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阪崎克罗诺杆菌RPA-LF检测方法的建立

中国兽医科学 2022年第2期52卷 168-176页

作者：张欣王权祁克宗宋祥军韩先干蒋蔚中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 安徽农业大学兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室安徽合肥230036

以阪崎克罗诺杆菌特异性基因16S rRNA和外膜蛋白基因ompA为靶序列,设计适用于重组酶聚合酶扩增-侧流层析技术(RPA-LF)的引物和探针,并优化反应条件。结果表明,RPA反应可在25~45℃进行,10~20 min即可完成。优化条件后,RPA-LF总反应时间仅... 详细信息

以阪崎克罗诺杆菌特异性基因16S rRNA和外膜蛋白基因ompA为靶序列,设计适用于重组酶聚合酶扩增-侧流层析技术(RPA-LF)的引物和探针,并优化反应条件。结果表明,RPA反应可在25~45℃进行,10~20 min即可完成。优化条件后,RPA-LF总反应时间仅为20 min,包括RPA在39℃反应15 min,RPA反应产物在LF试纸条上反应5 min,即可用肉眼判断结果。该方法具有较高的灵敏度,最低检测限可以达到80 pg/反应,约为960 CFU/反应。与7种常见的食源性病原菌都没有交叉反应,表明该方法具有较好的特异性。此外,该方法能够同时识别6种阪崎克罗诺杆菌同属菌,表明该方法广谱性好。本研究中建立的针对阪崎克罗诺杆菌的RPA-LF检测方法,具有操作简便、快速敏感的优点,为该菌的现场快速检测打下了基础。

关键词：阪崎克罗诺杆菌重组酶聚合酶扩增技术侧流层析快速检测

Ⅵ型分泌系统分泌蛋白ClpV对禽致病性大肠杆菌生物学特性的影响

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中国预防兽医学报 2021年第8期43卷 848-853页

作者：连丽燕宋祥军蒋胡艳陈兆国蒋蔚韩先干祁克宗安徽农业大学兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室安徽合肥230036 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

为研究clpV对禽致病性大肠杆菌(APEC)生物学特性的影响,本研究通过Red同源重组构建了APEC DE17株的clpV缺失株DE17ΔclpV及其回补株DE17CΔclpV,比较分析了野生株、缺失株和回补株的生长曲线,运动性和生物被膜(BF)形成能力;对DF-1细胞... 详细信息

为研究clpV对禽致病性大肠杆菌(APEC)生物学特性的影响,本研究通过Red同源重组构建了APEC DE17株的clpV缺失株DE17ΔclpV及其回补株DE17CΔclpV,比较分析了野生株、缺失株和回补株的生长曲线,运动性和生物被膜(BF)形成能力;对DF-1细胞的黏附、侵入能力以及通过荧光定量PCR检测clpV缺失后对Ⅵ型分泌系统(T6SS)相关基因转录水平的影响。结果显示,通过Red同源重组构建了clpV基因缺失株与回补株,利用分光光度计测OD600nm绘制野生株、缺失株和回补株的生长曲线。结果显示,与野生株相比,缺失株DE17ΔclpV生长速率无明显变化;其运动和BF形成能力的检测结果显示,与野生株相比,缺失株DE17ΔclpV的运动能力降低(p生物学特性,为进一步研究T6SS的功能及其致病机制提供参考。

关键词：禽致病性大肠杆菌 Ⅵ型分泌系统 clpV基因生物学功能

A、B、J亚群禽白血病病毒混合感染的鉴定及gp85基因序列分析

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中国畜牧兽医 2024年第1期51卷 302-311页

作者：窦俊峰汪最李丽卢琴金鑫鑫凌小淳罗青平翟新国河北工程大学生命科学与食品工程学院动物医学系邯郸056038 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室畜禽病原微生物学湖北省重点实验室武汉430064 湖北洪山实验室武汉430070

【目的】了解湖北地区禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)亚群之间混合感染及其gp85基因遗传变异情况,为进一步研究ALV混合感染的流行病学提供参考。【方法】对来自湖北宜昌疑似感染ALV的一只病死鸡进行病理剖检,无菌采集病变组... 详细信息

