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肝豆灵通过LncRNA H19调控PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路治疗Wilson病肝纤维化

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中国实验方剂学杂志 2025年第1期31卷 131-138页

作者：殷馨汪瀚花代平孙兰婷徐芸芸杨文明安徽中医药大学第一临床医学院合肥230031 安徽中医药大学第一附属医院合肥230031

目的:研究肝豆灵(GDL)治疗Wilson病肝纤维化可能的作用机制及途径。方法:60只雄性SD大鼠随机分为6组:正常组、模型组、GDL低、中、高剂量组(0.24、0.48、0.96 g·kg^(-1))及青霉胺组(90 mg·kg^(-1)),每组10只。除正常组以外,其余各组以... 详细信息

目的:研究肝豆灵(GDL)治疗Wilson病肝纤维化可能的作用机制及途径。方法:60只雄性SD大鼠随机分为6组:正常组、模型组、GDL低、中、高剂量组(0.24、0.48、0.96 g·kg^(-1))及青霉胺组(90 mg·kg^(-1)),每组10只。除正常组以外,其余各组以300 mg·kg^(-1)五水合硫酸铜灌胃造模,构建铜负荷Wilson病大鼠模型。采用苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察肝脏病理形态改变;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原肽(PC-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)水平;透射电镜观察肝组织超微结构;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝组织肝脏和血清外泌体长链非编码核糖核酸H19(LncRNA H19)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织中PI3K/Akt/mTOR通路蛋白及其磷酸化蛋白和自噬效应蛋白1(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3B(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)蛋白表达水平;免疫荧光观察Beclin1、LC3-Ⅱ信号强度。结果:与正常组比较,模型组染色结果显示肝细胞出现炎性细胞浸润,细胞核边界不清伴有裂解、坏死,汇管区周围可见胶原纤维沉积;HA、LN、PC-Ⅲ、C-Ⅳ含量升高(P<0.01);电镜下观察到自噬小体的数量增多,出现大多数包浆被降解后呈现单层膜结构的自噬溶酶体;Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达升高(P<0.05,P<0.01);Beclin1、LC3-II荧光信号明显增强;PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达降低(P<0.01);LncRNA H19 mRNA表达水平升高(P<0.01),PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平降低(P<0.01)。经GDL治疗后,肝组织纤维化程度明显改善;HA、LN、PC-Ⅲ、C-Ⅳ水平降低;自噬小体数量明显减少;Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01);Beclin1、LC3-Ⅱ荧光信号随药物剂量呈不同程度的减弱;PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达升高(P<0.01);LncRNA H19 mRNA表达水平降低(P<0.01),PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平升高(P<0.05,P<0.01)。结论:GDL可能通过LncRNA H19调控PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路减轻肝纤维化程度,减少肝损伤。

关键词： Wilson病肝豆灵长链非编码核糖核酸H19(LncRNA H19) 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路细胞自噬肝纤维化

骨蚀宁激活PI3K/Akt/Bad信号通路抑制地塞米松诱导的骨髓间充质干细胞凋亡机制

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中国实验方剂学杂志 2025年第5期31卷 115-122页

作者：储诚煜朱磊梁龙王峰余雪健梁文武安徽中医药大学第一附属医院合肥230031 安徽中医药大学第一临床医学院合肥230031

目的:采用地塞米松(DEX)处理骨髓间充质干细胞(BMSCs)建立激素性股骨头坏死(SANFH)细胞模型,证明骨蚀宁颗粒(GSN)通过激活磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/B细胞淋巴瘤-2基因相关启动子(PI3K/Akt/Bad)信号通路发挥改善作用。方法:采用SD大... 详细信息

目的:采用地塞米松(DEX)处理骨髓间充质干细胞(BMSCs)建立激素性股骨头坏死(SANFH)细胞模型,证明骨蚀宁颗粒(GSN)通过激活磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/B细胞淋巴瘤-2基因相关启动子(PI3K/Akt/Bad)信号通路发挥改善作用。方法:采用SD大鼠按照0.9 g·kg^(-1)剂量灌胃制备GSN含药血清,同时采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)筛选确定最佳给药剂量及作用时间。培养骨髓间充质干细胞(BMSCs)分别用1×10^(-6) mol·L^(-1)地塞米松、10%GSN含药血清及PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002处理24 h进行SANFH细胞建模及分组处理。通过细胞增殖与活力检测(CCK-8)及5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)染色试剂盒检测细胞活力及增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测ALP表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测PI3K/Akt/Bad信号通路及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、骨钙素(OCN)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)蛋白和mRNA表达。结果:CCK-8试剂盒检测确定含药血清最佳作用剂量为10%,作用时间为48 h;建模分组处理各组细胞后,检测结果表明,与空白组比较,SANFH模型组细胞活力、细胞增殖、ALP表达量及PI3K、Akt、Bad、Bcl-2、OCN和CollagenⅠ蛋白和mRNA水平均明显降低,Bax指标核酸及蛋白水平及流式检测细胞凋亡率明显升高(P科学理论依据。

