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PDX1真核表达载体的构建及其对PANC-1细胞PI3K/AKT信号途径的影响

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安徽医科大学学报 2017年第2期52卷 186-189页

作者：栾康金锐刘莉罗欣张胜权安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032

目的构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(PDX1)基因真核表达载体并转染至PANC-1细胞,观察其对PI3K/AKT信号通路的影响。方法从Hela细胞中提取总RNA,逆转后PCR扩增PDX1编码区片段,然后将PDX1的CDS插入PCMV6-Entry质粒构建PCMV6-Entry-PDX1表达... 详细信息

目的构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(PDX1)基因真核表达载体并转染至PANC-1细胞,观察其对PI3K/AKT信号通路的影响。方法从Hela细胞中提取总RNA,逆转后PCR扩增PDX1编码区片段,然后将PDX1的CDS插入PCMV6-Entry质粒构建PCMV6-Entry-PDX1表达重组体。重组体转染至PANC-1细胞中通过G418筛选出稳定表达细胞株。Western blot分析PDX1蛋白水平表达及p-AKT水平变化。结果 PDX1基因成功在PANC-1中表达。利用Western blot检测验证获得了稳定的PDX1过表达细胞株。Western blot结果显示:过表达PDX1的细胞株AKT表达含量与正常细胞及对照细胞没有区别而p-AKT水平降低。结论PDX1基因过表达能够降低PANC-1细胞的p-AKT水平。

关键词： PDX1 基因重组 PI3K/AKT信号通路 PANC-1

乳源免疫调节肽对小鼠酒精性脂肪肝的防治作用

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安徽医科大学学报 2013年第4期48卷 336-340页

作者：杨浩然魏彩唐宜桂李小勤刘琛顾芳秦宜德安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032

目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对小鼠酒精性脂肪肝的防治作用。方法 60只昆明种雄性小鼠,随机均分为对照组、模型组、护肝片(0.3 g/kg)组、PGPIPNⅠ组、Ⅱ组和Ⅲ组。采用梯度乙醇溶液灌胃的方法建立小鼠酒精性脂肪肝(AFL)模型,造模的... 详细信息

目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对小鼠酒精性脂肪肝的防治作用。方法 60只昆明种雄性小鼠,随机均分为对照组、模型组、护肝片(0.3 g/kg)组、PGPIPNⅠ组、Ⅱ组和Ⅲ组。采用梯度乙醇溶液灌胃的方法建立小鼠酒精性脂肪肝(AFL)模型,造模的同时给予药物干预,共12周。实验结束后,处死小鼠,收集血清和肝脏。测定小鼠肝指数(LI)、脾指数(SI)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)及高密度脂蛋白(HDL-C)和肝组织中甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量,并观察肝脏病理组织学变化。结果 PGPIPN各剂量组均能显著降低AFL小鼠LI和SI水平、血清中ALT和AST的活性,减少血清中TG、TC及LDL-C和肝组织中TG、MDA含量,升高HDL-C、SOD含量和GSH-PX活性水平;同时,病理组织学检查结果显示,PGPIPN各剂量组小鼠肝脏中小泡性脂肪变性程度明显减轻。结论PGPIPN对酒精性脂肪肝小鼠有防治作用,其机制可能与其调节脂质代谢,抗脂质过氧化有关。

关键词：乳源免疫调节肽酒精性脂肪肝脂质过氧化肝脏脂肪变性

IL-18调控血管平滑肌细胞TNF-α、IL-6、IL-8的表达

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安徽医科大学学报 2020年第12期55卷 1901-1905页

作者：罗欣周宏顾亚男李名聪李昱昊张胜权安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032

目的初步探讨白细胞介素(IL)-18调控血管平滑肌细胞(VSMC)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、IL-8表达及其机制。方法以不同浓度的IL-18(3、10、30、100ng/ml)处理VSMC,采取不同时间,通过Real-timePCR分析TNF-α、IL-6、IL-8mRNA水平的表... 详细信息

目的初步探讨白细胞介素(IL)-18调控血管平滑肌细胞(VSMC)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、IL-8表达及其机制。方法以不同浓度的IL-18(3、10、30、100ng/ml)处理VSMC,采取不同时间,通过Real-timePCR分析TNF-α、IL-6、IL-8mRNA水平的表达;ELISA方法分析TNF-α、IL-6、IL-8蛋白水平表达;用特异性抑制剂分别阻断p38和AKT信号通路,通过Westernblot分析这2条信号途径激活情况及对TNF-α、IL-6、IL-8蛋白表达的影响。结果不同浓度的IL-18能促使VSMC中TNF-α、IL-6、IL-8mRNA水平表达升高,表现出剂量依赖效应;IL-18(30ng/ml)以时间依赖的方式增加3种细胞因子的mRNA及蛋白水平表达。Western blot结果显示IL-18能够激活p38和AKT;特异性阻断剂分析显示:IL-18调控TNF-α、IL-6、IL-8的表达部分依赖该2条信号途径的激活。结论IL-18部分依赖p38和AKT信号通路的活化从而促使VSMC中TNF-α、IL-6、IL-83种炎症因子表达增高。

