检索结果-南通市图书馆

桔梗DXS基因的原核表达、亚细胞定位和酶活性分析

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药学学报 2023年第4期58卷 1059-1068页

作者：董楠余函纹刘梦丽李景陈博文常相伟王举涛查良平桂双英安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 安徽省中医药科学院药物制剂研究所安徽合肥230012 现代药物制剂安徽省教育厅工程技术研究中心安徽合肥230012 药物制剂技术与应用安徽省重点实验室安徽合肥230012

1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶(1-deoxy-D-xylulose-5-phosphatesynthase,DXS)是甲基赤藓醇磷酸(2-methyl-D-erythritol-4-phosphate,MEP)途径中催化3-磷酸甘油醛和丙酮酸缩合生成1-脱氧-木酮糖-5-磷酸(DXP)的第一个关键酶。本研究通过反转录·聚合酶链反应(RT-PCR)从桔梗根中克隆得到PgDXS1、PgDXS2、PgDXS3基因,开放阅读框(ORF)全长分别为2160、2208和2151 bp,分别编码719、735、716个氨基酸,同源氨基酸序列分析表明桔梗与橡胶树、曼陀罗及甜菊的DXS基因编码的氨基酸序列具有较高同源性;进一步构建原核表达载体pET-28a-PgDXSs,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,成功诱导3个DXS蛋白的表达。亚细胞定位结果显示,PgDXS1和PgDXS2蛋白主要定位于叶绿体中,PgDXS3蛋白定位于叶绿体、细胞核和细胞质中。运用实时荧光定量PCR检测3个DXS基因在2个产区不同组织中的表达水平,结果表明3个DXS基因均在太和桔梗叶中高表达。在茉莉酸甲酯(MeJA)诱导处理下,PgDXS1、PgDXS2、PgDXS3基因表达水平在不同诱导的时间点(3~48 h)呈现先降低后增高的趋势;酶活性检测结果显示:桔梗的3个组织中DXS酶活性在MeJA处理后不同的时间点也呈现先增加后降低的趋势。本研究为进一步阐明桔梗中萜类化合物合成途径PgDXS基因的生物学功能提供参考。

关键词：桔梗 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶基因克隆原核表达亚细胞定位酶活性分析

青藤碱原位液晶作为液体栓塞剂的流变特性研究

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中国中药杂志 2018年第12期43卷 2522-2530页

作者：曹娇娇黄洁桂双英李争光李倩章勇王邢琦储晓琴安徽中医药大学药学院安徽合肥230012 安徽省中医药科学院药物制剂研究所安徽合肥230012

制备3种不同处方的青藤碱原位液晶,并考察其原位前后的流变学性质,评价其用于栓塞的可行性。采用锥板夹具进行流变学实验,分别进行稳态流变学和非稳态流变学性质研究,并比较其原位前后的流变学性质差异。稳态流变学结果显示3种液体栓塞... 详细信息

制备3种不同处方的青藤碱原位液晶,并考察其原位前后的流变学性质,评价其用于栓塞的可行性。采用锥板夹具进行流变学实验,分别进行稳态流变学和非稳态流变学性质研究,并比较其原位前后的流变学性质差异。稳态流变学结果显示3种液体栓塞剂原位前后均为剪切变稀的非牛顿流体,原位前后黏度相差2-5个数量级;并具有一定的屈服值,原位前约10 Pa,原位后约4 500 Pa;各体系均有一定触变性,动力黏度基本不受剪切速率的影响,原位前均小于0.3 Pa·s,原位后大于1Pa·s,原位前后相差1个数量级;温度扫描结果显示在10-50℃各体系黏度均略有下降,但下降速率基本不变,原位前后黏度相差1-3个数量级。非稳态流变学结果显示原位前无明显线性黏弹区,表现为液体的性质;原位后线性黏弹区范围为应变γG＇,体系黏性占优势,在高频下G＇〉G″,体系弹性占优势,复合黏度的测试结果从侧面证实了该液体栓塞剂原位后可形成立方液晶（3号原位后在此条件下结构被破坏）。该实验采用DHR-2流变仪进行流变学性质研究,方法简单,结果可靠,可为产品的体外评价和实际应用提供更多理论参考。

