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液体或固体培养对环链棒束孢(Isaria cateinannulata)菌丝体中挥发性成分组成的影响

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微生物学报 2011年第12期51卷 1616-1624页

作者：张德龙王小董陆瑞利李康乐胡丰林安徽省微生物防治省重点实验室安徽农业大学合肥230036

【目的】测定环链棒束孢(Isaria cateinannulata)在不同培养方式下,其菌丝中挥发性代谢物组成,分析代谢产物差异与培养方式间的相互联系。【方法】分别用SDAY培养基固体平板与SDY培养基液体摇瓶的培养方式进行培养;培养温度为25℃,培养... 详细信息

【目的】测定环链棒束孢(Isaria cateinannulata)在不同培养方式下,其菌丝中挥发性代谢物组成,分析代谢产物差异与培养方式间的相互联系。【方法】分别用SDAY培养基固体平板与SDY培养基液体摇瓶的培养方式进行培养;培养温度为25℃,培养周期为8天;用同时蒸馏萃取装置提取菌丝的挥发性成分;用气质联用仪进行数据采集及分析。【结果】固体培养菌丝体含有较多种类的挥发性成分,共鉴定41种化合物,其中酯类、醌类和肟类化合物为其特有。液体培养菌丝体含有的挥发性成分相对较少,共鉴定32种化合物,其中羧酸类化合物为其特有,同时酚类含量远高于固体菌丝。固体和液体培养菌丝体的主要挥发性成分都是烃类物质,其中烯烃类物质分别占固体培养菌丝和液体培养菌丝总挥发物的57.6%和7.85%,烷烃类物质分别占固体培养菌丝和液体培养菌丝总挥发物的9.19%和22.4%。【结论】固体或液体培养条件对环链棒束孢菌丝体中挥发性成分的组成有影响。

关键词：环链棒束孢液体培养固体培养菌丝体气质联用

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人乳头瘤病毒16型纳米抗体的筛选及鉴定

中国肿瘤生物治疗杂志 2025年

作者：王若瑜白崇智仲启明范瑞文牛林茹韩鹏程山西省中医药研究院中心实验室山西农业大学羊驼生物工程实验室君研生物科技(山西)有限公司东南大学附属中大医院医学院

目的：构建HPV16L1蛋白纳米抗体初级文库，通过筛选鉴定获得一株HPV16L1特异性纳米抗体。方法：以HPV16L1蛋白为抗原进行羊驼免疫，采用噬菌体展示技术构建初级文库。经3轮淘选，采用ELISA法鉴定阳性克隆，将阳性反应最强克隆的VHH序列... 详细信息

目的：构建HPV16L1蛋白纳米抗体初级文库，通过筛选鉴定获得一株HPV16L1特异性纳米抗体。方法：以HPV16L1蛋白为抗原进行羊驼免疫，采用噬菌体展示技术构建初级文库。经3轮淘选，采用ELISA法鉴定阳性克隆，将阳性反应最强克隆的VHH序列进行真核表达。经亲和纯化、凝胶过滤层析纯化、SDS-PAGE和WB法鉴定，获得目的纳米抗体；表面等离子共振技术（SPR）检测纳米抗体与HPV 16 L1蛋白之间的亲和力；CCK-8法检测纳米抗体对人永生化角质细胞HaCat的毒性；荧光素酶报告基因实验检测纳米抗体对HPV 16假病毒的中和活性。结果：初级文库库容为1.304×1010，丰度为6.5×109个/mL，ELISA法鉴定获得36个阳性克隆。表达、纯化获得蛋白单体与二聚体，经鉴定为目的纳米抗体（Nb）。Nb与HPV 16 L1蛋白结合的亲和力为35.41 nmol/L。Nb实验组HaCat细胞增殖活力与空白组没有显著性差异（p≥0.01）。与阴性组比较，0.1 μmol、1 μmol Nb均能抑制假病毒感染293T细胞。结论：本研究成功获得一株纯度较好、亲和力较高，对上皮细胞没有毒性作用、有效抑制HPV 16假病毒感染293T细胞的纳米抗体Nb，为防治HPV 16感染提供了有效的候选抗体类药物。

关键词： HPV 16 噬菌体展示技术纳米抗体亲和力

培养时间对蛹拟青霉(Paecilomyces militaris)菌丝体中代谢产物的影响

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微生物学报 2012年第12期52卷 1477-1488页

作者：张德龙李淑林陆瑞利李康乐罗飞飞彭凡胡丰林安徽省微生物防治省重点实验室安徽农业大学合肥230036

【目的】通过测定不同培养时间蛹拟青霉(Paecilomyces militaris)菌丝体中次级代谢产物的变化,分析蛹拟青霉次级代谢产物与培养时间之间的关系。【方法】液体种子接入SDAY固体培养基;培养温度为25℃,培养周期为9 d,从第2天开始每天取样... 详细信息