关键词：骨蚀宁骨髓间充质干细胞细胞凋亡激素性股骨头坏死磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/B淋巴细胞瘤-2基因相关启动子(PI3K/Akt/Bad)信号通路

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半夏泻心汤对糖尿病性胃轻瘫模型大鼠肝脏组织LXRα表达及胃窦组织JAK2/STAT3信号通路的影响

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中医杂志 2025年第2期66卷 178-187页

作者：许奇阮诺冰李金菊吕溪涓方朝晖安徽中医药大学中医学院安徽省合肥市230012 安徽中医药大学第一附属医院

目的探讨半夏泻心汤治疗糖尿病性胃轻瘫(DGP)的可能作用机制。方法 29只SD大鼠随机分为空白组5只及模型组、半夏泻心汤组和二甲双胍组各8只。除空白组外,余下各组采用腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)溶液结合高糖高脂饲料不规则喂养制备DGP... 详细信息

目的探讨半夏泻心汤治疗糖尿病性胃轻瘫(DGP)的可能作用机制。方法 29只SD大鼠随机分为空白组5只及模型组、半夏泻心汤组和二甲双胍组各8只。除空白组外,余下各组采用腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)溶液结合高糖高脂饲料不规则喂养制备DGP大鼠模型。造模成功后半夏泻心汤组予半夏泻心汤6.68 g/(kg·d)灌胃,二甲双胍组予盐酸二甲双胍105 mg/(kg·d)灌胃,空白组与模型组予生理盐水6.68 ml/(kg·d)灌胃,连续8周。末次给药后检测大鼠空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG);计算胃排空率;ELISA法检测胃组织中胃肠激素胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)及炎症因子肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6 (IL-6)、白细胞介素1β (IL-1β)和白细胞介素10 (IL-10)水平;油红O观察大鼠肝脏病理形态,HE染色观察胃窦组织病理形态;免疫荧光法检测大鼠肝脏中肝X受体α (LXRα)水平;Western Blot法检测肝脏组织LXRα和胃窦组织非受体型酪氨酸蛋白激酶2 (JAK2)、磷酸化非受体型酪氨酸蛋白激酶2 (p-JAK2)、信号转导及转录激活蛋白3 (STAT3)与磷酸化信号转导及转录激活蛋白3 (p-STAT3)水平,qPCR法检测肝脏组织LXRα和胃窦组织JAK2、STAT3 mRNA表达。结果与空白组比较,模型组大鼠肝脏出现明显的脂肪变性,胃窦组织结构被破坏;FBG、HbA1c、TC、TG水平升高;肝脏组织LXRα平均荧光强度、蛋白水平及相应mRNA表达均降低;胃排空率及胃组织GAS、MTL、IL-10含量下降,胃组织TNF-α、IL-6、IL-1β含量升高;胃窦组织p-JAK2/JAK2与p-STAT3/STAT3和JAK2、STAT3mRNA表达上升(P<0.01)。与模型组比较,半夏泻心汤组及二甲双胍组肝脏与胃窦组织的病理形态改善;FBG、HbA1c、TC、TG水平降低;肝脏组织LXRα平均荧光强度、蛋白水平及相应mRNA表达升高;胃排空率及胃组织GAS、MTL、IL-10含量升高,TNF-α、IL-6、IL-1β含量下降;胃窦组织p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3和JAK2、STAT3 mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。与二甲双胍组比较,半夏泻心汤组FBG、HbA1c、TG水平升高;胃排空率及胃组织GAS、IL-10含量降低,TNF-α、IL-6、IL-1β含量升高;肝脏组织LXRα平均荧光强度及其相应mRNA表达降低,胃窦组织中p-JAK2/JAK2降低(P<0.05或P<0.01)。结论半夏泻心汤在降低DGP模型大鼠血糖、血脂水平的同时可提升胃功能、改善胃组织炎症反应,其作用机制可能与调控肝脏中LXRα水平与胃窦组织JAK2/STAT3通路有关。

