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外源性H_2S恢复缺氧后适应对衰老H9C2细胞的保护作用及机制

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中国应用生理学杂志 2018年第4期34卷 289-293页

作者：孙伟铭张源洲温馨席雨鑫袁迪王跃虹魏璨徐长庆李鸿珠哈尔滨医科大学基础医学院病理生理学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的:探讨外源性硫化氢(H_2S)恢复缺氧后适应对衰老H9C2细胞的保护作用及相关机制。方法:H9C2细胞(心肌细胞系)用30μmol/L过氧化氢(H_2O_2)处理2 h后再培养3 d,诱导生成衰老细胞。衰老H9C2细胞被随机分5组(n=8):正常组(Control)、缺氧... 详细信息

目的:探讨外源性硫化氢(H_2S)恢复缺氧后适应对衰老H9C2细胞的保护作用及相关机制。方法:H9C2细胞(心肌细胞系)用30μmol/L过氧化氢(H_2O_2)处理2 h后再培养3 d,诱导生成衰老细胞。衰老H9C2细胞被随机分5组(n=8):正常组(Control)、缺氧/复氧组(H/R)、H/R+NaHS组、缺氧后适应(PC)组、PC+NaHS组。缺氧/复氧(H/R)模型:衰老H9C2细胞用缺氧液(无血清、无糖培养基,p H=6.8)培养3 h,然后正常培养6h;缺氧后适应(PC)模型:方法同H/R模型,缺氧结束复氧前连续进行3次5 min间隔的复氧/再缺氧处理,随后复氧6 h。ELISA试剂盒分别检测大鼠晚期糖基化终末产物(AGEs)含量和caspase-3活性; CCK-8试剂盒检测细胞活力; DCFH-DA染色检测活性氧(ROS)水平; Hoechst 33342染色检测细胞凋亡率; Real-time PCR检测相关基因m RNA水平。结果:30μmol/L H_2O_2可诱导H9C2细胞衰老但不会导致其凋亡;与Control组比较,H/R和PC均降低细胞活力,增加细胞凋亡率、ROS水平及caspase-3、caspase-9和Bcl-2 m RNA水平(P<0.01);且PC组与H/R组比较,上述指标变化无明显差异;在H/R和PC组加入NaHS,可显著提高细胞活力,降低细胞凋亡率和氧化应激; PC+NaHS对上述指标的作用明显强于H/R+NaHS。结论:外源性H_2S能够恢复PC对衰老H9C2细胞的保护作用,其机制与抑制氧化应激和细胞凋亡有关。

关键词：硫化氢缺氧/复氧缺氧后适应 H9C2细胞细胞凋亡

安宫牛黄丸辅助氟哌啶醇治疗重症患者术后谵妄的临床研究

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中华急诊医学杂志 2016年第7期25卷 903-909页

作者：马琳魏媛媛顾亚楠窦清理新疆医科大学第一附属医院重症医学科乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院生理学教研室乌鲁木齐830054

目的观察安宫牛黄丸辅助氟哌啶醇治疗重症患者术后谵妄的临床疗效及其安全性。方法前瞻性研究新疆医科大学第一附属医院重症医学科（ICU）术后患者（2013年1月至2014年12月），使用重症医学意识模糊评估法，共收集谵妄患者243例，通... 详细信息