【目的】了解湖北地区禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)亚群之间混合感染及其gp85基因遗传变异情况,为进一步研究ALV混合感染的流行病学提供参考。【方法】对来自湖北宜昌疑似感染ALV的一只病死鸡进行病理剖检,无菌采集病变组织接种DF-1细胞进行病毒分离,通过PCR、ELISA及间接免疫荧光试验(IFA)等方法进行亚群鉴定,进一步对分离株gp85基因的相似性和变异情况进行分析。【结果】剖检结果可见病死鸡肾脏、脾脏肿大,肺脏出血,表面可见灰白色肿瘤结节;组织匀浆接种DF-1细胞后,ELISA检测发现细胞上清P27抗原呈阳性;IFA检测发现,感染细胞里有特异性绿色荧光;PCR鉴定能同时扩增出A(692 bp)、B(847 bp)和J(545 bp)亚群的特异性条带。鉴定结果表明,从该病死鸡中分离到A、B和J亚群ALV毒株,分别命名为HBYC2022-A、HBYC2022-B和HBYC2022-J。分离株gp85基因核苷酸相似性分析显示,HBYC2022-A与江苏株JS-A1201相似性最高,为99.6%;HBYC2022-B与江苏株JS-B1204相似性最高,为99.7%;而HBYC2022-J与黑龙江株PK19FA01、广西株GX20YL12 J及安徽株AHaq02相似性均为100%。此外,分离株gp85基因高突变区域(hr1、hr2)氨基酸序列并未出现特殊点突变。【结论】鸡群存在A、B和J不同亚群ALV的混合感染情况,提示国内养禽场需提高警惕并加强针对ALV各亚群的流行病学调查。

关键词：禽白血病病毒(ALV) 分离鉴定混合感染 gp85基因序列分析

T6SS2效应蛋白Hcp通过TPM4调控APEC的组织载菌量

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T6SS2效应蛋白Hcp通过TPM4调控APEC的组织载菌量

临床分离禽致病性大肠杆菌生物被膜成膜性与耐药相关性分析

第九届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：宋祥军侯曼曼涂健邵颖祁克宗安徽农业大学动物科技学院兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室

引言禽致病性大肠杆菌(APEC)感染给全球范围内的养禽业带来巨大的经济损失。Ⅵ型分泌系统(T6SS)是众多致病因子中的一种,在APEC致病力调控方面发挥至关重要的作用。但毒力效应蛋白Hcp在APEC感染宿主作用过程中具体所发挥的调控功能尚不... 详细信息

引言禽致病性大肠杆菌(APEC)感染给全球范围内的养禽业带来巨大的经济损失。Ⅵ型分泌系统(T6SS)是众多致病因子中的一种,在APEC致病力调控方面发挥至关重要的作用。但毒力效应蛋白Hcp在APEC感染宿主作用过程中具体所发挥的调控功能尚不清楚。

关键词：效应蛋白 Hcp T6SS2

来源： cnki会议评论

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临床分离禽致病性大肠杆菌生物被膜成膜性与耐药相关性分析

sRNA-RyhB调控禽致病性大肠杆菌致宿主细胞损伤的研究

中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：邓小玲曾明华阮祥春安徽农业大学动物科技学院兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室

[目的]为了探寻临床分离禽致病性大肠杆菌生物被膜成膜性与耐药性之间的相关性,对70株临床分离禽致病性大肠杆菌生物被膜成膜性和耐药性进行检测分析。[方法]通过结晶紫染色鉴定临床分离致病性大肠杆菌生物被膜成膜性,采用K-B纸片扩散... 详细信息

