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参七虫草方靶向MAPK/ERK/Nrf2信号通路调控肺泡巨噬细胞的作用机制研究

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中国免疫学杂志 2024年

作者：朱恩惠何程殷丽王三凤纪文雯陈炜安徽中医药大学第一附属医院安徽中医药大学第一临床医学院

目的：探究参七虫草方对肺纤维化中肺泡巨噬细胞的调控作用及作用机制。方法：取SPF雄性SD大鼠60 只，体外培养大鼠肺纤维化巨噬细胞，制备含药血清，CCK-8法筛选参七虫草方最佳给药时间及血清浓度，将培养的巨噬细胞分为空白组、模型... 详细信息

目的：探究参七虫草方对肺纤维化中肺泡巨噬细胞的调控作用及作用机制。方法：取SPF雄性SD大鼠60 只，体外培养大鼠肺纤维化巨噬细胞，制备含药血清，CCK-8法筛选参七虫草方最佳给药时间及血清浓度，将培养的巨噬细胞分为空白组、模型组、参七虫草最佳含药血清组、Nrf2抑制剂组，除空白组，均采用一次性气管内滴注博来霉素制备IPF模型。以CCK-8法检测细胞活力，流式细胞术检测各组巨噬细胞M1、M2表型的偏移；RT-qPCR检测各组核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）mRNA的表达水平；Western blot法检测各组p-MAPK、p-ERK、活化蛋白酶-1（AP-1）蛋白水平的含量。结果：10%含药血清在干预24h情况下改善巨噬细胞的活力最为显著（P<0.05)；与模型组相比，参七虫草组抑制细胞活力最明显（P<0.05)；相较于空白组，模型组M1型巨噬细胞比重明显升高（P<0.01），巨噬细胞M1/M2明显升高（P<0.01）；相较于模型组，药物干预的两组M2型巨噬细胞比重明显增高（P<0.05），而巨噬细胞M1/M2明显降低（P<0.05）；与模型组相比，参七虫草组Nrf2、HO-1的mRNA的表达水平显著上调（P<0.05)，AP-1、p-ERK、p-MAPK蛋白水平含量显著降低（P<0.05）。结论：参七虫草方可靶向激活巨噬细胞的MAPK/ERK/Nrf2通路，并调控巨噬细胞的极化，为参七虫草方治疗肺纤维化的临床应用提供了理论支持。

关键词：肺纤维化参七虫草方 MAPK/ERK/Nrf2信号通路巨噬细胞含药血清

肝豆灵通过LncRNA H19调控PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路治疗Wilson病肝纤维化

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：殷馨汪瀚花代平孙兰婷徐芸芸杨文明安徽中医药大学第一临床医学院安徽中医药大学第一附属医院

目的：研究肝豆灵（GDL）治疗Wilson病肝纤维化可能的作用机制及途径。方法：60只雄性SD大鼠随机分为6组：正常组、模型组、GDL低、中、高剂量组(0.24、0.48、0.96 g·kg-1)及青霉胺组(90 mg·kg-1)，每组10只。除正常组以外，其余各组... 详细信息

目的：研究肝豆灵（GDL）治疗Wilson病肝纤维化可能的作用机制及途径。方法：60只雄性SD大鼠随机分为6组：正常组、模型组、GDL低、中、高剂量组(0.24、0.48、0.96 g·kg-1)及青霉胺组(90 mg·kg-1)，每组10只。除正常组以外，其余各组以300 mg·kg-1五水合硫酸铜灌胃造模，构建铜负荷Wilson病大鼠模型。采用苏木素-伊红（HE）和马松（Masson）染色观察肝脏病理形态改变；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）、III型前胶原肽（PC-III）、IV型胶原（C-IV）水平；透射电镜观察肝组织超微结构；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肝组织肝脏和血清外泌体长链非编码（LncRNA H19）、磷脂酰肌醇激酶-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝组织中PI3K/Akt/mTOR通路蛋白及其磷酸化蛋白和自噬效应蛋白1（Beclin1）、微管相关蛋白1轻链3B（LC3-II/LC3-I）蛋白表达水平；免疫荧光观察Beclin-1、LC3-II信号强度。结果：与正常组比较，模型组染色结果显示肝细胞出现炎性细胞浸润，细胞核边界不清伴有裂解、坏死，汇管区周围可见胶原纤维沉积；HA、LN、PC-III、C-IV含量升高（P<0.01）；电镜下观察到自噬小体的数量增多，出现大多数包浆被降解后呈现单层膜结构的自噬溶酶体；Beclin-1、LC3-II/LC3-I表达升高（P<0.01）；Beclin-1、LC3-II荧光信号明显增强；PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达降低（P<0.01）；LncRNA H19表达水平升高（P<0.01），PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平降低（P<0.01）。经GDL治疗后，肝组织纤维化程度明显改善；HA、LN、PC-III、C-IV水平降低；自噬小体是数量明显减少；Beclin-1、LC3-II/LC3-I蛋白表达水平降低（P<0.01）；Beclin-1、LC3-II荧光信号随药物剂量呈不同程度的减弱；PI3K、Akt、mTOR、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达升高（P<0.01）；LncRNA H19表达水平降低（P<0.01），PI3K、Akt、mTOR mRNA表达水平升高（P<0.05， P<0.01）。结论：GDL可能通过LncRNA H19调控PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路减轻肝纤维化程度，减少肝损伤。

