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健脾滋肾方抑制系统性红斑狼疮患者的足细胞自噬:基于网络药理学和临床研究

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南方医科大学学报 2024年第3期44卷 465-473页

作者：陈君洁黄传兵李明安徽中医药大学第一临床医学院安徽合肥230000 安徽中医药大学第一附属医院风湿免疫科安徽合肥230031

目的基于网络药理学结合分子对接,通过临床验证,探讨健脾滋肾方从足细胞自噬途径治疗系统性红斑狼疮(SLE)潜在机制。方法运用TCMSP、GeneCards、OMIM及TTD数据库获取健脾滋肾方及SLE、足细胞自噬相关靶点;取三者交集得到健脾滋肾方经... 详细信息

目的基于网络药理学结合分子对接,通过临床验证,探讨健脾滋肾方从足细胞自噬途径治疗系统性红斑狼疮(SLE)潜在机制。方法运用TCMSP、GeneCards、OMIM及TTD数据库获取健脾滋肾方及SLE、足细胞自噬相关靶点;取三者交集得到健脾滋肾方经足细胞自噬途径治疗SLE的潜在作用靶点。Cytoscape3.9.1构建“复方-成分-疾病-潜在靶点”网络及蛋白质互作网络,筛选出关键活性成分和靶点,进行分子对接。并临床纳入46例SLE患者和10例健康人,将SLE患者随机分为观察组(n=22)和对照组(n=21)。对照组口服醋酸泼尼松及吗替麦考酚酯,观察组在其基础上加用健脾滋肾方,疗程均为12周。运用ELISA检测SLE组及健康人群尿液中nephrin、synaptopodin水平;使用Western blot检测外周血内p-JAK1/JAK1、pSTAT1/STAT1、LC3II/LC3I、p62蛋白水平,并观察经健脾滋肾方干预后对SLE患者足细胞相关蛋白(nephrin、synaptopodin)、自噬水平(LC3II/LC3I、p62)及p-JAK1/JAK1、p-STAT1/STAT1表达影响。结果经筛选得到健脾滋肾方经足细胞自噬途径治疗SLE的关键活性成分4种,核心靶点基因5个(STAT1、PIK3CG、MAPK1、PRKCA、CJA1);富集分析显示可能涉及AGERAGE、JAK/STAT、EGFR、PI3K/Akt等信号通路。分子对接结果显示关键活性物质和核心靶点均有较好的结合活性。其中STAT1是结合活性最好的靶蛋白。临床试验证实健脾滋肾方能够显著降低血清中p-JAK1/JAK1及p-STAT1/STAT1、LC3II/LC3I蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01),升高p62蛋白表达水平(P<0.05),降低尿液中nephrin、synaptopodin水平(P<0.05)。结论健脾滋肾方经足细胞自噬治疗SLE具有多成分、多靶点、多通路协同作用的特点,其可能通过槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇、异鼠李素等关键活性成分作用于STAT1靶基因,抑制JAK/STAT通路相关基因表达,调控自噬减轻SLE足细胞损伤。

关键词：系统性红斑狼疮健脾滋肾方网络药理学足细胞自噬

杨骏教授基于疾病要素针灸综合治疗神经性耳鸣经验

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中国针灸 2024年

作者：张乐乐袁爱红叶敏解鸿宇张雅婷查必祥戎志豪杨骏安徽中医药大学安徽中医药大学第一附属医院针灸康复科

杨骏教授从中医经典出发，结合临床经验和现代研究发现，深入分析神经性耳鸣的病因病机，总结出其中医疾病要素——气滞血瘀，神匿窍闭。综合针刺、电针、温针灸、冰片灸和中药多种治疗手段，妙用听宫，重用哑门，多穴配伍，多法并举，... 详细信息

杨骏教授从中医经典出发，结合临床经验和现代研究发现，深入分析神经性耳鸣的病因病机，总结出其中医疾病要素——气滞血瘀，神匿窍闭。综合针刺、电针、温针灸、冰片灸和中药多种治疗手段，妙用听宫，重用哑门，多穴配伍，多法并举，各取所宜，量效叠加，共奏活血通络、宁神开窍之功，竭力提高针灸疗效。

关键词：神经性耳鸣针灸疾病要素名医经验杨骏

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医学统计学课程思政教学改革的实践研究

中国卫生统计 2024年第2期41卷 302-305页

作者：李静朱继民武松杨洁冯鑫安徽中医药大学 230038

推动思想政治教育与专业课程的有机融合对于培养高素质医学人才具有积极意义。医学统计学是一门重要的专业基础课,受众面广,是医学院校开展课程思政的重要阵地。本文从课程思政教学设计、教学实施和效果评价等方面阐述了医学统计学课程... 详细信息