关键词：白细胞介素-18 血管平滑肌细胞细胞因子信号转导途径

TLR7激动剂Gardiquimod上调BxPC-3细胞中IL-15 mRNA表达

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安徽医科大学学报 2015年第1期50卷 1-4页

作者：王芳金锐李磊程丰伟罗欣张胜权安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032

目的研究TLR7在胰腺癌Bx PC-3细胞中表达,并探讨TLR7激动剂激活TLR7后细胞因子白介素15(IL-15)的表达。方法通过Western blot和Real-time PCR分析TLR7在细胞内的表达水平;Bx PC-3细胞经过不同时间点Gardiquimod(3μg/ml)的处理后,Real-time PCR分析TLR7激活后IL-15 mRNA水平表达变化;Western blot分析Gardiquimod刺激细胞后,磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K-AKT)信号通路的变化。结果 Western blot和Real-time PCR结果显示:与外周血单核细胞(PBMC)相比,TLR7在Bx PC-3中弱表达;Real-time PCR分析显示:Gardiquimod处理细胞后能刺激细胞中IL-15的表达;TLR7激动剂能够激活PI3K-AKT信号通路。结论 Gardiquimod激活TLR7后能够上调IL-15的表达,并且其激活与PI3KAKT信号途径相关。

关键词： TLR7 Gardiquimod IL-15 PI3K-AKT BxPC-3

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DNA印迹试验

安徽医科大学学报 2005年第2期40卷 194-196页

作者：汪渊左艳左莉刘虎张素梅熊江霞卜丽佳周青桂淑玉安徽医科大学分子生物学中心实验室和生物化学教研室安徽省基因研究重点实验室安徽医科大学第一附属医院肿瘤科安徽医科大学第一附属医院呼吸内科合肥230022

DNA印迹是一种将电泳分离的DNA片段转移到固相支持物上用探针与靶DNA进行杂交的技术，又称Southem杂交。利用一种或多种限制内切酶酶切消化的基因组DNA，或经PCR获得扩增片段，经琼脂糖凝胶电泳，所得的DNA片段按分子大小分离，DNA片段... 详细信息

DNA印迹是一种将电泳分离的DNA片段转移到固相支持物上用探针与靶DNA进行杂交的技术，又称Southem杂交。利用一种或多种限制内切酶酶切消化的基因组DNA，或经PCR获得扩增片段，经琼脂糖凝胶电泳，所得的DNA片段按分子大小分离，DNA片段经琼脂糖凝胶、变性，并将凝胶中的单链DNA片段转移到固相支持物上(多为硝酸纤维素膜，NC或尼龙膜)，

关键词：印迹试验 Southem杂交 DNA片段琼脂糖凝胶电泳固相支持物基因组DNA 硝酸纤维素膜 DNA印迹限制内切酶靶DNA 电泳分离扩增片段分子大小 PCR 尼龙膜转移

免疫调节肽对T淋巴细胞转化和巨噬细胞分泌的影响

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安徽医科大学学报 2011年第11期46卷 1144-1147页

作者：王巍何晓光郑欣顾芳秦宜德安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032

目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对BALB/c鼠脾T淋巴细胞转化和骨髓巨噬细胞(BMMs)分泌的影响。方法通过MTT法检测不同浓度PGPIPN对小鼠脾T淋巴细胞的转化作用,通过ELISA法检测在PGPIPN刺激下小鼠BMMs活化所释放的肿瘤坏死因子α(TNF-α... 详细信息

目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对BALB/c鼠脾T淋巴细胞转化和骨髓巨噬细胞(BMMs)分泌的影响。方法通过MTT法检测不同浓度PGPIPN对小鼠脾T淋巴细胞的转化作用,通过ELISA法检测在PGPIPN刺激下小鼠BMMs活化所释放的肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的含量。结果 PGPIPN在体外与刀豆蛋白A(Co-nA)合用可明显促进ConA的丝裂原作用;体内实验表明各种剂量PGPIPN饲养的小鼠,其脾淋巴细胞在适当剂量的ConA的诱导下均具有明显的T淋巴细胞转化的能力;PG-PIPN单独作用于BMMs不能刺激TNF-α和IL-6的释放,但与脂多糖(LPS)合用时则可以明显增加细胞因子的释放。结论 PGPIPN具有促进T淋巴细胞转化的作用,与LPS合用可促进BMMs的细胞因子释放的水平,提示PGPIPN可增加T淋巴细胞和巨噬细胞的免疫功能。

关键词：脾T淋巴细胞骨髓巨噬细胞细胞因子免疫调节肽中

免疫调节肽对卵巢癌skov3细胞凋亡及相关基因表达的影响

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安徽医科大学学报 2012年第7期47卷 758-762页

作者：郑欣何晓光张文晓杨浩然魏彩顾芳任明强秦宜德安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032