关键词：糖尿病性胃轻瘫炎症因子肝X受体α 非受体型酪氨酸蛋白激酶2 转录激活蛋白3 半夏泻心汤

LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴促进类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的恶性病理学过程

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南方医科大学学报 2025年第2期45卷 371-378页

作者：曹周芳汪元王梦娜孙玥刘菲菲安徽中医药大学第一临床医学院安徽合肥230038 安徽中医药大学第一附属医院风湿免疫科安徽合肥230031

目的探讨LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)病理学过程的影响。方法选用正常成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)和RA-FLS,构建LINC00837的过表达质粒和干扰质粒转染至RA-FLS中,实验分为对照组(FLS)、... 详细信息

目的探讨LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)病理学过程的影响。方法选用正常成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)和RA-FLS,构建LINC00837的过表达质粒和干扰质粒转染至RA-FLS中,实验分为对照组(FLS)、模型组(RA-FLS)、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-LINC00837组、siRNA-NC组、siRNA-LINC00837组。采用双荧光素酶验证LINC00837靶向miR-671-5p及miR-671-5p靶向SERPINE2关系;使用qRT-PCR实验检测各组细胞LINC00837、miR-671-5p、SERPINE2表达量;Edu法检测细胞增殖情况,划痕愈合实验检测RA-FLS迁移数,Western blotting法检测细胞增殖、迁移相关蛋白表达水平;ELISA法检测炎性细胞因子分泌情况。结果双荧光素酶报告基因结果显示,LINC00837与miR-671-5p的3'非翻译区(3'UTR)结合,而miR-671-5p与SERPINE2的3'非翻译区(3'UTR)结合,两两之间具有结合位点(P<0.01)。同一时间段,与对照组相比,模型组LINC00837和SERPINE2表达量升高,而miR-671-5p表达量降低,细胞增殖、迁移能力提高,促炎细胞因子表达升高,抑炎细胞因子表达降低(P<0.01);与模型组相比,pcDNA-LINC00837组细胞增殖、迁移活跃,促炎细胞因子表达升高,抑炎细胞因子表达降低(P<0.01);与模型组相比,siRNA-LINC00837组细胞增殖、迁移能力下降,促炎细胞因子表达下降,抑炎细胞因子水平升高(P<0.01)。结论RA-FLS中存在LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴,该功能轴促进RA-FLS增殖、迁移及炎症因子分泌等恶性病理学过程,干预LINC00837有望成为调控RA-FLS病理学过程的潜在策略。

关键词：类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞 LINC00837 增殖迁移炎症因子

基于血药浓度的普瑞巴林治疗带状疱疹后神经痛疗效差异研究

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中国医院药学杂志 2025年

作者：罗凤蓉龙兴震李银洛唐才林许琴赵诗晗杨洪涛白雪贵州中医药大学药学院贵州省人民医院药剂科贵州中医药大学第一附属医院皮肤科上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心贵州医院药剂科

目的：探究普瑞巴林治疗带状疱疹后神经痛（Postherpetic neuralgia，PHN）疗效差异的原因。方法：纳入2022年4月至2024年4月就诊于贵州中医药大学第一附属医院皮肤科的PHN住院患者，采用滴定式给予普瑞巴林并评估患者疗效，液质联用法... 详细信息

目的：探究普瑞巴林治疗带状疱疹后神经痛（Postherpetic neuralgia，PHN）疗效差异的原因。方法：纳入2022年4月至2024年4月就诊于贵州中医药大学第一附属医院皮肤科的PHN住院患者，采用滴定式给予普瑞巴林并评估患者疗效，液质联用法测定患者普瑞巴林的稳态有效血药浓度和无效极量浓度，分析给药剂量、普瑞巴林血药浓度对临床疗效的影响。结果：共纳入117例患者，86例治疗有效，31例治疗无效，有效率为73.50%。有效组的血药浓度与无效组的血药浓度无显著差异（P＞0.05）。在给药剂量≤300 mg·d-1时，普瑞巴林血药浓度随给药剂量增加而显著增加（P＜0.01），但给药剂量＞300 mg·d-1后，血药浓度的增加没有显著性差异（P＞0.05）。在给药剂量≤450 mg·d-1时，普瑞巴林临床疗效随给药剂量增加而显著改善（P＜0.05），但超过此剂量，疗效不再显著提升。同时，患者的个体差异（性别、疱疹部位）也对普瑞巴林的疗效有显著影响（P＜0.05）。结论：普瑞巴林临床疗效与其血药浓度无显著相关性，受给药剂量和患者个体差异影响。当给药剂量＞450 mg·d-1(300 mg·d-1)后，普瑞巴林临床疗效（血药浓度）可能出现天花板效应。