【目的】通过测定不同培养时间蛹拟青霉(Paecilomyces militaris)菌丝体中次级代谢产物的变化,分析蛹拟青霉次级代谢产物与培养时间之间的关系。【方法】液体种子接入SDAY固体培养基;培养温度为25℃,培养周期为9 d,从第2天开始每天取样;用甲醇与乙酸乙酯分别提取菌丝体中次级代谢产物,离心、过滤后合并提取液,用液质联用仪进行分析,用MetaboAnalyst software软件进行数据采集分析。【结果】主成分分析结果表明供试菌株在不同培养时间内其菌丝中次级代谢产物差异显著。聚类分析结果显示,供试拟青霉对生物碱、肽类和核苷等易形成阳离子类物质的代谢物可分为前中后三个阶段。供试拟青霉对糖类和有机酸等易形成阴离子类物质的代谢主要分为前后两个阶段。差异代谢物及热图分析结果表明,在培养的第2和第3天含量显著增加的代谢产物种类较多,主要有酯类及其水解产物、细胞破坏素B和拟青霉素,以及多种尚未鉴定的含氮化合物等;在培养第4和第5天含量显著增加的差异代谢物质种类较少,主要有细胞破坏素A和团囊虫草素等肽类抗菌杀虫物质;在培养第6天至第9天含量显著增加的代谢物种类较多,除多种白僵菌交酯和细胞破坏素等肽类抗生素外,显著增加的还有多种脂肪酸、氨基酸、鼠李糖、海藻糖、脑苷脂类化合物和核黄素等物质。【结论】培养时间对蛹拟青霉菌丝中次级代谢产物的产生有显著影响。在培养初期,菌体中酯类及细胞破坏素B和拟青霉素等含氮化合物的合成旺盛。在培养中期,次生代谢物明显减少,但细胞破坏素A2和团囊虫草素等肽类抗生素的合成却仍显著增多。在培养后期,供试蛹拟青霉除代谢出多种白僵菌交酯等肽类抗生素外,还大量产生有机酸、氨基酸和海藻糖等物质。虽然在整个培养过程中都有肽类抗生素产生,但这些抗生素并不相同,同时后一阶段新的抗生素的产生常常伴随着前一阶段的抗生素减少,因此前期的抗生素可能是后期产生的抗生素的前体。

关键词：培养时间蛹拟青霉菌丝体液质联用次级代谢物

代谢组学方法鉴定球孢白僵菌孢子萌发和杀虫毒力相关的标记物

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微生物学报 2014年第1期54卷 33-41页

作者：罗飞飞李淑林陈龙云张万存王滨黄勃胡丰林安徽省微生物防治省重点实验室、安徽农业大学安徽合肥230036

【目的】识别球孢白僵菌萌发和杀虫毒力相关的标记物。【方法】本研究对7个球孢白僵菌菌株的孢子进行萌发率和对茶毛虫毒力进行测定,采用基于LC-MS的代谢组学方法,识别菌丝和孢子提取物中与萌发和毒力有关的标记物。【结果】高毒力菌株... 详细信息

【目的】识别球孢白僵菌萌发和杀虫毒力相关的标记物。【方法】本研究对7个球孢白僵菌菌株的孢子进行萌发率和对茶毛虫毒力进行测定,采用基于LC-MS的代谢组学方法,识别菌丝和孢子提取物中与萌发和毒力有关的标记物。【结果】高毒力菌株的菌丝中具有高含量的carnitine、hercynine、acetylcarnitine、α,α-trehalose;Octa-Me、arg-arg-gln、phosphatidylethanolamine[PE(18∶2/0∶0)]、phosphotidylcholine[PC(18∶3/0∶0)]和PC(18∶2/0∶0)。高萌发率菌株的孢子中具有高含量的2,3-dimethylmaleate、acetylcarnitine、propionyl-carnitine和PC(18∶2/0∶0)。高毒力菌株的孢子中具有高含量的histamine、2,5-pyrrolidinedicarboxylic acid;Diamide、carnitine、acetylcarnitine、propionyl-carnitine、butyrylcarnitine、PE(18∶2/0∶0)、PC(16∶1/0∶0)和PC(18∶3/0∶0)。此外,对菌丝中杀虫相关的环肽beauverolides,beauvericins和bassianolide进行相对含量比较分析,发现单独一种肽的含量高低与菌株对茶毛虫的毒力没有直接关系,但高毒力的Bb1898菌株中的9种肽同时具有较高的含量暗示它们可能发挥协同作用。【结论】毒力和萌发的共同标记物是脂酰肉碱和磷脂,它们可能具有维持附着胞膨压和为穿透寄主提供能量的功能。其它标记物,如在高毒力菌丝中发现的hercynine和α,α-trehalose;高萌发率孢子中的2,3-dimethylmaleate,高毒力孢子中的histamine和2,5-pyrrolidinedicarboxylic acid Diamide,它们的作用原理有待进一步研究。