[目的]为了探寻临床分离禽致病性大肠杆菌生物被膜成膜性与耐药性之间的相关性,对70株临床分离禽致病性大肠杆菌生物被膜成膜性和耐药性进行检测分析。[方法]通过结晶紫染色鉴定临床分离致病性大肠杆菌生物被膜成膜性,采用K-B纸片扩散法和最小抑菌浓度法测定临床分离致病性大肠杆菌对十种抗菌药物敏感性。[结果]药敏试验结果显示,70株大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、多西环素、氟苯尼考、头孢曲松、恩诺沙星、新霉素、阿奇霉素、多粘菌素B、替加环素的耐药率分别为88.57%、87.14%、71.43%、65.71%、55.71%、42.86%、32.86%、27.14%、7.14%、2.86%。生物被膜成膜性与耐药相关性分析结果显示,大肠杆菌生物被膜阴性菌株(n=44)对氨苄西林、阿莫西林、多西环素、氟苯尼考、头孢曲松、恩诺沙星、新霉素、阿奇霉素、替加环素、多粘菌素B的耐药率分别为86.36%、84.09%、75.00%、54.55%、45.45%、34.09%、34.09%、20.45%、2.27%、2.27%。生物被膜阳性菌(n=26)对阿莫西林、氨苄西林、氟苯尼考、头孢曲松、多西环素、恩诺沙星、阿奇霉素、新霉素、多粘菌素B、替加环素的耐药率分别为92.31%、92.31%、84.62%、73.08%、65.38%、57.69%、38.46%、30.77%、15.38%、3.85%。生物被膜阳性菌株对多数抗生素的耐药率均高于阴性菌株,且生物被膜阳性菌株平均耐药5.62种,阴性菌株平均耐药4.36种。[结论]临床分离禽致病性大肠杆菌菌株,对十种抗生素均产生不同程度的耐药性,且菌株生物被膜的成膜性与其耐药性呈正相关。

关键词：致病性大肠杆菌耐药性生物被膜成膜性相关性

来源： cnki会议评论

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sRNA-RyhB调控禽致病性大肠杆菌致宿主细胞损伤的研究

禽腺病毒4型Fiber2蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会

作者：涂健祁克宗王慧敏安徽农业大学动物科技学院安徽农业大学兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室

【研究目的】禽大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic ***,APEC)引起的严重危害养业发展的重要细菌性传染病,APEC与尿路结肠大肠杆菌(UPEC)和新生儿脑膜炎大肠杆菌(NMEC)同属肠外致病性大肠杆菌(ExPEC),因APEC与上述两种大... 详细信息

【研究目的】禽大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic ***,APEC)引起的严重危害养业发展的重要细菌性传染病,APEC与尿路结肠大肠杆菌(UPEC)和新生儿脑膜炎大肠杆菌(NMEC)同属肠外致病性大肠杆菌(ExPEC),因APEC与上述两种大肠杆菌高度的基因同源性,对其致病机制研究具有重要的公共卫生学意义。非编码小RNA(sRNA)在细菌中普遍存在,虽不直接翻译蛋白但却是细菌极为重要的调控因子,在细菌致病性上发挥着多元化调控作用。Ryh B是目前己知调控细菌靶m RNA数目最多的sRNA,

关键词：禽致病性大肠杆菌巨噬细胞宿主细胞 sRNA-RyhB

来源： cnki会议评论

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农业生物技术学报 2019年第10期27卷 1804-1812页

作者：郭浩然贾艳娥吉艳红李郁安徽农业大学动物科技学院中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室

自2015年以来,国内鸡(Gallus domesticus)群因禽腺病毒4型(Fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4)感染引起的包涵体肝炎、心包积液的病例呈逐年上升趋势。为制备反应原性良好的FAdV-4血清学诊断抗原,本研究根据密码子优化后的FAdV-4 Fib... 详细信息

自2015年以来,国内鸡(Gallus domesticus)群因禽腺病毒4型(Fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4)感染引起的包涵体肝炎、心包积液的病例呈逐年上升趋势。为制备反应原性良好的FAdV-4血清学诊断抗原,本研究根据密码子优化后的FAdV-4 Fiber2全基因合成序列进行了体外扩增,再将其克隆入p Cold表达载体,构建原核表达载体pCold-Fiber2。pCold-Fiber2重组质粒转化至大肠杆菌(Escherichia coli) PGTf2感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalac toside, IPTG)诱导表达后纯化Fiber2蛋白,用该蛋白免疫家兔(Oryctolagus cuniculus),成功制备了抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗体。Western blot和间接免疫荧光试验(indirected immunofluorescence assay, IFA)结果表明,抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗体纯化后可与Fiber2蛋白和FAdV-4发生特异性反应,证明Fiber2蛋白具有良好的免疫原性。建立的FAdV-4抗体间接ELISA检测方法显示该方法检测灵敏性为96%,特异性为100%。本研究成功制备了具有良好Western blot和IFA反应原性的多克隆抗体,建立了FAdV-4抗体间接ELISA检测方法,该方法反应特异性好、灵敏度高、操作简单、反应结果稳定可靠,适用于鸡群抗体水平的监测、评估和发现早期隐性感染,为研制FAdV-4的血清学诊断技术和防控该病提供了基础资料。