目的观察安宫牛黄丸辅助氟哌啶醇治疗重症患者术后谵妄的临床疗效及其安全性。方法前瞻性研究新疆医科大学第一附属医院重症医学科（ICU）术后患者（2013年1月至2014年12月），使用重症医学意识模糊评估法，共收集谵妄患者243例，通过计算机随机分组软件（SAS 9.1）将纳入研究的受试者随机分为安宫牛黄丸辅助氟哌啶醇治疗（A）组、单纯氟哌啶醇治疗（F）组。两组干预措施终点均为重症医学意识模糊评估法评分连续两次阴性或最多达7 d治疗。分别记录两组患者的一般资料、有效性指标及安全性指标，通过SPSS 19.0统计软件分析两组各指标间的关系。计量资料用均数±标准差（x±s）描述；组间比较采用成组t检验；重复测量采用方差分析。计数资料用例数、构成比描述；组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。结果两组患者一般资料比较差异无统计学意义，而有效性指标中谵妄持续时间、ICU治疗时间A组较F组缩短，且差异有统计学意义[（3.0±0.9）d vs.（3.8±1.0）d，P=0.010；（6.2±1.4）d vs.（6.7±1.5）d，P=0.008]。在谵妄确诊时（T0），所有患者都存在脑电图异常情况，随着治疗的进行，脑电图异常率逐渐下降，治疗后第1天（T1）时A组、F组差异无统计学意义（95.7 % vs.97.5 %，P=0.045）,治疗后第2天（T2）及第3天（T3）时A组、F组差异有统计学意义（65.5 % vs.77.7 %，P=0.038；42.2 % vs.56.2 %，P=0.032）。两组S100β蛋白、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平T0时均有升高组间差异无统计学意义，在T1、T2、T3时均成下降趋势，且A组较F组下降快，差异有统计学意义（S100β：时间效应P〈 0.01，组间效应P=0.002，交互效应P=0.686；IL-6：时间效应P〈 0.01，组间效应P=0.034，交互效应P=0.01；TNF-α：时间效应P〈 0.01，组间效应P=0.003，交互效应P=0.516）。安全性指标好转出院率A组高于F组（89.7 % vs.79.3 %，P=0.029），术后合并症发生率、术后28 d病死率A组低于F组（45.7 % vs.58.7 %，P=0.045；12.9 % vs.24.0 %，P=0.028）。结论安宫牛黄丸辅助氟哌啶醇治疗谵妄从安全性有效性方面均较单独使用氟哌啶醇好，可能成为中西药结合治疗谵妄的新方法。

关键词：安宫牛黄丸氟哌啶醇术后谵妄重症患者

细胞松弛素B预处理人卵行玻璃化冻融后纺锤体与染色体变化的研究

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生殖与避孕 2009年第7期29卷 447-452页

作者：徐千花章志国周平魏兆莲邢琼黄大可曹云霞安徽医科大学第一附属医院妇产科生殖医学中心合肥230022 安徽医科大学基础医学院合肥230022

目的:探讨细胞松弛素B(cytochalasin B,CCB)预处理对改善人卵玻璃化冷冻的效果。方法:收集常规IVF-ET或ICSI-ET周期中成熟卵母细胞71枚,随机分成4组行玻璃化冷冻。A组(17枚)、B组(20枚)、C组(17枚)分别用CCB预处理20min、30min、40min... 详细信息

目的:探讨细胞松弛素B(cytochalasin B,CCB)预处理对改善人卵玻璃化冷冻的效果。方法:收集常规IVF-ET或ICSI-ET周期中成熟卵母细胞71枚,随机分成4组行玻璃化冷冻。A组(17枚)、B组(20枚)、C组(17枚)分别用CCB预处理20min、30min、40min后行玻璃化冷冻,D组(17枚)不用CCB处理直接玻璃化冷冻。冻存3周后融冻卵母细胞,复苏的卵母细胞行荧光染色固定,在共聚焦显微镜下观察各组卵母细胞纺锤体及染色体形态结构。结果:A、B、C、D各组间的复苏率(70.59%、64.71%、50.00%和64.71%)无统计学差异(P>0.05),4组间的纺锤体及染色体正常形态率(27.27%,30.00%,45.46%及33.33%)亦无统计学差异(P>0.05)。结论:冷冻使成熟卵母细胞纺锤体及染色体的正常形态结构受到一定程度的破坏,CCB并不能保护卵母细胞纺锤体及染色体在冻融过程中的损伤。

关键词：细胞松弛素B(CCB) 玻璃化冷冻纺锤体染色体

Aβ25-35通过钙超载导致HT22神经细胞Per2异常表达

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航天医学与医学工程 2017年第6期30卷 418-424页

作者：李亚蒙赵学玲任亚楠张蕊赵今原媛王丽王晓晖山西医科大学基础医学院病理教研室山西太原030001 山西医科大学基础医学院形态学实验室山西太原030001

目的探讨钙超载在Aβ25-35引起HT22细胞Per2表达变化中的作用。方法体内研究将C57BL/6小鼠双侧海马注射Aβ25-35(300μmol/kg)和无菌水后,利用跑轮行为学实验评估小鼠的昼夜节律。体外研究将HT22细胞分为对照组、Aβ25-35处理组、Nim+A... 详细信息

