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基于计算机筛选与分子模拟技术的宁夏肉牛血红蛋白源抗氧化肽的鉴定

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食品科学 2025年第2期46卷 108-117页

作者：徐斐然王玉王晓静崔伟王永坤周辉王兆明蔡克周章宝徐宝才合肥工业大学食品与生物工程学院动物源食品绿色制造与资源挖掘安徽省重点实验室安徽合肥230601 宁夏农产品质量标准与检测技术研究所宁夏银川750002

采用3种酶解法(碱性蛋白酶(E1组)、胃蛋白酶+胰蛋白酶(E2组)、碱性蛋白酶+胃蛋白酶+胰蛋白酶(E3组))制备宁夏肉牛血红蛋白酶解产物,并筛选出抗氧化活性最佳组分;利用氨基酸分析和液相色谱-串联质谱鉴定分子质量<3 kDa酶解产物的氨基酸... 详细信息

采用3种酶解法(碱性蛋白酶(E1组)、胃蛋白酶+胰蛋白酶(E2组)、碱性蛋白酶+胃蛋白酶+胰蛋白酶(E3组))制备宁夏肉牛血红蛋白酶解产物,并筛选出抗氧化活性最佳组分;利用氨基酸分析和液相色谱-串联质谱鉴定分子质量<3 kDa酶解产物的氨基酸组成和序列,利用计算机分析技术筛选出潜在的抗氧化肽,并验证其活性;通过分子模拟技术进一步研究宁夏肉牛血红蛋白抗氧化肽的作用机理。结果表明,E3组酶解效果最佳,超滤后<3 kDa的组分表现出更佳的抗氧化活性(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和2,2’-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)阳离子自由基清除率的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))分别为(18.382±0.023)mg/mL和(0.246±0.012)mg/mL);E3(分子质量<3 kDa)组富含疏水性和芳香族氨基酸,且鉴定和筛选出4条活性最佳的抗氧化肽,氨基酸序列分别为DWGHSW、VFYPW、GTGW和TYFPHF;其中,VFYPW表现出最高的DPPH自由基清除率(IC_(50):(0.350±0.013)mg/mL)和ABTS阳离子自由基清除率(IC_(50):(9.482±0.122)μg/mL),其次为DWGHSW;氢键和疏水作用使DWGHSW和VFYPW与Keap1蛋白(PDB ID:2FLU)形成稳定的复合物。该研究可为宁夏肉牛血红蛋白肽作为天然源抗氧化补充剂的应用提供理论依据,有助于宁夏肉牛血液资源的高值化利用。

关键词：计算机筛选分子模拟宁夏肉牛血红蛋白抗氧化肽鉴定

恒定链CLIP的2个片段在增强体液免疫效果的比较

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微生物学报 2014年第3期54卷 338-344页

作者：王瑞靖陈芳芳余为一安徽农业大学安徽省人畜共患病重点实验室安徽合肥230036

【目的】比较恒定链(invariant chain,Ii)CLIP的2个片段(PBS、GBS)影响免疫载体增强体液免疫的效果。【方法】首先,构建了基于小鼠Ii功能片段与新城疫病毒抗原肽F2的6个嵌合体(Cyt/TM/F2、Cyt/TM/F2/GBS、Cyt/TM/PBS/F2、Cyt/TM/F2/TRIM、Cyt/TM/F2/GBS/TRIM、Cyt/TM/PBS/F2/TRIM);其次,定向克隆至原核表达载体pET-32a中,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表达和纯化目的蛋白;最后,免疫小鼠,经间接ELISA法测定血清抗体效价,以及比较分析不同嵌合体免疫组免疫效果。【结果】一是所构建的含不同Ii功能片段/F2嵌合体的6个免疫组,均比单独F2的免疫组提高抗体水平1.5-4.9倍;二是在上述6个免疫组中,含CLIP的PBS或GBS的免疫组比不含CLIP的免疫组增强1.6-2.4倍;三是含PBS比含GBS的免疫组增强1.5倍。【结论】Ii胞浆区、跨膜区具有增强免疫效果的作用,而CLIP的PBS在Ii免疫载体中的作用优于GBS。

关键词：恒定链抗体 CLIP

基于声发射技术研究木材表面裂纹对应力波能量衰减特性的影响

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森林工程 2025年第1期41卷 40-49页

作者：陈楚敏李明方赛银赵家龙沈志辉张志恒邓婷婷西南林业大学机械与交通学院昆明650224 安徽工程大学高端装备先进感知与智能控制教育部重点实验室安徽芜湖241000 安徽工程大学电气工程学院安徽芜湖241000

