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金龟子绿僵菌对棉花枯萎病菌的拮抗作用研究

棉花学报 2010年第6期22卷 591-596页

作者：齐永霞陈方新李增智安徽农业大学植物保护学院合肥230036 安徽农业大学微生物防治省重点实验室合肥230036

在实验室条件下,研究了虫生真菌金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)对棉花枯萎病菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporium ***)的拮抗作用及其机制。对峙培养结果表明,金龟子绿僵菌的3个供试菌株对3株枯萎病菌均有抑制作用,其中以Ma55抑制... 详细信息

在实验室条件下,研究了虫生真菌金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)对棉花枯萎病菌尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporium ***)的拮抗作用及其机制。对峙培养结果表明,金龟子绿僵菌的3个供试菌株对3株枯萎病菌均有抑制作用,其中以Ma55抑制效果最好。在培养基中加入Ma55不同浓度的孢子悬浮液,当浓度为3.25×106 ***-1时,5 d后,对3株枯萎病菌菌丝生长的抑制率均超过70%。Ma55液体振荡培养20 d获得的无菌发酵液对3个枯萎病菌菌株菌丝生长的抑制率分别达到59.86%、56.99%和57.09%,对它们的分生孢子产生及分生孢子萌发也都具有显著的抑制作用。显微镜观察未发现金龟子绿僵菌与棉花枯萎病菌菌丝间有重寄生现象。上述结果显示,金龟子绿僵菌对供试棉花枯萎病菌的拮抗机制主要是营养竞争、空间竞争及抗生作用。

关键词：金龟子绿僵菌棉花枯萎病菌拮抗竞争抗生

转录组分析罗伯茨绿僵菌精胺合成酶MrSPS介导真菌血腔定殖功能

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微生物学通报 2022年第10期49卷 4118-4133页

作者：李心怡王凯陈浩然万荣杰黄勃王玉龙安徽农业大学安徽省微生物防治重点实验室安徽合肥230036

【背景】精胺在植物应对逆境胁迫、动物抵抗疲劳和衰老、真菌生长代谢等过程中发挥重要作用,但目前在昆虫病原真菌中的研究未见报道。【目的】在分子水平上探究罗伯茨绿僵菌精胺合成关键酶——精胺合成酶在昆虫血腔定殖中的作用机制。... 详细信息

【背景】精胺在植物应对逆境胁迫、动物抵抗疲劳和衰老、真菌生长代谢等过程中发挥重要作用,但目前在昆虫病原真菌中的研究未见报道。【目的】在分子水平上探究罗伯茨绿僵菌精胺合成关键酶——精胺合成酶在昆虫血腔定殖中的作用机制。【方法】显微注射法测定Mrsps敲除株ΔMrsps的致病力变化,并观察血腔中ΔMrsps生长状态;收集ΔMrsps和野生型WT注射侵染30 h后的大蜡螟血淋巴进行转录组测序,分别与罗伯茨绿僵菌和大蜡螟参考基因组进行比对分析,并结合定量PCR进行验证。【结果】与WT和回补株ΔMrsps-cp相比较,ΔMrsps致病力显著下降,而且随着注射浓度的降低,ΔMrsps致病力下降越显著。侵染36 h后WT和ΔMrsps孢子都能正常萌发且开始以类酵母状态生长,60 h后,相较于WT,ΔMrsps的生长繁殖数量较少。转录组共检测到3202个罗伯茨绿僵菌基因,其中1769个基因在ΔMrsps中表达上调,922个基因表达下调;差异表达基因涉及碳水化合物代谢、运输、分解代谢、翻译和氨基酸代谢等多条途径;筛选出28个血腔致病相关基因全部在ΔMrsps中表达下调;定量PCR检测发现在整个血腔定殖阶段免疫逃避蛋白Mcl1基因和血腔定殖Colonization of hemocoel 1基因在WT和ΔMrsps-cp中的表达量高于ΔMrsps。共检测到13249个大蜡螟基因,其中4026个差异表达基因;KEGG注释分析显示大量差异表达基因富集到内分泌系统和免疫系统等途径;深入分析发现22个差异表达基因归属于Toll和Imd信号通路,其中18个基因在ΔMrsps侵染的大蜡螟中表达上调,表明ΔMrsps侵染大蜡螟过程中更易引起免疫系统的激活。【结论】揭示了Mrsps在罗伯茨绿僵菌血腔定殖阶段作用的分子机制,为进一步揭示精胺在真菌中的作用机理提供了理论基础。

关键词：转录组罗伯茨绿僵菌精胺合成酶血腔定殖

桑天牛对补充营养寄主的选择性及诱杀药剂筛选

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应用昆虫学报 2013年第4期50卷 1109-1114页

