治疗组、胰蛋白酶水解产物免疫治疗组和哮喘组小鼠BALF中的IL-4含量分别为（231.61±11.73）、（206.20±14.33）、（200.44±9.34）、（299.68±12.46）pg/ml,IL-10含量分别为（361.87±13.62）、（376.27±20.57）、（413.57±12.98）、（171.28±19.79）pg/ml,IL-17含量为（142.12±5.01）、（128.27±5.34）、（130.79±6.30）、（273.59±11.56）pg/ml,IFN-γ含量为（229.60±11.32）、（269.13±11.98）、（282.25±19.65）、（147.76±11.36）pg/ml;各治疗组和哮喘组小鼠脾细胞分泌因子IL-4含量分别为（218.54±12.62）、（220.21±10.73）、（201.59±18.54）、（256.86±15.53）pg/ml,IL-10含量分别为（360.45±13.10）、（383.41±19.81）、（413.51±13.14）、（173.50±20.25）pg/ml,IL-17含量为（154.23±5.18）、（137.72±6.66）、（141.01±7.35）、（297.55±8.97）pg/ml,IFN-γ含量为（243.22±25.01）、（275.20±14.65）、（284.67±25.87）、（154.54±17.45）pg/ml;各治疗组和哮喘组小鼠血清中Ig E抗体含量分别为（309.66±13.56）、（256.61±40.64）、（248.83±10.51）、（359.60±29.48）μg/ml,Ig G2a抗体含量分别为（8.87±0.82）、（9.15±0.83）、（10.56±1.68）、（7.04±0.42）μg/ml。各免疫治疗组血清抗原特异性Ig E抗体、BALF和脾细胞分泌的IL-4、IL-17均比哮喘组低;血清抗原特异性抗体Ig G2a、BALF和脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-10含量均比哮喘组高。结论应用上述两种蛋白酶水解产物对小鼠哮喘模型进行特异性免疫治疗,可有效改善由Pro Der f 1蛋白致敏的小鼠变态反应性气道及肺部炎症。

关键词：粉尘螨 Pro Der f 1蛋白水解哮喘免疫治疗

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日本血蜱的二倍体与三倍体核型

畜牧兽医学报 1989年第4期20卷 343-348页

作者：周洪福孟阳春田庆云苏州医学院寄生虫学教研室山西医学院寄生虫学教研室

以日本血蜱卵早期胚细胞为材料,气干法制片,Giemsa染色制备染色体标本,首次证明:日本血蜱的有丝分裂核型为2n=22(20+XY)和2n=22(20+XX);性别决定属于XY—XX遗传系统;并发现三倍体(3n=33)。雌性核型中含1对X-染色体,雄性核型含1条X-和1... 详细信息

以日本血蜱卵早期胚细胞为材料,气干法制片,Giemsa染色制备染色体标本,首次证明:日本血蜱的有丝分裂核型为2n=22(20+XY)和2n=22(20+XX);性别决定属于XY—XX遗传系统;并发现三倍体(3n=33)。雌性核型中含1对X-染色体,雄性核型含1条X-和1条Y-性染色体。X-染色体最长,占单倍体总长度的20.8±1.8％,Y-染色体次长,约为X-染色体长之68.7％,明显长于其余10对常染色体。据本实验结果,与前人报道的该雄蜱减数分裂含21条染色体进行讨论。

关键词：日本血蜱染色体二倍体三倍体

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保护性免疫大鼠结支睾吸虫后吡喹酮化疗效果

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2000年第2期18卷 98-102页

作者： Quan,FS Lee,JS 高丽大学医学院寄生虫学教研室

目的研究吡喹酮与宿主保护性对华支睾吸虫感染的协同作用。方法用粗成虫抗原９ＡＷＡｇ）和排泄分泌抗的（ＥＳＡｇ）免疫大鼠或感染２０条华支睾吸虫囊蚴获得保护性免疫，用５０俱结支睾吸虫囊蚴感染大鼠，用亚致死量吡喹酮（５０... 详细信息