关键词：青藤碱液体栓塞剂流变学原位液晶黏度

玻璃体注射用秦皮甲素微球的处方及制备工艺优化

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中国药学杂志 2022年第9期57卷 729-735页

作者：罗芮雷芳费清松何宁安徽中医药大学药剂系合肥230012 安徽省中医药科学院药物制剂研究所合肥230012 安徽省药物制剂技术与应用重点实验室合肥230012 安徽省教育厅现代药物制剂工程技术研究中心合肥230012

目的研究玻璃体注射用秦皮甲素微球的制备工艺并对其进行优化。方法以秦皮甲素为模型药物,壳聚糖为载体材料,采用乳化交联法制备秦皮甲素微球,在单因素考察的基础上,通过星点设计进行处方工艺优化,从而得到秦皮甲素微球最佳制备条件。... 详细信息

目的研究玻璃体注射用秦皮甲素微球的制备工艺并对其进行优化。方法以秦皮甲素为模型药物,壳聚糖为载体材料,采用乳化交联法制备秦皮甲素微球,在单因素考察的基础上,通过星点设计进行处方工艺优化,从而得到秦皮甲素微球最佳制备条件。结果制备所得秦皮甲素微球呈淡黄色粉末状态,外观圆整,能均匀分散于5 mg·mL^(-1)的羧甲基纤维素钠溶液中,其载药量为8.03%,包封率为93.03%,平均粒径为4.81μm。结论本研究制备得到的秦皮甲素微球具有较佳的载药量和包封率,且粒径符合玻璃体注射要求,可为黄斑病变的治疗提供新的剂型。

关键词：秦皮甲素壳聚糖微球乳化交联法星点设计-响应面优化法

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液晶纳米粒作为药物载体的研究进展

中国药学杂志 2018年第7期53卷 485-489页

作者：单倩倩桂志萍桂双英安徽中医药大学合肥230012 安徽省中医药科学院药物制剂研究所合肥230012

液晶纳米粒是由一定浓度的两亲性脂质在水中自组装分散形成的纳米粒,具有生物相容性高、生物黏附性好、载药量大等优点,其独特内部结构能够包封不同性质的药物,适合多种给药途径。液晶纳米粒作为一种新型药物载体在药物递送方面显示出... 详细信息

液晶纳米粒是由一定浓度的两亲性脂质在水中自组装分散形成的纳米粒,具有生物相容性高、生物黏附性好、载药量大等优点,其独特内部结构能够包封不同性质的药物,适合多种给药途径。液晶纳米粒作为一种新型药物载体在药物递送方面显示出广阔的应用前景。笔者对液晶纳米粒的形成,制备工艺,表征及其作为载药体的应用予以归纳和总结,为液晶纳米粒的进一步研究提供参考。

关键词：两亲性脂质立方液晶纳米粒六角液晶纳米粒制备工艺药物载体

甘油单油酸酯溶致液晶作为药物载体的研究进展

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中国药学杂志 2018年第9期53卷 671-674页

作者：宛君桂双英杨转转杨晔安徽中医药大学合肥230012 安徽省中医药科学院药物制剂研究所合肥230012

从溶致液晶的形成、结构特点以及在药物载体领域中的应用做归纳总结,分析其作为药物载体的优势、前景及存在的问题,重点对添加物对甘油单油酸酯溶致液晶形成及结构的影响进行讨论,为进一步研究溶致液晶载药系统提供参考。

关键词：甘油单油酸酯立方相液晶六角相液晶添加物药物载体

黄连粗多糖协同小檗碱改善溃疡性结肠炎肠黏膜屏障损伤的作用

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中国实验方剂学杂志 2022年第13期28卷 71-76页

作者：薛明松郑玉玉张宇峰陶全杨晔尹登科安徽中医药大学药学院合肥230012 安徽省中医药科学院药物制剂研究所合肥230012 中药研究与开发安徽省重点实验室合肥230012

目的:考察黄连粗多糖与小檗碱在溃疡性结肠炎小鼠治疗中的协同作用。方法:采用雄性BALB/c小鼠30只随机分为5组,除正常组6只外,其余在小鼠日常饮水中给予5%葡聚糖硫酸钠建立结肠炎模型。建模成功后,每组分别进行灌胃给药4 d,每日1次,小... 详细信息