作者：唐燕平丁玉洲王同生谢菲苏远达张龙娃安徽农业大学安徽省微生物防治重点实验室合肥230036

桑天牛Apriona germari(Hope)对补充营养植物的偏好性引起了诸多学者的广泛关注。利用天牛对寄主植物的选择性,开发植物源引诱剂对于天牛的控制具有重要意义。作为植物源引诱剂开发的一个基础工作,本论文研究选择3种主要寄主植物(构树... 详细信息

桑天牛Apriona germari(Hope)对补充营养植物的偏好性引起了诸多学者的广泛关注。利用天牛对寄主植物的选择性,开发植物源引诱剂对于天牛的控制具有重要意义。作为植物源引诱剂开发的一个基础工作,本论文研究选择3种主要寄主植物(构树、桑树和杨树)进行桑天牛成虫选择性与取食量的研究;研究显示,构树(Broussonetia parpyrifera(L.)Vent)、桑树(Morus alba L.)和杨树(Populus×canadensis Moench)引诱桑天牛成虫补充营养频率存在显著差异(F=118.9,P植物取食量存在显著差异(F=14.7,P防治率为100%;绿色威雷喷雾防治桑天牛成虫杀虫作用迅速,150 min内成虫全部死亡,防治效果达100%。上述两种药剂可以作为桑天牛成虫诱集捕杀的候选药剂在生产实践中加以应用。

关键词：桑天牛取食频次取食量虫线清乳油绿色威雷防治效果

白僵菌抗多菌灵突变株的诱变及生物学特性研究

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核农学报 2012年第1期26卷 68-72页

作者：齐永霞陈方新李增智安徽农业大学植物保护学院安徽合肥230036 安徽农业大学微生物防治重点实验室安徽合肥230036

采用菌丝生长速率法测定了球孢白僵菌对多菌灵的敏感性和最低完全抑制浓度(MIC)。结果显示,在供试的球孢白僵菌菌株中,Bb06菌株对多菌灵最敏感,其EC50值为1.0688μg/ml,多菌灵对球孢白僵菌菌丝生长的MIC为9μg/ml。通过菌丝块诱变法和... 详细信息

采用菌丝生长速率法测定了球孢白僵菌对多菌灵的敏感性和最低完全抑制浓度(MIC)。结果显示,在供试的球孢白僵菌菌株中,Bb06菌株对多菌灵最敏感,其EC50值为1.0688μg/ml,多菌灵对球孢白僵菌菌丝生长的MIC为9μg/ml。通过菌丝块诱变法和分生孢子诱变法获得球孢白僵菌抗多菌灵突变株,并测定球孢白僵菌不同抗性突变株对多菌灵的抗性水平。结果表明,在抗性突变株中,BC-4菌株的EC50值最大,为258.7711,对多菌灵的抗性水平最高,达到242.11;BC-3菌株的EC50值最小,为18.6311,抗性水平最低。同时对球孢白僵菌抗多菌灵突变株的菌丝生长速率和产孢能力差异的研究表明,Bb06菌株(亲本菌株)的生长速率最大,为1.78mm/d,BC-8菌株的生长速率最小,为1.41mm/d。球孢白僵菌不同抗性突变株的产孢能力均比对照敏感菌株强,但不同菌株间存在一定差异,在抗性突变株中,BC-4菌株的分生孢子产生量最大。

关键词：球孢白僵菌抗多菌灵诱变生物学特性抗性水平

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昆虫病原真菌对梨网蝽防治潜力的室内评测

中国生物防治学报 2015年第6期31卷 853-859页

作者：侯明明刘义豪王滨安徽农业大学微生物防治省重点实验室合肥230036

梨网蝽Stephanitis nashi是多种果树和园林植物上的重要害虫,在长江流域、华北地区为害严重。梨网蝽发生世代多,易产生抗药性,筛选出能替代化学农药的生物控制因子,是对梨网蝽实现有效可持续控制的重要手段。本文通过菌株筛选平台,挑选... 详细信息