木材中的裂纹对应力波的传播特性具有不可忽略的影响,探究应力波的能量变化规律对木材中裂纹深度的识别具有重要意义。以樟子松木材作为试验材料,在不同的试件上制作不同数量的裂纹,并且裂纹深度从0逐渐增加至90 mm,每次的增量为10 mm... 详细信息

木材中的裂纹对应力波的传播特性具有不可忽略的影响,探究应力波的能量变化规律对木材中裂纹深度的识别具有重要意义。以樟子松木材作为试验材料,在不同的试件上制作不同数量的裂纹,并且裂纹深度从0逐渐增加至90 mm,每次的增量为10 mm。首先,利用声发射(acoustic emission,AE)传感器采集铅芯折断在试件表面产生的应力波,并对其进行时频特征分析。然后,基于离散小波分析,建立应力波在不同频段中的能量衰减模型。研究结果表明,随着裂纹深度的增加,暂态波中频率成分为125~250 kHz的AE信号占比显著减小;随着裂纹数量的增加,小波重构后的AE信号能量衰减模型中表示衰减程度的系数由0.73增加至1.09;此外,随着裂纹深度的增加,频段为31.25~62.5 kHz的小波信号能量衰减明显缓慢;利用能量衰减模型确定的裂纹区域可以覆盖实际裂纹的所在位置。

关键词：木材裂纹声发射能量小波变换应力波区域定位指数衰减

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基于声发射的木材裂缝数量辨识研究

森林工程 2025年第1期41卷 59-66页

作者：张志恒李明沈志辉陈楚敏方赛银杜坤杨龙飞邓婷婷西南林业大学机械与交通学院昆明650224 安徽工程大学高端装备先进感知与智能控制教育部重点实验室安徽芜湖241000 安徽工程大学电气工程学院安徽芜湖241000

针对木材裂缝缺陷,提出一种基于声发射的木材裂缝数量识别方法。首先,在试件上人为依次制作1 mm×9 mm(长×高)的4条裂缝,在裂缝的一侧通过折铅的方式产生声发射(acoustic emission,AE)信号,另一侧放置传感器,信号采样频率设置为2 MHz... 详细信息

针对木材裂缝缺陷,提出一种基于声发射的木材裂缝数量识别方法。首先,在试件上人为依次制作1 mm×9 mm(长×高)的4条裂缝,在裂缝的一侧通过折铅的方式产生声发射(acoustic emission,AE)信号,另一侧放置传感器,信号采样频率设置为2 MHz。然后,通过粒子群算法(particle swarm optimization,PSO)确定变分模态分解(variational mode decoposition,VMD)的分解层数K和惩罚因子α,并将原始信号分解为具有不同频率的本征模态(intrinsic mode function,IMF)。接着,随机选择5组信号进行VMD分解,并对分解后的IMF构成的矩阵进行奇异值分解(singular value decomposition,SVD),得到相应的奇异值向量,再由5组奇异值向量组成标准矩阵。最后,由测得的AE信号,分别与标准矩阵计算马氏距离,并依据最小判别原则,判定裂缝数量。结果表明,PSO-VMD-SVD方法能够方便提取出AE信号特征,并通过计算马氏距离进行裂缝数量判别,判别正确率为92%。

关键词：声发射变分模态分解奇异值分解马氏距离木材裂缝缺陷

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C6位选择性氧化竹浆纤维的制备与表征

高分子材料科学与工程 2014年第3期30卷 175-180页

作者：许云辉刘雪兰朱洪玲谭九龙安徽农业大学轻纺工程与艺术学院安徽合肥230036 安徽农业大学安徽省人普共患病重点实验室安徽合肥230036

通过HNO3/H3PO4-NaNO2体系选择性氧化制备了不同氧化程度的单羧基竹浆纤维素。研究了HNO3/H3PO4-NaNO2氧化条件对竹浆纤维的聚集态结构和物理力学性能的影响,利用红外光谱、扫描电镜、核磁共振碳谱及X射线衍射对氧化竹浆纤维的结构进行... 详细信息