目的:考察黄连粗多糖与小檗碱在溃疡性结肠炎小鼠治疗中的协同作用。方法:采用雄性BALB/c小鼠30只随机分为5组,除正常组6只外,其余在小鼠日常饮水中给予5%葡聚糖硫酸钠建立结肠炎模型。建模成功后,每组分别进行灌胃给药4 d,每日1次,小檗碱组(100 mg·kg^(-1)BBR)、小檗碱+低剂量粗多糖组(100 mg·kg^(-1)BBR+22.8 mg·kg^(-1)CCP)、小檗碱+高剂量粗多糖组(100 mg·kg^(-1)BBR+45.6 mg·kg^(-1)CCP),模型组和正常组灌胃同体积生理盐水。实验结束后处死小鼠提取结肠,通过蛋白免疫印迹法检测小鼠结肠组织紧密连接闭锁连接蛋白-1(ZO-1)、紧密连接蛋白-1(Claudin-1)和闭合蛋白(Occludin)蛋白的表达。以正常组为对照,评价各治疗组模型小鼠疾病活动指数(DAI)评分、结肠长度、结肠组织形态和结肠紧密连接蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠ZO-1、Claudin-1和Occludin蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,小檗碱组Claudin-1蛋白表达无明显差异,ZO-1和Occludin蛋白表达显著升高(P<0.01),黄连粗多糖联合小檗碱组Claudin-1、ZO-1和Occludin蛋白表达显著升高(P<0.01);与小檗碱组比较,黄连粗多糖联合小檗碱组紧密连接蛋白表达明显强于小檗碱单独给药(P<0.05)。结论:黄连粗多糖协同小檗碱给药能有效改善溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜屏障损伤。

关键词：黄连粗多糖小檗碱结肠炎紧密连接蛋白

壳聚糖纳米粒对小檗碱经Caco-2细胞单层膜转运的影响研究

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中国新药杂志 2018年第6期27卷 708-713页

作者：袁秀妍徐慧慧邵福平尹登科杨晔安徽中医药大学药学院合肥230012 安徽省中医药科学院药物制剂研究所合肥230012

目的:考察壳聚糖纳米粒对难吸收药物小檗碱经Caco-2细胞转运与吸收的影响。方法:采用离子凝胶法制备壳聚糖纳米粒,根据跨膜电阻和荧光素透过率验证Caco-2细胞模型的完整性,利用MTT法确定壳聚糖纳米粒和小檗碱在Caco-2细胞单层模型的合... 详细信息

目的:考察壳聚糖纳米粒对难吸收药物小檗碱经Caco-2细胞转运与吸收的影响。方法:采用离子凝胶法制备壳聚糖纳米粒,根据跨膜电阻和荧光素透过率验证Caco-2细胞模型的完整性,利用MTT法确定壳聚糖纳米粒和小檗碱在Caco-2细胞单层模型的合适浓度,采用高效液相色谱测定小檗碱含量,以计算小檗碱的表观渗透系数(apparent permeability coefficients,P_(app))。结果:壳聚糖纳米粒粒径为(577.07±14.89)nm,电位(24.7±0.8)mV。所建Caco-2细胞模型完整性与紧密性良好。以10μg·mL^(-1)壳聚糖纳米粒和10μg·mL^(-1)小檗碱进行细胞转运和摄取实验。纳米粒子组P_(app)(AP→BL)和P_(app)(BL→AP)分别为1.67×10^(-6)和1.48×10^(-6)cm·s^(-1);不加纳米粒子组P_(app)(AP→BL)和P_(app)(BL→AP)分别为0.55×10^(-6)和1.67×10^(-6)cm·s^(-1)。纳米粒子组AP→BL和BL→AP药物摄入量分别为(0.617 5±0.052 7)和(0.529 2±0.025 0)mg·g^(-1);不加纳米粒子组AP→BL和BL→AP药物摄入量为(0.604 7±0.061 6)和(0.406 3±0.075 6)mg·g^(-1)。结论:壳聚糖纳米粒有利于小檗碱在细胞AP→BL的转运,但不影响BL→AP的转运,这可能因为纳米粒吸附在细胞膜上,扰乱了细胞膜的稳定性,激活了膜上的离子通道或蛋白转运体,使小檗碱容易透过。