目的探讨钙超载在Aβ25-35引起HT22细胞Per2表达变化中的作用。方法体内研究将C57BL/6小鼠双侧海马注射Aβ25-35(300μmol/kg)和无菌水后,利用跑轮行为学实验评估小鼠的昼夜节律。体外研究将HT22细胞分为对照组、Aβ25-35处理组、Nim+Aβ25-35处理组。以MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测per2 mRNA表达水平,Western Blotting检测PER2蛋白相对表达量,免疫荧光染色观察PER2蛋白原位表达情况,流式细胞术检测胞内钙离子浓度。结果体内研究表明Aβ25-35导致C57BL/6小鼠在跑轮行为学实验中表现出明显的昼夜节律紊乱。离体研究发现,5、10、15、20、25、30μmol/L Aβ25-35剂量组细胞存活率较对照组显著降低(P<0.05)。经20μmol/L Aβ25-35处理后,per2 mRNA及PER2蛋白水平在CT16较对照组显著降低(P<0.05)。经钙离子拮抗剂尼莫地平预处理后,由Aβ25-35在CT16所致per2 mRNA及PER2蛋白水平的降低均显著升高(P<0.05)。结论钙超载在Aβ25-35引起HT22细胞Per2异常表达中发挥重要作用。

关键词：昼夜节律 Aβ25-35 Per2 钙超载

以疾病为中心的眼底多模影像在专业学位硕士研究生教学中的应用

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医学教育管理 2024年第3期10卷 332-337页

作者：史雪辉王海燕杨帆魏文斌首都医科大学附属北京同仁医院北京市眼科学与视觉科学重点实验室工信部医学人工智能研究与验证实验室北京100730

眼底病学是眼科最复杂的领域之一,也是眼科学习的重点和难点。眼底影像是辅助眼底病诊疗、教学和学习的必要方式及可靠途径。眼底影像的发展已经进入多模态时代。近年来,眼底多模影像已达到不同影像多位一体,并可实现不同影像间点对点... 详细信息

眼底病学是眼科最复杂的领域之一,也是眼科学习的重点和难点。眼底影像是辅助眼底病诊疗、教学和学习的必要方式及可靠途径。眼底影像的发展已经进入多模态时代。近年来,眼底多模影像已达到不同影像多位一体,并可实现不同影像间点对点精准对位;不但是平面像与立体像的交互融合,更有结构像和功能像的有机结合。多模影像辅助眼底病教学,更有助于全方位深刻理解、系统掌握眼底病。本文针对当前眼底病教学中存在的问题,结合眼底病教学的实际需求,提出以眼底疾病为中心,以病理机制为基础,以眼底多模影像循证解读为主要教学手段,使学生高效掌握眼底病;同时,本研究将与时俱进,进一步补充完善眼科教学方法,采用发病基础与影像表现互解互证的引导式教学模式,激发学生自主学习热情、提高教学效率,并为提升学生逻辑辨证的临床思维能力提供帮助。

关键词：研究生教学眼底病眼底多模影像发病机制

cAMP在Liraglutide改善Aβ25-35诱导的昼夜节律紊乱中的作用研究

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航天医学与医学工程 2018年第4期31卷 402-408页