关键词：禽腺病毒4型(FAdV-4) Fiber2蛋白原核表达多克隆抗体

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鸡粪堆肥中优势菌及复合固化菌剂载体的筛选

安徽农业大学学报 2021年第4期48卷 584-589页

作者：邵颖郑倩倩赵鑫铭宋祥军涂健祁克宗安徽农业大学动物科技学院兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室安徽省动物性食品质量与生物安全工程实验室合肥230036

为了提高畜禽粪便堆肥降解效率和堆肥质量,比较不同堆肥时期微生物菌群结构和多样性。基于高通量测序分析堆肥前、中和腐熟时期样品的优势细菌,通过检测油脂、淀粉、纤维素、明胶分解性能和生理生化特性,筛选堆肥中的优势菌株,并优化优... 详细信息

为了提高畜禽粪便堆肥降解效率和堆肥质量,比较不同堆肥时期微生物菌群结构和多样性。基于高通量测序分析堆肥前、中和腐熟时期样品的优势细菌,通过检测油脂、淀粉、纤维素、明胶分解性能和生理生化特性,筛选堆肥中的优势菌株,并优化优势菌株的培养条件和筛选最佳的菌剂载体。结果表明:芽孢杆菌是堆肥过程中的优势菌,成功筛选出具有堆肥微生态菌剂优势的3株芽孢杆菌,分别是D1解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、D5苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)和D7地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis);3株菌在环境温度为41℃时,pH为6.5~7.5,以酵母提取物为3株菌氮源时,酶活性最高,各菌同组产酶差异显著(P生物和制备固体堆肥复合菌剂,有利于揭示堆肥过程中微生物作用的本质规律,为加速畜禽排泄物资源化提供有效途径。

关键词：养殖污染芽孢杆菌鸡粪复合堆肥菌剂菌剂固化技术

禽致病性大肠杆菌hcp2a基因对雏鸡脾脏细胞因子-细胞因子受体相互作用通路的影响

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江苏农业学报 2022年第1期38卷 151-156页

作者：何琪孙晨晨侯曼曼肖福泉龚柳菲黄燕段少仪祁克宗宋祥军安徽农业大学动物科技学院兽医病理生物学与疫病防控安徽省重点实验室安徽合肥230036

探究禽致病性大肠杆菌(APEC)hcp2a基因缺失对雏鸡脾脏转录组的影响,为深入研究禽致病性大肠杆菌的致病机理奠定理论基础。将7日龄雏鸡随机分成2组,用APEC野生株(AE17)及其hcp2a基因缺失株(AE17△hcp2a)分别感染雏鸡,采集脾脏组织制作苏... 详细信息

探究禽致病性大肠杆菌(APEC)hcp2a基因缺失对雏鸡脾脏转录组的影响,为深入研究禽致病性大肠杆菌的致病机理奠定理论基础。将7日龄雏鸡随机分成2组,用APEC野生株(AE17)及其hcp2a基因缺失株(AE17△hcp2a)分别感染雏鸡,采集脾脏组织制作苏木精-伊红(HE)染色切片,通过转录组学测序筛选hcp2a基因缺失株感染后的差异表达基因,利用实时荧光定量PCR方法对测序结果进行验证,对差异表达基因进行GO、KEGG分析。AE17和AE17△hcp2a均能引起雏鸡脾脏的病理变化,转录组学测序结果发现,AE17△hcp2a感染雏鸡脾脏中筛选到512个差异表达基因,其中221个基因上调表达,291个基因下调表达。选择部分差异表达基因进行实时荧光定量PCR验证,差异表达基因mRNA转录水平的变化趋势与测序结果一致。GO分析结果表明,差异表达基因富集在生物膜、生物膜的组成成分、氧化还原过程、免疫反应、水解酶活性等条目。KEGG分析结果表明,差异表达基因富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用通路、细胞粘附分子(CAMs)通路等。禽致病性大肠杆菌hcp2a基因缺失后感染雏鸡,会影响其脾脏mRNA表达谱,差异表达基因主要富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用通路等。

关键词：禽致病性大肠杆菌 hcp2a基因脾脏雏鸡细胞因子-细胞因子受体相互作用通路

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