关键词：球孢白僵菌代谢组学液质联用萌发毒力标记物

中国北方球孢白僵菌的遗传多样性和种群遗传结构

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应用生态学报 2012年第11期23卷 3087-3095页

作者：何玲敏胡晓磊陈雪张胜利栾丰刚李增智安徽农业大学微生物防治安徽省重点实验室合肥230036

将在中国北方13省采集分离的622株球孢白僵菌按省份划分成13个亚种群,其中寄主可以鉴定到目的8目昆虫和蜘蛛目的568株按目划分成9个亚种群,用ISSR(简单重复序列区间)分子标记技术进行遗传多样性和种群遗传结构分析.结果表明:各多样性指... 详细信息

将在中国北方13省采集分离的622株球孢白僵菌按省份划分成13个亚种群,其中寄主可以鉴定到目的8目昆虫和蜘蛛目的568株按目划分成9个亚种群,用ISSR(简单重复序列区间)分子标记技术进行遗传多样性和种群遗传结构分析.结果表明:各多样性指数皆显示我国北方地区球孢白僵菌的遗传多样性水平较高,种群的异质性较强.其中内蒙古亚种群的遗传多样性和种群异质性最高,河南亚种群最低;鳞翅目亚种群的遗传多样性和种群异质性最高,蜘蛛目亚种群最低.河南与辽宁亚种群间以及蜘蛛目与螳螂目亚种群间的遗传分化系数以及遗传距离最大,宁夏与陕西亚种群间以及鞘翅目与膜翅目亚种群间最小.按寄主目划分的亚种群间的平均遗传分化系数和平均遗传距离均低于按省份划分的亚种群.这些结果以及基于遗传距离的亚种群聚类分析都证明我国北方球孢白僵菌的遗传谱系与寄主来源和地理来源均无关系.我国北方球孢白僵菌的变异主要是由各不同寄主目内科间及属间的变异造成的,也是由各省不同采集地以及采集地内部不同微生境间的差异造成的.

关键词：球孢白僵菌 ISSR 遗传多样性种群遗传结构

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马尾松纯林中球孢白僵菌种群的遗传异质性

应用生态学报 2010年第10期21卷 2627-2634页

作者：陈名君黄勃刘玉军李增智安徽农业大学微生物防治安徽省重点实验室合肥230036

应用ISSR分子标记对安徽省麻姑山马尾松人工纯林的111株球孢白僵菌进行遗传异质性分析,7个引物共得到58个位点,其中多态位点比率为93.10%.不同调查时间亚种群的Nei基因多样性(He)为0.2552,Shannon信息指数(I)为0.3825,亚种群间的基因分... 详细信息

应用ISSR分子标记对安徽省麻姑山马尾松人工纯林的111株球孢白僵菌进行遗传异质性分析,7个引物共得到58个位点,其中多态位点比率为93.10%.不同调查时间亚种群的Nei基因多样性(He)为0.2552,Shannon信息指数(I)为0.3825,亚种群间的基因分化系数(Gst)为0.2269,基因流(Nm)为0.8518,其中5月和7月间的遗传距离最小,为0.0408;不同寄主亚种群的He为0.2623、I为0.3884,亚种群间的Gst为0.1964、Nm为1.0223,其中鞘翅目和鳞翅目间亚种群的遗传距离最小,为0.0163.表明麻姑山球孢白僵菌存在较高的遗传异质性,亚种群间的遗传变异较小,亚种群内表现出相对较大的遗传变异,未见ISSR图谱相同或高度相似的菌株.

关键词：虫生真菌分子标记基因流遗传分化遗传多样性

台湾虫草的被毛孢无性型新种及其对黄粉虫的侵染研究

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菌物学报 2005年第3期24卷 349-355页

作者：李春如夏成润林英任樊美珍李增智安徽农业大学微生物防治省重点实验室

报道采自安徽省黄山风景区的台湾虫草Cordycepsformosana,多批次收集弹射的子囊孢子分离得到其无性型,经鉴定为一被毛孢新种,命名为黄山被毛孢Hirsutellahuangshanensis。黄山被毛孢在米饭培养和自制的虫草培养基上均能长出子实体,其菌... 详细信息