作者：任亚楠郭林芝张蕊侯晓鸿原媛王丽王晓晖山西医科大学基础医学院病理教研室山西太原030001 山西医科大学基础医学院形态学实验室山西太原030001

目的研究环腺苷酸(cAMP)在利拉鲁肽(Liraglutide)改善β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)引起的昼夜节律紊乱中的作用。方法 C57BL/6小鼠随机分为Vehicle,Aβ25-35,Liraglutide,Liraglutide+Aβ25-35四组,利用跑轮行为学实验评估小鼠昼夜节律,ELISA法检测海马CA1区cAMP的表达水平。HT22小鼠海马神经细胞随机分为Vehicle,Aβ25-35,Liraglutide,Liraglutide+Aβ25-35,SQ22536+Liraglutide+Aβ25-35,SQ22536组,利用CCK8法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测per1 mRNA表达水平。结果海马内注射Aβ25-35后小鼠出现明显昼夜节律紊乱,且cAMP节律性表达异常,Liraglutide预处理明显改善了小鼠昼夜节律紊乱现象和cAMP节律性表达异常。HT22细胞中加入Aβ25-35后,细胞存活率下降且per1基因节律性表达异常,而Liraglutide预处理提高了细胞存活率并改善了per1表达异常,但这种效应会被cAMP抑制剂SQ22536所拮抗。结论 Liraglutide可拮抗Aβ25-35所致昼夜节律紊乱及per1基因的异常表达,其机制可能是通过改变cAMP节律性表达实现的。

关键词：昼夜节律 Liraglutide Aβ25-35 per1节律基因 cAMP

硒代半胱氨酸合成蛋白基因表达对过氧化氢介导的内皮细胞EVC-304损伤的影响

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中华地方病学杂志 2014年第4期33卷 383-387页

作者：赵汉东孙美娜李凤兰李晖哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 150081

目的：观察硒代半胱氨酸合成蛋白（SEPSECS）基因表达对过氧化氢（H2O2）介导的氧化应激状态下内皮细胞EVC-304损伤的影响。方法体外培养人内皮细胞EVC-304，对细胞进行转染处理，分为对照组、SEPSECS低表达组、空载体转染组、SEPSECS... 详细信息

目的：观察硒代半胱氨酸合成蛋白（SEPSECS）基因表达对过氧化氢（H2O2）介导的氧化应激状态下内皮细胞EVC-304损伤的影响。方法体外培养人内皮细胞EVC-304，对细胞进行转染处理，分为对照组、SEPSECS低表达组、空载体转染组、SEPSECS高表达组，分别用0、200、400、600、800、1000μmol/L H2O2处理细胞6 h。转染后，用实时荧光定量PCR 法检测各组细胞SEPSECS基因表达，蛋白质免疫印迹试验（Western blot）检测各组细胞SEPSECS蛋白表达，流式细胞仪对各组细胞进行细胞周期检测。H2O2处理后，用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒检测各组细胞丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量。结果转染后对照组、SEPSECS 低表达组、空载体转染组、SEPSECS 高表达组 EVC-304细胞 SEPSECS mRNA 表达分别为1.03±0.24、0.43±0.11、0.98±0.27、1.61±0.13，SEPSECS 蛋白表达分别为1.00±0.26、0.51±0.10、1.12±0.38、1.51±0.20。其中SEPSECS低表达组SEPSECS mRNA、蛋白表达与对照组比较，差异有统计学意义（P均〈0.05）；SEPSECS高表达组SEPSECS mRNA、蛋白表达与空载体转染组比较，差异有统计学意义（P均〈0.05）。转染后，各组细胞周期未见明显改变（P 均〉0.05）。经H2O2处理的各组EVC-304细胞MDA含量均随H2O2浓度的升高而升高。其中H2O2为800、1000μmol/L时，SEPSECS低表达组MDA含量[（15.8±0.5）、（19.6±1.5）μmol/L]明显高于对照组[（12.4±0.1）、（17.1±0.5）μmol/L，P均〈0.05]，SEPSECS高表达组MDA含量[（10.8±0.4）、（14.2±1.1）μmol/L]明显低于空载体转染组[（12.7±0.7）、（16.2±1.1）μmol/L，P均〈0.05]。经H2O2处理的各组EVC-304细胞SOD含量均随 H2O2浓度升高而降低，且 H2O2为800、1000μmol/L 时，SEPSECS 低表达组SOD 含量[（7.7±0.4）、（2.4±0.3）μmol/L]明显低于对照组[（10.0±1.0）、（6.0±0.6）μmol/L，P均〈0.05]， SEPSECS高表达组SOD含量[（11.3±0.6）、（12.7±1.6）μmol/L]明显高于空载体转染组[（9.2±0.6）、（6.7±0.2）μmol/L，P均〈0.05]。结论 SEPSECS基因表达对H2O2介导的氧化应激状态下内皮细胞EVC-304具有保护作用，能够显著降低氧化应激所致的细胞损伤。