推动思想政治教育与专业课程的有机融合对于培养高素质医学人才具有积极意义。医学统计学是一门重要的专业基础课,受众面广,是医学院校开展课程思政的重要阵地。本文从课程思政教学设计、教学实施和效果评价等方面阐述了医学统计学课程思政教学改革的实践情况,并对完善课程思政教学措施提出了相关建议,为提升高校医学统计学课程思政教学质量和水平提供参考。

关键词：课程思政医学统计学教学改革

针刺联合刺血及清瘟泄热汤对新型冠状病毒感染轻中型患者临床疗效回顾性研究

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针刺研究 2024年

作者：姜天鑫王保国杨琪琪柳雯马守亮李飞杨骏安徽中医药大学第二附属医院安徽中医药大学蚌埠医学院第一附属医院安徽中医药大学第一附属医院

目的：回顾性研究针刺联合刺血及中药清瘟泄热汤对轻中型新型冠状病毒（COVID-19）感染患者的临床疗效及安全性。方法：将2022年12月至2023年2月收治的100例COVID-19轻中型患者，按照1:1比例随机分为对照组和观察组，每组50例。对照组... 详细信息

目的：回顾性研究针刺联合刺血及中药清瘟泄热汤对轻中型新型冠状病毒（COVID-19）感染患者的临床疗效及安全性。方法：将2022年12月至2023年2月收治的100例COVID-19轻中型患者，按照1:1比例随机分为对照组和观察组，每组50例。对照组予以中药清瘟泄热汤口服，连续服用6 d。治疗组在对照组基础上加用针刺联合刺血治疗，针刺每日1次，每次30 min，连续治疗6 d；刺血隔日1次，治疗3次。治疗前和治疗结束当日，记录患者的中医症候评分和肺部CT评分，采用ELISA法检测患者血清C反应蛋白（CRP）、白细胞介素6（IL-6）及肿瘤坏死因子（TNF-α）水平，采用汉密尔顿抑郁量表（HAMD）及汉密尔顿焦虑量表（HAMA）评价患者焦虑抑郁水平，并评定两组治疗的安全性。结果：与本组治疗前比较，治疗后对照组患者在发热、干咳、咽痛和中医证候评分总分方面有所改善（P＜0.01），而肌肉酸痛、乏力未见明显好转；观察组患者中医临床症候评分总分和各项症候均显著改善（P＜0.01）；两组患者肺部CT评分、HAMA和HAMD评分、血清CRP、IL-6含量均降低（P＜0.01)；观察组患者血清TNF-α含量降低（P＜0.01)。观察组各项指标均优于对照组（P＜0.01，P＜0.05）。两组患者均未出现不良反应。结论：针刺联合刺血及口服清瘟泄热汤治疗轻中型COVID-19感染，可明显改善患者临床症状，缓解肺部炎性损伤，降低炎性因子水平，减轻焦虑和抑郁情绪，且无不良反应发生。

关键词：新型冠状病毒感染针刺刺血清瘟泄热汤回顾性研究

复方泽漆冲剂含药血清调控PI3K/Akt/NF-κB通路与NLRP3炎症小体缓解银屑病细胞模型损伤作用机制研究

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药物评价研究 2024年第5期47卷 1051-1062页

作者：吴敏王久香刘涛峰刘小平曹宇章纬汪长中安徽中医药大学第一附属医院安徽合肥230031 安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012

目的探讨复方泽漆冲剂含药血清对银屑病细胞模型PI3K/Akt/NF-κB通路及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的调控作用以阐明该药对银屑病的干预机制。方法制备复方泽漆冲剂大鼠含药血清,体外以10 ng·mL^(−1)的角质形成细... 详细信息