关键词： Wilson病肝豆灵 LncRNA H19 PI3K/Akt/mTOR信号通路细胞自噬肝纤维化

肿瘤间质比在口腔鳞状细胞癌患者预后评估中的价值分析

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口腔医学研究 2024年第3期40卷 242-247页

作者：房敏健刘亮邱若兰曹伟葛素云柴大敏蚌埠医学院第一附属医院口腔科安徽蚌埠233004 蚌埠医学院第一附属医院病理科安徽蚌埠233004

目的:分析肿瘤间质比(tumor-stroma ratio,TSR)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者预后中的价值。方法:收集2015年1月~2017年12月在蚌埠医学院第一附属医院接受根治性切除术的OSCC患者为研究对象,并收集临床及病... 详细信息

目的:分析肿瘤间质比(tumor-stroma ratio,TSR)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者预后中的价值。方法:收集2015年1月~2017年12月在蚌埠医学院第一附属医院接受根治性切除术的OSCC患者为研究对象,并收集临床及病理资料。TSR以50%为界限,将其分为高间质比组(≥50%)及低间质比组(<50%)。分析TSR和OSCC患者的无病生存期及总生存期之间的关系。结果:术后随访及临床资料完整的98例患者中,高间质比患者42例,低间质比患者56例。高间质比组OSCC患者的5年总生存率以及5年无病生存率分别为31.0%(13/42)、26.2%(11/42);低间质比组OSCC患者的5年总生存率以及5年无病生存率分别为73.2%(41/56)、67.9%(38/56)。肿瘤发病部位与患者的5年总生存率(χ^(2)=1.327,P=0.932)及5年无病生存率(χ^(2)=3.113,P=0.683)无关;肿瘤临床分期、TSR与患者的5年总生存率5年无病生存率显著相关(P<0.001)。单因素COX分析结果显示,年龄、肿瘤T分期、淋巴结转移、TSR与OSCC患者总体生存率以及无病生存率有关。而通过多因素COX研究显示,肿瘤T分期、淋巴结转移以及TSR是影响OSCC患者总生存率与无病生存率的独立危险因素(P<0.05)。结论:TSR可作为OSCC患者术后预后的影响因素,可为OSCC患者术后辅助治疗方法的选择提供参考依据。

关键词：肿瘤间质比口腔鳞状细胞癌预后生存率

基于循证体系的针灸学数据挖掘算法构建与应用研究

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中国循证医学杂志 2024年第9期24卷 1070-1078页

作者：王喆陈芊秀董志浩宋庆雨陈新勇韩晶山东中医药大学针灸推拿学院济南250013 山东中医药大学中医学院济南250013 山东中医药大学附属医院针灸科济南250013

在针灸临床研究的腧穴数据挖掘工作中,文献证据质量、样本量、临床疗效等因素对结局质量的影响尚不明确,影响了数据挖掘类研究成果的证据转化与临床应用。本研究提出运用熵权和线性加权法对上述指标进行多指标决策以获得腧穴处方综合权... 详细信息