关键词：硒代半胱氨酸合成蛋白过氧化氢细胞培养技术

急、慢性铅中毒对海马CA1区长时程增强和活化的细胞外信号调节激酶2影响

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中国药理学与毒理学杂志 2004年第1期18卷 66-70页

作者：杨菁孙黎光蔡葵宗志宏邢伟刘素媛刘宁中国医科大学基础医学院生物化学教研室辽宁沈阳110001 中国医科大学基础医学院脑研究所神经生理研究室辽宁沈阳110001

目的　探讨急、慢性铅中毒对大鼠海马活化的细胞外信号调节激酶 2 (ERK2 )含量的影响及其与海马CA1区长时程增强 (LTP)的关系。方法　大鼠怀孕后分别饮用蒸馏水或 0 .2 %醋酸铅溶液 ,断乳后鼠仔则直接饮用 ,于 30d后测定LTP ,并取海马... 详细信息

目的　探讨急、慢性铅中毒对大鼠海马活化的细胞外信号调节激酶 2 (ERK2 )含量的影响及其与海马CA1区长时程增强 (LTP)的关系。方法　大鼠怀孕后分别饮用蒸馏水或 0 .2 %醋酸铅溶液 ,断乳后鼠仔则直接饮用 ,于 30d后测定LTP ,并取海马作为慢性铅中毒标本测定ERK2含量。正常 30d大鼠海马片稳定培养 2h后 ,分别用含或不含 2 0 μmol·L-1 醋酸铅的人工脑脊液孵育 ,不同时间点收集 ,作为急性铅中毒标本测定ERK2含量。用Western印迹法测定标本活化的ERK2含量。结果　高频刺激后对照组和慢性铅中毒组峰电位分别为刺激前的1 85 %和 88% ;慢性铅中毒组活化的ERK2则比对照组降低了 46 %。海马片培养中 ,对照组活化的ERK2含量基本保持不变 ,铅中毒组在 30和 60min时分别下降了 68%和 33% ,1 2 0min后恢复到正常水平。

关键词：铅中毒急性慢性海马CA1区蛋白激酶类长时程增强活化细胞外信号调节激酶2

白纹伊蚊唾液源34ku-1基因的克隆表达及鉴定

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中国病原生物学杂志 2022年第3期17卷 308-313页

作者：陈素素吴家红程金芝赵久刚商正玲聂映牟荣贵州医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室贵州贵阳550025 贵州医科大学现代病原生物学特色重点实验室贵州医科大学基础医学院免疫学教研室

目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊安... 详细信息

目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊安顺株雌蚊体内扩增获得34ku-1基因。利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)、瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASy)等对该蛋白进行生物信息学分析。将该基因构建到原核表达质粒pET-32a(+)中,转染大肠埃希菌BL21(DE3)后经异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析表达结果。镍柱纯化34ku-1重组蛋白,采用Western blot验证纯化蛋白的免疫反应性。用纯化的34ku-1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫血清,采用间接ELISA法检测血清抗体效价,采用Western blot方法对抗体的特异性进行鉴定。收集雌蚊唾液,采用Western blot方法用制备的多克隆抗体检测蚊唾液34ku-1蛋白。结果成功克隆获得34ku-1基因,生物信息学分析该基因全长888 bp,编码295个氨基酸。编码蛋白的理论分子质量单位为33.6 ku,等电点为5.54。重组质粒pET-32a(+)-34ku-1经PCR、双酶切及测序验证构建正确。经IPTG诱导的BL21重组菌表达产物主要以包涵体形式存在。经亲和层析法获得高纯度的34ku-1重组蛋白,浓度为0.71 mg/mL。Western blot显示重组蛋白可被抗6-His tag抗体识别,制备的鼠抗34ku-1血清抗体效价为1∶625000,且特异性良好,用34ku-1多克隆抗体Western blot可检测到蚊虫唾液中的34ku-1蛋白。结论成功克隆并表达了白纹伊蚊34ku-1原核蛋白,制备了高效价、高特异性的鼠抗34ku-1多克隆抗体,应用该抗体可检测到雌蚊唾液中的34ku-1蛋白。

关键词：白纹伊蚊唾液腺 34ku-1重组蛋白原核表达多克隆抗体