目的探讨复方泽漆冲剂含药血清对银屑病细胞模型PI3K/Akt/NF-κB通路及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体的调控作用以阐明该药对银屑病的干预机制。方法制备复方泽漆冲剂大鼠含药血清,体外以10 ng·mL^(−1)的角质形成细胞生长因子(KGF)刺激人永生化角质形成细胞系HaCaT建立银屑病细胞模型,将细胞分为对照组、模型组及复方泽漆冲剂5%、10%、20%含药血清组,CCK-8法检测不同体积分数含药血清作用于HaCaT细胞0、24、48、72 h时的细胞活力,确定复方泽漆冲剂含药血清最佳体积分数及作用时间。体外以10 ng·mL^(−1)的KGF刺激HaCaT细胞建立银屑病细胞模型,以siRNA基因沉默HaCaT细胞NLRP3,将细胞分为对照组、模型组、10%含药血清组、si-NLRP3-NC组(质粒阴性对照)、si-NLRP3组,CCK-8法检测复方泽漆冲剂含药血清对银屑病模型细胞相对活力的影响;ELISA检测含药血清干预后白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-17α、IL-23、IL-8和趋化因子配体(CXCL)1、CXCL2的分泌水平及乳酸脱氢酶(LDH)释放量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析NLRP3、半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、磷脂酰激醇激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)、核因子-κB(NF-κB)的mRNA表达水平;Western blotting分析NLRP3、Caspase-1、ASC、p-PI3K、p-Akt、p-NF-κB、cleaved-Caspase-1、Gasdermin D(GSDMD)的蛋白表达水平;免疫荧光检测p-PI3K、p-Akt、p-NF-κB、ASC、Caspase-1的表达与分布。结果10%复方泽漆冲剂含药血清及作用48 h为含药血清最佳作用体积分数和时间;在KGF刺激HaCaT细胞增殖的银屑病细胞模型中,与对照组比较,IL-17α、IL-23、IL-1β、IL-8和CXCL1、CXCL2的分泌水平升高,LDH释放量显著升高;与模型组相比较,10%复方泽漆冲剂含药血清干预48 h后,银屑病细胞模型中IL-17α、IL-23、IL-1β、IL-8和CXCL1、CXCL2表达显著降低,LDH释放量显著下降;NLRP3、ASC、Caspase-1、PI3K、Akt、NF-κB的mRNA表达水平也有所降低;含药血清处理后,NLRP3、Caspase-1、ASC、p-PI3K、p-Akt、p-NF-κB、cleaved-Caspase-1、GSDMD的蛋白表达水平下降明显,p-PI3K、p-Akt、p-NF-κB、ASC、Caspase-1的表达与分布也有所减少。结论复方泽漆冲剂含药血清通过下调PI3K/Akt/NF-κB信号通路及NLRP3炎症小体发挥对银屑病细胞模型的干预作用。

关键词：复方泽漆冲剂银屑病含药血清 PI3K/Akt/NFκB通路 NLRP3炎症小体

参七虫草方靶向MAPK/ERK/Nrf2信号通路调控肺泡巨噬细胞的作用机制研究

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中国免疫学杂志 2024年

作者：朱恩惠何程殷丽王三凤纪文雯陈炜安徽中医药大学第一附属医院安徽中医药大学第一临床医学院

目的：探究参七虫草方对肺纤维化中肺泡巨噬细胞的调控作用及作用机制。方法：取SPF雄性SD大鼠60 只，体外培养大鼠肺纤维化巨噬细胞，制备含药血清，CCK-8法筛选参七虫草方最佳给药时间及血清浓度，将培养的巨噬细胞分为空白组、模型... 详细信息

目的：探究参七虫草方对肺纤维化中肺泡巨噬细胞的调控作用及作用机制。方法：取SPF雄性SD大鼠60 只，体外培养大鼠肺纤维化巨噬细胞，制备含药血清，CCK-8法筛选参七虫草方最佳给药时间及血清浓度，将培养的巨噬细胞分为空白组、模型组、参七虫草最佳含药血清组、Nrf2抑制剂组，除空白组，均采用一次性气管内滴注博来霉素制备IPF模型。以CCK-8法检测细胞活力，流式细胞术检测各组巨噬细胞M1、M2表型的偏移；RT-qPCR检测各组核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）mRNA的表达水平；Western blot法检测各组p-MAPK、p-ERK、活化蛋白酶-1（AP-1）蛋白水平的含量。结果：10%含药血清在干预24h情况下改善巨噬细胞的活力最为显著（P<0.05)；与模型组相比，参七虫草组抑制细胞活力最明显（P<0.05)；相较于空白组，模型组M1型巨噬细胞比重明显升高（P<0.01），巨噬细胞M1/M2明显升高（P<0.01）；相较于模型组，药物干预的两组M2型巨噬细胞比重明显增高（P<0.05），而巨噬细胞M1/M2明显降低（P<0.05）；与模型组相比，参七虫草组Nrf2、HO-1的mRNA的表达水平显著上调（P<0.05)，AP-1、p-ERK、p-MAPK蛋白水平含量显著降低（P<0.05）。结论：参七虫草方可靶向激活巨噬细胞的MAPK/ERK/Nrf2通路，并调控巨噬细胞的极化，为参七虫草方治疗肺纤维化的临床应用提供了理论支持。

关键词：肺纤维化参七虫草方 MAPK/ERK/Nrf2信号通路巨噬细胞含药血清

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四川大学学报（医学版） 2024年第3期55卷 619-629页