关键词：普瑞巴林血药浓度临床疗效给药剂量

PBL+CTTM双轨教学模式在伤寒论教学中的应用

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牡丹江医科大学学报 2025年第1期46卷 154-157页

作者：杨勤军薛倩刘锋郭锦晨董妍妍储全根方向明童佳兵李泽庚安徽中医药大学中医学院安徽合肥230038 第一附属医院安徽合肥230031

伤寒论是中医临床经典著作,亦是沟通中医学相关专业学生中医理论到临床实践的必修桥梁课程,为解决伤寒论传统教学方式以教师为主导、学生缺乏主观能动性、内容与临床脱节等问题,运用以问题为基础的教学法(Problem-based Learning,PBL)... 详细信息

伤寒论是中医临床经典著作,亦是沟通中医学相关专业学生中医理论到临床实践的必修桥梁课程,为解决伤寒论传统教学方式以教师为主导、学生缺乏主观能动性、内容与临床脱节等问题,运用以问题为基础的教学法(Problem-based Learning,PBL)联合以案例为核心的案例式立体教学法(Case three-dimensional teaching method,CTTM),将伤寒论条文与具体临床案例相结合,以学生为主体中心,教师为主导引导,改变了传统“填鸭式”教学模式,搭建起伤寒论六经辨治理论知识与临床实践衔接的桥梁,有助于提升教学规范性和质量,促进学生学习的积极性,提高学生中医临床思维和临床能力。

关键词：伤寒论 CTTM+PBL 双轨教学模式理论探讨

药学专业临床实习教学同质化培养模式及质量评价的探讨

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牡丹江医科大学学报 2025年第1期46卷 167-170页

作者：殷勤何丽霞皖南医学院第二附属医院药剂科安徽芜湖241000

目的对药学专业本科生实践教学模式及评价方法进行探讨,以期实现高质量层次同质化培养目标。方法选取药学院2021年上半年30名医院药学实习生为对照组,采用传统模式带教;2021年下半年27名医院药学实习生为观察组,采用同质化培养模式进行... 详细信息

目的对药学专业本科生实践教学模式及评价方法进行探讨,以期实现高质量层次同质化培养目标。方法选取药学院2021年上半年30名医院药学实习生为对照组,采用传统模式带教;2021年下半年27名医院药学实习生为观察组,采用同质化培养模式进行实习带教。评价两种模式的教学质量。参考质量管理学科中的过程质量能力指数,引入T/6的概念作为教学质量评价指标,用于评价实习生培养的同质化程度。结果门诊药房实习成绩观察组略高于对照组;临床技能考核观察组成绩良好且明显高于对照组(P99.9%);观察组学生药房教学满意度和临床技能的自我评价方面明显高于对照组(P<0.05)。结论采用同质化培养平台模式不仅可以提高学生的理论知识和临床实践技能,并且提升实习效果的稳定性,实现临床实习培养高质量层次下的同质化,从而提高学生的药学服务能力和实习满意度,在药学实习带教中有一定的推广意义和价值。

关键词：药学专业临床实践同质化培养质量评价

应用LC-MS/MS技术研究健脾滋肾方对系统性红斑狼疮鼠血清代谢物及代谢通路的影响

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中国医院药学杂志 2025年第4期 368-377页

作者：庞利君黄传兵李明李云飞束龙武安徽中医药大学第一附属医院第一临床医学院安徽中医药大学第一附属医院风湿科

目的：探究健脾滋肾方对系统性红斑狼疮鼠（MRL/lpr）血清差异代谢物及代谢通路的影响。方法：将12只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为模型组、中药组，以6只C57BL/6小鼠为对照组，运用LC-MS/MS分析技术，在主成分分析（principal component ana... 详细信息