在针灸临床研究的腧穴数据挖掘工作中,文献证据质量、样本量、临床疗效等因素对结局质量的影响尚不明确,影响了数据挖掘类研究成果的证据转化与临床应用。本研究提出运用熵权和线性加权法对上述指标进行多指标决策以获得腧穴处方综合权重得分,通过加权腧穴处方进行后续数据挖掘工作的新流程。本文以偏头痛研究为例将加权算法与经典算法结果进行对比,结果显示本研究所提出的算法对选穴分散的研究更具意义,在聚类分析中能更好发现潜在的腧穴配伍规律。该算法将循证针灸学体系纳入数据挖掘工作流程,为针灸学数据挖掘相关研究质量的提升提供了新思路,但后续仍需更多的研究加以验证。

关键词：针灸数据挖掘熵权法多指标决策加权关联规则分析加权聚类分析

基于NLRP3/Caspase-1信号通路探讨参芪健心方对慢性心力衰竭模型大鼠心肌细胞焦亡的影响

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中医杂志 2024年第1期65卷 94-102页

作者：梁国庆夏冉王银燕刘攀张军戴小华安徽中医药大学第一附属医院安徽省合肥市230031 安徽中医药大学中医学院安徽省中西医结合医院

目的从细胞焦亡角度探讨参芪健心方治疗慢性心力衰竭的可能作用机制。方法将52只大鼠随机分为假手术组8只和造模组44只,造模组大鼠结扎左冠状动脉前降支构建慢性心力衰竭大鼠模型。将造模成功的40只大鼠随机分为模型组、沙库巴曲缬沙... 详细信息

目的从细胞焦亡角度探讨参芪健心方治疗慢性心力衰竭的可能作用机制。方法将52只大鼠随机分为假手术组8只和造模组44只,造模组大鼠结扎左冠状动脉前降支构建慢性心力衰竭大鼠模型。将造模成功的40只大鼠随机分为模型组、沙库巴曲缬沙坦组、参芪健心方组、MCC950组及参芪健心方+MCC950组,每组8只。参芪健心方组予参芪健心方药液7.4 g/(kg·d)灌胃;沙库巴曲缬沙坦组予沙库巴曲缬沙坦混悬液68 mg/(kg·d)灌胃;MCC950组予以腹腔注射MCC950 10 mg/kg,隔日1次;参芪健心方+MCC950组予参芪健心方7.4 g/(kg·d)灌胃,再腹腔注射MCC950 10 mg/kg隔日1次;假手术组和模型组予生理盐水10 ml/(kg·d)灌胃。各组连续干预3周后,ELISA法检测大鼠血清脑B型钠尿肽(BNP)、肌酸激酶同工酶MB (CK-MB)、白细胞介素1β (IL-1β)、白细胞介素18 (IL-18)水平;HE染色、MASSON染色观察大鼠心肌病理改变。除沙库巴曲缬沙坦组外,Western blot法检测各组大鼠心肌NOD样受体蛋白3 (NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)蛋白表达,RT-PCR法检测NLRP3、Caspase-1mRNA的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠HE染色示心肌损伤明显,MASSON染色示胶原纤维化面积增大,血清BNP、CK-MB、IL-1β、IL-18含量,心肌组织NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达及NLRP3、Caspase-1 mRNA表达均升高(P一MCC950和参芪健心方。

关键词：慢性心力衰竭参芪健心方细胞焦亡 NLRP3/Caspase-1通路 MCC950

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寿胎丸治疗复发性流产的作用机制研究进展

中国实验方剂学杂志 2024年

作者：党雪刘飞祥封俨宸车志英河南中医药大学中医学院(仲景学院) 河南中医药大学第一附属医院

复发性流产（Recurrent Spontaneous Abortion，RSA）是妊娠期常见的妇科疾病，临床特征主要表现为反复自然流产，其病理机制复杂尚未完全阐明。中医药将其病机归于冲任虚损，胎元不固，在治疗RSA方面积累了丰富的经验，其中，寿胎丸被... 详细信息