作者：薛秋云黄玉蓉李慧李辰程成龙王玉亭缪成贵安徽中医药大学中西医结合学院合肥230012

目的基于分泌Frizzled相关蛋白2(secreted frizzled-related protein 2, SFRP2)-Wnt/β-catenin信号通路探讨催乳颗粒(Cuiru Keli, CRKL)治疗产后缺乳的效果及其作用机制。方法通过向分娩后第3天的雌鼠灌胃2 mL1.6 mg/mL甲磺酸溴隐亭... 详细信息

目的基于分泌Frizzled相关蛋白2(secreted frizzled-related protein 2, SFRP2)-Wnt/β-catenin信号通路探讨催乳颗粒(Cuiru Keli, CRKL)治疗产后缺乳的效果及其作用机制。方法通过向分娩后第3天的雌鼠灌胃2 mL1.6 mg/mL甲磺酸溴隐亭来建立产后缺乳大鼠模型。将产仔时间差小于48 h的雌性大鼠随机分为7组:正常组(不造模,不给药);模型组;CRKL低剂量组(模型组+3 g/kg CRKL);CRKL中剂量组(模型组+6 g/kg CRKL)、CRKL高剂量组(模型组+9 g/kg CRKL);阳性药组(模型组+3 mg/kg多潘立酮);NC组(模型组+生理盐水);每组6只。除正常组和模型组外,其余5组按分组药物和剂量连续灌胃给药,每天1次,共10 d。取7组大鼠,测量10 d仔鼠总窝质量变化、HE染色观察乳腺病理变化。取除阳性对照组之外的6组大鼠,HE染色观察垂体病理变化,检测血清中PRL含量(ELISA)、乳腺组织(mammary tissue, MT)中PRLR的表达(免疫组化染色)、MT中乳汁合成相关基因mRNA的表达(RT-qPCR),然后以网络药理学和分子对接研究CRKL对产后缺乳的治疗作用和机制,特别是其是否通过SFRP2-Wnt/β-catenin信号通路治疗产后缺乳;再通过检测相关通路基因(RT-qPCR)和蛋白(Western blot)进行验证。然后进行细胞实验验证:取鉴定后的大鼠乳腺上皮细胞(rat mammary epithelial cell, RMEC),将RMEC分为4组:正常组(原代培养的RMEC,不处理)、 SFRP2过表达组(原代培养的RMEC+SFRP2过表达载体)、 SFRP2过表达+CRKL组(SFRP2过表达组+10%含药血清)、阴性对照组(原代培养的RMEC+空载体)。RT-qPCR检测过表达SFRP2后CRKL对于乳汁合成相关基因FASN、CSN2和GLUT1 mRNA表达的影响。结果与模型组相比,低、中、高剂量的CRKL均可以提高仔鼠10 d体质量增加量(P<0.05或P<0.01),均能有效增加产后缺乳大鼠泌乳量(P<0.01),增加乳腺小叶的面积,增加腺泡腔的大小和填充量,并促进产后缺乳大鼠催乳素的分泌和表达(P<0.05或P<0.01),显著促进产后缺乳大鼠乳腺乳脂、乳蛋白和乳糖合成基因的表达(P<0.05或P<0.01)。网络药理学表明,Wnt信号通路可能是CRKL治疗产后缺乳的关键通路。分子对接结果表明CRKL和CCND1、SFRP2具有良好的结合能力。与模型组相比,低、中、高剂量的CRKL均抑制体内SFRP2基因的表达(P<0.01),激活了产后缺乳大鼠乳腺中的Wnt/β-catenin信号通路中CCND1、c-Myc的基因和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。细胞实验表明,过表达SFRP2后,与正常组相比,乳汁合成相关基因FASN、CSN2和GLUT1的mRNA水平也降低(P<0.01)。加入含药血清后,上述基因的表达上调(与SFRP2过表达组相比,P<0.01)。结论 CRKL通过SFRP2-Wnt/β-catenin信号通路治疗产后缺乳,SFRP2可能成为产后缺乳诊断和治疗的新靶点。这揭示了CRKL治疗产后缺乳的新机制,并促进了其临床推广。

关键词：催乳颗粒产后缺乳大鼠模型网络药理乳腺上皮细胞作用机制中医药

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白头翁汤正丁醇提取物通过激活BMP信号通路治疗溃疡性结肠炎的作用机制研究

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中国中药杂志 2024年第7期49卷 1762-1773页

作者：蒋晓娟王亚东孙娟马克龙吴大强邵菁汪天明汪长中安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012 安徽省中医药科学院中西医结合研究所安徽合肥230012 安徽中医药大学中医学院安徽合肥230012