通过HNO3/H3PO4-NaNO2体系选择性氧化制备了不同氧化程度的单羧基竹浆纤维素。研究了HNO3/H3PO4-NaNO2氧化条件对竹浆纤维的聚集态结构和物理力学性能的影响,利用红外光谱、扫描电镜、核磁共振碳谱及X射线衍射对氧化竹浆纤维的结构进行了表征。结果表明,竹浆纤维分子中的C6位伯羟基已被HNO3/H3PO4-NaNO2氧化体系选择性氧化为羧基,在FT-IR和13C-NMR谱图中明显出现了羧基特征峰。随着氧化剂用量的增加与氧化时间的延长,氧化竹浆纤维的失重率和羧基含量明显提高,但纤维的力学强度与结晶度逐渐降低。保持HNO3/H3PO4-NaNO2氧化时间在0 min^60 min范围内,氧化竹浆纤维的物理力学性能可满足纺织后加工及服用性能要求,且在竹浆纤维分子中引入了2.28%更具活性的羧基官能团,增强了氧化竹浆纤维进一步化学改性的能力。

关键词：竹浆纤维氧化纤维索HNO3 H3PO4-NaNO2氧化体系C6位选择性氧化结构表征

农田氧化亚氮减排技术及其与绿肥协同应用分析

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草业学报 2025年第2期 196-210页

作者：刘蕊常单娜周国朋高嵩涓柴强曹卫东甘肃农业大学农学院干旱生境作物学国家重点实验室中国农业科学院农业资源与农业区划研究所北方干旱半干旱耕地高效利用全国重点实验室安徽农业大学资源与环境学院农田生态保育与污染防控安徽省重点实验室南京农业大学资源与环境科学学院

氧化亚氮（N2O）是导致全球气候变暖的主要温室气体之一，农业活动是N2O的重要排放源。土壤N2O排放主要源于硝化和反硝化过程，受土壤p H值、氧气浓度、二氧化碳浓度、水分、质地、温度和外源碳氮投入等因素的影响。近年来，中国在利用... 详细信息

氧化亚氮（N2O）是导致全球气候变暖的主要温室气体之一，农业活动是N2O的重要排放源。土壤N2O排放主要源于硝化和反硝化过程，受土壤p H值、氧气浓度、二氧化碳浓度、水分、质地、温度和外源碳氮投入等因素的影响。近年来，中国在利用绿肥实现化肥减施、驱动土壤健康方面取得了明显成效。但关于绿肥参与N2O排放的研究尚处在起步阶段。种植利用绿肥对N2O排放的影响受绿肥种类、土壤理化性状等多方面因素共同作用，绿肥主要通过调控土壤无机氮含量影响N2O排放，绿肥生长期间能够吸收土壤盈余的无机氮，翻压后能够替代部分氮肥，通过减少硝化和反硝化底物减少农田土壤N2O排放，但同时存在由于绿肥腐解引发的有机氮矿化导致的N2O排放风险。可根据绿肥种植制度、作物种类、气候条件和土壤类型等，采用适宜的N2O减排技术。南方水稻与绿肥轮作区，可减施氮肥40%，添加生物炭等碱性调理剂；华北地区主作物与绿肥轮作区，可减施氮肥15%～20%，添加化学抑制剂、结合氮肥机械化深施；东北和西北地区的主作物复种、间作绿肥制度中，可减施氮肥13%～48%，结合添加硝化抑制剂、结合水肥一体化和免耕；西南地区主作物与绿肥轮作制度中，可减施氮肥15%～20%，配合缓控释肥一次性施肥和添加化学抑制剂等。重点探讨了N2O减排技术在绿肥制度中应用的可行性，以期为更好发挥绿肥作用，进一步减缓N2O排放提供参考。

关键词：绿肥氧化亚氮影响因素减排技术

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牛恒定链与BoLAⅡ类分子β链活性片段的结合与定位分析

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农业生物技术学报 2022年第10期30卷 1884-1893页

作者：陈芳芳于凤梅张俊谈阳刘翠艳桂亚萍安徽农业大学动物科技学院/安徽省人畜共患病实验室

牛白细胞抗原(bovine leukocyte antigen, BoLA)，又名主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)，其Ⅱ类分子及其伴侣蛋白恒定链(invariant chain, Ii)在加工和递呈抗原肽中起关键作用。为了解在此过程中BoLAⅡβ... 详细信息