目的：探究健脾滋肾方对系统性红斑狼疮鼠（MRL/lpr）血清差异代谢物及代谢通路的影响。方法：将12只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为模型组、中药组，以6只C57BL/6小鼠为对照组，运用LC-MS/MS分析技术，在主成分分析（principal component analysis,PCA）、偏最小二乘判别分析（partial least squares discriminant analysis,PLS-DA）、正交偏最小二乘判别分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA）分析的基础上，以变量重要性投影值>1、t检验P<0.05及差异倍数（fold change,FC）≥1.5或FC≤0.5筛选健脾滋肾方治疗SLE的差异代谢物质。采用公共数据库HMDB、massbank、LipidMaps、mzcloud、KEGG及诺米代谢自建标准品库进行物质鉴定，采用MetaboAnalyst软件包对筛选的差异代谢物进行功能通路富集和拓扑学分析。富集得到的通路采用KEGG Mapper可视化工具进行差异代谢物与通路图展示。结果：检测出代谢产物共338种，模型组与正常组相比，代谢物差异33个，其中22个代谢物含量上调，11个代谢物含量下调。在模型组、中药组比较中共发现31个差异代谢物，其中18个代谢物含量上调，13个代谢物含量下调。经健脾滋肾方治疗后，3-羟基-2-氨基苯甲酸、鞘氨醇1-磷酸、豆蔻酸差异代谢物含量均明显上调，棉子糖、4-乙酰基丁酸乙酯均明显下调。KEEG代谢通路分析结果表明，差异显著的代谢通路有49条，排在前5位的通路是胞葬作用、磷酸戊糖途径、黑色素生成、半乳糖代谢、Fcγ受体介导的吞噬作用通路。结论：健脾滋肾方对MRL/lpr小鼠的治疗作用可能与3-羟基-2-氨基苯甲酸、鞘氨醇1-磷酸、豆蔻酸、棉子糖、4-乙酰基丁酸乙酯等显著差异代谢物相关，以上代谢物通过参与调控胞葬作用、磷酸戊糖途径、黑色素生成、半乳糖代谢、Fcγ受体介导的吞噬作用代谢通路实现。

关键词：健脾滋肾方系统性红斑狼疮高效液相色谱串联质谱差异代谢物代谢途径

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LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴促进类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的恶性病理学过程

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南方医科大学学报 2025年

作者：曹周芳汪元王梦娜孙玥刘菲菲安徽中医药大学第一临床医学院安徽中医药大学第一附属医院风湿免疫科

目的探讨LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）病理学过程影响。方法选用正常成纤维细胞样滑膜细胞（FLS）和RA-FLS，构建LINC00837的过表达质粒和干扰质粒转染至RA-FLS中，实验分为对照组（... 详细信息

目的探讨LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）病理学过程影响。方法选用正常成纤维细胞样滑膜细胞（FLS）和RA-FLS，构建LINC00837的过表达质粒和干扰质粒转染至RA-FLS中，实验分为对照组（FLS）、模型组（RA-FLS）、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-LINC00837组、siRNA-NC组、siRNA-LINC00837组。采用双荧光素酶验证LINC00837靶向miR-671-5p及miR-671-5p靶向SERPINE2关系；使用qRT-PCR实验检测各组细胞LINC00837、miR-671-5p、SERPINE2表达量；Edu法检测细胞增殖情况，划痕愈合实验检测RA-FLS迁移数，Western blotting法检测细胞增殖、迁移相关蛋白表达水平；ELISA法检测炎性细胞因子分泌情况。结果双荧光素酶报告基因结果显示，LINC00837与miR-671-5p的3'非翻译区（3'UTR）结合，而miR-671-5p与SERPINE2的3'非翻译区（3'UTR）结合，两两之间具有结合位点（P<0.01）。同一时间段，与对照组相比，模型组LINC00837和SERPINE2表达量升高，而miR-671-5p表达量降低，细胞增殖、迁移能力提高，促炎细胞因子表达升高，抑炎细胞因子表达降低（P<0.01）；与模型组相比，pcDNA-LINC00837组细胞增殖、迁移活跃，促炎细胞因子表达升高，抑炎细胞因子表达降低（P<0.01）；与模型组相比，siRNA-LINC00837组细胞增殖、迁移能力下降，促炎细胞因子表达下降，抑炎细胞因子水平升高（P<0.01）。结论 RA-FLS中存在LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴，该功能轴促进RA-FLS增殖、迁移及炎症因子分泌等恶性病理学过程，干预LINC00837有望成为调控RA-FLS病理学过程的潜在策略。

关键词：类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞 LINC00837 增殖迁移炎症因子