该研究旨在探讨白头翁汤正丁醇提取物(n-butanol extract of Pulsatilla Decoction,BEPD)通过激活骨形态发生蛋白(BMP)信号通路发挥对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用。C57BL/6小鼠分为6组:对照组、模型组、美沙拉嗪组及... 详细信息

该研究旨在探讨白头翁汤正丁醇提取物(n-butanol extract of Pulsatilla Decoction,BEPD)通过激活骨形态发生蛋白(BMP)信号通路发挥对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的治疗作用。C57BL/6小鼠分为6组:对照组、模型组、美沙拉嗪组及BEPD低、中、高剂量组。除对照组外,其余各组小鼠连续7 d自由饮用3%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)建立UC模型,然后进行不同浓度的BEPD和美沙拉嗪灌胃治疗。记录各组小鼠体质量和疾病活动指数(disease activity index,DAI)。处死小鼠后,取结肠组织进行组织学分析,采用阿利新蓝/过碘酸雪夫(AB/PAS)染色法检测杯状细胞的数量及黏液分泌状况,免疫组化法检测结肠组织中增殖标志物ki67、活化半胱天冬酶3(cleaved caspase-3)、粘蛋白2(mucin 2,Muc2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达,免疫荧光法检测结肠组织中紧密连接蛋白的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β和IL-6的水平,Western blot检测小鼠结肠组织中与BMP通路相关蛋白的表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测小鼠结肠杯状细胞分化相关基因表达。在体外细胞学实验中,进一步验证BEPD含药血清对脂多糖(LPS)诱导下的LS174T杯状细胞屏障功能的保护作用及其机制。结果表明,BEPD显著缓解UC小鼠的一般症状,恢复杯状细胞分化功能,促进Muc2分泌和紧密连接蛋白的表达,并抑制炎症因子的分泌,同时激活BMP信号通路。因此,该研究提示BEPD可能通过激活BMP信号通路发挥治疗UC的作用,为药物干预UC提供了新的思路。

关键词：溃疡性结肠炎白头翁汤正丁醇提取物肠黏膜屏障骨形态发生蛋白(BMP)信号通路杯状细胞

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抵当陷胸汤调控PI3K/Akt信号通路对糖尿病大鼠足细胞凋亡的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年第12期30卷 62-69页

作者：张可敬王悦琦储全根储俊安徽中医药大学中医学院新安医学教育部重点实验室合肥230038 安徽中医药大学新安医学与中医药现代化研究所合肥230012

目的:观察抵当陷胸汤对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的调控作用与对足细胞凋亡的影响,探讨抵当陷胸汤改善糖尿病肾病的机制。方法:采用单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液55 mg·kg^(-1... 详细信息

目的:观察抵当陷胸汤对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的调控作用与对足细胞凋亡的影响,探讨抵当陷胸汤改善糖尿病肾病的机制。方法:采用单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)溶液55 mg·kg^(-1)的方法建立糖尿病模型,将模型复制成功的30只随机分为模型组、抵当陷胸汤组(8.10 g·kg^(-1))、小陷胸汤组(4.05 g·kg^(-1))、抵当汤组(4.05 g·kg^(-1))、阿拉氯胺(ALT-711)组(3 mg·kg^(-1)),每组6只,另设6只空白组大鼠。连续给药8周后,采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理形态变化;马松(Masson)染色观察胶原沉积程度;高碘酸-席夫(PAS)染色观察基底膜病变;免疫组化法检测大鼠肾组织磷酸化(p)-PI3K、p-Akt蛋白表达;原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠足细胞凋亡;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠肾组织PI3K、Akt mRNA表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3β)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肾小球代偿性膨胀,系膜细胞增殖,系膜间质大量胶原沉积,基底膜增厚,PI3K、Akt mRNA表达减少,PI3K、Akt蛋白磷酸化显著受到抑制(P<0.01),足细胞凋亡率显著升高(P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低(P<0.01),Bax、p-GSK-3β、Caspase-3表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,抵当陷胸汤组肾脏组织病理明显改善,PI3K、Akt mRNA表达显著升高(P<0.01),PI3K、Akt蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.01),Bcl-2表达显著升高(P<0.01),Bax、p-GSK-3β、Caspase-3表达显著降低(P<0.01),足细胞凋亡率显著降低(P<0.01)。结论:抵当陷胸汤可能通过促进PI3K/Akt信号通路活化,抑制足细胞凋亡,减缓糖尿病肾病的发展进程。

关键词：糖尿病肾脏病变抵当陷胸汤痰瘀同治磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路足细胞凋亡

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