复发性流产（Recurrent Spontaneous Abortion，RSA）是妊娠期常见的妇科疾病，临床特征主要表现为反复自然流产，其病理机制复杂尚未完全阐明。中医药将其病机归于冲任虚损，胎元不固，在治疗RSA方面积累了丰富的经验，其中，寿胎丸被广泛用于治疗肾虚引起的滑胎、妊娠期出血和胎动不安等流产症状。近年来，围绕寿胎丸在RSA治疗中的应用及相关实验研究逐渐增多，研究表明寿胎丸主要通过调整妊娠期激素的平衡，缓解妊娠期免疫炎症，改善孕期血凝平衡等过程发挥保胎作用。并通过调节核因子-二类调节因子2（Nuclear Factor， Erythroid 2 Like 2，Nrf2）/血红素氧合酶-1（Heme Oxygenase-1，HO-1）、JAK激酶1（Janus Kinase 1，JAK1）/转录激活蛋白3（Signal Transducer and Activator of Transcription 3，STAT3）和丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-Activated Protein Kinase，MAPK）等关键信号通路，改善细胞的抗氧化能力，调整滋养层与蜕膜细胞表型，抑制免疫排斥提高妊娠成功率，这些发现不仅揭示了寿胎丸治疗RSA的多重生物学基础，也为其临床应用和进一步的机制研究提供了科学依据，然而，目前对寿胎丸治疗RSA的系统综述仍然缺乏。因此，该综述通过对现有的研究成果进行归纳、总结，系统性地分析已有的文献和研究，深入探讨寿胎丸调控RSA的主要药理作用和有关信号通路，以期为寿胎丸治疗RSA的临床应用及未来的实验研究提供重要参考依据。

关键词：寿胎丸复发性流产药理作用信号通路临床应用

电针督脉对脊髓损伤大鼠脊髓组织线粒体融合及神经干细胞增殖分化的影响

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针刺研究 2024年第2期49卷 119-126页

作者：吴明莉段昭远常文涛高静苏凯奇冯晓东河南中医药大学第一临床医学院郑州450000 河南中医药大学第一附属医院郑州450000 新乡医学院第一附属医院河南新乡453100

目的:观察电针督脉对脊髓损伤(SCI)大鼠损伤区脊髓组织中线粒体融合及神经干细胞增殖分化的影响,探讨电针促进SCI神经修复的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组各15只。采用精密打击器打击法构建胸10节段SCI模型... 详细信息

目的:观察电针督脉对脊髓损伤(SCI)大鼠损伤区脊髓组织中线粒体融合及神经干细胞增殖分化的影响,探讨电针促进SCI神经修复的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针组,每组各15只。采用精密打击器打击法构建胸10节段SCI模型。电针组大鼠予以电针“大椎”“脊中”,30 min/次,1次/d,共14 d。用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)运动功能评分法评估大鼠后肢的运动功能;HE染色法、尼氏染色法观察大鼠损伤区脊髓组织病理变化及神经元数量;免疫荧光染色法检测大鼠损伤区脊髓组织中神经干细胞增殖标记物巢蛋白(Nestin)、线粒体融合相关蛋白视神经萎缩蛋白1(OPA1)及神经干细胞转录因子性别决定区Y框蛋白2(SOX2)的阳性表达;实时荧光定量PCR法、Western blot法检测大鼠脊髓组织中Nestin mRNA及蛋白的表达。结果:与同时点假手术组比较,模型组大鼠造模后BBB评分降低(P<0.001);脊髓组织中神经元肿胀、破裂、坏死严重,尼氏小体溶解严重,神经元数量减少(P<0.001);Nestin、OPA1、SOX2阳性表达及Nestin蛋白和mRNA相对表达量均升高(P<0.001,P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,电针干预第7、14天时电针组大鼠BBB评分,Nestin、OPA1、SOX2阳性表达,以及Nestin蛋白和mRNA相对表达量均升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001),脊髓神经元受损程度减轻,尼氏小体溶解程度减轻,神经元数量增加(P<0.05)。结论:电针督脉可改善SCI大鼠运动功能,促进SCI区域神经元修复,其机制可能与电针督脉促进损伤区脊髓组织线粒体融合蛋白OPA1表达,增强神经干细胞增殖分化有关。

关键词：电针督脉脊髓损伤线粒体融合神经干细胞增殖分化

LINC00467高表达通过抑制AMPK/mTOR通路抑制细胞自噬促进肺腺癌细胞的增殖和转移

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南方医科大学学报 2024年第10期44卷 1898-1909页

作者：李泳华奚欣然张萌吴勋汪向海皖南医学院第一附属医院//弋矶山医院呼吸内科安徽芜湖241001

目的探讨LINC00467对肺腺癌增殖和转移的影响及参与细胞自噬的机制。方法体外培养人支气管上皮细胞16HBE和人肺腺癌细胞A549和H1299,A549和H1299细胞经慢病毒shlinc00467和shNC感染、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和AMPK抑制剂BML-275... 详细信息