牛白细胞抗原(bovine leukocyte antigen, BoLA)，又名主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)，其Ⅱ类分子及其伴侣蛋白恒定链(invariant chain, Ii)在加工和递呈抗原肽中起关键作用。为了解在此过程中BoLAⅡβ链与Ii结合和在细胞内定位的特征，本研究提取了淮北黄牛(Bos taurus)血细胞mRNA并反转录为cDNA，应用PCR技术扩增牛Ii与BoLAⅡβ链及结构域的基因片段，并分别构建相应的真核和原核表达质粒。利用原核表达系统进行蛋白的表达和纯化，应用拉下法和Western blot检测Ii结合BoLAⅡβ及其片段的结合关系。应用激光共聚焦显微镜观察Ii与BoLAⅡβ链及其片段在细胞内共定位。结果显示，构建的含牛Ii、BoLAⅡβ、BoLAⅡβ(β1β2)和BoLAⅡβ(TC)基因的重组质粒转化细菌，经诱导能正确表达蛋白并得到纯化。BoLAⅡβ和BoLAⅡβ(β1β2)具有结合Ii的活性功能，而BoLAⅡβ(TC)却无此功能。同时，在真核细胞内Ii能与BoLAⅡβ及其主要结构域BoLAⅡβ(β1β2)和BoLAⅡβ(TC)共定位。综上所述，BoLAⅡβ的β1β2是结合Ii的关键结构域，而BoLAⅡβ的β1β2和TC结构域均具有与Ii在细胞内共定位功能。本研究为进一步研究牛BoLA分子与Ii在免疫应答中的转运及其机理提供了重要实验依据。

关键词：牛恒定链(Ii) 牛白细胞抗原(BoLA) 结合共定位

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应用RACE法克隆鸽恒定链基因的研究

遗传 2008年第1期30卷 77-80页

作者：刘岗仲大莲刘雪兰余为一安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室合肥230036

为比较禽类恒定链的结构和功能,应用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术首次克隆并鉴定了鸽恒定链基因。首先用一对含高度保守的DNA片段的简并引物,从鸽脾细胞RNA扩增部分恒定链片段,接着测序并设计新引物分别从5′和3′RACE... 详细信息

为比较禽类恒定链的结构和功能,应用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术首次克隆并鉴定了鸽恒定链基因。首先用一对含高度保守的DNA片段的简并引物,从鸽脾细胞RNA扩增部分恒定链片段,接着测序并设计新引物分别从5′和3′RACE扩增延长该片段。最后根据全基因的序列设计上、下游引物,获得大小为1050bp的全长cDNA。比较核苷酸序列,鸽与鸡的Ii链同源性达到82.8%,而与人等其它动物的同源性则在52.0%以上;其中633bp的开放阅读框编码211个氨基酸残基的前体蛋白。推导和分析氨基酸序列表明,分子结构与鸡恒定链相似,其中有些氨基酸残基表现出较高的保守性。

关键词：鸽恒定链 RACE 克隆

沉默鸡B-Fα基因对IL-2、IL-4和IL-6转录水平的影响

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农业生物技术学报 2018年第10期26卷 1747-1753页

作者：陈芳芳李锦春刘雪兰李娟余为一安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)和白介素(interleukin, IL)都是重要的免疫分子,其中MHCⅠ类分子递呈内源性抗原并启动细胞免疫,IL则是重要的免疫调节因子。关于鸡(Gallus gallus) MHCⅠ类分子(又称为B-F... 详细信息

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)和白介素(interleukin, IL)都是重要的免疫分子,其中MHCⅠ类分子递呈内源性抗原并启动细胞免疫,IL则是重要的免疫调节因子。关于鸡(Gallus gallus) MHCⅠ类分子(又称为B-Fα)与下游调节因子IL基因的关系尚不明确。本研究旨在应用基因沉默法研究下调B-Fα基因表达对IL-2、IL-4、IL-6转录水平的影响。首先构建沉默鸡B-Fα基因的重组慢病毒载体。根据B-Fα基因和短发夹RNA (short hairpin RNA, shRNA)序列的结构要求,筛选3段DNA序列并设计合成shRNA;利用限制性内切酶定向插入慢病毒表达质粒pLL3.7,获得重组质粒。分别将3个重组质粒转染293T细胞,均能表达标签蛋白并包装慢病毒。将3株重组病毒感染HD-11细胞,感染效率达95%以上。利用qRT-PCR进行检测分析显示,重组病毒干扰B-Fα基因表达,分别下调至39%、97%和61%。将其中干扰效果最佳的重组慢病毒(pLL-sh B-Fα-257)感染鸡源巨噬细胞系HD-11细胞,并检测IL-2、IL-4和IL-6的转录水平。结果显示,B-Fα基因表达下调的同时,IL基因转录水平受到不同程度的影响,其中IL-2表达下调(P<0.01),IL-4上调(P<0.05),IL-6没有明显变化。上述结果提示,应用基因沉默法可抑制B-Fα基因表达,并影响IL基因的转录水平,提示启动细胞免疫的B-Fα基因与下游调节免疫反应的细胞因子之间存在关联。本研究为深入探讨免疫反应的调控机理提供了基础资料。

关键词：基因沉默包装病毒鸡MHCⅠ类分子基因(B-Fα) 白介素基因