梨网蝽Stephanitis nashi是多种果树和园林植物上的重要害虫,在长江流域、华北地区为害严重。梨网蝽发生世代多,易产生抗药性,筛选出能替代化学农药的生物控制因子,是对梨网蝽实现有效可持续控制的重要手段。本文通过菌株筛选平台,挑选出产孢较好的15株昆虫病原真菌,用喷雾法测定其对梨网蝽成虫和若虫致病力的差异。在1.0×106孢子/m L孢子悬浮液接种后,菌株Bb2359等6株球孢白僵菌和1株金龟子绿僵菌Ma67对梨网蝽成、若虫累积死亡率均达到100%,其中菌株Bb2352、Bb2359、Bb2372等对成虫的LT50小于4 d,而菌株Bb2352、Bb2359、Ma67对2龄若虫的LT50均在5 d以内,LT50显示菌株对成虫的致死速度要快于对若虫的致死速度。在时间-剂量-死亡模型研究中,梨网蝽成、若虫在接种后的第3 d到第7 d,累积死亡率均呈直线快速上升趋势,而在前后均变化平缓。同时,各菌株均表现出明显的死亡率随接种浓度增高而不断增高的剂量效应。菌株Bb2359对梨网蝽成虫、若虫均显示出很高的毒力水平,致死中浓度LC50分别为6.466×104和4.747×104孢子/m L;在1.0×107孢子/m L浓度下致死中时LT50分别为2.89和3.54 d。该菌株具备高效快速的杀虫特点,具有开发为真菌生物农药的巨大潜力。

关键词：梨网蝽成虫若虫昆虫病原真菌生物测定

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引起蜘蛛流行病的紫色野村菌种群异质性

菌物学报 2010年第1期29卷 37-43页

作者：周娜陈名君黄勃李增智安徽农业大学微生物防治省重点实验室合肥230036

应用ISSR分子标记对安徽琅琊山自然保护区和牯牛降自然风景区引起蜘蛛流行病的紫色野村菌Nomuraea atypicola遗传多样性进行了研究。筛出的9个ISSR引物共扩增出117条带,多态性比率高达94%。ISSR扩增结果显示:22株紫色野村菌之间的遗传... 详细信息

应用ISSR分子标记对安徽琅琊山自然保护区和牯牛降自然风景区引起蜘蛛流行病的紫色野村菌Nomuraea atypicola遗传多样性进行了研究。筛出的9个ISSR引物共扩增出117条带,多态性比率高达94%。ISSR扩增结果显示:22株紫色野村菌之间的遗传分化较大,Jaccard遗传相似系数为0.48-0.88,平均为0.71。UPGMA方法构建的系统树表明,在遗传相似系数0.60处,22株紫色野村菌按照两个自然保护区明显分为2大类群。第一大类是分离自琅琊山不同蜘蛛的10株菌株,其种群内平均遗传相似系数为0.74。第二大类是采自牯牛降不同蜘蛛的12株菌株,其种群内平均遗传相似系数为0.76。种群内的遗传相似性虽高于种群间的遗传相似性,但未见两株菌株的ISSR指纹图谱相同或高度相似。这表明,不管是在琅琊山还是在牯牛降,紫色野村菌的两个种群均无优势的流行菌株。两地的蜘蛛流行病都是由高度异质的紫色野村菌种群造成的。紫色野村菌的菌株遗传相似性和地理来源相关而和寄主无关。

关键词：蛛生真菌虫生真菌分子标记 ISSR 遗传多样性

用于防治假眼小绿叶蝉的爪哇棒束孢可湿性粉剂的研制

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中国生物防治学报 2014年第1期30卷 51-57页

作者：陈名张大敏彭凡李增智安徽农业大学微生物防治省重点实验室合肥230036

由于对刺吸式口器昆虫的独特侵染方式，真菌杀虫剂对防治茶树重要害虫假眼小绿叶蝉极具潜力，但迄今产品极少。本研究研制出对该叶蝉有高毒力的爪哇棒束孢可湿性粉剂，筛选出的助剂对孢子活力均无显著影响，物理性状为最佳。从4种载体... 详细信息

由于对刺吸式口器昆虫的独特侵染方式，真菌杀虫剂对防治茶树重要害虫假眼小绿叶蝉极具潜力，但迄今产品极少。本研究研制出对该叶蝉有高毒力的爪哇棒束孢可湿性粉剂，筛选出的助剂对孢子活力均无显著影响，物理性状为最佳。从4种载体中筛选出入水3～5 s即湿润的惰性载体海泡石，从12种湿润剂中筛选出湿润时间仅3 s的湿润剂A，从7种分散剂中筛选出悬浮率达94.9%的分散剂B，以及从2种紫外保护剂中筛选出对孢子保护率可达76.2%的荧光素钠。最后确定的配方为分生孢子粉（1011孢子/g）10%，湿润剂A 3%，分散剂B 5%，紫外保护剂荧光素钠1%，抗氧化剂C 0.5%，以海泡石作为载体补足到100%。该剂型在室温下储藏7个月后，孢子的萌发率仍达55.7%，极显著高于未制剂的分生孢子的4.9%。室内生物测定结果显示制剂对假眼小绿叶蝉的侵染死亡率达到100%。