目的探讨LINC00467对肺腺癌增殖和转移的影响及参与细胞自噬的机制。方法体外培养人支气管上皮细胞16HBE和人肺腺癌细胞A549和H1299,A549和H1299细胞经慢病毒shlinc00467和shNC感染、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)和AMPK抑制剂BML-275处理。分别设置shNC组、shlinc00467组、shNC+3-MA组、shlinc00467+3-MA组、shNC+BML-275组和shlinc00467+BML-275组。实时荧光定量PCR检测细胞中LINC00467的表达,TCGA数据分析组织中LINC00467的表达以及对肺腺癌患者生存率和临床分期的影响,克隆形成实验检测细胞增殖情况,Transwell实验测定细胞迁移和侵袭能力,免疫荧光染色检测LC3的表达,Western blotting检测蛋白表达,GSEA富集分析LINC00467与自噬通路的相关性。结果与16HBE细胞相比,LINC00467在A549和H1299细胞中表达增加(P第一阶段进展率(FP,P=0.026)。与shNC组相比,shlinc00467感染的A549和H1299细胞中LINC00467表达降低(P1,P<0.05,FDR<0.25)。结论LINC00467能促进肺腺癌细胞增殖和转移,可能是通过抑制AMPK/mTOR信号通路介导的自噬实现的。

关键词： LINC00467 肺腺癌自噬增殖转移 AMPK/mTOR信号通路

参七虫草方通过ASS1/src/STAT3信号通路改善肺纤维化大鼠的炎症反应

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南方医科大学学报 2024年第4期44卷 644-651页

作者：何程陈炜张念志栾军王三凤张尤安徽中医药大学第一附属医院呼吸科安徽合肥230031

目的观察参七虫草方对肺纤维化大鼠精氨酸琥珀酸盐合成酶-1(ASS1)/src酪氨酸激酶(src)/信号转导和转化激活因子3(STAT3)通路相关因子表达的影响,探讨其治疗肺纤维化的作用机制。方法选择120只SPF级SD雄性大鼠,采用随机数字表法分为5组:... 详细信息

目的观察参七虫草方对肺纤维化大鼠精氨酸琥珀酸盐合成酶-1(ASS1)/src酪氨酸激酶(src)/信号转导和转化激活因子3(STAT3)通路相关因子表达的影响,探讨其治疗肺纤维化的作用机制。方法选择120只SPF级SD雄性大鼠,采用随机数字表法分为5组:空白组、模型组、参七虫草方组、吡非尼酮组、精氨酸脱亚胺酶(ADI)腹腔注射组(24只/组)。除空白组以外,4组均使用一次性气管内滴注博来霉素(BLM)诱导制备特发性肺纤维化的大鼠模型。造模成功后,参七虫草组予参七虫草方汤剂(0.423 g/kg)灌胃;吡非尼酮组予溶于生理盐水的吡非尼酮胶囊粉末(10 mL·kg^(-1)·d^(-1))灌胃2次;ADI腹腔注射组予以2.25 mg/(kg·d)腹腔注射,1次/3d;空白组、模型组分别以10mL/(kg·d)生理盐水灌胃;给药疗程28d。于第7、14、21、28天分4批处死大鼠,分离肺组织并计算肺指数。采用苏木素-伊红、马松染色观察大鼠肺组织的组织病理学;吉姆萨染色分析BALF中不同种类的炎症细胞;采用酶联免疫吸附测定法检测血清趋化因子配体2(CCL2)、转化生长因子β1(TGF-β1)的含量;蛋白免疫印迹法测定肺组织src、p-src^(Try529)、STAT3、p-STAT3^(Try705)的蛋白表达;采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测肺组织ASS1、src、STAT3的表达水平。结果参七虫草组、吡非尼酮组和ADI腹腔注射组各时间点中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞均低于同一时间点的模型组(P一时间点的模型组(P<0.05)。结论参七虫草方可以缓解大鼠的肺纤维化程度,其机制可能通过调控ASS1/src/STAT3信号通路的活化从而缓解BLM大鼠肺纤维化的炎症反应。

关键词：参七虫草方精氨酸特发性肺纤维化 ASS1/src/STAT3信号通路炎症反应

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