目的研究吡喹酮与宿主保护性对华支睾吸虫感染的协同作用。方法用粗成虫抗原９ＡＷＡｇ）和排泄分泌抗的（ＥＳＡｇ）免疫大鼠或感染２０条华支睾吸虫囊蚴获得保护性免疫，用５０俱结支睾吸虫囊蚴感染大鼠，用亚致死量吡喹酮（５０ｍｇ／ｋｇ）治疗，以回收虫体数观察疗效。统计学上显著性差异用ＰＣ－ＳＡＳ系统的ＡＮＯＶＡ和ＮｐａｒｌｗａｙＫｒｕｓｋａｌ－Ｗａｌｌｉｓ检验法。结果（１）在对照组，ＥＳＡｇ免疫接

关键词：华支睾吸虫吡喹酮化疗效果保护性免疫

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弓形虫表膜主要分子抗原的免疫印迹分析

中国人兽共患病杂志 1993年第4期9卷 2-4页

作者：沈继龙夏惠马济宏蚌埠医学院寄生虫学教研室南通医学院寄生虫学教研室

本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(immunoblotting)和A蛋白酶联免疫吸附试验(SPA-ELISA)对弓形虫RH株速殖子表膜进行了免疫化学研究,结果见到,膜组分较其他组分抗原用于血清学诊断具有更高的敏感性。分子量分别为30KD和6... 详细信息

本文采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(immunoblotting)和A蛋白酶联免疫吸附试验(SPA-ELISA)对弓形虫RH株速殖子表膜进行了免疫化学研究,结果见到,膜组分较其他组分抗原用于血清学诊断具有更高的敏感性。分子量分别为30KD和6.5KD的膜蛋白为速殖子表膜主要抗原。它们在膜组分中含量甚微,但具有很强的免疫反应性,其中6.5KD抗原仅见于膜组分而未见于分泌排泄抗原中。

关键词：免疫印迹抗原弓形体虫体表膜

间日疟原虫海南分离株乳酸脱氢酶基因的克隆与序列分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2010年第1期28卷 72-74页

作者：吕刚李静晶赵世勇芦亚君范志刚海南医学院寄生虫学教研室

用PCR扩增间日疟原虫海南分离株基因组DNA中乳酸脱氢酶(LDH)全长基因,命名为PvLDH/HN(GenBank登录号为FJ527750)。生物信息学分析表明,PvLDH/HN全长951bp,编码316个氨基酸残基,与间日疟原虫SalvadorI株、Belem株LDH等分离株核苷酸序列... 详细信息

用PCR扩增间日疟原虫海南分离株基因组DNA中乳酸脱氢酶(LDH)全长基因,命名为PvLDH/HN(GenBank登录号为FJ527750)。生物信息学分析表明,PvLDH/HN全长951bp,编码316个氨基酸残基,与间日疟原虫SalvadorI株、Belem株LDH等分离株核苷酸序列同源性均为99.89%(950/951),氨基酸序列同源性均为100%(316/316)。拓扑结构分析显示,该蛋白具有2个α螺旋跨膜区域,可能是膜蛋白。三级结构模型显示主要抗原表位82～95aa位于蛋白表面,构成特异性底物结合环,提示该位点是可能的药物作用靶点及免疫诊断抗原表位。

关键词：间日疟原虫乳酸脱氢酶克隆序列分析

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人芽囊原虫形态学的观察

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1998年第2期16卷 124-125页

作者：乔继英薛弘燮吐尔逊艾新疆医学院寄生虫学教研室

目的：观察人芽囊原虫的不同形态。方法：用生理盐水涂片、碘液染色和苏木素染色法对西藏阿里地区和新疆地区的小学生与腹泻病人肠道内人芽囊原虫进行调查。结果：发现人芽囊原虫形态多变，有空泡型、颗粒型、变形型和二分裂法生殖。结... 详细信息

目的：观察人芽囊原虫的不同形态。方法：用生理盐水涂片、碘液染色和苏木素染色法对西藏阿里地区和新疆地区的小学生与腹泻病人肠道内人芽囊原虫进行调查。结果：发现人芽囊原虫形态多变，有空泡型、颗粒型、变形型和二分裂法生殖。结论：人芽囊原虫在肠道中可出现多种形态，但以空泡型为最常见占８４％，易与结肠内阿米巴和其它非致病阿米巴合并感染，且与患者的腹泻有一定关系。

关键词：人牙囊原虫形态学肠道原虫