目的研究免疫调节肽(PGPIPN)对人卵巢癌细胞株skov3凋亡及相关基因表达的影响。方法体外培养卵巢癌skov3细胞,分别使用10-6、10-5、10-4、10-3、10-2g/L的PGPIPN孵育skov3细胞48 h,观察量效关系;通过cDNA芯片技术筛选凋亡相关基因;实时... 详细信息

目的研究免疫调节肽(PGPIPN)对人卵巢癌细胞株skov3凋亡及相关基因表达的影响。方法体外培养卵巢癌skov3细胞,分别使用10-6、10-5、10-4、10-3、10-2g/L的PGPIPN孵育skov3细胞48 h,观察量效关系;通过cDNA芯片技术筛选凋亡相关基因;实时荧光定量PCR法检测Bax、Bcl-xl、Caspase-3 mRNA水平的表达量;Western blot法检测Bax、Bcl-xl、Caspase-3蛋白表达量。结果与对照组相比,Bax和Caspase-3的表达随着PGPIPN浓度升高而升高(P<0.05);Bcl-xl的表达随着PGPIPN浓度升高而降低(P<0.05)。结论 PGPIPN通过促进细胞中Bax及抑制Bcl-xl的表达来调控skov3细胞的凋亡,该过程可能和Caspase的活化相关。

关键词：免疫调节肽 cDNA芯片 Bax Bcl-xl Caspase-3

人白细胞介素29对Hela细胞抗病毒保护作用

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安徽医科大学学报 2008年第1期43卷 10-13页

作者：罗欣黄海良张胜权安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室合肥230032

目的研究重组人白介素29(rhIL-29)对Hela细胞的抗病毒保护作用及其作用机制。方法传代培养的Hela细胞按一定密度接种于24孔培养板,分别加入不同浓度的rhIL-29,培养24h后换液一次,继续以含rhIL-29的培养基培养16h,用水疱性口炎病毒(VSV)... 详细信息

目的研究重组人白介素29(rhIL-29)对Hela细胞的抗病毒保护作用及其作用机制。方法传代培养的Hela细胞按一定密度接种于24孔培养板,分别加入不同浓度的rhIL-29,培养24h后换液一次,继续以含rhIL-29的培养基培养16h,用水疱性口炎病毒(VSV)感染后,以不加rhIL-29为空白对照。RT-PCR分析MxA蛋白、2′,5′-寡腺苷酸合成酶(2′,5′-OAS)mRNA及VSV的RNA水平;MTT及细胞形态学检测分析rhIL-29对Hela细胞的抗病毒保护作用。结果经rhIL-29处理的Hela细胞的MxA蛋白、2′,5′-OAS的mRNA表达明显上调,VSVRNA含量显著下降。MTT分析结果rhIL-29对Hela细胞有保护作用且具有剂量依赖关系(P<0.01)。结论rhIL-29通过上调MxA蛋白、2′,5′-寡腺苷酸合成酶,抑制VSV增殖具有一定的保护Hela细胞免受病毒损伤的作用。

关键词：白细胞介素类/药理学 HeLa细胞/药物作用抗病毒药蛋白质类

基于16S rRNA基因扩增子测序技术研究云南野生小型哺乳动物肠道菌群多样性

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北京大学学报（自然科学版） 2022年第2期58卷 326-336页

作者：苏佳何锴连春盎张雪余珂北京大学深圳研究生院环境与能源学院深圳518055 南方医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室广东省单细胞技术与应用重点实验室广州510515

以生活在同一生境,但具有不同进化关系和不同食性的野生哺乳类动物(鼠科、猬科和鼩鼱科)为研究对象,通过16S rRNA基因扩增子测序,分析和比较其肠道菌群。共识别出5378个操作分类单位(OTUs),主要隶属Firmicutes(40.55%),Proteobacteria(3... 详细信息

以生活在同一生境,但具有不同进化关系和不同食性的野生哺乳类动物(鼠科、猬科和鼩鼱科)为研究对象,通过16S rRNA基因扩增子测序,分析和比较其肠道菌群。共识别出5378个操作分类单位(OTUs),主要隶属Firmicutes(40.55%),Proteobacteria(34.60%)和Bacteroidetes(13.67%)。Firmicutes和Bacteroidetes是鼠科的优势菌门,Proteobacteria是猬科和鼩鼱科的优势菌门。多样性分析表明,鼠科、猬科与鼩鼱科的肠道微生物多样性及群落结构具有显著性差异;LEfSe分析表明,鼠科中存在更多与复杂碳水化合物发酵相关的细菌,猬科和鼩鼱科中含较多氨基酸发酵菌;益生菌(如Lactobacillus和Lactococcus等)共存于这3类野生小型哺乳类动物中,起调控宿主健康的作用。研究结果揭示,宿主食性与进化关系影响着野生小型哺乳动物肠道菌群结构,而肠道菌群可能在多种方面对宿主起益生作用。

关键词：野生小型哺乳动物肠道菌群 16S rRNA基因扩增子测序宿主饮食

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