关键词：茶小绿叶蝉爪哇棒束孢可湿性粉剂助剂生物防治

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球孢白僵菌对两种植物病原镰孢的拮抗作用

中国生物防治学报 2011年第3期27卷 349-356页

作者：张胜利李增智安徽农业大学微生物防治省重点实验室合肥230036

体外测定了球孢白僵菌Beauveria bassiana对两种棉花病原镰孢——棉花枯萎病菌Fusarium oxysporium ***和棉花红腐病菌Fusarium verticillioides的拮抗作用。平板对峙培养时,两种镰孢的生长均受到明显抑制。不同含孢量的球孢白僵菌对两... 详细信息

体外测定了球孢白僵菌Beauveria bassiana对两种棉花病原镰孢——棉花枯萎病菌Fusarium oxysporium ***和棉花红腐病菌Fusarium verticillioides的拮抗作用。平板对峙培养时,两种镰孢的生长均受到明显抑制。不同含孢量的球孢白僵菌对两种镰孢的抑制效果不同,且抑制率与孢子浓度成显著的线性量效关系;在接种量为6×107孢子.mL-1时,对两种菌的抑制率均达到90%以上,对红腐病菌的抑制率稍高。白僵菌代谢液对两种植物病原菌也表现出抑菌作用,并且抑制率与代谢液浓度呈显著的线性量效关系。综上述,球孢白僵菌对两种镰孢拮抗作用的机制主要涉及营养和空间竞争以及抗生作用,其中抗生作用对拮抗作用的贡献更大。对抗生性代谢液的初步分析发现,醇沉后的上清液冻干粉经4种有机溶剂浸提后,无明显的抑菌作用;而向培养基中添加球孢白僵菌多糖和蛋白粗提物均能显著抑制两种镰孢菌的菌丝生长。因此,抑菌活性物质主要是大分子的多糖和蛋白。

关键词：棉花枯萎病棉花红腐病球孢白僵菌拮抗多糖蛋白质

SlSnRK1.2调控番茄抗灰霉病功能分析

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中国农业科学 2024年第21期57卷 4238-4247页

作者：李杰梁郅林孙燕檀根甲怀宝玉安徽农业大学植物保护学院/作物有害生物综合治理安徽省重点实验室

【背景】由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）侵染番茄（Solanum lycopersicum）引起的灰霉病严重威胁番茄生产。植物蔗糖非发酵-1-相关蛋白激酶-1(sucrose non-fermenting-1-related protein kinase 1,SnRK1)参与多种植物对生物胁迫和非生物胁迫响应的调控，然而，番茄SnRK1是否参与对灰霉病抗性未见报道。【目的】以灰葡萄孢侵染番茄过程中上调表达的SlSnRK1.2为研究对象，克隆并分析其调控灰霉病抗性功能，为番茄灰霉病防治提供理论依据和基因资源。【方法】采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)技术，分析SlSnRK1.2在灰葡萄孢侵染番茄过程中以及在番茄不同组织中的表达模式；利用农杆菌介导的瞬时表达技术分析SlSnRK1.2的亚细胞定位情况；借助烟草脆裂病毒（tobacco rattle virus,TRV）介导的基因沉默技术（virus induced gene silencing,VIGS）构建SlSnRK1.2沉默植株，初步分析SlSnRK1.2在番茄与灰葡萄孢互作过程中的作用；利用农杆菌介导的番茄遗传转化体系创制SlSnRK1.2过表达植株，进一步明确SlSnRK1.2在调控番茄对灰霉病抗性中的作用；利用TRV-VIGS技术构建SlSnRK1.2同源基因NbSnRK1.2的沉默植株，分析NbSnRK1.2在烟草与灰葡萄孢互作中的作用。【结果】以Micro-Tom为材料，利用qRT-PCR技术明确SlSnRK1.2的转录表达显著受到灰葡萄孢侵染诱导；亚细胞定位结果显示SlSnRK1.2定位于细胞质和细胞核；qRT-PCR分析表明，SlSnRK1.2在番茄的根、茎、幼嫩叶片、成熟叶片、花蕾和花中均有表达，在茎部的表达量最高；瞬时沉默SlSnRK1.2减弱番茄对灰霉病的抗性，过表达SlSnRK1.2增强番茄对灰霉病的抗性；在此基础上，瞬时沉默SlSnRK1.2的同源基因NbSnRK1.2减弱烟草对灰霉病的抗性。【结论】SlSnRK1.2正调控番茄对灰霉病的抗性，可作为番茄抗灰霉病分子育种的基因资源。

关键词：番茄灰霉病灰葡萄孢 SlSnRK1.2 抗病性病毒介导的基因沉默