关键词：壳聚糖纳米粒小檗碱 Caco-2细胞表观渗透系数

多花黄精产吲哚乙酸内生菌的分离筛选及其对黄精种子萌发的影响

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生物技术通报 2022年第12期38卷 223-232页

作者：杜佳慧徐伟芳杨晓冬谭松尹登科刘园旭安徽中医药大学药学院合肥230012 安徽省中医药科学院药物制剂研究所合肥230012 中药研究与开发安徽省重点实验室合肥230012

从健康多花黄精根部分离筛选对黄精种子萌发具促生作用的内生细菌,以期为解决黄精资源短缺问题奠定理论基础。采用传统组织培养法分离纯化内生菌,沙尔科夫斯基反应(Salkowski法)筛选产IAA能力的促生菌;通过形态学观察、生理生化特征检测... 详细信息

从健康多花黄精根部分离筛选对黄精种子萌发具促生作用的内生细菌,以期为解决黄精资源短缺问题奠定理论基础。采用传统组织培养法分离纯化内生菌,沙尔科夫斯基反应(Salkowski法)筛选产IAA能力的促生菌;通过形态学观察、生理生化特征检测及16S rDNA序列分析确定目标菌株的分类地位;温室纸床实验验证目标菌株对黄精种子发芽的促生效果。从多花黄精中共分离纯化得到34株内生菌,其中细菌25株,真菌9株;从中筛选出两株具有稳定高产IAA的内生细菌HNC2和HPB1,其产IAA能力分别高达4.833 mg/L、4.608 mg/L;菌种鉴定结果表明菌株HNC2和HPB1分别为芽孢杆菌(Bacillus sp.)和葡萄球菌(Staphylococcus sp.);菌种对种子萌发影响的实验结果显示,与无菌水和培养基对照组比,促生菌Bacillus sp.HNC2和Staphylococcus sp.HPB1均显著提高黄精种子的发芽势与发芽率,且对萌发幼苗的生长具有不同程度的促生功效。多花黄精具有丰富的内生菌资源,Bacillus sp.HNC2和Staphylococcus sp.HPB1有望进一步开发为微生物菌肥以提高黄精种子的繁殖率。

关键词：多花黄精内生菌筛选吲哚乙酸促生作用

光敏自供氧微球的制备及其对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的光动力作用研究

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中国新药杂志 2020年第19期29卷 2244-2250页

作者：芮雪尹登科陈静吴晶晶杨晔安徽中医药大学药学院合肥230012 安徽省中医科学院药物制剂研究所合肥230012

目的:制备光敏自供氧微球,考察其理化性质并研究其对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的作用。方法:以聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]为载体材料,血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)为光敏... 详细信息

目的:制备光敏自供氧微球,考察其理化性质并研究其对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的作用。方法:以聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]为载体材料,血卟啉单甲醚(hematoporphyrin monomethyl ether,HMME)为光敏剂,过氧化钙(CaO2)为产氧物质,采用油包油乳化溶剂挥发法制备光敏自供氧微球,并对微球的形貌、粒径、包封率和体外释放行为等性质进行了考察;同时采用人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MH7A为研究对象,考察光敏自供氧微球在细胞内的产氧能力及产单线态氧能力,并研究其在光动力介导下对细胞生长的抑制作用。结果:制备得到的光敏自供氧微球平均粒径为(436.33±23.52)nm;HMME及CaO2的包封率分别为(62.82±1.77)%和(71.14±3.75)%且缓释性能良好;其可有效改善MH7A细胞的缺氧状态,并在细胞内产生大量活性氧物质,在光动力的联合作用下显著抑制MH7A细胞的活力。结论:采用油包油乳化溶剂挥发法成功制备光敏自供氧微球,与光敏微球相比,其可有效改善细胞中的氧气供应并增效光动力作用,显著抑制MH7A细胞的增殖,控制类风湿关节炎的病理进展。

关键词：光动力疗法单线态氧微球类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