报道采自安徽省黄山风景区的台湾虫草Cordycepsformosana,多批次收集弹射的子囊孢子分离得到其无性型,经鉴定为一被毛孢新种,命名为黄山被毛孢Hirsutellahuangshanensis。黄山被毛孢在米饭培养和自制的虫草培养基上均能长出子实体,其菌落及子实体颜色与天然虫草较为相似,但未见成熟的子囊壳。应用黄山被毛孢RCEF0868菌株对饲喂昆虫黄粉虫进行感染试验,结果表明:黄粉虫在菌落接触感染、刚蜕皮幼虫的穿刺接种和孢子浓度1.0×107/ml浸蘸处理下,获得了相对较高的侵染率,分别达到30%、25%和25%,刚蜕皮幼虫一般比深色幼虫组其侵染率较高,1×105/ml孢子浓度浸蘸试虫不论是刚蜕皮或老熟幼虫均不能感染。10d后被感染的黄粉虫形成僵虫,继续保湿培养20d后,体表节间膜处形成白色菌膜,粘片镜检表明感染真菌即为供试菌株。40d后,可见子实体原基及孢梗束,尚未见成熟的子囊壳。

关键词：黄山被毛孢虫生真菌侵染率

ComX对贝莱斯芽胞杆菌B31生防性状及抑制番茄枯萎病菌活性的影响

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植物病理学报 2025年

作者：姜倩倩苏振贺刘高鸽魏亚蕊刘晓萌郭庆港魏学军马平河北工程大学园林与生态工程学院河北省农林科学院植物保护研究所/农业农村部华北北部作物有害生物综合治理重点实验室/河北省农业有害生物综合防治技术创新中心/河北省作物有害生物综合防治国际科技联合研究中心

细菌可通过群体感应系统调控其代谢活动以适应外部环境，其中ComQXPA是芽胞杆菌的主要群体感应系统。贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）B31菌株在防治番茄和瓜类枯萎病方面表现出显著效果，本研究旨在探讨群体感应ComX信号分子对B.... 详细信息

细菌可通过群体感应系统调控其代谢活动以适应外部环境，其中ComQXPA是芽胞杆菌的主要群体感应系统。贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）B31菌株在防治番茄和瓜类枯萎病方面表现出显著效果，本研究旨在探讨群体感应ComX信号分子对B. velezensis B31菌株生防性状的影响。通过对B. velezensis B31菌株中ComX信号分子合成基因进行缺失突变，获得突变体ΔcomX，同时构建其互补菌株CPΔcomX，并且比较野生型B31菌株、突变体及其互补菌株在生防性状等方面的差异。结果表明，comX缺失突变对于B31菌株的生长无明显影响，但显著影响了其菌落形态、生物膜形成和游动性，且显著降低了其胞外酶活性、芽胞形成率以及对番茄枯萎病菌的抑菌活性。该研究明确了ComX对B31菌株生防性状的影响，为进一步利用该菌株进行生物防治提供了理论依据。

关键词：贝莱斯芽胞杆菌群体感应系统生物防治番茄枯萎病基因缺失和互补

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安徽西南部家蚕白僵病病源及传播途径追踪

中国农业科学 2011年第1期44卷 143-152页

作者：李佳丽栾丰刚李增智安徽农业大学微生物防治省重点实验室

【目的】明确安徽西南部家蚕白僵病菌株来源和传播途径,控制蚕病流行。【方法】利用ISSR分子标记对安徽西南潜山的病蚕、蚕室及其周边桑园、农田及松林的70株球孢白僵菌进行聚类分析和三维主坐标分析。【结果】该地区的球孢白僵菌为优... 详细信息

【目的】明确安徽西南部家蚕白僵病菌株来源和传播途径,控制蚕病流行。【方法】利用ISSR分子标记对安徽西南潜山的病蚕、蚕室及其周边桑园、农田及松林的70株球孢白僵菌进行聚类分析和三维主坐标分析。【结果】该地区的球孢白僵菌为优势性明显的异质种群;6个类群中仅主病源第II-1类群和次病源第IV类群引起家蚕的地方性白僵病,与用于防治松毛虫的菌株及在附近松毛虫种群中自然流行的土著菌株关系较远。生物测定表明,使用松毛虫分离株使家蚕死亡25%的LC25、LD25和LT25分别为使用家蚕分离株使家蚕死亡75%的LC75、LD75和LT75的1 327、1 378和1.5倍。【结论】鉴于松毛虫分离株明显的寄主专化性,在该蚕区使用由这类菌株研制的白僵菌杀虫剂防治松毛虫对蚕业是相对较为安全的。另外,当年夏秋季蚕室附近螳螂种群的白僵病大流行与家蚕白僵病无关。

关键词：家蚕球孢白僵菌白僵病地方病马尾松毛虫